专家视角

• 《欧洲药典》通则“用于疫苗质量控制的体外方法替代体内方法”的解读和思考

  张旋旋;吴星;毛群颖;徐苗;梁争论;

  效价是控制疫苗有效性和批间一致性的关键指标，依据是否使用实验动物分为体内法和体外法。体内法存在动物需求量大、操作费时及检测结果变异大等缺陷，体外替代方法因操作简便、符合3R原则、变异小等优势一直是人们研究的重点，但因替代实验设计和操作复杂并缺少相应指南进展较慢。近年《欧洲药典》10.0版通则增加了“用于疫苗质量控制的体外方法替代体内方法”章节，明确了开展方法替代的考虑要点。本文在《中国药典》和《欧洲药典》收载的体内外效力检测品种及相关变革基础上，解读《欧洲药典》体外替代章节，提出对我国疫苗效价体外替代方法的思考，以期加速相关研究进程，提升我国疫苗质控和监管能力。

  2023年01期 v.36 1-4+10页 [查看摘要][在线阅读][下载 852K]
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疫苗研究

• 金刚烷胺二聚体佐剂对新型冠状病毒蛋白疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效果

  陈思思;金育;张玉芳;何春艳;周正淼;刘野;

  目的 研究金刚烷胺二聚体佐剂对新型冠状病毒蛋白疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效果。方法 经取代反应连接、水解酸化反应连接、酰胺缩合反应连接合成金刚烷胺二聚体，作为佐剂与新型冠状病毒受体结合域（receptorbinding domain,RBD）蛋白免疫雌性BALB/c小鼠后，将小鼠随机分为5组，每组6只：R6A+RBD组[21μg(0.033μmol)金刚烷胺二聚体+10μg RBD]、Ada+RBD组[10μg(0.066μmol)金刚烷胺+10μg RBD]、Alu+RBD组（35μg铝佐剂+10μg RBD）、RBD组（10μg RBD）、Blank组（0.9%生理盐水）。分别在第0、14和28天肌肉注射免疫小鼠，于第2次免疫后7 d和末次免疫后14 d，经小鼠尾静脉采血分离血清，ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平。结果 经薄层色谱法（thin layer chromatography,TLC）进行纯化，并利用电喷雾电离质谱（electrosprayionization-MS,ESIMS）正/负离子模式鉴定，获得的金刚烷胺二聚体为目标产物。2次免疫后，R6A+RBD组各稀释度小鼠血清抗体水平均高于Ada+RBD组，但均低于Alu+RBD组；3次免疫后，R6A+RBD组各稀释度小鼠血清抗体水平均显著高于Ada+RBD和Alu+RBD组，差异有统计学意义（F均> 30,P均<0.000 1和<0.01）。结论 金刚烷胺二聚体佐剂能增强新冠蛋白疫苗诱导小鼠体液免疫应答，具有良好的佐剂效应，可作为备选佐剂，这种基于现有药物改造的策略为开发新型佐剂提供了新的思路。

  2023年01期 v.36 5-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 980K]
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• 肿瘤疫苗在结肠癌模型小鼠体内抑制效果的评价

  韩卢;梁朝远;石思伟;杨立群;邓雄威;盛望;

