- 张峰典;张颖;李文娟;梅可佳;张朔;孙超;孙宏亮;
目的对两种不同工艺制备的双价肾综合征出血热灭活疫苗的安全性及免疫原性进行评价。方法分别采用细胞工厂、原10 L转瓶工艺培养肾综合征病毒(hemorrhagic fever with renal syndrome virus,HFRSV)Ⅰ型和Ⅱ型,经病毒收获、灭活、超滤浓缩、纯化及除菌过滤后制备单价疫苗原液,将Ⅰ型、Ⅱ型单价疫苗原液按1∶1等体积混合,采用透射电子显微镜观察病毒形态,12%SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量。采用家兔刺激试验和豚鼠主动过敏性试验对两种工艺制备的各3批疫苗进行安全性评价,并对疫苗进行小鼠免疫保护性试验。结果两种工艺分别制备了3批疫苗原液,经透射电镜观察可见100 nm左右的粗糙圆形病毒颗粒,12%SDS-PAGE分析可见相对分子质量分别为70 000～73 000和约50 000的蛋白条带,病毒形态及蛋白条带大小均与HFRSV一致。两种工艺制备的疫苗家兔注射部位经肉眼观察未见刺激性,豚鼠主动过敏试验中也未出现过敏性反应;疫苗免疫保护指数均大于1∶10。结论细胞工厂工艺和原有10 L转瓶工艺制备的双价肾综合征出血热灭活疫苗均具有良好的安全性及免疫原性。
2022年02期 v.35 129-132+137页 [查看摘要][在线阅读][下载 674K] [下载次数：314 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 黄翟;赵王丽;宋天扬;罗正辉;杨东琼;葛绕玲;雷银瓶;范金;易力;
目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗病毒纯化液纯度对照品。方法将Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗病毒纯化液经超滤离心后制备的对照品,在4和-20℃条件下保存,并于保存0、3、6、9、12个月时,采用高效液相色谱法检测纯度。结果 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗病毒纯化液对照品在4和-20℃条件下保存12个月内,目标峰均能被检出,峰型基本保持一致,峰面积百分比均为100%,保留时间RSD为0.69%;4℃时,峰高和峰面积分别降低11.4%和8.8%;-20℃时,峰高和峰面积分别降低44.3%和35.8%。结论由Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗病毒纯化液超滤浓缩后制备的对照品,在4和-20℃条件下放置12个月均保持稳定,可作为Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗病毒纯化液纯度检测对照品使用。
2022年02期 v.35 133-137页 [查看摘要][在线阅读][下载 683K] [下载次数：308 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 张震;魏媛;王雪薇;郭紫婵;赵蓉;王秀丽;王晓霞;
目的利用生物信息学方法分析食管鳞癌基因表达谱芯片,筛选与食管鳞癌相关的核心基因,为食管鳞癌的分子诊断和精准靶向治疗奠定基础。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中寻找3个不同的食管鳞癌基因表达谱芯片GSE45168、GSE38129、GSE70409,利用GEO2R筛选出食管鳞癌较正常癌旁组织具有显著表达差异的基因(differentially expressed genes,DEGs)。通过Draw Venn Diagram对3个基因表达谱芯片的差异基因取交集,利用基因功能注释数据库DAVID(Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)6.8对差异表达基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,利用蛋白互作(protein protein interaction,PPI)检索工具STRING 11.0和Cytoscape等软件对3个数据集进行蛋白互作分析,筛选出枢纽基因(hub gene)。利用GEPIA数据库分析hub基因差异表达情况。结果食管鳞癌与正常癌旁组织相比,具有显著表达差异的基因共2 529个(上调1 164个,下调1 365个),在3个基因表达谱芯片中均有显著表达差异的基因有191个(上调68个,下调123个)。GO分析显示,差异表达基因的功能主要集中在胶原蛋白分解代谢的过程、细胞外基质的组成与分解、细胞外泌体等;KEGG富集分析显示,差异表达基因的通路主要涉及细胞外基质受体相互作用、黏着斑、PI3K-AKT信号通路等;STRING-MCODE分析得到蛋白互作中的30个hub基因。其中KIF20A、ASPM、VCAN与食管鳞癌的相关性未见报道,且与癌旁正常组织相比,其在食管鳞癌组织中表达上调。结论食管鳞癌的发生、发展存在复杂的调控网络。通过生物信息学分析筛选出来的3个核心基因KIF20A、ASPM、VCAN可能成为食管鳞癌治疗的有效靶点。
