- 严皎;赵勇;贺凌煜;納锐雄;李亚东;袁明翠;蒋曦;易力;
目的 探讨氢氧化铝佐剂吸附肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活病毒的特性。方法 采用透射电镜、凝胶排阻层析高效液相色谱（size exclusion chromatography HPLC,SEC-HPLC）及动态光散射（dynamic light scatter,DLS）技术分析灭活EV71颗粒的形态、纯度及粒径分布，并以透射电镜观察氢氧化铝佐剂纳米颗粒形态。以灭活EV71抗原含量（4 000、6 000、8 000、10 000、11 000、12 000、13 000、14 000、20 000、30 000 U/m L）、氢氧化铝佐剂浓度[0.35、0.25、0.17、0.085 mg/m L（按铝含量计）]、吸附时间（0、30及120 min）、离子强度（Na Cl浓度0.15、0.75和1.25 mol/L）及磷铝摩尔比（P/Al,0.15、0.64、2.08及7.87）为变量，考察氢氧化铝佐剂吸附灭活EV71抗原后所呈现的吸附特性。结果 灭活EV71颗粒主要以完整的病毒颗粒形式存在，直径约30 nm；氢氧化铝佐剂具有纳米化的特征，粒径分布在200～700 nm之间。≤11 000 U/m L浓度的灭活EV71抗原可被0.35 mg/m L（按铝含量计）的氢氧化铝佐剂完全吸附，上清中未检测到游离抗原，从12 000 U/m L起，随抗原量的增加，上清中游离抗原含量也增加；各浓度氢氧化铝佐剂能完全吸附250 U/m L的灭活EV71抗原，上清中未检测到游离抗原，不同孵育时间的吸附效果一致。在单剂量疫苗氢氧化铝含量（0.35 mg/m L，按铝含量计）及灭活EV71抗原含量（250 U/m L）条件下，Na Cl离子强度对灭活EV71吸附无影响，而磷酸离子浓度明显影响吸附。结论 单剂量疫苗中的氢氧化铝佐剂可完全吸附灭活EV71抗原，基团置换在其中发挥了重要作用。
2023年06期 v.36 651-656页 [查看摘要][在线阅读][下载 894K] [下载次数：298 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 付明月;吴月;陈子杨;常东英;王清爽;常军亮;
目的 串联表达、纯化森林脑炎病毒（tick-borne encephalitis virus,TBEV）E蛋白Domain Ⅲ（ED Ⅲ），并制备多克隆抗体。方法 Trizol法提取TBEV RNA，反转录为cDNA，以其为模板PCR扩增ED Ⅲ基因片段，采用重叠PCR法将2段ED Ⅲ基因片段通过疏水性柔性多肽（G_4S）_3连接为融合基因，与原核表达载体pET-28a（+）连接，构建重组表达质粒pET-28a-2ED Ⅲ，经测序鉴定后，转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，Ni~(2+)亲和层析纯化。以复性后的重组蛋白为免疫原，免疫雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体，间接ELISA法检测效价，Western blot法鉴定特异性。利用DNAMAN软件分析TBEV与其他黄病毒ED Ⅲ氨基酸序列同源性。结果 重组质粒pET-28a-2ED Ⅲ经测序鉴定，扩增序列包含2段与GenBank上登录的TBEV“森张”株（JQ650523.1）E序列一致的基因，证明质粒构建正确。诱导表达的重组2ED Ⅲ蛋白相对分子质量约21 000，主要以包涵体形式存在，纯度可达97.5%。兔抗2ED Ⅲ血清多克隆抗体效价为1∶107，可与TBEV全病毒发生特异性反应。经DNAMAN软件比对，TBEV与日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）、黄热病病毒（yellow fever virus,YFV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）ED Ⅲ氨基酸序列同源性分别为36.56%、9.28%、30.77%。结论 成功构建了TBEV ED Ⅲ串联重组表达质粒pET-28a-2ED Ⅲ，表达的重组2ED Ⅲ蛋白具有良好的反应性和免疫原性，制备的多克隆抗体效价较高。
2023年06期 v.36 657-662页 [查看摘要][在线阅读][下载 1065K] [下载次数：159 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 王绿音;张慧;吕萍;李晶;梁成罡;