  目的 评价肿瘤疫苗在结肠癌模型小鼠体内的抑制效果。方法 用CpG的β-葡聚糖纳米颗粒（CpG β-glucan nanoparticles,CNP）于体外刺激小鼠骨髓来源树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs），同时设PBS组、NP组（无CpG纳米颗粒）、Lysate组（MC38细胞裂解物）及CpG组（CpG1826），流式细胞术检测BMDCs表面标志分子的表达情况，ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-12p40的含量。将50 mg/mL肿瘤裂解物（MC38细胞裂解物）与200 mg/mL的CNP按1∶1的体积比混合，制备成肿瘤裂解物纳米疫苗。用该疫苗经皮下免疫C57BL/6J小鼠（Vaccine组），同时设PBS组、CNP组及Lysate组，每周1次，共免疫3次，末次免疫后1 h，经小鼠右下肢皮下接种MC38细胞，2×10~5个/只，每3 d测量1次肿瘤体积，并绘制肿瘤生长曲线；流式细胞术分析小鼠血液中CD3~+CD4~+T及CD3~+CD8~+T细胞比例；ELISA法检测小鼠血液和脾脏中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和干扰素γ(interferon γ,IFNγ)的含量。结果 CNP在体外提高BMDCs表面标志物CD11c~+CD80~+、CD11c~+CD86~+、CD11c~+MHC-Ⅱ~+的表达及IL-6和IL-12p40的分泌水平明显高于其他4组（t=4.3～46.2,P均<0.05）。与其他3组比较，Vaccine组小鼠肿瘤体积明显减小（t=2.6～3.4,P均<0.05）;CD3~+CD8~+T及CD3~+CD8~+T细胞比例差异均无统计学意义（t=0.5～1.9,P均> 0.05）；血液中IFNγ含量明显升高（t=3.8～4.6,P均<0.05）,TNF-α含量差异无统计学意义（t=0.4～2.0,P均> 0.05）；脾脏中IFNγ及TNF-α含量均明显升高（t=6.3～13.0,P均<0.001）。结论 制备的肿瘤裂解物纳米疫苗能提高小鼠体内免疫水平，有效抑制结肠癌生长。

  2023年01期 v.36 11-15+20页 [查看摘要][在线阅读][下载 912K]
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• 流感疫苗中神经氨酸酶的温度稳定性分析

  曹海丹;邱璐;赵丽佳;徐文;王敏;李汶倩;李帅;

  目的 分析流感疫苗中神经氨酸酶（neuraminidase,NA）在不同温度下的稳定性，为更全面地了解疫苗综合活性货架期提供参考。方法 将H1N1、H3N2和B型单价流感疫苗原液分别在4（低温）、25（室温）、37（变温）℃放置0.5、2、7、24、48 h，同时以极端温度（100℃）处理1 h作为对照。采用酶连凝集素法测定NA活性。结果 H1N1型疫苗在25和37℃放置，NA活性均随时间延长而显著下降；H3N2和B型疫苗在两个非储藏温度下放置48 h内活性均无明显下降。3种疫苗在100℃高温下活性均下降。结论 H3N2和B型流感疫苗在不超过37℃的异常储藏温度下有较高的稳定性，H1N1型流感疫苗相比H3N2和B型，对储藏温度较为敏感。

  2023年01期 v.36 16-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K]
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基础研究

• 干扰素受体1沉默的人二倍体MRC-5细胞系对水痘-带状疱疹病毒复制的影响

  杨骁;姜承瀚;孙博;谷铁军;万明明;孙捷;丁雪;王岑嵘;周恩同;姜皓;苏维恒;

  目的 通过优化人二倍体细胞系MRC-5降低其干扰素（interferon,IFN）相关基因表达水平，以提高水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）在该细胞系中的复制水平，并提高VZV疫苗产量。方法 通过CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建IFN受体1(interferon receptor 1,IFNAR1)沉默的MRC-5细胞系（MRC-5~(IFNAR1-)）。采用qRT-PCR法检测MRC-5~(IFNAR1-)细胞系IFNAR1 mRNA相对表达量，同时检测VZV感染后IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量，评价基因沉默效果。通过沉默位点的基因测序进一步鉴定基因突变序列。采用qRT-PCR法和空斑形成单位（plaque formation unit,PFU）试验，对比VZV感染后168 h病毒在MRC-5和MRC-5~(IFNAR1-)细胞系中的复制情况，评价MRC-5~(IFNAR1-)细胞系对VZV复制的影响。结果 MRC-5~(IFNAR1-)细胞系生长状态与MRC-5细胞一致，IFNAR1 mRNA相对表达量降低73%;VZV感染后MRC-5~(IFNAR1-)细胞系中IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量比MRC-5细胞分别降低了61%和90%;VZV感染后168 h，病毒DNA复制水平增加5.7倍，病毒滴度增加4倍。结论 成功建立了MRC-5~(IFNAR1-)细胞系，可作为增加基于人二倍体细胞疫苗产量的潜在方案，为扩大VZV疫苗生产提供了参考。

  2023年01期 v.36 21-25+31页 [查看摘要][在线阅读][下载 986K]
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• 肝细胞癌相关固醇-O酰基转移酶1基因的生物信息学分析