2022年02期 v.35 138-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 1172K] [下载次数：295 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 丛山日;刘红波;许丹菡;张名;冯昌增;黄小琴;孙浩;杨昭庆;马绍辉;
目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)毒株的VP1基因遗传特征进行分析。方法利用人横纹肌肉瘤RD细胞、人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,以病毒RNA作为逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)的模板,扩增病毒完整VP1基因,利用MEGA 6.06和Geneious 9.0. 2等软件对VP1序列进行分析。结果选取8株CV-A4分离株进行分析,其完整VP1序列为915 bp,编码305个氨基酸。8株CV-A4云南分离株与CVA4/High Point/USA/1949/AF081295(简称原型株)的核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为83.4%～84.6%和97.0%～98.0%;与其他国内CV-A4参考株相比,核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为87.7%～97.0%和97.7%～99.3%。8株CV-A4云南分离株相互比对,核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为91.0%～99.9%和97.7%～100.0%。CV-A4云南分离株与大部分中国分离株同属C2基因亚型。结论本研究中CV-A4分离株均是中国大陆地区优势流行株。
2022年02期 v.35 144-149+158页 [查看摘要][在线阅读][下载 1391K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 胡媛媛;刘子琦;乔子祺;陈欣;尹华雯;姚波;
目的对斑马鱼Hepcidin-2基因结构进行生物信息学分析,并设计优化其抗菌活性。方法选取斑马鱼Hepcidin-2作为目的基因,通过Tblastn进行多序列同源性比对得到Hepcidin基因家族的核苷酸和氨基酸序列,利用生物信息学方法分析其进化关系、理化性质、信号肽、跨膜结构、二级结构、三级结构等;收集和筛选多个物种的Hepcidin序列152条,计算成熟肽各个位置最大频率的氨基酸,得到序列模板,并对序列模板进行预测。结果抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)活性中心空间结构高度保守,C-末端及信号肽区域形成跨膜螺旋结构,成熟肽部分存在β-折叠,得到的序列模板预测具有抗真菌活性,对肺炎克雷伯菌有抗菌活性,对人红细胞有溶血活性。结论建立了序列模板法优化AMP序列和预测其抗菌活性的技术路线,为改造天然AMP,扩大其在临床和生产中的应用提供了理论支持和技术支撑。
2022年02期 v.35 150-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 1286K] [下载次数：413 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 宋丽茹;孙晨;马佳乐;杨滨;郭睿;闫萍;
目的探讨Canopy2(Canopy FGF signaling regulator 2,CNPY2)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemiareperfusion injury,MIRI)心肌细胞凋亡的影响。方法 H_2O_2分别作用于感染腺病毒Ade-hCNPY2-Flag和Ade-NC-Flag的H9c2细胞,细胞核Hoechst 33258染色法检测过表达CNPY2对体外缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,同时采用Western blot法检测多聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymerase,PARP)的活化情况。通过免疫荧光染色法检测CNPY2在心肌细胞的定位。建立大鼠MIRI模型,同时给与Ade-hCNPY2-Flag和Ade-NC-Flag注射,收集再灌注4 d的大鼠心肌组织,TUNEL染色法检测过表达CNPY2对大鼠MIRI心肌细胞凋亡的影响,Western blot法检测PARP的活化情况。结果 Ade-hCNPY2-Flag+H_2O_2组H9c2细胞的凋亡率和PARP活性均明显低于Ade-NC-Flag+H_2O_2组(P <0.05)。CNPY2在心肌细胞的胞浆中表达。大鼠经注射Ade-hCNPY2-Flag后,MIRI心肌细胞的凋亡率和PARP活性均明显低于注射Ade-NC-Flag的大鼠(P <0.01)。结论体内外过表达外源性CNPY2蛋白均可明显抑制缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡。
