疫苗研究

• H5N1型流感病毒灭活疫苗（MDCK细胞）原液蛋白成分分析

  刘博;张青梅;邱冉;李芳;彭飞霞;张文佳;苏敏讷;张哲罡;张家友;杨晓明;

  目的 对H5N1型流感病毒灭活疫苗(MDCK细胞)原液蛋白成分进行分析，为完善该疫苗的质量控制方法及疫苗的研发提供依据。方法 将H5N1型流感病毒株接种于MDCK细胞，病毒培养48 h后，收获病毒液，经澄清、超滤浓缩、β-丙内酯灭活、Capto Q和Sephorase 4FF两步层析纯化，获得原液样品。应用透射电镜分析样品中病毒颗粒的形态；单向免疫扩散(single radial immunodiffusion,SRID)试验鉴别病毒原液血凝素(hemagglutinin,HA)；高效液相色谱进行纯度分析；梯度SDS-PAGE进行蛋白电泳分析；液质联用仪(LC/MS)结合对回收的各条带蛋白多肽进行二级质谱序列测定的方法分析样品中所含的蛋白成分。结果 在透射电镜下可观察到80～120 nm球形H5N1流感病毒颗粒，呈典型的流感病毒形态；鉴别试验表明病毒原液抗原性与病毒株相一致；经梯度SDS-PAGE分析，病毒原液有2条带；LC/MS质谱分析显示，原液样品中H5N1型流感病毒蛋白为主要成分，包括H5N1型流感病毒的NP、M1、HA、NA等蛋白。结论 对H5N1型流感病毒灭活疫苗制备过程中原液的蛋白成分进行了分析，为该类疫苗的研发及质量控制提供了参考依据。

  2023年04期 v.36 385-388+394页 [查看摘要][在线阅读][下载 870K]
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• 多次穿刺对5剂量西林瓶包装Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗质量的影响

  周振歆;易力;刘一凡;高承刚;胡云光;赵勇;李亚东;张晗;起李光程;

  目的 评价多次穿刺对5剂量西林瓶包装Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strains,sIPV)质量的影响。方法 取3批储存约24个月的sIPV，室温平衡至少20 min，开盖取样，即为穿刺前样品；另取相同3批sIPV，于第0、7、14、21、28天分别进行第1～5针穿刺取样，每次取样前均于室温平衡至少20 min，每次取样后剩余样品均返回2～8℃保存。按企业注册标准(YBS01052021)的要求对穿刺前和第5针穿刺样品进行全项检测，其他4针穿刺样品进行pH、渗透压摩尔浓度、无菌试验、细菌内毒素、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒D抗原含量、外观、异常毒性检查、蛋白质含量、2-苯氧乙醇含量检测。计算每针穿刺样品的2-苯氧乙醇含量、蛋白质含量、渗透压摩尔浓度及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒D抗原含量的相对变化率，应用SPSS 20软件对各项指标的相对变化率进行单因素方差分析，评价多次穿刺对sIPV质量的影响。结果 sIPV穿刺前后样品的各项检测结果均符合企业注册标准。每针穿刺样品间2-苯氧乙醇含量、蛋白质含量、Ⅱ、Ⅲ型病毒D抗原含量的相对变化率差异均无统计学意义(F分别为2.125、1.155、1.137、1.882,P分别为0.152、0.386、0.393、0.190)；渗透压摩尔浓度及Ⅰ型病毒D抗原含量的相对变化率差异有统计学意义(F分别为4.750和4.010,P分别为0.021和0.034)。Duncan检验结果显示，与第1针比较，第2、3针穿刺样品的渗透压摩尔浓度相对变化率差异不显著，第4针差异显著，第5针又相对稳定；第1、2、4和5针穿刺样品间Ⅰ型病毒D抗原含量的相对变化率差异不显著，第3针与其他4针间存在显著差异。结论 28 d内5次穿刺对5剂量西林瓶包装sIPV的质量无影响。

  2023年04期 v.36 389-394页 [查看摘要][在线阅读][下载 880K]
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• 稳定表达胰蛋白酶原的重组MDCK细胞分离流感病毒效果初步分析

  江征;赵慧;张哲罡;张家友;李长贵;杨晓明;