  程日娜;王晓宇;马庆;孔令华;张宇奇;秦凯莉;赵莹珠;苏丹;弓韬;郭睿;

  目的 使用生物信息学工具对肝细胞癌相关固醇-O酰基转移酶1(sterol O-acyltransferase 1,SOAT1)的结构、功能进行预测分析，以了解其作为S-Ⅲ亚型标记物以及治疗靶标的相关作用机制。方法 使用NCBI、STRING、Protscale、SignalP、TMHMM、PSORT、SOPMA、SWISS-MODEL、NetNGlyc、NetOGlyc、Netphos、ProtParam等数据库或软件，对SOAT1的结构、功能、蛋白相互作用等进行预测分析。结果 SOAT1编码的蛋白质为疏水性蛋白，稳定性较好，属于非经典途径蛋白，具有8个跨膜区域，主要分布于细胞膜。SOAT1在多种组织均有表达，但绝大多数位于肾上腺。具有多个磷酸化位点，主要参与胆固醇的合成以及分解代谢过程。结论 通过生物信息学分析SOAT1的结构以及功能，发现SOAT1脂质的合成以及分解代谢途径发挥重要作用，脂质的表达与癌症的发展密切相关。因此可通过调节SOAT1基因的表达从而实现肝细胞癌的治疗。

  2023年01期 v.36 26-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 1133K]
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• 结核分枝杆菌H37Rv株PE＿PGRS35蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析

  袁美丽;王楚彤;李敏英;李柏青;许涛;汪洪涛;

  目的 克隆结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）PE＿PGRS35基因，构建pET28a-PE＿PGRS35重组表达载体，异源表达并纯化MTB H37Rv的PE＿PGRS35蛋白，经生物信息学分析后，探讨抗MTB新型靶点。方法 PCR扩增PE＿PGRS35编码基因，利用重组克隆技术，构建表达载体pET28a-PE＿PGRS35，测序鉴定成功后转化至大肠埃希菌（E. coli）BL21(DE3)中，加入异丙基-β-D半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达。用Ni柱亲和层析纯化PE＿PGRS35蛋白，并对其进行生物信息学分析。结果 经测序证明pET28a-PE＿PGRS35表达载体构建正确，表达的PE＿PGRS35蛋白相对分子质量约53 000，主要以包涵体形式存在，纯度达90%。生物信息学分析表明，PE＿PGRS35蛋白为酸性不稳定性蛋白，主要二级结构为β-折叠和无规则卷曲，无跨膜区，推测为膜外蛋白，有39个磷酸化位点和2个保守结构域，有Rv1769、PPE8、PPE64、PPE54、PPE24、PPE16、PPE35、PPE6、PPE28、PE2共10个蛋白与PE＿PGRS35蛋白相互作用。结论 成功获得高纯度的PE＿PGRS35蛋白，为进一步开发抗MTB药物新型靶点提供了参考。

  2023年01期 v.36 32-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 1132K]
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• 外膜蛋白C作为蛋白呈递平台将抗原定位至细菌外膜囊泡表面的可行性

  孙京京;黄建东;

  目的 探讨外膜蛋白C(outer membrane protein C,OmpC)作为蛋白呈递平台将抗原定位至细菌外膜囊泡（outer membrane vesicle,OMV）表面的可行性。方法 构建含有ompC基因片段及金黄色葡萄球菌EsxA抗原基因（esxA基因）的重组表达质粒，转化感受态E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达，表达产物进行12%SDS-PAGE分析。提取重组菌OMV，经12%SDS-PAGE分析OMV总蛋白，并采用Western blot法和纳米流式仪检测融合蛋白定位至OMV表面的情况。结果 含ompC基因和esxA基因的重组表达质粒经测序证明构建正确。融合蛋白OmpC-EsxA经12%SDS-PAGE分析，可见相对分子质量约57 000的目的蛋白条带，大小与预期相符。OMV总蛋白经12%SDS-PAGE分析，可见多条蛋白条带，表明成功提取重组菌OMV。重组菌OMV表面的融合蛋白OmpC-EsxA可与小鼠抗His-Tag抗体发生特异性结合，且纳米流式仪可检测到荧光抗体标记的OMV。结论 OmpC可作为蛋白呈递平台将抗原定位至OMV表面，有望应用于抗原呈递疫苗的研发。