目的 研制首批重组胰蛋白酶国家标准品，以规范并提高重组胰蛋白酶的质量。方法 通过酶底物反应鉴别、HPLC鉴别、N-末端氨基酸序列测定、质谱分子量测定对重组胰蛋白酶进行定性及结构确证；HPLC法测定纯度；参照《中国药典》三部（2020版）通则3603中的相关方法，对待标品进行比活性测定，并对待标品进行均一性及稳定性考察。结果 确证了重组胰蛋白酶的结构，并确定了首批重组胰蛋白酶标准品比活性为5 169 U/mg，含β-胰蛋白酶80%、α-胰蛋白酶9%。12支待标品的α、β-胰蛋白酶纯度和保留时间的RSD均小于2.0%。于25℃，相对湿度（relative humidity,RH）80%条件下放置10 d,α、β-胰蛋白酶纯度无明显下降，于40℃，RH 80%条件下放置10 d,β-胰蛋白酶纯度略有下降，α-胰蛋白酶纯度略有升高；光照（4 000 lx）条件下放置10 d,β-胰蛋白酶纯度略有下降。结论 研制了结构准确且纯度较高的重组胰蛋白酶国家标准品，可用于重组胰蛋白酶纯度系统适用性试验。
2023年06期 v.36 663-667页 [查看摘要][在线阅读][下载 854K] [下载次数：233 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 刘畅;裴晋红;穆秀丽;于保锋;
目的 探讨多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂Ponatinib对人肝癌细胞SK-Hep-1增殖、黏附和迁移能力的影响。方法 常规培养SK-Hep-1细胞，分别加入Ponatinib等24种酪氨酸激酶抑制剂，MTT法检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞存活和增殖的影响。常规培养SK-Hep-1细胞至融合度达90%，分别加入0.1、0.5和1.0μmol/L Ponatinib，同时设对照组（不加Ponatinib），细胞缓慢聚集试验和细胞分离试验检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞黏附能力的影响；划痕试验检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞迁移能力的影响；Western blot法检测Ponatinib对SK-Hep-1细胞中E-cadherin蛋白表达水平的影响。结果 24种酪氨酸激酶抑制剂对SK-Hep-1细胞均有抑制作用，其中Ponatinib抑制作用最强，IC_(50)达（0.288±0.044）μmol/L。与对照组比较，0.1、0.5和1.0μmol/L Ponatinib组细胞团块数明显减少（t分别为16.143、44.002、44.853,P均<0.001），含EDTA(TE)及CaCl_2(TC)胰酶消化后单个细胞数（N）的比值（N_(TC)/N_(TE)）明显降低（t分别为4.276、10.625、27.571,P均<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（t分别为-3.757、-4.561、-6.922,P均<0.05）；划痕24及48 h后，0.1μmol/L Ponatinib组细胞划痕迁移率差异无统计学意义（t分别为0.473和0.872,P均> 0.05），但0.5及1.0μmol/L Ponatinib组明显减小（t=6.272～16.733,P均<0.01）。结论 Ponatinib可抑制SK-Hep-1细胞增殖和迁移，促进细胞黏附。
2023年06期 v.36 668-672+679页 [查看摘要][在线阅读][下载 1043K] [下载次数：131 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 蒙玉娜;马淑萍;党春艳;薛丽;李红玲;
目的 评价邻香草醛基席夫碱配体衍生物VALD-3对结直肠癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法 体外培养HT-29和HCT116细胞，MTT法检测VALD-3(5、10、20、40 mg/L)对两种细胞增殖的抑制作用；倒置显微镜观察VALD-3(10、20、40 mg/L)对两种细胞形态变化的影响；细胞划痕试验检测VALD-3(10、20、40 mg/L)对HT-29细胞迁移能力的影响；流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色法检测VALD-3(10、20、40 mg/L)对HT-29细胞凋亡的影响；Western blot法检测VALD-3(5、10、20、40 mg/L)对HT-29细胞中凋亡相关蛋白表达水平的影响。实验均设阴性对照组（不加VALD-3）。