  目的 初步考察稳定表达胰蛋白酶原的重组MDCK细胞(即MTY6细胞)分离流感病毒的效果。方法 按照世界卫生组织(World Health Organization,WHO)全球流感监测网络和国家流感中心(National Influenza Centers,NICs)推荐的病毒分离方法，使用MDCK和MTY6细胞同步分离包含H1N1、H3N2和B型流感病毒核酸阳性的咽拭子样本共20份，对分离培养液分别使用豚鼠红细胞和鸡血红细胞进行凝集试验，统计比较不同类型红细胞凝集效果，以及不同细胞分离病毒阳性率和血凝素滴度。结果 相同病毒分离物对两种类型红细胞的凝集效果不同，豚鼠红细胞完全凝集时间约为鸡血红细胞2倍，沉积形状呈环状，血凝滴度平均为鸡红细胞的23.6±1.2倍。相同条件下，有3份样本两种细胞均分离阴性，11份样本两种细胞均分离阳性，其余6份样本MDCK细胞分离阴性，而MTY6细胞分离阳性，MTY6细胞分离阳性率较MDCK细胞高30%；分离阳性样本包括H1N1亚型8份，MTY6细胞分离病毒血凝素滴度显著高于MDCK细胞，平均为13.0(1.7,23.0)倍；H3N2亚型和B型各2份，MTY6细胞分离病毒血凝素滴度均高于MDCK细胞，平均为11.3和32.0倍。结论 综合考虑，对于细胞分离流感病毒检测，豚鼠红细胞优于鸡血红细胞。相同条件下，MTY6细胞较MDCK细胞分离流感病毒的灵敏度更高，具有作为流感病毒分离优质细胞基质的潜力。

  2023年04期 v.36 395-399+405页 [查看摘要][在线阅读][下载 837K]
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基础研究

• 靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9系统的构建及其打靶效力验证

  杨玲玲;陈玲;李锦昆;王川贵;李勇;岳鹏鹏;于鸿浩;

  目的 设计并构建靶向Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统，并在细胞水平验证基因编辑效力。方法针对小鼠Tsc1和Tsc2基因分别设计3个sgRNA导向序列，构建sgRNA表达载体，与Cas9表达质粒共转染小鼠N2a细胞，经药物筛选获得阳性细胞后，PCR扩增打靶位点的DNA片段，利用TA克隆测序验证打靶效率。结果 Tsc1基因Tsc1-M-sgRNA2、Tsc1-M-sgRNA3及Tsc2基因Tsc2-M-sgRNA1、Tsc2-M-sgRNA2、Tsc2-M-sgRNA3这5个靶点均发生基因编辑，编辑效率分别为40%、80%、30%、30%和20%。结论 成功构建了有编辑效力的靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR-Cas9基因编辑系统。

  2023年04期 v.36 400-405页 [查看摘要][在线阅读][下载 1168K]
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• 融合蛋白ABD-Fc-IL-2的真核表达及其生物学活性鉴定

  柴欣秀;张波;王静娜;孔道春;郭睿;

  目的 真核表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2，并检测其生物学活性。方法 通过直接PCR及重叠延伸PCR法扩增目的基因SP-ABD-Fc-IL-2，连接至载体pcDNA3.1(+)，获得重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2。将重组质粒转染CHO-S细胞表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2，并进行Protein A beads亲和层析纯化。Western blot法检测纯化融合蛋白的特异性，CTLL-2/MTT细胞增殖比色法测定其生物学活性，pull down/Western blot法检测融合蛋白中链球菌蛋白G的白蛋白结合结构域(albumin-binding domain,ABD)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的相互作用。结果重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2经双酶切及测序鉴定，证明构建正确。纯化融合蛋白ABD-Fc-IL-2纯度达90%，可与鼠抗IL-2单克隆抗体发生特异性结合，生物学活性为3.29×108IU/mL，融合蛋白中ABD与HSA可相互结合。结论 真核表达的融合蛋白ABD-Fc-IL-2具有较高的生物学活性，可促进CTLL-2细胞增殖，且保持了ABD片段与HSA结合的能力。

  2023年04期 v.36 406-410+418页 [查看摘要][在线阅读][下载 889K]
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诊断制剂

