- 吴小红;赵丹华;刘欣玉;杨立宏;李玉华;曹守春;
目的 对3种SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫血清抗体水平的检测方法进行比较。方法 分别采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）、假病毒中和试验（pseudo virus-based neutralization assay,PBNA）及微量细胞病变中和试验（micro-cytopathic effect neutralization test,MCPENT）检测SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫前及2针免疫后共120份血清（免疫前40份，免疫后80份）的抗体水平，分析3种检测方法的一致性和相关性。结果 3种方法检测120份血清的符合率均达90%以上，Kappa系数均> 0.7,P均<0.01。3种方法检测阳性血清抗体滴度结果的相关系数（r）为0.825～0.902,P均<0.01。结论 3种方法用于SARS-CoV-2 mRNA疫苗免疫血清抗体水平检测具有良好的一致性及相关性。
2023年12期 v.36 1414-1418页 [查看摘要][在线阅读][下载 893K] [下载次数：140 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李喆;吴燕;王丽婵;卫辰;廖平安;朱德武;瞿明霞;马霄;
目的 对我国百日咳疫苗生产用菌株进行完成图基因组的遗传分析。方法 利用PacBio Sequel三代测序平台与Illumina二代测序平台相结合的方式，对百日咳疫苗生产用原始菌株进行完成图基因组测序，并进行基因组组分分析、基因功能注释以及比较基因组分析。同时对企业生产过程中不同代次菌株进行遗传稳定性分析。结果 获得了百日咳疫苗原始菌株及其生产过程不同代次菌株的完成图基因组，基因组长度4.1 Mb,GC含量68%，不同代次间基因组结构稳定；获得并分析了pt、pha、prn、fim2、fim3、act、tct、ompA、BrKA、rplD、BP1569等具有免疫原性或潜在免疫原性的基因，不同代次间基因未发生变异。结论 本研究获得了结构完整、背景清晰的百日咳疫苗生产用菌株完成图基因组，为我国百日咳疫苗生产用菌种的质量控制提供了依据，同时也为百日咳分子流行病学的研究提供了参考。
2023年12期 v.36 1419-1424+1429页 [查看摘要][在线阅读][下载 1040K] [下载次数：142 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王艺博;夏青娟;王昕雷;徐涵禹;白鸽;郑书君;徐艳玲;
目的 优化氢氧化铝Al(OH)_3佐剂与甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）抗原的吸附条件，并评价吸附产物的免疫原性。方法 选取缓冲盐终摩尔浓度（0.01、0.02和0.04 mol/L）、pH(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、氯化钠（NaCl）终摩尔浓度（0.075、0.13、0.15、0.17、0.45、0.75、1.0 mol/L）、混合方式（稀释后混合、不稀释直接混合）及滴加顺序[HAV原液滴加至Al(OH)_3溶液、Al(OH)_3溶液滴加至HAV原液]进行单因素筛选。以Al(OH)_3吸附率为评价指标，通过正交试验对筛选出的因素进行优化。采用最优及次优组合条件制备的吸附产物经腹腔免疫NIH小鼠（雌雄各半），0.5 mL/只，每组10只，于免疫后28 d，经眼球或心脏采血，分离血清，HAV抗体定性检测试剂盒（ELISA法）检测HAV抗体水平，小鼠血清抗体阳转率评价吸附产物的免疫原性。结果 单因素筛选结果表明，缓冲盐终摩尔浓度、pH、NaCl终摩尔浓度对吸附效果可产生明显影响（F分别为6.582、14.007、8.612,P均<0.05），混合方式和滴加顺序对吸附效果无影响（t分别为-0.696和1.153,P均> 0.05），确定缓冲盐终摩尔浓度为0.01及0.02 mol/L,pH为5.5～7.0、NaCl终摩尔浓度为0.13～0.17 mol/L。正交试验确定影响吸附效果因素依次为：缓冲盐终摩尔浓度> pH> NaCl终摩尔浓度，最优组合为：pH 6.3+缓冲盐终摩尔浓度0.01 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.15 mol/L，次优组合为：pH 5.8+缓冲盐终摩尔浓度0.02 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.17 mol/L。最优及次优组合制备吸附产物免疫小鼠的血清抗体阳转率均为100%。结论 优化条件制备的吸附产物具有良好的免疫原性，本研究为甲肝灭活疫苗研究奠定了基础。
