疫苗研究

• 表达诺如病毒衣壳蛋白的重组腺病毒疫苗的构建及其免疫原性分析

  王金冬;马亚林;毛彤瑶;段招军;

  目的 构建表达诺如病毒（norovirus,NoV）衣壳蛋白VP1和VP2基因的重组腺病毒疫苗，并检测其在小鼠体内的免疫原性。方法 以5型腺病毒为载体，制备表达NoV主要衣壳蛋白VP1以及同时表达VP1、VP2和3′UTR区的两种重组腺病毒载体，通过PCR和Western blot法对重组腺病毒进行体外鉴定。将两组重组腺病毒以108IU/只的剂量灌胃免疫BALB/c小鼠，共免疫2次，间隔3周。采用ELISA和ELISPOT等方法检测两组重组腺病毒诱导的体液免疫、黏膜免疫和细胞免疫反应。结果 重组腺病毒pkAd5ES-VP1和pkAd5ES-VP1-2的病毒滴度分别为3.4×10~9和2.4×10~9IU/mL。两种重组腺病毒均能在真核细胞中高效表达外源基因。VP1+VP2+3′UTR区共表达的重组腺病毒在灌胃免疫时能有效提升小鼠粪便IgA、血清组织血型抗原（histo-blood group antigen,HBGA）阻断抗体水平以及脾脏IL-4分泌细胞的数量。结论 与单独表达VP1比较，VP1+VP2+3′UTR区共同表达的重组腺病毒疫苗具有更好的免疫原性。本研究为高效口服NoV疫苗的研发提供了参考。

  2022年03期 v.35 257-262页 [查看摘要][在线阅读][下载 631K]
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• 冻干甲型肝炎减毒活疫苗规格变更后（复溶后0.5 mL/瓶）的稳定性

  王艺博;李勇;侯丽娟;岳立广;李莉;王拥军;王春雨;徐艳玲;

  目的 研究冻干甲型肝炎减毒活疫苗规格变更后（复溶后由1.0 mL/瓶变更为0.5 mL/瓶）的稳定性。方法将3批规格变更后的冻干甲型肝炎减毒活疫苗（复溶后0.5 mL/瓶）试验疫苗于（5±3）℃条件下放置，每隔3个月抽样检测，进行长期稳定性试验；将试验疫苗于（25±2）℃条件下放置6个月，分别于0、1、2、3及6个月取样检测，进行加速稳定性试验；将3批试验疫苗（复溶后0.5 mL/瓶）与2批市售疫苗（复溶后1.0 mL/瓶）于（5±3）℃放置0、9、18个月的产品质量检测结果进行对比分析。结果 3批规格变更后的冻干甲型肝炎减毒活疫苗（复溶后0.5 mL/瓶）试验疫苗成品的长期稳定性试验和加速稳定性试验结果均符合《中国药典》三部（2010版）相关规定；规格变更后的试验疫苗与市售疫苗在（5±3）℃放置0、9和18个月的各项检测结果均达到合格标准。结论 冻干甲型肝炎减毒活疫苗规格变更后稳定性良好。

  2022年03期 v.35 263-266页 [查看摘要][在线阅读][下载 650K]
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基础研究

• miR-520c-3p介导的血管内皮生长因子A低表达对乳头状甲状腺癌细胞增殖、运动和血管再生的影响及其机制

  邵建斌;方因;文霆;杨梅兰;

  目的 探讨miR-520c-3p介导的血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)低表达对乳头状甲状腺癌细胞增殖、运动和血管再生的影响及其机制。方法 利用生物信息学软件预测miR-520c-3p的靶基因，并通过荧光素酶试验验证靶向关系；体外培养乳头状甲状腺癌细胞B-CPAP，将mi R-520c-3p mimic和pcDNAVEGFA单独或联合转染B-CPAP细胞，并设不做任何处理的Control组。采用RT-PCR和Western blot检测细胞miR-520c-3p、VEGFA m RNA和蛋白表达水平，CCK-8法检测细胞增殖情况，Transwell小室试验检测细胞侵袭情况，Western blot法检测细胞Ki67、PCNA、E-cadherin和Vimentin蛋白表达情况，微管形成试验检测微管形成数目。结果VEGFA是miR-520c-3p的靶基因。与Control组比较，miR-520c-3p mimic组miR-520c-3p、E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P <0.05）,VEGFA mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖活性、Ki67、PCNA和Vimentin蛋白表达水平、细胞侵袭数目及结节数显著降低（P <0.05）;VEGFA组miR-520c-3p、E-cadherin蛋白表达水平显著降低（P <0.05）,VEGFA mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖活性、Ki67、PCNA和Vimentin蛋白表达水平、细胞侵袭数目及结节数显著升高（P <0.05）。与VEGFA组比较，mimic+VEGFA组miR-520c-3p、E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P <0.05）,VEGFA mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖活性、Ki67、PCNA和Vimentin蛋白表达水平、细胞侵袭数目及结节数显著降低（P <0.05）。结论 miR-520c-3p可靶向下调VEGFA表达，实现对甲状腺癌细胞增殖、运动和血管再生的抑制。