• 重组SARS-CoV-2蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒的研制

  安超强;刘东;卞莲莲;刘明琛;么山山;徐康维;李长贵;吴星;毛群颖;高帆;徐苗;姜崴;梁争论;

  目的 制备重组严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)蛋白疫苗抗原含量通用检测试剂盒，并进行验证。方法 选用中国食品药品检定研究院(简称中检院)制备的羊抗S蛋白多克隆抗体作为包被抗体，从4株单克隆抗体(14C8、15F9、17A7和20D8)中筛选出1株具有受体结合域(receptor-binding domain,RBD)结合活性高，且广谱抗主要突变株的单克隆抗体作为酶标抗体(用HRP标记)，制备重组SARS-CoV-2疫苗抗原含量的双抗体夹心ELISA法通用检测试剂盒，并采用棋盘滴定法对包被抗体稀释度(1∶125～1∶4 000)和酶标抗体稀释度(1∶250～1∶32 000)进行优化。验证试剂盒的专属性、线性范围、准确性、精密性及耐用性。将制备的通用检测试剂盒分发给12个实验室，检测各实验室自制的不同表达系统(CHO细胞、毕赤酵母、Sf9细胞或大肠埃希菌)和目的蛋白(RBD或S蛋白)的15批重组SARS-CoV-2蛋白疫苗原液(包括11批以WT株为参考序列设计的原液及4批以Beta、Gamma和Delta变异株设计的原液)。结果 确定包被抗体最佳稀释度为1∶500，单克隆抗体20D8作为酶标抗体，最佳稀释度为1∶4 000。通用检测试剂盒与严重急性呼吸综合征(SARS)和中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome,MERS)病毒的重组S蛋白无交叉反应；第1代重组SARS-CoV-2蛋白疫苗抗原国家标准品(简称国家标准品)浓度在0.16～2.50 U/mL范围内，与A450/630呈良好的线性关系，线性方程为：y=0.791 x-0.100 4,R2=0.993 7;0.16～2.50 U/mL国家标准品重复6次检测结果回收率均在95%～104%之间，变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;2名实验员在不同时间重复3次检测结果的CV为4.4%～6.6%；在不同温度及时间条件下检测结果回收率均在80%～120%范围内。15批重组SARS-CoV-2蛋白疫苗原液抗原含量的检测结果与国家标准品均具有良好的平行性。结论 本研究建立的抗原含量通用检测试剂盒具有良好的专属性、准确性、精密性及耐用性，可用于重组SARSCoV-2蛋白疫苗抗原含量的检测。

  2023年04期 v.36 411-418页 [查看摘要][在线阅读][下载 1011K]
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• 柯萨奇病毒A16型核酸检测试剂国家参考品的建立

  郝晓甜;李曼郁;李克坚;周诚;

  目的 建立柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CA16)核酸检测试剂国家参考品，并制定其质量标准。方法收集并筛选CA16核酸阳性和阴性样本，分装、冻干后，建立CA16核酸检测试剂国家参考品。采用不同企业的试剂对参考品进行协作标定，根据协作标定结果确定参考品的质量标准，并考察其均匀性和稳定性。结果 CA16核酸检测试剂国家参考品由9份阳性参考品，8份阴性参考品，1份检测限参考品和1份精密度参考品组成。其质量标准为：阳性参考品符合率≥8/9；阴性参考品符合率为8/8；最低检测限为稀释度不低于1∶103；精密度参考品稀释100倍后重复检测10次，结果均为阳性，且Ct值的CV≤5%。该参考品均匀性符合要求，室温(25℃)放置1 d、反复冻融3次均未影响参考品的稳定性。结论 建立了首批CA16核酸检测试剂国家参考品，并制定了质量标准，为相关试剂的质量控制和评价提供了依据。

  2023年04期 v.36 419-422+428页 [查看摘要][在线阅读][下载 815K]
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治疗制剂

• 乙型流感病毒感染过程中干扰素介导的天然免疫应答

  蒲飞洋;汪梦竹;冯茜莉;赵泽阳;杨光美;李倬;马忠仁;马晓霞;