结果 与阴性对照组比较，10、20、40 mg/L VALD-3组HT-29和HCT116细胞存活率明显下降（t=7.717～2 006.148,P均<0.05）;10、20和40 mg/L VALD-3组HT-29和HCT116细胞随着VALD-3浓度增加，细胞数目明显减少，且细胞出现不规则形态，逐渐变圆、变小，细胞碎片增多；10、20和40 mg/L VALD-3组HT-29细胞划痕迁移率均明显降低（t=7.596～73.780,P均<0.01），凋亡率明显升高（t=7.092～8.057,P均<0.01），且凋亡细胞明显增多，产生强烈的亮蓝色荧光，染色质浓缩，细胞核碎裂；5、10、20、40 mg/L VALD-3组HT-29细胞中cleaved caspase-3和Bax蛋白水平明显升高（t=2.998～24.901,P均<0.05）,40 mg/L VALD-3组Bcl-2蛋白水平明显降低（t=10.035,P <0.05）,20、40 mg/L VALD-3组cleaved caspase-8明显升高（t分别为12.630和8.064,P均<0.01）。结论 VALD-3可抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移，诱导细胞凋亡，这些作用是通过调节cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、Bax和Bcl-2蛋白表达实现的。
2023年06期 v.36 673-679页 [查看摘要][在线阅读][下载 1267K] [下载次数：156 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 马琳琳;刘莹;俞露;朱秋媚;刘涵;毕江坤;张凯宁;
目的 建立全柱成像毛细管等电聚焦电泳（image capillary isoelectric focusing,iCIEF）方法分析重组人生长激素（recombinant human growth hormone,rhGH）Fc融合蛋白（Fc-rhGH）的电荷异质性，并对方法进行验证。方法 通过对目标蛋白浓度、助溶剂（尿素）浓度、聚焦时间的优化建立Fc-rhGH的iCIEF分析方法。采用该方法与传统平板等电聚焦电泳（isoelectric focusing,IEF）同时分析目标蛋白，并比较分析结果；对建立的方法进行特异性、准确性、精密性、定量限（limit of quantitation,LOQ）、耐用性验证。结果 优化后的方法为采用8 mol/L尿素、0.35%甲基纤维素（methyl cellulose,MC）、4%两性电解质、0.5%等电点标记物混合溶液为样品缓冲液，聚焦条件为：1 500 V 1 min,3 000 V 5.5 min。IEF不适用于分析Fc-rhGH原液的电荷异质性。采用优化的iCIEF进行分析，目标蛋白能明显区别于非相关蛋白，且空白试剂基线平稳；准确性验证回收率在90%～110%之间，线性范围为0.25～0.75 mg/mL（目标上样量的50%～150%）；重复性验证中各异构体pI的RSD均小于0.3%，峰面积百分比RSD均小于5%；定量限为0.04 mg/mL；方法的样品保存时间耐用性、两性电解质pharmalyte 3-10耐用性和MC耐用性良好。采用该方法分析Fc-rhGH理化对照品的电荷异质性，可有效分离对照品的8个电荷异质体，pI范围在5.9～6.4。结论 建立的iCIEF法具有良好的特异性、准确性、精密性、耐用性，比传统平板IEF更适合高效分析Fc-rhGH的电荷异质性，对Fc-rhGH及其他Fc融合蛋白的质量控制具有重要意义。
2023年06期 v.36 700-706+713页 [查看摘要][在线阅读][下载 962K] [下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 刘利强;包小华;周慧明;曾智;刘建华;张海平;迟宝琦;汪树生;刘大维;
目的 建立能够进行定性及定量分析的人用狂犬病疫苗（Vero细胞）原液宿主残余DNA检测的qPCR法，并进行验证。方法 用Vero细胞DNA定量国家标准品建立qPCR标准曲线，磁珠法提取Vero细胞残余DNA。对该方法进行专属性、重复性、中间精密度、准确度及耐用性验证，并确立线性范围及定量限。用该方法对3批人用狂犬病疫苗（Vero细胞）原液残余DNA进行定量分析及片段大小定性分析。结果 采用qPCR法检测Vero细胞DNA定量国家标准品，标准曲线相关系数（R~2）均> 0.99,DNA检测范围为0.3 pg/mL～30 ng/mL。该方法专属性、重复性好，中间精密度、准确度及耐用性验证中，样品检测结果的相对标准偏差（RSD）均<10%。3批原液Vero细胞残余DNA含量为0.20～0.77 ng/剂，符合《中国药典》三部（2020版）相关标准；残余DNA>154 bp的片段占52%～63%。结论 建立的方法专属性、重复性、中间精密度、耐用性好，可快速、准确地进行残余DNA的定性及定量分析，对人用狂犬病疫苗（Vero细胞）生产过程中和最终产品残余DNA含量的检测及控制具有重要意义。