  2022年03期 v.35 267-274页 [查看摘要][在线阅读][下载 982K]
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• 硫氧还蛋白互作蛋白的生物信息学预测

  靳文文;李文龙;张志楠;焦向英;

  目的 分析硫氧还蛋白互作蛋白（thioredoxin-interacting protein,TXNIP）的氨基酸序列、结构特点、翻译后修饰及蛋白互作网络等生物学信息。方法 应用ProtParam、ProtScale、SignalP 4.0 Server、SecretomeP 2.0 Server、TMHMM Server v. 2.0、PSORTⅡ、DNAstar、NetNGlyc 1.0 Sever、STRING等多种生物信息学在线软件对TXNIP的理化性质、信号肽、跨膜结构、空间结构、翻译后修饰和蛋白互作网络等方面进行预测分析。结果 TXNIP为一种稳定亲水性蛋白，是非经典型分泌蛋白，不存在信号肽序列和跨膜区，β折叠是其二级结构的主要形式。TXNIP有14个O-糖基化位点，34个磷酸化位点。TXNIP与ITCH、NLRP3、TXN等10个蛋白有互作关系。结论 TXNIP不仅可诱导细胞凋亡，也是胰岛素抵抗及非酒精性脂肪肝病信号通路中的重要信号分子。本研究为进一步探索TXNIP在机体生命活动中的机制提供了实验依据。

  2022年03期 v.35 275-280页 [查看摘要][在线阅读][下载 1126K]
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• 鸦葱提取液对水痘-带状疱疹病毒体外增殖作用的影响

  周莹;张夫坤;孙跃秋;王梦涵;袁琳;秦臻;岳玮;顾建阳;沈德新;

  目的 探讨鸦葱提取液对水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）体外增殖的影响。方法 水煎煮法制备鸦葱原液和水提液，两者均稀释为18.75～4 800μg/mL,CCK8法检测鸦葱提取液在2BS细胞上的半数毒性浓度（TC50）。将VZV（病毒滴度为5.2 lgPFU/mL）加入2BS细胞中，于感染后2、4、6、8 h分别加入不同浓度的鸦葱原液（200、100和50μg/mL）和鸦葱水提液（50、25和5μg/mL）,37℃培养3 d，检测噬斑数及噬斑面积；于VZV感染2BS细胞后2 h分别加入200μg/mL的鸦葱原液和50μg/mL的鸦葱水提液，37℃培养3 d,qPCR法检测病毒载量。同时设病毒对照组（仅加入VZV）。结果 鸦葱原液和鸦葱水提液的TC50分别为501.9和222.5μg/mL。VZV感染2BS细胞2 h后，加入200μg/mL鸦葱原液和50μg/mL鸦葱水提液对VZV增殖的抑制效果最佳，与病毒对照组比较，噬斑数量明显降低（P <0.01），噬斑面积明显减少（P <0.05），病毒载量明显减少（P <0.05）。结论 鸦葱提取液可有效抑制VZV的体外增殖。

  2022年03期 v.35 281-284页 [查看摘要][在线阅读][下载 977K]
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治疗制剂

• 人血白蛋白中常见可见异物成因及控制分析

  焦旭雯;梁蔚阳;陈宇堃;蒋玉辉;陈龙少;

  目的 分析人血白蛋白中常见可见异物的基本情况及其产生原因。方法 收集不同企业生产的人血白蛋白可见异物阳性样品，通过不溶性微粒、大粒子、多聚体含量、浊度等项目检测，分析可见异物与其他指标的相关性。结果可见异物阳性样品的不溶性微粒、浊度检测结果符合《中国药典》三部（2020版）规定，但二聚体含量、粒径> 50μm的大粒子所占比重呈增加趋势。结论 企业在对人血白蛋白可见异物进行灯检法的同时，可通过测定二聚体含量、粒径> 50μm大粒子所占比重对生产线上产品进行在线监督，以评估产品总体质量。