  目的 探讨乙型流感病毒(influenza B virus,IBV)感染引起干扰素(interferon,IFN)介导的天然免疫应答。方法以IBV感染犬肾上皮细胞(MDCK)为模型，通过荧光定量PCR法检测IFN信号通路的激活以及IFN刺激基因的表达。收集IBV感染MDCK细胞36及48 h上清，与新鲜培养基混合培养IBV感染MDCK细胞，qPCR法检测内源性IFN的抗病毒作用。加入JAK-STAT通路抑制剂CP后，收集IBV感染MDCK细胞上清，培养IBV感染MDCK细胞，通过qPCR法检测JAK-STAT通路抑制后对内源性IFN抗病毒作用的影响。结果 IBV可有效激活IFN信号通路，并诱导产生Ⅰ型IFN(IFNα、IFNβ)以及Ⅲ型IFN(IFNλ1、IFNλ3)为主的细胞因子。同时，IBV感染MDCK细胞后可诱导产生一系列具有广谱抗病毒作用的IFN刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)，如ISG15、CCL5、CXCL10、MX1、RIG-I。用JAKSTAT通路抑制剂CP抑制该信号通路后，IBV感染MDCK细胞所诱导生成的ISGs的能力及其相应的抗病毒作用均被显著抑制。结论 IBV感染MDCK细胞可有效激活Ⅰ型及Ⅲ型IFN介导的JAK-STAT信号通路，本研究为进一步了解IBV与宿主的相互作用关系提供了参考。

  2023年04期 v.36 423-428页 [查看摘要][在线阅读][下载 898K]
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• 重组5型腺相关病毒基因组滴度测定用国家标准品的研制

  郑红梅;于雷;李永红;史新昌;安怡方;郭莹;韩春梅;饶春明;周勇;

  目的 研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法 对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液，按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、感染滴度等检定，根据结果稀释、分装，制备成候选标准品；采用热加速试验对候选标准品进行稳定性考察；组织3家实验室，采用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)法对候选标准品进行协作标定。结果 候选标准品原液及候选标准品的各项检测指标均符合相关要求；在25、4、-20、-40、-80℃条件下，1、3、4、6个月基因组滴度均无明显下降；经3家实验室协作标定，候选标准品赋值为2.56×10~(12)copies/mL,95%置信区间为2.48×1012～2.64×10~(12)copies/mL。结论 研制的rAAV5基因组滴度测定用国家标准品具有良好的稳定性，可用于rAAV5相关产品的质量评价。

  2023年04期 v.36 429-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 807K]
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• 苦豆碱对白细胞介素-1β诱导软骨细胞损伤的作用及其机制

  胡华;李连泰;施保柱;刘艳伟;王书君;谢双喜;孙建君;

  目的 探讨苦豆碱(aloperine,ALO)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导软骨细胞损伤的作用及其机制。方法 将软骨细胞随机分为(1)空白对照(Con)、IL-1β、IL-1β+ALO-L(25 mg/L)、IL-1β+ALO-M(50 mg/L)、IL-1β+ALO-H(100 mg/L)组；(2)Con、IL-1β、IL-1β+miR-NC、IL-1β+miR-16-5p组；(3)Con、IL-1β、IL-1β+si-NC、IL-1β+si-SOX5组。IL-1β组细胞加入10 ng/mL的IL-1β,Con组不进行任何处理。qRT-PCR法检测软骨细胞中miR-16-5p和SOX5基因mRNA转录水平；ELISA法检测IL-6、TNF-α和IL-1β含量；Western blot法检测Bcl-2、Bax、SOX5蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 与IL-1β组比较，IL-1β+ALO-L、IL-1β+ALO-M、IL-1β+ALO-H组软骨细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(t=5.002～20.653,P均<0.001)，细胞凋亡率显著降低(t=5.473～17.371,P均<0.001),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(t=7.800～16.100,P均<0.001),Bax蛋白表达水平显著降低(t=4.993～14.311,P均<0.001);miR-16-5p基因mRNA转录水平显著升高(t=6.688～16.545,P均<0.001),SOX5基因mRNA转录水平及其蛋白表达水平均明显降低(t=4.609～15.393,P均<0.001)。与IL-1β+miRNC组比较，IL-1β+miR-16-5p组min-16-5p基因mRNA转录水平明显升高(t=17.106,P <0.001),IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(t=15.030～20.013,P均<0.001)，细胞凋亡率明显降低(t=12.273,P <0.001),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(t=15.652,P <0.001),Bax蛋白表达水平显著降低(t=12.999,P <0.001)。与IL-1β+si-NC组比较，IL-1β+si-SOX5组SOX5蛋白表达水平显著降低(t=13.444,P <0.001),IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(t=14.087～17.103,P均<0.001)，细胞凋亡率明显降低(t=11.991,P <0.001),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(t=13.864,P <0.001),Bax蛋白表达水平显著降低(t=11.818,P <0.001)。结论 ALO可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡，从而降低软骨细胞损伤，其机制可能是通过调节软骨细胞中miR-16-5p和SOX5表达水平及炎症因子的分泌水平实现的。