2023年12期 v.36 1425-1429页 [查看摘要][在线阅读][下载 888K] [下载次数：184 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 邵宏秋;魏巍;黄晓娜;李景新;魏国良;张芸畅;修华谦;刘婷婷;王宇迪;孙博;卢井才;石亮;
目的 制备水痘-带状疱疹病毒（varicella-herpes zoster virus,VZV）高效价特异性免疫血清，用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。方法 将高纯度重组gE糖蛋白分别与弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂及MF59佐剂组合，免疫雄性家兔，每组2只，免疫后第56天，每只最大量采血（心脏或颈动脉）制备血清，与VZV混合进行中和反应后，接种至长满单层MRC-5株人二倍体细胞的6孔板中，孵育7 d，计数空斑数，检测免疫血清的中和效价和中和病毒能力；选择高中和效价和高中和病毒能力血清进行水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查。结果 重组gE糖蛋白的多种组合免疫家兔后制备的免疫血清均具有中和活性，其中重组gE糖蛋白与弗氏佐剂组合免疫后制备的血清中和效价最高，为1:512，中和病毒能力可达240 000 PFU/mL；制备的免疫血清用于VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查，结果均符合要求。结论 重组gE糖蛋白可用于VZV高效价中和抗体制备，制备的高效价中和抗体适用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。
2023年12期 v.36 1430-1433+1441页 [查看摘要][在线阅读][下载 884K] [下载次数：364 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]
- 姚梦玮;李玉迁;徐庆胜;方小菡;魏洪;迟茜文;刘蕊;
目的 探讨麻疹减毒活疫苗Hu191株（MV-Hu191）对4T1乳腺癌细胞上皮-间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）、增殖及迁移的影响。方法 采用CCK-8法和克隆形成试验检测MV-Hu191对4T1细胞增殖的影响；细胞划痕试验检测MV-Hu191对4T1细胞迁移的影响；Western blot法检测MV-Hu191对4T1细胞EMT通路蛋白（MMP-2、MMP-9、E-cadherin）表达的影响。建立雌性BALB/c小鼠4T1荷瘤小鼠模型，将模型小鼠分为对照组（PBS）、MV-Hu191(1×106TCID50)组和紫杉醇组（15 mg/kg），每组10只，每2 d瘤内注射药物100μL，连续给药5次，28 d后，观察MV-Hu191对小鼠生存期、体内成瘤性及转移的影响；HE染色观察肺组织及肿瘤组织病理特征；免疫组化染色观察肿瘤组织EMT通路蛋白（MMP-2、MMP-9、E-cadherin）表达情况。结果 体外试验结果表明，与对照组相比，MV-Hu191能抑制4T1细胞增殖及迁移（F分别为2.811和13.535,P分别为0.001和0.002），下调4T1细胞MMP-2和MMP-9表达（F分别为45.433和9.744,P分别为0.011和0.038），上调E-cadherin表达（F=7.001,P=0.032）。体内试验结果表明，与对照组相比，MV-Hu191能显著延长荷瘤小鼠生存时间（F=18.079,P=0.000），并降低肿瘤质量（F=8.301,P=0.003）和肺结节转移数量（F=33.792,P=0.000）;MV-Hu191组肿瘤组织间隙较小，细胞呈圆形，肺泡轮廓清晰可见；MV-Hu191组肿瘤组织MMP-2和MMP-9表达显著降低（F分别为6.705和9.047,P分别为0.028和0.023）,E-cadherin表达显著上升（F=3.468,P=0.039）。结论 MV-Hu191能显著抑制4T1乳腺癌细胞增殖及迁移，拮抗4T1荷瘤小鼠成瘤性和肺转移，延长小鼠生存期，其抗乳腺癌作用的可能机制是调节EMT通路蛋白表达。
2023年12期 v.36 1434-1441页 [查看摘要][在线阅读][下载 1184K] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈选才;符浩;唐亚纯;唐昕;祝乐喜;李雪峰;朱子贵;