  2022年03期 v.35 285-288+292页 [查看摘要][在线阅读][下载 1042K]
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• 重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体N糖谱的定性及定量分析

  刘冰;王梦莹;肖志良;董衍东;邹寒艳;杨惠洁;张伶俐;

  <正>临床上，单克隆抗体用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病，是近年生物制药行业最热门的研究领域之一[1-2]。重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体是一种特异性靶向淋巴细胞表面CD20抗原的抗体，可与CD20抗原发生结合，激发机体免疫反应，可致表面表达CD20抗原的B-淋巴细胞的溶解和被杀伤，

  2022年03期 v.35 289-292页 [查看摘要][在线阅读][下载 1034K]
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诊断制剂

• SARS-Co V-2抗原检测用样品盘的建立及其在胶体金测试卡研发和质量评估中的应用

  施金荣;周志军;程小玲;杨爽;李茜;罗敏;石艳红;李策生;李陶敬;

  目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗原检测用样品盘，并应用于SARS-CoV-2抗原胶体金测试卡的研发及质量评估。方法 以12种非SARS-CoV-2灭活疫苗原液及黏蛋白作为阴性样品盘，重组SARS-CoV-2 N蛋白、2批SARS-CoV-2灭活疫苗原液（B1、B2）及1批灭活SARS-CoV-2培养液（S1）作为阳性样品盘，二者结合建立SARS-CoV-2抗原检测用样品盘。采用B1对4个厂家（A、B、C、D）的胶体金测试卡进行阳性评估，并对厂家A胶体金测试卡的研发进行全程检测。通过阴性样品盘评价5个厂家（A、C、E、F、G）胶体金测试卡的特异性，阳性样品盘（B2、S1和重组N蛋白）评价其灵敏度。采用市售SARS-CoV-2核酸检测试剂盒检测灭活SARS-CoV-2培养物S1，并与厂家A的胶体金测试卡进行对比。结果 通过阳性评估，确定N蛋白为检测SARS-CoV-2抗原的主要位点。厂家A研发的胶体金测试卡对B1的灵敏度达1:2×10~3。5个厂家的胶体金测试卡对非SARS-CoV-2灭活疫苗原液无交叉反应，表明特异性均良好。厂家A的胶体金测试卡对B2的灵敏达1:106，对S1的灵敏度达1:2×10~7；厂家E、F、G的胶体金测试卡对B2的灵敏度达1:103以上，对S1的灵敏度达1:10~4～1:10~5；厂家C的胶体金测试卡对B2的灵敏度达1:104，对S1的灵敏度达1:106。厂家A的胶体金测试卡对重组N蛋白的灵敏度为100 pg/mL，其他4家均为10 pg/mL。市售核酸检测试剂盒对S1的灵敏度为1:107，与厂家A的胶体金测试卡（1:2×107）相当。结论 成功建立了SARS-CoV-2抗原检测用样本盘，其具有良好的特异性及灵敏性，可用于SARS-CoV-2抗原胶体金测试卡的研发及质量评估。

  2022年03期 v.35 293-298+303页 [查看摘要][在线阅读][下载 1152K]
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临床研究

• 新型冠状病毒感染者6个月后抗体滴度分析

  张卉;王文辉;卢佳;林凤杰;刘漫;刘璋;万鑫;郭靖;段凯;李新国;

  目的 对湖北省大悟县确诊和疑似新型冠状病毒肺炎（Coronavirus Disease 2019,COVID-19）康复者出院6个月后抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndromecoronavirus 2,SARS-CoV-2)抗体进行分析。方法 收集COVID-19康复者出院6个月后血清样本166例，采用蚀斑减少中和试验（plaque reduction neutralization test,PRNT）检测血清抗SARS-CoV-2中和抗体，计算中和抗体滴度（EC50）;ELISA法检测抗SARS-CoV-2特异性IgG抗体滴度，并采用Pearson进行相关性分析。结果 166例样本中和抗体及特异性IgG抗体总阳性率分别为68.7%和77.7%，其中有典型症状确诊人群分别为82.2%和90.1%，无症状确诊人群分别为66.7%和88.9%，疑似人群分别为44.6%和53.6%。中和抗体与特异性IgG抗体滴度间的相关性为93.0%，两者检测方法高度相关。结论 医院确诊和疑似COVID-19患者出院6个月后的抗SARS-CoV-2抗体仍持续存在，且抗体滴度与抗SARS-CoV-2特异性IgG抗体滴度显著相关。

  2022年03期 v.35 299-303页 [查看摘要][在线阅读][下载 1064K]
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• 2012—2018年长春市手足口病非肠道病毒A组71型肠道病毒VP1基因特征分析

  张智丽;李晨光;张兴国;孙宇;崔薇;乔凤娟;孙炳欣;

  目的 分析2012—2018年长春市手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）非肠道病毒A组71型（enteroviruses A71,EV-A71）肠道病毒VP1基因特征，探讨其流行规律，为及时调整防控策略提供参考。方法 收集2012—2018年长春市医疗机构报告的HFMD临床诊断病例样本，选取非EV-A71型肠道病毒对其VP1区扩增并测序，比对构建系统进化树，进行核苷酸同源性及氨基酸变异位点分析。结果 2012—2018年长春市HFMD病例中共获得83条柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CV-A16）序列、30条柯萨奇病毒A组6型（CV-A6）序列和10条柯萨奇病毒A组10型（CV-A10）序列，其中CV-A16序列全部属于B1亚型，除2012年1条和2018年7条序列属于B1a亚型，其他均属于B1b亚型，各株间核苷酸序列同源性为88.2%～100.0%。2012—2018年长春市HFMD病例中CV-A6毒株相对集中，30条序列均属于D3亚型，与D3亚型参考株的同源性为92.8%～98.1%，各株间同源性为91.6%～99.8%;CV-A10毒株相对集中，10条序列均属于D2亚型，与D2亚型同源性较高为96.4%～98.4%，各株间同源性为96.4%～100.0%;CV-A16毒株中存在14个氨基酸位点变异，有12株发现在第14位点上发生N天冬酰胺→S丝氨酸（N14S）的变异，其中9株同时存在L215P变异。有9株存在M23L变异，其中8株为B1a亚型。结论 2012—2018年长春市HFMD病例中CV-A16流行株均属于B1亚型，且同时存在B1b和B1a亚型，B1b为主要优势型别，毒株存在14个氨基酸位点变异，其中N14S和L215P可能成为稳定流行位点。CV-A6和CV-A10毒株相对集中，分别为D3和D2亚型，同源性较好。加强对非EV-A71型HFMD病原的检测，对HFMD疫情的防控具有重大意义。

  2022年03期 v.35 304-311+315页 [查看摘要][在线阅读][下载 1584K]
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• 4例接种疫苗后偶合癫痫（婴儿痉挛症）案例分析

  黄蓉;王凤双;肖雷;唐莹;彭枭然;李春龙;管文奇;张松建;

  目的 对接种疫苗后出现的癫痫（婴儿痉挛症）病例进行因果关联评估，为判定预防接种后偶合癫痫（婴儿痉挛症）提供参考。方法 根据受种方调查诊断申请，顺义区疾病预防控制中心启动区级预防接种异常反应（adverse event following immunization,AEFI）调查诊断专家组，专家组参照预防接种后不良事件个案因果关联评估法则对病例分别进行诊断。结果 经专家组一致认定，4例接种疫苗后出现的癫痫（婴儿痉挛症）案例均不属于AEFI，为偶合症。结论 4例接种疫苗与癫痫（婴儿痉挛症）无因果关联。

  2022年03期 v.35 312-315页 [查看摘要][在线阅读][下载 1114K]
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技术方法

• 生物反应器悬浮培养禽偏肺病毒制备弱毒疫苗工艺的优化

  蒋天华;周庆丰;严专强;周展;

  目的 对生物反应器悬浮培养禽偏肺病毒（avian metapneumovirus,aMPV）制备弱毒疫苗的工艺进行优化。方法 采用分批培养的方法优化悬浮BHK-21细胞在生物反应器内培养及aMPV增殖工艺，并对制备的疫苗进行动物安全性及攻毒保护试验。结果 采用1.0×10~6cells/mL的初始接种密度培养BHK-21悬浮细胞，细胞能快速度过延滞期进入对数生长期，培养72 h细胞密度可达1.6×10~7cells/mL。调整细胞密度为3.0×10~6cells/mL，按照感染复数MOI=0.1的剂量接种病毒，病毒含量可达108.67TCID50/mL。制备的疫苗安全性良好，可有效保护番鸭，保护率为100%。结论 优化了生物反应器培养aMPV的工艺，可获得较高的病毒效价，为aMPV疫苗的规模化生产提供了参考。

  2022年03期 v.35 316-320页 [查看摘要][在线阅读][下载 1313K]
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• 流感疫苗神经氨酸酶活性荧光底物检测法的建立及验证

  邓涛;张家友;刘京;吕传硕;杨晓明;

  目的 建立用于检测流感疫苗神经氨酸酶（neuraminidase,NA）活性的荧光底物法，并进行验证。方法 以唾液酸类似物4-MUNANA作为酶底物，通过测定NA催化底物分解后产物的荧光强度来评价NA活性。选取基于MDCK细胞制备的四价流感疫苗各单价原液（H1N1、H3N2、BV和BY）作为样品，优化荧光底物法的底物酶浓度（10、20、30、40、50μmol/L）、作用时间（每2 min检测1次，至90 min）、缓冲液pH(4.5、5.5、6.5、7.5、8.5和9.5)及反应温度（4、25、37和45℃）。以已知活性的重组NA蛋白作为参考品，验证方法的线性范围、准确度及精密度。用优化的方法检测流感疫苗生产过程中的样品（基于MDCK细胞制备的H1N1、H3N2、BV、BY相应的病毒收获液、纯化液和原液）及以MDCK细胞基质和鸡胚基质制备的四价流感裂解疫苗成品各1批。结果 最佳反应条件为：酶底物浓度20μmol/L，反应时间40 min,pH 7.5，反应温度37℃。重组NA蛋白参考品浓度在62.5～2 000 U/L范围内与荧光强度呈良好的线性关系，R2> 0.99;1 600、800、400 U/L 3个浓度参考品的回收率分别为92.60%～106.96%、85.54%～113.11%、87.00%～114.54%，于2个时间点共12次检测结果的CV分别为6.40%、8.25%、6.92%。H1N1、H3N2、BV和BY 4种亚型的流感疫苗半成品在不同阶段NA活性逐渐降低；细胞基质及鸡胚基质四价流感裂解疫苗成品的NA活性分别为61 585.82和69 583.51 U/L。结论 成功建立并优化了一种NA活性的荧光底物检测方法，该方法具有良好的准确度和精密度，可应用于流感疫苗生产过程及成品中NA活性的检测。

  2022年03期 v.35 321-326页 [查看摘要][在线阅读][下载 1293K]
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• SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立

  李妮;龙柏霖;朱文勇;钏鸿云;宋绍辉;刘婧;吴雅楠;廖国阳;

  目的 制备严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）棘突蛋白（spike protein,S）单克隆抗体（简称单抗），建立S蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证。方法 通过杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体，并对单抗进行鉴定。用该单抗作为包被抗体，HRP标记的兔抗S蛋白多克隆抗体作为酶标抗体，建立双抗体夹心ELISA方法，检测SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量。对方法的包被抗体浓度（10、5、2.5、1.25μg/mL）、酶标抗体浓度（4、2、1μg/mL）以及封闭液种类（未封闭、PBS稀释的1%BSA、2%BSA、1%BSA+1%蔗糖、2%BSA+2%蔗糖）进行优化，并对方法的线性范围及灵敏度、特异性和准确性进行验证。用建立的方法对10份疫苗生产工艺不同阶段已知S蛋白抗原含量的样本进行检测，计算该方法与中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所新冠疫苗定量方法检测结果的符合率。结果 筛选出18株S蛋白特异性单克隆抗体，7B10A2细胞株制备的腹水抗体纯化后浓度为4.487 mg/mL，纯度大于90%，可特异性结合新冠病毒S蛋白上S1亚基；抗体亚型为IgG2b型，抗体效价为1︰128 000，效应浓度为0.137μg/mL。建立的双抗体夹心ELISA方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为5和4μg/m L，最适封闭液为2%BSA+2%蔗糖；在2.5～160 U范围内，相关系数（R2）大于0.99，检测灵敏度为1.25 U；该方法特异性良好，与核衣壳蛋白（nucleocapsid protein,N）、BSA、PBS及流感病毒等不发生反应；准确性验证的回收率在92.10%～111.58%之间。用建立的方法检测已知含量样本符合率在94.2%～109%之间。结论 制备了SARS-CoV-2 S蛋白特异性单抗，并建立了适用于SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法，可用于疫苗产品及其工艺阶段样品和其他样本中S蛋白含量的检测。

  2022年03期 v.35 327-333页 [查看摘要][在线阅读][下载 1288K]
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• 陶瓷羟基磷灰石层析法纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖

  高磊;苏晓叶;石献华;程亚君;张荣锋;李倩;刘刚;

  目的 采用陶瓷羟基磷灰石（ceramic hydroxyapatite,CHT）层析法纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖，以代替传统的苯酚抽提法。方法 将b型流感嗜血杆菌粗多糖溶解后，采用4种方案进行粗多糖纯化，筛选最佳工艺路线；并对工艺路线进行优化（乙醇沉淀条件、切向流超滤条件、CHT层析条件）。结果 根据工艺路线选择及优化结果，确定如下工艺路线：将b型流感嗜血杆菌粗多糖溶解后经35%和80%浓度乙醇沉淀2次，沉淀物溶解后，经切向流超滤10次，CHT层析收获流穿液，再经切向流超滤后冻干。最终获得的b型流感嗜血杆菌多糖质量符合《中国药典》三部（2015版）要求。结论 可使用CHT层析法纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖。相比于传统苯酚抽提工艺，该方法环保、安全。

  2022年03期 v.35 334-337+343页 [查看摘要][在线阅读][下载 1348K]
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综述

• 狂犬病病毒aG株在人用狂犬病疫苗中应用的研究进展

  石磊泰;李玉华;

  狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的以中枢神经系统症状为主的一种动物源性传染病，病死率几乎100%，狂犬病疫苗是预防狂犬病的主要手段。1931年，研究者从狂犬病病犬脑中分离获得狂犬病病毒，经兔脑传至30多代，经驯化后获得一种固定毒（北京株），后续经多家机构合作，将狂犬病病毒北京株在豚鼠脑和原代地鼠肾细胞中交替传代15年，获得地鼠肾细胞适应株，即aG株，用于人用狂犬病疫苗生产。本文就狂犬病病毒aG株的传代适应方法、基因特性及其制备相应疫苗的免疫保护作用作一综述。

  2022年03期 v.35 338-343页 [查看摘要][在线阅读][下载 1318K]
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• 人冠状病毒及其疫苗的研究进展

  王俊丽;贾金伦;卢荣华;

  冠状病毒（coronavirus,CoV）是自然界广泛存在的一类病毒，为正链RNA包膜病毒，是导致多种畜、禽、宠物及人类若干疾病的重要病原，能够引起呼吸道、肠道、肝、肾及神经系统不同严重程度的疾病。目前已发现7种人冠状病毒（human coronavirus,HCoV），其中严重急性呼吸综合征冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV）、中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）和2019新型冠状病毒（2019 novel corona virus,2019-nCoV）可引起严重致死性肺炎，对人类公共卫生安全造成了严重威胁。本文就HCoV的致病性及其疫苗的研究进展作一综述。

  2022年03期 v.35 344-350+355页 [查看摘要][在线阅读][下载 1406K]
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• 外泌体的提取、贮存及其临床应用进展

  张芮浩;张晓勃;袁文欢;周海宇;

  外泌体由于其巨大的治疗潜力及其在再生医学中的作用，近年来已成为关注的焦点。其不仅可作为肿瘤转移的标志物，还可用于液体活检无创诊断临床疾病。虽然外泌体的研究已取得突破性进展，但其提取和贮存方法仍未达成共识，提取方法的多样化使得外泌体的研究存在争议，贮存方法也大都无法长期维持外泌体的结构和特性。本文对外泌体的特性、提取和贮存手段及其临床应用进展作一综述，以期促进后续外泌体功能的研究。

  2022年03期 v.35 351-355页 [查看摘要][在线阅读][下载 1314K]
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• 环状RNA的生物学功能及其与中枢神经系统疾病关系的研究进展

  武世萍;俞坤;王满侠;

  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种共价闭合的长链非编码RNA，在真核生物中表达丰富。CircRNA具有良好的稳定性、高度保守性和组织发育特异性等特点。研究发现，circRNA是一种新的基因调控层，可通过充当微小RNA(microRNA,miRNA)“分子海绵”等方式参与基因转录及转录后的调节过程。先前的研究发现，circRNA在脑组织中高度表达，近年来研究进一步表明，circRNA对中枢神经系统（central nervous system,CNS）疾病具有重要影响。本文对circRNA这一新型分子的研究现状及其与多发性硬化（multiple sclerosis,MS）、阿尔兹海默病（Alzheimer disease,AD）、帕金森病（Parkinson disease,PD）等CNS疾病的关系的研究进展作一综述，以加深对circRNA及其与CNS疾病关系的认识。

  2022年03期 v.35 356-362页 [查看摘要][在线阅读][下载 1394K]
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• 代谢流分析在CHO细胞代谢研究中的应用进展

  彭婷;梅文枫;

  CHO细胞可进行正确的翻译后修饰，如蛋白折叠、糖基化，且其表达的重组蛋白可分泌至胞外，更便于后续纯化，已成为抗体药物的首选表达宿主。代谢流分析（metabolic flux analysis,MFA）又称代谢通量分析，可通过同位素示踪剂绘制胞内流动的代谢途径来量化这些代谢表型，其综合底物吸收及产物形成速率、生物合成、化学计量反应、中间代谢物的生物合成等数据，可为重新构建细胞代谢提供关键的量化信息。13C-MFA是以13C标记实验为基础的MFA，已成为研究CHO细胞工程改造后的变化及指导培养基和生物工艺优化的重要工具之一。本文就13C-MFA流程及近年MFA在CHO细胞代谢研究中的应用进展作一综述。

  2022年03期 v.35 363-368+378页 [查看摘要][在线阅读][下载 1403K]
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• 嵌合抗原受体修饰T细胞免疫疗法的现状、挑战及应用前景

  张国林;薛满;景荣先;邢以文;

  以嵌合抗原受体修饰T细胞（chimeric antigen receptor T cells,CAR-T）技术为代表的免疫治疗，旨在利用机体免疫细胞的活性特异性地杀灭含有某种抗原表型的恶性肿瘤细胞。CAR-T免疫疗法已成为继外科手术、放射治疗和化疗后最有潜力的肿瘤治疗方法，是利用经基因工程修饰的、可表达嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）的T细胞进行过继性免疫治疗的技术。CAR-T能够以非限制性形式特异识别肿瘤细胞表面特异抗原并进行杀灭，且无需抗原递呈细胞（antigen presenting cell,APC）参与、不受主要组织相容复合体（major histocompatibility complex,MHC）的限制。CAR-T可通过释放穿孔素、颗粒霉素B等直接杀灭肿瘤细胞、募集体内免疫细胞杀灭肿瘤细胞、形成记忆T细胞获得特异性的长效抗肿瘤机制等发挥治疗作用。CAR-T免疫疗法在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤治疗中效果显著，对实体肿瘤治疗潜力巨大。但CAR-T免疫疗法会产生脱靶效应和多种不良反应，诸如细胞因子风暴、神经系统毒性和基因修饰致成瘤风险等。国内尚无自体CAR-T或异体CAR-T产品的生产及质量控制相关规范。未来应在制定相关规范及质量标准的基础上，从寻找肿瘤特异性抗原、强化CAR-T产品的识别特异性、优化CAR-T的制备工艺和筛选流程、降低副反应等方面优化CAR-T细胞制剂的应用。本文就CAR-T免疫疗法的原理、在血液系统恶性肿瘤和实体肿瘤治疗中的应用及存在的挑战作一综述，为相关领域的研究和应用提供参考。

  2022年03期 v.35 369-378页 [查看摘要][在线阅读][下载 1517K]
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专题报道

• 欧洲药品管理局应对甲型H1N1流感大流行的结果报告及经验总结回顾

  江征;徐苗;

  <正>面对大流行传染病，集中调动资源，快速开发、审批以及生产安全有效的抗病毒药物和疫苗制品可能成为有效控制大流行的策略之一。欧洲药品管理局（European Medicines Agency,EMA）作为欧洲联盟成员之一，在2009—2010年应对甲型H1N1流感大流行期间，主体参与了大流行流感疫苗和抗病毒药物审批及监督，凭借清晰明确的危机管理制度，创新的模拟概念和快速评估程序，有效的药品安全监测体系，良好高效的沟通合作和信息共享机制，成功地促进了大流行流感疫苗和抗病毒药物的快速批准和使用，也为防备和应对下一场大流行病积累了一定的经验。

  2022年03期 v.35 379-384页 [查看摘要][在线阅读][下载 1351K]
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