  2023年04期 v.36 434-441+447页 [查看摘要][在线阅读][下载 1060K]
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临床研究

• 2016—2021年北京市顺义区6月龄～5岁儿童流感疫苗接种率及安全性分析

  唐莹;黄蓉;王凤双;肖雷;

  目的 了解2016—2021年北京市顺义区6月龄～5岁儿童流感疫苗接种率和影响因素，分析疫苗接种后疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)监测情况。方法 收集2016—2021年北京市顺义区儿童流感疫苗接种、AEFI报告资料以及患基础疾病儿童在“预防接种建议”试行后流感疫苗接种情况和随访观察资料，分析疫苗接种率和AEFI报告情况。结果 2016—2021年北京市顺义区6月龄～5岁儿童共接种流感疫苗11 996人，接种率呈逐年增高趋势(χ~2=11 921.129,P <0.01；χ~2趋势=8 881.396,P <0.01)，随着年龄增长，流感疫苗接种率有升高趋势(χ~2=4 073.395,P <0.01；χ~2趋势=3 495.611,P <0.01)；城区儿童接种率高于农村地区(χ~2=497.153,P <0.01),9名符合“预防接种专家建议”的基础疾病儿童接种流感疫苗后随访观察未出现不良反应。结论 北京市顺义区6月龄～5岁儿童流感疫苗接种率较低，未监测到不同于其他疫苗的不良反应。“预防接种建议”指导下患基础疾病儿童接种流感疫苗安全可靠。

  2023年04期 v.36 442-447页 [查看摘要][在线阅读][下载 836K]
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• 2019—2021年上海市金山区企业人群麻疹风疹联合减毒活疫苗补充免疫效果分析

  周杰;施娟辉;王芳;李淑华;

  目的 分析2019—2021年上海市金山区企业人群麻疹风疹联合减毒活疫苗(measles and rubella combined attenuated live vaccine,MR)补充免疫(supplementary immunization activity,SIA)的效果。方法 收集2019—2021年金山区437名企业人员MR疫苗接种前和接种后1个月血清，2 mL/人，ELISA法定量检测麻疹IgG抗体水平，计算几何平均浓度(geometric mean concentration,GMC)。麻疹IgG抗体GMC≥200 mIU/mL时判为抗体阳性，≥800 mIU/mL为保护性抗体阳性；接种MR后，麻疹IgG抗体由阴性转为阳性或麻疹IgG水平升高≥4倍时，判为免疫有效。结果MR接种前麻疹抗体阳性率、保护性抗体阳性率和IgG抗体GMC分别为90.85%、38.44%、795.29 mIU/mL，接种后分别为99.31%、76.20%、1 481.51 mIU/mL。免疫后保护性抗体阳性率(χ~2=21.290,P <0.001)和IgG抗体GMC均明显高于免疫前(t=19.548,P <0.001)。免疫有效率为26.54%，且随着免疫前抗体水平升高呈递减趋势(χ~2=119.022,P <0.001)。结论 在低麻疹抗体水平人群中开展MR SIA效果良好，建议在企业低麻疹抗体水平人员中进行含麻疹成分疫苗的SIA。

  2023年04期 v.36 448-451+457页 [查看摘要][在线阅读][下载 831K]
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技术方法

• 甲型肝炎病毒复合层析介质Capto Core 400的纯化效果

  李春雷;岳立广;夏青娟;王艺博;王昕雷;徐艳玲;