  2023年01期 v.36 39-42+47页 [查看摘要][在线阅读][下载 1140K]
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• 甲型肝炎病毒SYX_1株在人二倍体细胞MRC-5上的适应性及遗传稳定性

  李芳芳;廖辉;杨文腰;周荔葆;

  目的 探讨甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）SYX_1株在人二倍体细胞MRC-5上的适应性及遗传稳定性。方法 将来源于甲肝患者粪便的HAV SYX_1株接种至MRC-5细胞，连续传代至第28代，检测第1～26代病毒的抗原含量和病毒滴度；镜下观察第6代病毒的形态，并检测其理化性质。取第13～15代病毒进行病毒增殖动态研究，确定病毒增殖高峰期。选择第8、12、18、20、22、25、26和28代病毒，提取病毒基因组RNA进行序列测定，分析其遗传稳定性。建立HAV SYX_1株主种子批和工作种子批，按照《中国药典》三部（2020版）要求进行检定。结果 HAV SYX_1株在MRC-5细胞上连续传至8代后，抗原含量稳定在160～320 EU/mL之间，病毒滴度维持在7.3～8.3 lgCCID_(50)/mL；病毒颗粒有空心和实心两种类型，直径为27～32 nm，呈球形，无包膜，表面无突起；可耐受低pH及乙醚。确定病毒增殖高峰期为10 d，抗原含量达160 EU/mL以上，病毒滴度达7.0 lgCCID_(50)/mL以上。HAV SYX_1株为HAV IB亚型，传代过程中所有结构蛋白编码区基因序列未发生突变。HAV的主种子批和工作种子批的各项检定结果均符合相关要求。结论 HAV SYX_1株在MRC-5上传代具有良好的适应性及遗传稳定性，可用于甲肝灭活疫苗的研究及生产。

  2023年01期 v.36 43-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 907K]
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治疗制剂

• 利用单个B细胞制备人源SARS-CoV-2刺突蛋白单克隆抗体

  冯泽众;路阳;李佳莹;马平;王英楠;朱瑾琪;孙金福;

  目的 利用单个B细胞制备人源严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白（S蛋白）单克隆抗体，并检测其中和活性。方法 采集经2次SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）免疫，且抗体水平较高的人静脉血，用人外周血淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC），经偶联S蛋白的磁珠分选表达S蛋白抗体的单个B细胞。将单个B细胞反转录后，用套式PCR法扩增IgG重链、轻链可变区基因；通过重叠PCR法将可变区基因与CMV启动子及IgG leader序列DNA片段、IgG恒定区及PolyA序列DNA片段连接，构建抗体线性表达盒。将同一B细胞的重链、轻链线性表达盒转染HEK293T细胞，表达人源SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体。免疫荧光法检测抗体免疫反应活性，假病毒中和试验检测抗体中和活性。结果 共表达了26株SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体，经Western blot检测，于相对分子质量约55 000和25 000处可见IgG抗体重链、轻链的蛋白条带。表达的单克隆抗体具有S蛋白特异性抗体免疫反应活性。26株单克隆抗体中，20株具有中和活性，抗体半数抑制浓度（half-maximal inhibitory concentrations,IC_(50)）在0.040～0.545μg/mL之间。结论 制备的人源SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体具有较高的中和活性，有望应用于新型冠状病毒肺炎（Coronavirus Disease 2019,COVID-19））治疗药物和检测试剂的研发。

  2023年01期 v.36 48-52页 [查看摘要][在线阅读][下载 912K]
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• 黄芪注射液对肠道病毒71型感染引起的细胞凋亡及自噬的抑制作用

  郝晋芳;孙晨曦;杜建平;韩倩;张晓延;