2022年02期 v.35 159-163+169页 [查看摘要][在线阅读][下载 1269K] [下载次数：408 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 刘杨;许淑娟;李琼毅;刘翊忠;
目的利用慢病毒包装构建过表达小窝蛋白-1(Caveolin-1)的稳定细胞株。方法 PCR扩增仓鼠肾细胞BHK-21中Caveolin-1基因,克隆至pTRIP-CMV载体中,构建重组表达质粒pTRIP-Cav1,将其与对照质粒pTRIP-EGFP分别经LipofectamineTM2000介导转染HEK-293T细胞,收集包装的慢病毒并转导至BHK-21细胞,构建过表达Caveolin-1的细胞株BHK-Cav1及过表达绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的对照细胞株BHK-EGFP。Western blot、qRT-PCR、免疫荧光法验证细胞株的稳定性及过表达特性,同时检测细胞活力。结果经双酶切及测序鉴定,重组表达质粒pTRIP-Cav1构建正确。与BHK-21细胞比较,各代次BHK-EGFP细胞中EGFP荧光明显,BHKCav1细胞中Caveolin-1蛋白表达水平增加,mRNA水平显著增加(P <0.01),且表达水平不随细胞代次的增长而改变。BHK-Cav1和BHK-EGFP细胞活力与BHK-21细胞比较,差异均无统计学意义(P均> 0.05)。结论成功构建了Caveolin-1过表达细胞株BHK-Cav1,其具有较好的稳定性,为下一步研究病毒通过Caveolin依赖型内吞途径感染BHK-21细胞奠定了基础。
2022年02期 v.35 164-169页 [查看摘要][在线阅读][下载 1166K] [下载次数：749 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 郭垠利;刘承波;
目的研究替普瑞酮(geranylgeranylacetone,GGA)对MPP~+诱导的帕金森(Parkinsons' disease,PD)细胞模型中热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70表达的影响及其抗细胞凋亡机制。方法用MPP+刺激PC12细胞,MTT法检测细胞存活率,验证PD细胞模型是否构建成功;Western blot法检测模型中凋亡标记分子Bax和pro-caspase-12蛋白的表达情况。将构建成功的PD细胞模型(6 h组)分为4组:建模成功的control组、0.2 mmol/L GGA给药组(GGA组)、1μmol/L HSP70抑制剂单独给药组(AP组)及0.2 mmol/L GGA和1μmol/L HSP70抑制剂联合用药组(GGA+AP组),Western blot法检测各组HSP70、Bax、pro-caspase-12和caspase-3蛋白的表达情况。结果经MPP+刺激成功构建了PD细胞模型,Bax蛋白的表达明显升高(P <0.05),而pro-caspase-12蛋白切割活化明显升高(P <0.01)。与control组相比,GGA组HSP70蛋白的表达明显升高(P <0.01),AP组明显降低(P <0.05);GGA组Bax蛋白的表达被明显抑制(P <0.05),而AP组明显升高(P <0.01);GGA组caspase-3蛋白的表达明显降低(P <0.01),而AP组明显升高(P <0.01);GGA组pro-caspase-12蛋白的表达明显升高(P <0.01),而AP组明显降低(P <0.05)。GGA+AP组HSP70和pro-caspase-12蛋白的表达较GGA组明显降低(P均<0.01),而Bax和caspase-3蛋白的表达与GGA组相比差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 GGA诱导PD细胞模型中HSP70的过表达,可能通过抑制细胞凋亡途径的激活而发挥抗凋亡作用,减轻对神经元损伤。
2022年02期 v.35 170-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 1104K] [下载次数：241 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王敏力;王弢;周倩;马力;陈家啡;曹大伟;梁蔚阳;何永兵;余进;李炎;徐苗;侯继锋;
目的制备重组人血白蛋白蛋白质含量RS20国家标准品,用于重组人血白蛋白产品的质量控制。方法以重组人血白蛋白为原料,经灭菌注射用水稀释、除菌过滤后,进行分装、冻干,制备重组人血白蛋白蛋白质含量RS20国家标准品。8家实验室采用凯氏定氮法进行协作标定,并检测标准品的分装误差、水分含量、均匀性及稳定性。结果 8家实验室测定本批标准品蛋白质含量实验室间均值为19.05 mg/mL,95%置信区间为18.80～19.31 mg/mL,均值标准差为0.308 7 mg/m L,标准误为0.109 1 mg/mL,相对标准偏差(RSD)为1.62%。标准品分装过程前、中、后段随机抽取6支样品,分装误差为-0.07%～0.08%,均在±0.1%以内;3支标准品样品的水分含量分别为1.44%、2.43%、2.25%,均<3.0%;5支标准品样品的装量差异为-0.5%～0.5%,均在±1%以内;标准品于-20℃保存2～14个月时蛋白质含量为18.09～18.88 mg/mL,于-20、4、23、32℃保存6个月时蛋白质含量为18.35～18.82 mg/mL,两者变化均较小。结论制备的重组人血白蛋白蛋白质含量RS20国家标准品符合相关规定,规定代码为:280030-201901,可用于重组人血白蛋白产品的相关质量控制。