  目的 探索新型复合层析介质Capto Core 400层析填料纯化甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的效果。方法用Capto Core 400层析介质纯化人胚肺二倍体细胞(2BS株)培养收获的HAV粗纯液，经流速(60、150、300、450 cm/h)、上样缓冲液pH(6.6、7.0、7.4)、上样缓冲液盐离子浓度(0、0.15、0.3、0.45 mol/L)、载量[0.5、1、2、4柱体积(column volume,CV)]筛选最适纯化HAV的条件，并与传统Sepharose 4FF层析介质纯化效果进行比较。结果 初步确定Capto Core 400纯化工艺条件为流速150 cm/h、上样缓冲液pH 7.0～7.4、盐离子浓度0.15 mol/L、上样量2 CV时，纯化效果最好，病毒回收率平均为92.61%，蛋白去除率平均为84.25%。Sepharose 4FF层析介质纯化HAV抗原回收率平均为76.03%，蛋白去除率平均为73.21%,Capto Core 400层析介质纯化效果优于Sepharose 4FF层析介质。结论Capto Core 400复合层析介质纯化HAV回收率较高，操作相对简便，适合纯化HAV。

  2023年04期 v.36 452-457页 [查看摘要][在线阅读][下载 918K]
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• SARS-CoV-2 δ变异株S抗原含量检测方法的建立及验证

  陈可芝;钟子辉;王笑天;慕容健昌;张梅;赖文龙;李东;甘建辉;刘萌萌;刘建凯;

  目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)δ变异株S抗原含量的检测方法，并进行验证。方法 采用δ变异株重组表达的受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白分别免疫山羊和家兔，制备抗RBD多克隆抗体。以制备的两种抗RBD多克隆抗体为包被抗体和一抗，HRP标记的羊抗兔IgG抗体为酶标抗体，建立用于检测S抗原含量的双抗体夹心ELISA法。棋盘滴定法确定包被抗体和一抗，同时优化3种抗体稀释度。验证方法的准确性、精密性、线性范围及专属性。采用建立的方法检测SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及其中间品的S抗原含量。结果 兔抗RBD多克隆抗体及羊抗RBD多克隆抗体的效价分别为1∶32 000和1∶64 000，蛋白浓度分别为2.26和5.41 mg/mL。最佳包被抗体为羊抗RBD多克隆抗体，一抗为兔抗RBD多克隆抗体，包被抗体、一抗及酶标抗体最佳稀释度分别为1∶4 000、1∶8 000和1∶16 000。40、20、10 U/mL3种浓度S抗原内部参考品重复6次检测结果的回收率为83.5%～103.0%；重复6次测定3批SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液抗原含量的CV均<7.5%,2名实验员对3批上述疫苗原液重复检测3次结果的CV均<7.5%;S抗原含量理论值在10～40 U/mL范围内，与测定值呈良好的线性关系，线性回归方程为：y=0.942 3 x+0.049 2,R~2=0.995 4，定量限为10 U/mL；建立的方法与甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)、四价流感病毒裂解疫苗、Vero细胞宿主蛋白、Vero细胞培养上清液等无交叉反应。SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及中间品3次检测结果的CV均<15.0%。结论 建立的双抗体夹心ELISA法具有良好的准确性、精密性、专属性，可用于SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及中间品中S抗原的定量检测。

  2023年04期 v.36 458-463页 [查看摘要][在线阅读][下载 869K]
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• 基于补体依赖的水痘-带状疱疹病毒中和抗体效价检测方法的建立及应用

  梁慧颖;李剑楠;刘洪涛;夏立新;张夫坤;徐俊峰;