  目的 探讨黄芪注射液（astragalus membranaceus,AM）对肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）感染诱导的人胃上皮细胞（GES-1）凋亡及自噬的影响。方法 体外培养GES-1细胞，将细胞分为感染组（按MOI=3感染EV71）和对照组（未感染病毒），倒置显微镜观察EV71感染后细胞形态变化；Western blot检测EV71感染后GES-1细胞中病毒结构蛋白VP1的水平；CCK-8法检测EV71感染后GES-1细胞活力；用DAPI进行细胞核染色，观察EV71感染的细胞核凋亡形态变化。再将GES-1细胞分为对照组（未感染病毒）、感染组及终浓度分别为1、2.5、5和10μg/mL的AM干预组，Western blot检测AM干预对EV71感染的GES-1细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP及自噬相关蛋白LC3、P62表达的影响；CCK-8法检测AM干预对EV71感染的GES-1细胞活力的影响。结果 EV71感染引起了GES-1细胞变圆、皱缩，细胞核固缩，大小不均，细胞中VP1水平明显增高（t=41.56,P <0.01），细胞活力明显降低（t=19.07,P <0.01），细胞中Caspase-3和PARP蛋白均发生了明显的剪切（t分别为35.29和3.648,P分别为<0.01和0.021 8）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例显著增加（t=10.16,P=0.000 5）,P62蛋白发生了降解（t=68.68,P <0.01）;AM干预后，抑制了EV71引起的Caspase-3、PARP、P62蛋白的降解（t分别为52.66、59.60和40.22,P均<0.01）及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增加（t=5.521,P=0.005 3），并减轻了EV71对GES-1细胞活力的抑制作用（t=4.420,P=0.011 5）。结论 EV71感染诱导了GES-1细胞凋亡，AM干预通过抑制EV71引起的细胞自噬来抑制EV71诱导的细胞凋亡。

  2023年01期 v.36 53-58+69页 [查看摘要][在线阅读][下载 983K]
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诊断制剂

• 核糖体展示技术筛选抗呋喃唑酮单链抗体

  陈荫楠;罗彩林;郑晨娜;石贤爱;刘震;

  目的 运用核糖体展示技术筛选高特异性抗呋喃唑酮（furazolidone,FZD）单链抗体，并进行初步分析。方法 提取小鼠杂交瘤细胞总RNA，利用反转录PCR及重叠延伸（splicing by overlap extension,SOE）-PCR技术合成V_H-linker-V_L单链抗体文库。采用TNT T7 Quick for PCR DNA试剂盒对单链抗体文库进行体外翻译及筛选，经过三轮筛选富集目的基因，对目的基因进行原核表达及纯化后，初步分析其特异性及亲和力。结果 获取1株特异性较高的单链抗体FZD-ScFv1,IC_(50)值为13.01 ng/mL，与呋喃它酮、呋喃妥因、氨基脲、呋喃西林及其衍生物之间的交叉反应率均小于1%。结论 利用核糖体展示技术成功获得亲和力较好的单链抗体，该抗体可用于建立ELISA法，为FZD残留量的快速检测提供了新的思路。

  2023年01期 v.36 59-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 929K]
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临床研究

• 2019年上海市金山区企业人群的麻疹抗体水平及易感性分析

  周杰;马小敏;王芳;李淑华;

  目的 分析2019年上海市金山区企业人群的麻疹抗体水平及易感性，为企业人群麻疹防控工作提供依据。方法 采用分层随机抽样方法抽选金山区6家企业共1 796名职工，采集静脉血，分离血清，ELISA法检测血清麻疹IgG抗体水平，计算麻疹IgG抗体几何平均浓度（geometric mean concentration,GMC）、抗体阳性率和抗体保护率；应用非条件多因素Logistic回归模型分析影响企业人群的麻疹易感因素。结果 1 796名监测对象的麻疹抗体GMC为639.71 mIU/mL，阳性率为87.58%，保护率为29.06%。多因素Logistic回归分析显示，与外来户籍人群比较，本市户籍人群易感麻疹的比值比（odds ratio,OR）为1.55(95%CI:1.14～2.12)，与≥50岁组人群比较，40～49岁组人群易感麻疹的OR为2.35(95%CI:1.35～4.08)。结论 2019年上海金山区企业人群麻疹抗体水平较低，40～49岁组人群特别是本地户籍人群易感麻疹的风险较高，应针对企业高风险人群开展含麻疹成分疫苗补充免疫工作，降低麻疹感染风险和控制麻疹流行。