2022年02期 v.35 175-178+188页 [查看摘要][在线阅读][下载 1182K] [下载次数：362 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 陈琼;王珊珊;石继春;王春娥;李红;李茂光;叶强;
目的制备1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品,用于速率比浊法检测疫苗中的多糖含量。方法采用双光径速率浊度免疫分析系统(IMMAGE 800)非竞争性浊度模式进行检测,多糖体积21μL,血清体积21μL,反应缓冲液体积300μL,增益系数为4,反应时间为3.5 min。确定1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清候选参考品的工作浓度、线性范围、检测限、定量限,并验证专属性和稳定性。采用本实验制备的血清国家参考品及市售血清同时检测2个厂家的23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量。结果确定各型血清候选参考品的工作浓度在原倍至4倍稀释度之间,在相应工作浓度下,多糖浓度在1～6μg/mL范围时,与响应值呈良好的线性关系,相关系数(R2)均> 0.980;检测限和定量限均低于多糖候选参考品最低点(1μg/mL)的反应值;各型血清候选参考品特异性良好,无交叉反应;血清候选参考品于2～8℃保存28 d后仍具有良好的稳定性。除厂家2疫苗的6B和9V型外,2种血清对厂家2疫苗其他型别及厂家1疫苗所有型别多糖含量检测结果的相对标准偏差(RSD)<15%。结论成功制备了12种兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品,可用于速率比浊法检测23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖抗原含量。
2022年02期 v.35 179-183页 [查看摘要][在线阅读][下载 1109K] [下载次数：290 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 李光;任仲;胡道奇;刘汨;李克强;张玉玲;周松辉;方晓兰;李卫平;滕淑静;
目的在大肠埃希菌中表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N蛋白),并进行纯化,用于制备SARS-CoV-2检测试剂。方法将含N蛋白基因的重组质粒pET28a转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达N蛋白,考察Ni柱亲和层析与SP强阳离子交换层析和CM弱阳离子交换层析对重组N蛋白的纯化效率,制备胶体金免疫检测试剂并检测灭活血清。结果表达的重组N蛋白相对分子质量约49 000,表达量约占包涵体总蛋白的30%。Ni2+亲和层析对重组N蛋白的选择性较低,通过强阳离子交换与弱阳离子交换两步层析,实现了重组N蛋白在色谱柱上的复性和纯化,纯度大于90%。以此制备的免疫胶体金检测试剂可初步用于血清中相应抗体的检测。结论复性后的重组N蛋白,具有较好的生物活性,可用于诊断试剂开发,复性工艺对其他重组蛋白质的纯化具有借鉴意义。
2022年02期 v.35 184-188页 [查看摘要][在线阅读][下载 1181K] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 杜慧竟;张全仓;李江姣;叶强;
目的用全自动移液工作站代替人工进行多重调理吞噬实验(multiplexed opsonophagocytic killing assay,MOPA)部分操作步骤。方法用两台全自动移液工作站(1号和3号)分步进行11份13价肺炎球菌疫苗免疫血清样本的MOPA检测,通过与人工操作的检测结果比较验证其准确性;通过5次试验内和5次试验间平行检测验证其重复性。结果 1号工作站检测11份血清样本的13个型别滴度结果与手动操作结果的相关系数均在0.90以上,除6B和9V型,滴度差值80%以上均在3倍以内;1号工作站对6份样本5次试验内平行检测,每份血清样本的滴度均在均值的3倍以内;3号工作站预稀释和人工预稀释的11份血清滴度值相差均在3倍以内;3份血清5次试验内平行检测,每份血清的滴度均在均值的3倍以内;11份血清5次试验间平行检测,每份血清的滴度均在均值的3倍以内。结论全自动移液工作站实验准确性和重复性良好,有望代替人工完成部分MOPA实验步骤。
2022年02期 v.35 194-199页 [查看摘要][在线阅读][下载 1381K] [下载次数：220 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张豆;李月影;申硕;明平刚;