目的 探讨miR-130b-5p靶向E26转录因子1(E26 transformation specific-1,ETS1)对前列腺癌（prostatic cancer,PCa）细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法 qRT-PCR法测定PCa组织及其癌旁组织、PCa细胞（LNCap、PC-3、DU-145）及正常前列腺细胞（RPWE-1）中miR-130b-5p基因mRNA的转录水平，Western blot法检测PCa细胞中ETS1蛋白的表达水平。生物信息学、双荧光素酶活性测定法、qRT-PCR法及Western blot法预测和验证miR-130b-5p与ETS1的靶向关系。将PC-3细胞分为对照（不作任何处理）、mimic（转染miR-130b-5p模拟物）、mimic+ETS1组（转染miR-130b-5p模拟物+pcDNA-ETS1），采用克隆形成试验和CCK-8法分别检测细胞增殖情况及活力，划痕试验和Transwell小室试验分别检测细胞迁移及侵袭情况，Western blot法检测侵袭相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果 与癌旁组织比较，PCa组织中miR-130b-5p基因mRNA的转录水平明显下降（t=12.450,P <0.001）；与RPWE-1细胞比较，LNCap、PC-3和DU-145细胞中miR-130b-5p基因mRNA的转录水平均明显下降（t分别为4.463、7.103和5.741,P分别为0.001 2、<0.001和<0.001）,ETS1蛋白表达水平显著升高（t分别为4.850、9.325和7.723,P分别为0.008、<0.001和0.002）。miR-130-5p可以靶向负调控ETS1的表达。与对照组比较，mimic组细胞克隆率、细胞活力、细胞划痕愈合率均明显降低（t分别为11.370、10.640、15.660,P均<0.001），侵袭细胞数明显减少（t=10.160,P <0.001），基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9和波形蛋白（vimentin）表达水平显著下调（t分别为15.120、9.992和12.600,P分别为<0.001、<0.001和0.002），钙黏蛋白（E-cadherin）表达显著升高（t=6.928,P <0.001），磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K）、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）磷酸化水平均显著降低（t分别为7.746、8.041和11.510,P分别为0.002、0.002、<0.001）；与mimic组比较，mimic+ETS1组细胞克隆率、细胞活力、细胞划痕愈合率均明显升高（t分别为6.988、6.642、6.660,P均<0.001），侵袭细胞数明显增多（t=4.082,P=0.002）,MMP-2、MMP-9和vimentin蛋白表达水平显著上调（t分别为10.410、6.754和8.521,P分别为0.002、0.003、0.002）,E-cadherin表达水平显著下调（t=4.648,P <0.01）,PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平均显著升高（t分别为4.850、4.323和10.840,P分别为0.008、0.008和<0.001）。结论 miR-130b-5p可靶向ETS1抑制PC-3细胞的增殖、迁移及侵袭，可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路实现的。
2023年12期 v.36 1442-1449页 [查看摘要][在线阅读][下载 1165K] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 赵婷婷;任秀秀;王轶男;李实实;黄秋芳;王晓杰;张晓焕;卫江波;苏文浩;
目的 以水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）为载体，构建表达狂犬病病毒（rabies virus,RV）G蛋白的嵌合型重组VSV。方法 将VSV骨架质粒G基因替换为狂犬病疫苗CTN-1株G基因，与分别表达T7聚合酶及VSV N、P、L蛋白的辅助质粒共转染293T细胞，获得重组病毒。通过RT-PCR、免疫荧光法和Western blot检测RV G基因和G蛋白表达。将重组病毒在Vero细胞上传代培养，检测不同代次病毒滴度并绘制病毒生长曲线。结果 成功获得了重组病毒VSV-RVG,RT-PCR结果表明重组病毒基因组中成功插入了RV G基因，免疫荧光法和Western blot可检测到RV G蛋白的表达。重组病毒连续传代5次，病毒滴度稳定在7.5～8.5 lgTCID50/mL之间。结论 成功构建了表达RV G蛋白的嵌合型重组VSV，重组病毒具有良好的遗传稳定性，为以VSV为载体的反向遗传学技术平台的构建奠定了基础。
2023年12期 v.36 1450-1454页 [查看摘要][在线阅读][下载 1160K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 张秋;王如玉;范慧芬;孙凯丽;刘元浪;夏云翔;徐秀丽;卢佳;李新国;