  2023年01期 v.36 65-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 881K]
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• 辽宁省1～30岁健康人群水痘-带状疱疹病毒IgG抗体血清学分析

  王文思;方兴;任丽萍;安晓慧;韩悦;王艳;

  目的 对辽宁省1～30岁健康人群水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）IgG抗体水平进行血清学分析。方法 于2020年10月采用分层随机抽样方法抽取辽宁省沈阳市、阜新市及丹东市3个地区的6个县区作为监测点，采集617名1～30岁健康人群的静脉血3～5 mL，分离血清，ELISA法检测VZV IgG抗体水平，计算血清抗体阳性率和抗体几何平均浓度（geometric mean concentration,GMC），并进行比较分析。结果 617份血清样本中共检出VZV IgG抗体阳性样本302份，阳性率为48.947%,GMC为112.772 mIU/mL。不同年龄组健康人群VZV IgG抗体阳性率为29.670%～75.789%,GMC为45.508～366.559 mIU/mL，抗体阳性率（χ~2=67.104,P <0.001）和GMC(F=20.685,P <0.001)差异均有统计学意义。男性和女性的VZV IgG抗体阳性率分别为44.817%和53.633%，差异有统计学意义（χ~2=4.779,P=0.029）;GMC分别为96.983和133.829 mIU/mL，差异无统计学意义（t=-1.958,P=0.051）。辽宁省沈阳市、阜新市、丹东市健康人群VZV IgG抗体阳性率分别为55.224%、40.201%、51.152%,3个地区抗体阳性率差异有统计学意义（χ~2=9.683,P=0.008），阜新市明显低于沈阳市及丹东市（χ~2分别为9.046和5.013,P分别为0.003和0.025）;GMC分别为133.523、85.953、123.713 mIU/mL,3个地区GMC差异无统计学意义（F=0.514,P=0.598）。617份血清样本中，54份为可疑结果，复检后仍在临界范围内，随年龄增长阳性率与阳性和可疑结果合计百分率之间的差距逐渐减小，表明随着年龄的增长对水痘的免疫力逐渐增强。结论 辽宁省1～30岁健康人群VZV IgG抗体水平随年龄增长逐渐升高，但总体水平偏低。为控制水痘病毒的传播，建议提高薄弱地区和易感人群的水痘疫苗覆盖率，以建立VZV免疫屏障。

  2023年01期 v.36 70-75页 [查看摘要][在线阅读][下载 921K]
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技术方法

• 维氏气单胞菌CA07株灭活疫苗生产工艺的优化

  孙承文;巩华;赖迎迢;江小燕;任燕;陈总会;黄志斌;陶家发;

  目的 优化维氏气单胞菌（Aeromonas veronii,AV）CA07株灭活疫苗的生产工艺。方法 通过对AV CA07株菌种培养时间（2～16 h）、发酵培养基（优化发酵培养基、LB培养基、NB培养基）、发酵条件[接种量（1%、5%、10%、15%）、通气量（2、4、6、8 L/min）、发酵时间（6、8、10、12 h）]的优化，确定AV CA07株菌液的发酵工艺。通过对灭活剂甲醛溶液的终浓度（0.10%、0.20%、0.30%、0.40%）、灭活温度（28和37℃）、灭活时间（24、48、72 h）的比较，确定最佳灭活工艺。建立AV CA07株灭活疫苗500 L发酵罐规模化生产工艺，并对制备的疫苗进行安全性及免疫原性试验。结果AV CA07株发酵工艺的最佳接种量为5%，通气量为4 L/min，培养时间为10～12 h；最佳灭活条件为：用终浓度0.30%的甲醛溶液于37℃灭活24 h。500 L发酵罐制备的AV CA07株菌液活菌数达8×10~9CFU/mL以上，灭活后经腹部免疫鲫鱼，鲫鱼全部存活；攻毒后，相对免疫保护率达90%以上。结论 采用优化生产工艺制备的AV CA07株灭活疫苗具有良好的安全性及免疫原性。

  2023年01期 v.36 76-80+84页 [查看摘要][在线阅读][下载 923K]
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• 不同纳米过滤系统过滤静注人免疫球蛋白的效果评价