目的建立适用于疫苗生产车间的新生牛血清(newborn bovine serum,NBS)快速筛选方法。方法以12批NBS(编号为A、B、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M)作为待评价血清,制备细胞培养液,采用细胞收获量测定法、微量终点稀释测定法、相对增长率测定法、细胞3次连续传代培养法、细胞倍增时间测定法5种方法培养Vero细胞,采用配对样本t检验进行统计学分析。结果细胞收获量测定法筛选出J、F、K、B、E、A、M、L、H可作为备用血清;微量终点稀释测定法筛选出J、F、A、E、K、L、M可作为备用血清;相对增长率测定法筛选出J、F、A、E、K、L、M可作为备用血清;细胞3次连续传代培养法筛选出J、F、A、D、K、E可作为备用血清;细胞倍增时间测定法筛选出K、L、E、I、A、D、F、B可作为备用血清。结论微量终点稀释测定法、相对增长率测定法、细胞3次连续传代培养法可用于疫苗生产车间NBS的快速筛选。
2022年02期 v.35 200-204页 [查看摘要][在线阅读][下载 1351K] [下载次数：245 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 罗二华;雷鹏;李雅文;陈婷婷;龚佳莉;匡青芬;
目的优化辛酸沉淀工艺参数,并结合两步层析纯化,评价10%静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中杂蛋白去除效果。方法对溶解倍数、反应液终pH值、辛酸钠浓度3个因素进行优化,设计3因素3水平的正交试验方案,优选辛酸沉淀工艺参数;取100 g组分Ⅱ+Ⅲ沉淀,按最佳工艺参数进行辛酸沉淀,过滤收集上清经Q、QXP两步层析纯化后,进行IgG、IgA、IgM、Alb含量及纯度检测,评价杂蛋白去除效果。结果辛酸沉淀法最佳工艺参数为溶解倍数13倍,反应液终pH值5.1,反应液辛酸钠终浓度20 mmol/L;按最佳工艺参数获得的辛酸沉淀上清经两步层析纯化后纯度达99.99%,杂蛋白含量降至1 mg/L以下。结论辛酸沉淀法可最大限度提升IgG收率,给合后续两步层析纯化,可获得高纯度IgG。该工艺可用于临床安全的人免疫球蛋白产品开发。
2022年02期 v.35 205-208页 [查看摘要][在线阅读][下载 1213K] [下载次数：359 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 梁久佳;刘玉林;刘涵;俞露;张凯宁;刘景会;李利;
目的在NewBrunSwick310 14 L生物反应器中培养表达重组人长效生长激素(recombinant human growth hormone Fc fusion protein,rhGH-Fc)的CHO细胞,优化工艺参数以提高表达量,并进行NewBrunSwick310 14 L到NewBrunSwick510 40 L生物反应器的工艺放大。方法在原有14 L培养工艺基础上,调节转速、通气速率等参数,并对参数调整时期进行工艺优化。通过对渗透压、乳酸、铵离子、钾离子等代谢过程产物的检测来确保代谢正常,利用HPLC法测定表达量。再根据经验公式算出可线性放大的体积依赖型参数,保持原有培养方案及补料策略不变的情况下,结合不同放大经验方法确定操作窗口,从而进行工艺放大。结果 14 L生物反应器优化工艺乳酸累积量低于20 mmol/L、最终铵离子累积量为8 mmol/L、钾离子累积量为14 mmol/L、渗透压为425 osmol/kg,降温后比耗糖速率为0.12 g/(10~9cells·d),表达量为0.9 g/L。经检测,放大至40 L生物反应器,整个培养过程耗糖曲线及代谢产物均与14 L生物反应器中一致,表达量为1.0 g/L。结论成功优化了rhGH-Fc工程细胞大规模培养的工艺,并进行了规模放大,为rhGH-Fc的后续开发奠定了基础。
2022年02期 v.35 209-214+227页 [查看摘要][在线阅读][下载 1469K] [下载次数：1114 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 马瑞君;王苗苗;封启龙;
目的分离并纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),在此基础上收集骨髓间充质干细胞来源的微颗粒(bone mesenchymal stem cell-derived microparticles,BMSC-MPs),并对其进行鉴定。方法采用全骨髓贴壁法分离纯化BMSCs,显微镜下观察BMSCs的形态,绘制第5代BMSCs的生长曲线,通过流式细胞术鉴定BMSCs的表面标记。通过血清饥饿法诱导BMSCs释放BMSC-MPs,流式细胞术鉴定BMSC-MPs的数量和表面标记。结果分离的BMSC生长状态良好,呈梭形和典型的"鱼群样"分布,表面标记CD90和CD29阳性率分别为(99.81±0.94)%和(99.90±0.66)%,CD45和CD34阳性率分别为(0.89±0.31)%和(1.79±0.33)%;流式细胞术鉴定BMSC-MPs数量为(2.55±0.86)×10~7个/mL,BMSC-MPs表面标记CD90和CD29阳性率分别为(97.46±1.85)%和(94.00±2.03)%,CD45和CD34阳性率分别为(4.89±1.05)%和(1.81±0.33)%。结论成功分离了大鼠BMSCs,在此基础上制备了BMSC-MPs,并进行了初步鉴定,为后续研究BMSC-MPs的功能奠定了基础。