2023年06期 v.36 707-713页 [查看摘要][在线阅读][下载 1121K] [下载次数：346 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李红;石刚;郭丽娜;陈琼;付宏斌;王国东;胡小华;朱卫华;王斌;叶强;
目的 验证人血清中福氏2a及宋内志贺菌O-特异性多糖（分别简称福氏2a多糖及宋内多糖）抗体IgG含量的ELISA定量检测方法，并用于福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后人血清样本的检测。方法 将参考血清及质控血清按一定比例混合，制备成10份不同浓度的血清样本（编号为S1～S10），采用企业提供的间接ELISA定量检测方法检测样本，连续测定6 d，计算多糖抗体IgG回收率和变异系数（coefficient of variation,CV），并以回收率CV低于20%的相应参考血清含量作为定量限（limit of quantitation,LOQ）。采用相同检测方法连续6 d测定血清样本S10及质控血清，每天重复检测3次，计算CV；采用参考血清进行多糖竞争抑制ELISA试验，计算血清对多糖的抑制率。采用企业提供的方法检测参考血清，确定线性范围，获得曲线方程，计算相关系数（R~2）。采用验证的方法检测1 842份福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后的人血清样本。结果 10份血清样本中福氏2a和宋内多糖抗体IgG回收率分别为73.21%～222.68%和83.67%～123.56%；试验间及试验内精密性CV均<30%；参考血清对100μg/mL福氏2a和宋内多糖的抑制率分别为85.95%和88.42%；福氏2a和宋内多糖抗体IgG检测的线性范围分别为0.05～0.125和0.025～0.125 EU/mL,R~2均≥0.99,LOQ分别为0.050和0.025 EU/mL。福氏宋内痢疾双价疫苗免疫后血清IgG含量大幅高于免疫前。结论 企业提供的ELISA定量检测方法具有良好的准确性、精密性及特异性，可用于痢疾疫苗免疫血清的检测。
2023年06期 v.36 714-718+723页 [查看摘要][在线阅读][下载 881K] [下载次数：145 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 蒋国润;赵恒;廖芸;范胜涛;李丹丹;张莹;于丽;王丽春;李琦涵;徐兴丽;
目的 分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性，为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法 采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法（分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原）检测SARS-CoV-2灭活疫苗临床试验血清样品的IgG抗体阳转率及中和抗体滴度，并进行微量细胞中和试验与3种ELISA方法的相关性分析。结果 中和抗体、S抗体、N抗体和全病毒抗体检测所得抗体阳转率分别为84.3%、91.3%、65.2%和46.6%，抗体几何平均滴度分别为16.6、945.9、72.7和18.8。3种ELISA方法（分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原）与微量细胞中和试验检测结果的相关系数（r）分别为0.494、0.371和0.181。结论 检测SARS-CoV-2 S抗体水平能在很大程度上反映以抗体水平升高为特征的体液免疫反应的激活情况。
2023年06期 v.36 719-723页 [查看摘要][在线阅读][下载 857K] [下载次数：182 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 汪梦俊;申硕;
近年来，越来越多的冠状病毒（coronaviruses,CoV）跨越种属屏障，由动物传播至人，引发多起严重的公共卫生事件，并给全球经济造成巨大损失。疫苗接种是目前防范CoV大流行最有效的措施，安全、高效、快捷的疫苗平台是疫苗研发的基础。而伴随着反向遗传学技术的日益成熟，其也越来越多地应用于CoV疫苗的研发中。本文就目前应用于CoV研究中的几种反向遗传学技术及其可能在CoV疫苗研发中的应用作一综述。
2023年06期 v.36 724-730页 [查看摘要][在线阅读][下载 899K] [下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 马春英;王美皓;马忠仁;王家敏;
以聚酯纤维为基质的片状载体具有良好的耐酸碱性、耐热性、生物相容性以及不可生物降解、促进细胞黏附和生长等优点。片状载体无动物源性成分，生物安全性高，是细胞培养基质的首选载体之一。近年来，随着生物技术的发展，广泛应用于细胞基质生物制品等研发及生产中。本文对片状载体的结构和细胞培养特点以及在疫苗生产、细胞治疗和组织工程等中的应用作一综述，为片状载体技术后续的进一步研发和应用提供理论依据。