  马力;李冠军;张学成;范蓓;马小伟;王志刚;

  目的 评价不同纳米过滤系统对静注人免疫球蛋白（Intravenous human immunoglobulin,IVIG）的过滤效果，以筛选最佳纳米过滤系统。方法 采用不同纳米过滤器进行IVIG过滤，确定最佳纳米过滤器；选用不同预过滤器和优选的纳米过滤器组合，进行IVIG过滤，确定最佳纳米过滤系统。结果 切向流（错流）纳米过滤器过滤效果优于死端（直流）纳米过滤器，纳米过滤器C为最佳纳米过滤器；深层过滤预过滤器的过滤效果优于绝对过滤预过滤器，预过滤器Y1串联纳米过滤器C为最佳纳米过滤系统。结论 通过不同纳米过滤系统对IVIG过滤效果的评价，筛选出了最佳纳米过滤系统。

  2023年01期 v.36 81-84页 [查看摘要][在线阅读][下载 943K]
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• 索马鲁肽原料中N-羟基琥珀酰亚胺残留量反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

  杨庆;马鲁南;刘忠;张贵民;

  目的 建立检测索马鲁肽原料中N-羟基琥珀酰亚胺（N-hydroxy succinimide,NHS）残留量的反相高效液相色谱（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）法，并进行验证。方法 筛选色谱柱并优化流动相条件（磷酸盐浓度与有机相比例），建立检测索马鲁肽原料中NHS残留量的RP-HPLC法，并验证方法的专属性、适用性、准确度、重复性和稳定性，确定线性范围及定量限、检测限。用建立的方法检测3批索马鲁肽中NHS含量。结果 确定的色谱条件如下：色谱柱为CAPCELL PAK ADME(4.6 mm×150 mm,3μm)；流动相A为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（98∶2），流动相B为70%乙腈溶液；洗脱梯度为0 min 0%B,10 min 0%B,19 min 90%B,19.1 min 0%B,25 min 0%B；流速为0.8 mL/min；检测波长为260 nm；柱温为30℃。建立的方法在0.2～3.0μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，R~2=1.000 0，检测限和定量限分别为4.8和9.6 ng；专属性、系统适用性良好；3种不同浓度NHS加样样品回收率的相对标准偏差（RSD）为0.58%，准确度良好；6份供试品溶液中NHS含量的RSD为0.16%，重复性良好；室温放置0、4、8、12、16、20和24 h NHS峰面积的RSD为0.34%，稳定性良好。3批索马鲁肽中均未检出NHS。结论 建立的RP-HPLC法简单、灵敏度高，可用于索马鲁肽原料中NHS含量的测定。

  2023年01期 v.36 85-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 868K]
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综述

• 抗呼吸道病毒单克隆抗体药物的研发进展及应用

  周建花;乐鑫;潘勇兵;

  近年来，呼吸道传染病在全球范围内暴发和流行，严重危害人类健康，其中因病毒感染导致的呼吸道传染病占很大比例。疫苗和常用抗病毒药物的使用是对抗病毒感染的有效途径，但也存在滞后性和耐药性等问题，针对呼吸道病毒性传染病的单克隆抗体为其临床治疗提供了新的策略。本文对抗呼吸道病毒单克隆抗体药物的研发进展及其在呼吸道病毒性传染病中的应用作一综述。

  2023年01期 v.36 89-97页 [查看摘要][在线阅读][下载 928K]
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• 病毒蛋白调控逆转录元件Ⅰ型长弥散核元件活性的影响及其意义

  赵梓含;王宇;赵一霏;赵可;

  型长弥散核元件（long interspersed element-1,LINE-1）是已知人类细胞中唯一具有活性的、可自主转座的逆转录元件（retroelements），与自身免疫性疾病相关，对细胞的抗病毒天然免疫，特别是对细胞干扰素（interferon,IFN）水平起到重要的激活、调控作用。本文阐述了包括人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）等病毒的几种非结构蛋白参与调控LINE-1活性的机制。这些机制既保证了病毒基因组的正常表达，又参与调控细胞天然免疫水平，对相关机制的抑制可能为治疗病毒感染引起的疾病提供新的方法。