  目的 建立基于补体依赖的水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)中和抗体效价检测方法并进行应用，以提高传统噬斑减少中和试验检测VZV抗体效价的灵敏度。方法 将抗原(水痘减毒活疫苗)、抗体(人VZV免疫球蛋白)以不同比例、不同时间混合孵育，中和后接种于6孔板培养的人二倍体细胞2BS株培养7～10 d，考马斯亮蓝染色计数噬斑数，通过Karber公式计算50%中和抗体滴度。在最佳中和条件下，通过改变补体(冻干豚鼠血清)添加量来探讨补体对中和试验灵敏度的影响，评估补体的最佳添加剂量。根据确定的中和试验参数，分别采用传统蚀斑法和补体依赖的蚀斑法对12份抗VZV小鼠血清和14份抗VZV人血清进行中和抗体效价检测。结果 确定了检测方法的关键参数：VZV标准抗原使用滴度为500～1 000 PFU/mL，补体在抗原抗体中和体系中添加的比例为1∶10(v/v)，中和条件为37℃中和1 h。补体依赖的蚀斑法和传统蚀斑法检测抗VZV小鼠血清抗体均为阳性，但传统蚀斑法检测抗体效价普遍偏低，接种2剂水痘减毒活疫苗的小鼠抗体水平显著高于接种1剂水痘减毒活疫苗的小鼠(t=0.45,P <0.05)；两种方法检测抗VZV人血清抗体均为阳性。结论 建立了补体依赖的VZV中和抗体效价检测方法，补体的添加显著提高了中和抗体检测的灵敏度。用该方法评价不同免疫策略的小鼠血清的中和抗体效价，得出2剂疫苗的免疫效果优于1剂。

  2023年04期 v.36 464-468页 [查看摘要][在线阅读][下载 828K]
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综述

• 抗SARS-CoV-2药物的临床研究进展

  全佳丽;黄泽宏;陈祺;黄守杰;

  由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染导致的新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19)在全球范围内迅速传播，对公共卫生和世界经济产生了破坏性影响。为减少COVID-19所致疾病负担和公共卫生影响，大量预防和治疗性抗SARS-CoV-2药物正被紧急开发，其中以小分子抗病毒药物和单克隆抗体药物为主。目前中国国家药品监督管理局(National Medical Products Administration,NMPA)或美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)已批准的3款小分子药物和3款单克隆抗体药物正在使用，本文对目前已上市的主要抗SARS-CoV-2药物的临床研究进展及其目前所面临的挑战作一综述。

  2023年04期 v.36 469-477页 [查看摘要][在线阅读][下载 923K]
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• 游离脂肪酸受体在神经系统疾病中作用的研究进展

  刘伟;赵翀翀;

  游离脂肪酸受体(free fatty acid receptors,FFARs)是一系列由游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)及其衍生物激活的孤儿G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)。GPCRs作为跨膜受体，参与了多种疾病的发生发展过程，为这些疾病提供了广泛的治疗靶点。FFARs结合FFAs后主要参与胰岛素等内分泌激素分泌、脂肪细胞分化、炎症反应、自身免疫反应等过程，是能量代谢紊乱和免疫疾病的潜在治疗靶点。但近年研究表明，FFAs及其受体FFARs还可直接或通过脑-肠轴广泛参与神经炎症、神经免疫等反应，有望成为多发性硬化、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)、帕金森病(Parkinson's disease,PD)、抑郁症等疾病治疗的靶点。本文就FFARs在神经系统疾病中作用的研究进展作一综述。

  2023年04期 v.36 478-482+488页 [查看摘要][在线阅读][下载 856K]
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• 生物制品在眼用制剂中的作用机制及临床应用

  刘可轩;朱宸葭;钟心;王嘉仪;来琳琳;

  生物制品是指应用生物技术，以细胞、微生物、动物或人的组织或体液为原料制成的用于预防、诊断、治疗的药品，其在市场上以及临床治疗上所占比例均在不断上升。本文对眼科疾病中常用生物制品在眼用制剂中的应用[如重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor,rbFGF)、小牛血去蛋白提取物等在角膜损伤或角膜炎中的作用]，以及不同生物制品之间联合应用的相关性(如羟糖苷与生长因子类药物联用效果等)作一综述。通过现有药物应用的启发，为生物制品在该领域的发展提供新的方向。

  2023年04期 v.36 483-488页 [查看摘要][在线阅读][下载 911K]
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• 小反刍兽疫病毒与宿主细胞相互作用的研究进展

  金丽;王慧慧;马忠仁;马晓霞;