目的 通过滴鼻途径探讨严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)不同毒株（Prototype、Delta、Beta、Omicron BA.1）对表达人血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的转基因小鼠K18-hACE2的感染效果。方法 每种毒株设置不同梯度的攻毒剂量，采用滴鼻方式进行攻毒，每日监测小鼠体质量及存活情况，观察周期变异株Beta组为6 d，其他3组为14 d。利用IBM SPSS Statistics26分析软件计算半数致死量（LD_(50)），通过检测肺、脑、鼻甲组织病毒核酸载量及肺组织病变损伤情况对SARS-CoV-2不同毒株的毒力进行比较。结果 Beta株毒力最强、致死性最高，最低剂量（1 CCID_(50)）100%致死，LD_(50)<1 CCID_(50);Delta、Prototype和Omicron BA. 1株的LD_(50)分别为0.52、0.60和52.92 CCID_(50)。不同毒株感染后各剂量组小鼠的肺组织病毒核酸拷贝数随着攻毒剂量的增加而呈整体递增趋势，死亡小鼠的脑组织病毒拷贝数可达108～1011copies/mL，感染不同毒株各剂量组小鼠的肺组织病理出现不同程度的损伤。结论 SARS-CoV-2不同毒株在K18-hACE2小鼠体内的毒力Beta> Delta> Prototype> Omicron BA.1。
2023年12期 v.36 1455-1464页 [查看摘要][在线阅读][下载 1443K] [下载次数：165 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 沈克飞;曹兰;徐登峰;许国洋;杨金龙;罗文华;
目的 鉴定囊状幼虫病病毒（sacbrood virus,SBV）药物结合口袋蛋白2(drug-binding pocket protein 2,Dbpp2)的肝素结合基序，并测定肝素结合基序及其衍生肽的抗SBV感染活性。方法 采用在线软件对Dbpp2进行二级结构预测和同源建模，以搜索肝素结合基序，利用肝素琼脂糖珠检测SBV、Dbpp2及其肝素结合基序突变体与肝素的结合能力、肝素结合基序抑制Dbpp2结合肝素的能力，并检测肝素结合基序及其衍生肽对SBV感染的中华蜜蜂（Apis cerana cerana）幼虫的治疗效果。结果 SBV和Dbpp2可结合肝素，Dbpp2 C-端暴露在表面的富含碱性氨基酸的柔性环（KPANRPRR）为肝素结合基序，该基序可抑制Dbpp2结合肝素。KPANRPRR及其衍生肽KPAARPRR、KPRN-RPRR、KPRARPRR、KPRWRPRR、KPRWRPRRW均具有降低SBV感染导致幼虫死亡率的作用，其中，KPRARPRR的治疗效果最佳。结论 本研究为阐明SBV-氨基萄聚糖（glycosaminoglycan,GAG）相互作用奠定了基础，也为基于相互作用开发治疗SBV感染的多肽提供了参考。
2023年12期 v.36 1465-1470+1475页 [查看摘要][在线阅读][下载 985K] [下载次数：33 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张超;汪静;李小鹏;张江涛;张传宝;
目的 原核表达及纯化肾素前体（renin,REN）和成熟肾素（REN-340），并检测其浓度。方法 根据NCBI中检索获得的人REN基因序列（5972），经E.coli密码子优化后，人工合成REN及REN-340基因片段，克隆至载体p ET-28a（+），构建重组表达质粒6×His-REN-p ET和6×His-REN-340-p ET。转化至感受态E.coli BL21(DE3)，于不同诱导温度（20、25、30、37℃）及不同终浓度（0.1、0.2、0.4、0.5 mmol/L）IPTG条件下进行诱导表达。采用最佳诱导条件诱导表达重组REN和REN-340，经Ni-NTA镍离子亲和层析后，ELISA法检测其浓度。结果 经双酶切及测序鉴定，重组表达质粒6×His-REN-p ET和6×His-REN-340-p ET构建正确。重组REN和REN-340的最佳诱导温度分别为37和20℃，最佳IPTG终浓度分别为0.1和0.2 mmol/L。纯化的重组REN和RNE-340浓度分别为9 148.21和15 115.31 m IU/m L。结论 制备的重组REN和REN-340蛋白浓度较高，且生产周期较短，有望用于制备室间质量评价（external quality assessment,EQA）的候选质控品和标准物质。
2023年12期 v.36 1471-1475页 [查看摘要][在线阅读][下载 883K] [下载次数：53 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]