  2023年01期 v.36 98-104页 [查看摘要][在线阅读][下载 974K]
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• PD-1/PD-L1类单抗药物在肿瘤治疗中的应用进展

  王思渊;鲁辉;杨纯;

  程序性死亡受体-1(programmed death receptor-1,PD-1)属于免疫球蛋白B7-CD28家族，在人体免疫应答中起调控作用。自2018年首个PD-1/程序性死亡配体1(PD-ligand 1,PD-L1)类单抗药物在国内获批上市以来，PD-1/PD-L1免疫治疗在肿瘤治疗中的价值引起广泛关注。本文在介绍PD-1/PD-L1类单抗药物作用机制的基础上，从获批适应证、临床试验、用法用量、不良反应等多个角度对8个品种在中国获批上市的PD-1/PD-L1类单抗药物在肿瘤治疗中的应用进展作一综述，以期为临床合理使用PD-1/PD-L1类单抗药物提供参考。

  2023年01期 v.36 105-111+118页 [查看摘要][在线阅读][下载 928K]
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• 白喉流行及免疫现状

  蔡梦瑶;刘宏博;杨晓明;

  白喉在大规模免疫接种下，其感染率和发病率曾得到有效控制。但近年来国内外白喉病例频现，除常见儿童感染外，中老年人群患者数量也有所增加，表明白喉的预防及控制依旧不容忽视。本文综述了白喉的病原学特征、致病机制，国内外白喉的流行及免疫现状，并就以上问题进行展望。

  2023年01期 v.36 112-118页 [查看摘要][在线阅读][下载 951K]
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• 硫柳汞对疫苗抗原活性的影响及其作用机制

  张秀丽;张志刚;赵勤俭;

  硫柳汞作为防腐剂常被用于生物制品，尤其是疫苗中。目前，大多数国家已将硫柳汞从单剂量疫苗中移除，但其仍广泛应用于多剂量疫苗中。硫柳汞作为疫苗制剂中的组分，应与其他成分相互兼容，尤其不能损害抗原的活性。但近年来多项研究报道，硫柳汞可致疫苗抗原的抗原性和免疫原性降低，尤其是含有或富含半胱氨酸（cysteine,Cys）的蛋白抗原，提示将硫柳汞作为疫苗防腐剂时应充分考察其对疫苗抗原活性的影响。本文对硫柳汞对2种灭活疫苗和3种重组蛋白疫苗抗原性和免疫原性的影响及其可能的作用机制作一综述，为疫苗防腐剂的合理选择提供参考。

  2023年01期 v.36 119-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 889K]
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• 细胞焦亡及其在肝细胞癌中作用的研究进展

  常钰玲;牛亚倩;陈彻;

  细胞焦亡是一种新的细胞程序性死亡方式，在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发病机理中起双重作用：一方面，引起细胞焦亡的炎症小体以及焦亡过程中释放的炎性介质会促进肝癌的发生发展；另一方面，焦亡可抑制肝癌细胞的增殖、转移和侵袭。随着研究的深入，细胞焦亡在肝癌中的作用越来越突出。本文就细胞焦亡在HCC进展过程中的潜在影响以及在抗癌治疗中的作用作一综述。

  2023年01期 v.36 124-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 850K]
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• 《中国生物制品学杂志》被WHO西太区医学索引（WPRIM）收录

  <正>经WHO西太区医学索引（The Western Pacific Region Index Medicus,WPRIM）中国生物医学期刊评审委员会推荐，并经WHO西太区期刊评审委员会评审，2022年12月27日《中国生物制品学杂志》被WPRIM收录。

  2023年01期 v.36 127页 [查看摘要][在线阅读][下载 593K]
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• 《中国生物制品学杂志》稿约

  <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊，主要报道我国生物制品科技成果及相关行业国内外研究现状和发展动态。本刊为月刊，由国家卫生健康委员会主管，中华预防医学会和长春生物制品研究所主办。1刊载内容和设置栏目主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域，如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用及质控类学术文章，并兼顾重大学术交流活动的报道。在选择来稿时注重学术性、前沿性和实用性。

  2023年01期 v.36 128页 [查看摘要][在线阅读][下载 593K]
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