2023年06期 v.36 731-736+741页 [查看摘要][在线阅读][下载 1023K] [下载次数：284 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王丽;杨英;
血液肿瘤的发病率逐年上升，儿童白血病是儿童发病率最高的一种恶性肿瘤，多种基因变异与血液肿瘤的发生发展密切相关。载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3B(apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide 3B,APOBEC3B)是胞嘧啶脱氨酶家族成员之一，可诱导靶DNA或RNA产生突变，是肿瘤基因组损伤的原因之一，在多种血液肿瘤中表达水平均较高。本文主要就APOBEC3B在血液肿瘤中作用的研究进展作一综述，以期为血液肿瘤靶向治疗及实现精准个性化治疗提供潜在靶点。
2023年06期 v.36 737-741页 [查看摘要][在线阅读][下载 854K] [下载次数：54 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 肖莉春;杜娟;张芳梅;朱迎男;
新型冠状病毒肺炎（Coronavirus Disease 2019,COVID-19）的大流行给人类健康、生活和全球经济带来了巨大影响。开发安全有效的疫苗，是保护人类免受感染，同时限制病毒传播最有效的干预措施。依据目前各国对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)疫苗研发的指导要求及疫苗的研究进展，本文参考国内外指导原则和相关文献，对当前SARS-CoV-2疫苗的非临床安全性评价的研究进展作一概述，以期为SARS-CoV-2疫苗的非临床研究提供参考。
2023年06期 v.36 742-750页 [查看摘要][在线阅读][下载 947K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张学文;吴念平;周策凡;唐景峰;
自噬是细胞内溶酶体降解物质的自我吞噬过程。机体在正常条件下，细胞可利用自噬清除自身垃圾来提供能量，而在应激状态下自噬也可被激活，造成细胞损伤和死亡，严重时可引发肿瘤。B细胞淋巴瘤-2蛋白相互作用中心卷曲螺旋蛋白1(B-cell lymphoma-2-interacting myosin-like coiled-coil protein 1,Beclin1)在自噬通路中处于中心节点，与多种蛋白相互作用调控自噬体形成与成熟。Beclin1在自噬过程中受激酶介导的蛋白修饰作用，Beclin1蛋白修饰会影响其活性及与其他自噬相关蛋白的相互作用。Beclin1与人类肿瘤的发生和发展过程密切相关。本文就Beclin1在自噬中的作用机制及其蛋白修饰的研究进展作一综述，以期为肿瘤自噬靶向药物的研究提供参考。
2023年06期 v.36 751-758+763页 [查看摘要][在线阅读][下载 974K] [下载次数：508 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 孙耕天;任金娜;钱明;
凝胶作为一项新的研究领域倍受关注，并已广泛应用于组织工程、药物传递及生物感受器的研究中。水凝胶是细胞的载体，而细胞的存活与死亡是决定构建组织器官的关键之一。但细胞的活力和生物学行为由于水凝胶与培养基中营养物质的交换而受到限制。本文对水凝胶的种类、水凝胶与培养基中营养物质的交换方式及影响因素作一综述，为组织生物工程的发展和研究提供参考。
2023年06期 v.36 759-763页 [查看摘要][在线阅读][下载 828K] [下载次数：234 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 项婷婷;马淑敏;沃恩康;
疫苗在传染性疾病预防控制中发挥重要作用。细菌鞭毛蛋白能激活宿主细胞Toll样受体5(Toll like receptor 5,TLR5)和NOD样受体C4(NOD like receptor C4,NLRC4)，具有免疫佐剂效应。作为新型免疫佐剂，鞭毛蛋白既能与抗原蛋白共同作用，又能与抗原蛋白融合表达，均能显著提高免疫效果；同时，其在黏膜免疫和抗肿瘤免疫中也取得较好的应用效果，成为疫苗佐剂研发的热点。本文主要就细菌鞭毛蛋白作为疫苗佐剂应用的研究进展作一综述，以期为鞭毛蛋白佐剂疫苗的研发提供新思路。
2023年06期 v.36 764-768页 [查看摘要][在线阅读][下载 844K] [下载次数：353 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] 下载本期数据