  小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)感染引起的一种高感染性、高致死率疾病，给国内外养羊业带来巨大经济损失。认识和了解PPRV与宿主的相互作用是了解致病机制的基础和疫病防控的前提。本文对PPRV侵染宿主机体后激活宿主天然免疫应答，病毒蛋白产物介导PPRV实现免疫逃逸，以及诱导细胞凋亡、自噬和炎症小体抵抗病毒等方面的相关研究作一综述，为深入探讨PPRV的免疫逃避作用以及PPRV与宿主相互作用涉及的关键节点提供参考，从而为有效防控PPR的传播提供理论依据。

  2023年04期 v.36 489-494+500页 [查看摘要][在线阅读][下载 857K]
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• 嵌合抗原受体T细胞及T细胞抗原耦合器修饰T细胞技术的研究进展

  陆婷婷;蔡晓晴;徐道俊;

  目前，恶性肿瘤已成为严重威胁人类健康的公共问题之一。除手术、放疗、化疗、靶向疗法等方法外，随着分子生物学的发展，免疫疗法得到迅速发展，成为肿瘤治疗的一种新兴方法。临床免疫疗法采用最多的免疫细胞分别为DC、NK、CIK、CTL及嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)等。其中CAR-T技术全球研究最早，但由于其存在脱靶、神经毒性、转染载体缺陷等问题，在临床应用方面具有一定局限性。T细胞抗原耦合器修饰T细胞(T cell antigen coupler modified T cell,TAC-T)技术是在CAR-T技术基础上发展的一种利用天然T细胞受体(T cell receptor,TCR)修饰T细胞并重新靶向肿瘤细胞抗原的新技术。本文就CAR-T技术的研究现状及TAC-T技术的研究进展作一综述，以期为TAC-T技术作用机制及其临床应用安全性的深入研究提供参考。

  2023年04期 v.36 495-500页 [查看摘要][在线阅读][下载 862K]
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• 肿瘤源性外泌体对微环境免疫调节的研究进展

  刘翠华;张烜;

  外泌体是由细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体与细胞膜融合，主动向胞外分泌的含双层脂膜结构的纳米级囊泡样小体，是细胞外囊泡的一个分支。外泌体可携带多种蛋白质、核酸和脂类等信号分子，从而介导细胞间信息传递，对周围环境进行调控。肿瘤细胞较正常细胞分泌更多的外泌体，肿瘤源性外泌体(tumor-derived exosomes,TEXs)在形成和维持利于肿瘤细胞存活的免疫抑制微环境方面具有重要作用，可在体内和体外微环境中诱导免疫监视，调节免疫功能。本文对TEXs通过调控多种免疫细胞功能，从而诱导免疫抑制及对微环境的免疫调节方面的研究进展作一综述。

  2023年04期 v.36 501-505页 [查看摘要][在线阅读][下载 817K]
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• 细胞因子与嵌合抗原受体修饰T细胞免疫疗法不良反应的相关性及其靶向药物干预

  张国林;景荣先;邢以文;薛满;

  嵌合抗原受体修饰T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)免疫治疗是目前最有潜力的恶性肿瘤过继性免疫疗法，具有不需要抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC)、不受主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)限制的优点。CAR-T免疫疗法除直接识别并杀灭肿瘤细胞外，还可形成记忆T细胞并建立长效的抗肿瘤机制。CAR-T免疫疗法治疗白血病、多发性骨髓瘤等非实体肿瘤的效果已得到广泛证实，在治疗实体肿瘤中也有巨大潜力。但CAR-T免疫疗法治疗过程中也会产生多种不良反应，如细胞因子释放综合征(cytokine release syndrome,CRS，也称细胞因子风暴)、神经系统毒性(neurotoxicity,NT)、脱靶效应等，其中CRS和NT的发生可能与治疗时细胞因子水平的异常变化有关。细胞因子水平剧烈升高是CRS的主要特征，细胞因子升高并非CAR-T疗法不良反应的根本原因，也并非不良反应的全部结果表现。CAR-T免疫疗法不良反应发生率高，甚至可能危及患者生命，而托珠单抗、阿那白滞素等细胞因子靶向药物可降低不良反应的发生率，改善患者的预后。本文对细胞因子与CAR-T免疫治疗并发CRS及NT的相关性以及细胞因子靶向药物的作用作一综述，以期为CAR-T免疫疗法的基础研究、质量控制及临床应用提供参考。

  2023年04期 v.36 506-512页 [查看摘要][在线阅读][下载 879K]
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