2022年02期 v.35 215-219页 [查看摘要][在线阅读][下载 1467K] [下载次数：445 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 张洋;武成;于源华;
革兰阴性(Gram-negative,G~-)菌的分泌系统至少有9种,依次命名为Ⅰ～Ⅸ型分泌系统,其中Ⅴ型分泌系统(typeⅤsecretion system,T5SS)亦被称为自主转运分泌系统(autotransporters,AT),广泛存在于G~-菌中。该系统分泌的蛋白占G~-菌外泌蛋白的比例最高。该系统只含1或2条多肽链,被视为最简单的分泌系统,但其分泌机制复杂。本文对T5SS蛋白的结构、类型、分泌过程、基于T5SS的表面展示技术及T5SS研究中常用的方法作一综述,旨在为研究细菌的致病机制提供参考,以及新型抗生素的研发和T5SS的生物学应用等提供新的思路。
2022年02期 v.35 220-227页 [查看摘要][在线阅读][下载 1517K] [下载次数：576 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 徐梦蔚;宋武琦;付治美;张凤民;
单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)是由单一B细胞产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。mAb已广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞术等医学诊断技术;并可作为亲和层析中重要的配体用于蛋白质的提纯;也可与化疗药物或放疗物质连接,利用mAb的导向作用,直接杀伤靶细胞,用于肿瘤导向治疗。mAb的纯度是其产品重要的质量指标之一,不同方法制备的mAb需根据其物理化学属性(等电点、分子量、疏水性等)来选择不同的纯化步骤,去除不同的杂质,以满足实验需求。本文就实验室水平的mAb制备方法及去除制备过程中产生污染物相应纯化策略的研究进展作一综述。
2022年02期 v.35 228-232+238页 [查看摘要][在线阅读][下载 1388K] [下载次数：2021 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：0 ] - 杨颖;马雁冰;
免疫原性细胞死亡(immunogenic cell death,ICD)是细胞死亡的一种形式,通过释放肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA)和肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen,TSA),暴露"危险信号"以刺激机体免疫系统产生免疫应答,其特点是释放和/或增加表达损伤相关的分子模式(danger associated molecular patterns,DAMPs)等,主要的DAMPs包括三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、钙网蛋白(calreticulin,CRT)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box protein B1,HMGB1)、热休克蛋白(heat shock protein,HSP)、Ⅰ型干扰素(typeⅠinterferon,IFNⅠ)和膜联蛋白1(Annexin 1,ANXA1)等。肿瘤经多种特定具有细胞毒性的化疗药物(米托蒽醌、奥沙利铂和紫衫醇等)或物理疗法(放射线、光动力疗法)治疗时,肿瘤细胞会发生ICD,从非免疫原性转变为免疫原性,募集和激活免疫细胞,从而激发或增强抗肿瘤免疫反应。本文就ICD的重要相关分子及诱导ICD在肿瘤治疗应用中的研究进展作一综述。
2022年02期 v.35 233-238页 [查看摘要][在线阅读][下载 1388K] [下载次数：2192 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：1 ] - 刘芳;常钰玲;宋艳梅;陈彻;
近年来,氧化还原调节、有氧糖酵解和自噬均可作为抗肿瘤的关键因素,且三者的交叉作用与肿瘤的生物学行为密切相关。有氧糖酵解的关键代谢途径与调控氧化还原的信号通路密切相关,自噬又在有氧糖酵解的作用下起着维持细胞生长、保护细胞的作用。阐明三者在肿瘤中的作用及其相互关系,可有效增强临床诊断、监测和治疗癌症的能力,也可为临床治疗肿瘤提供更有效的组合治疗策略及新颖且有效的思路和方法。本文就氧化还原调节、有氧糖酵解、自噬近年来在抗肿瘤中的应用及其三者间的相互关系作一综述。
2022年02期 v.35 239-245+250页 [查看摘要][在线阅读][下载 1468K] [下载次数：1499 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ]