- 禹玉婷;胡岗;罗志宇;卢佳;王泽鋆;孟胜利;申硕;
目的制备柯萨奇病毒A2(Coxsackievirus A2,CV-A2)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并对其进行纯化及鉴定。方法将CV-A2 P1和3CD基因序列根据昆虫细胞偏好特性进行密码子优化并人工合成,分别克隆至供体质粒pFastBacDual的多角体蛋白启动子(pPh)和pP10启动子后,构建重组质粒pFastBacDualCV-A2 P1-3CD,转化至大肠埃希菌(E. coli)DH10 BacTM中,转座形成重组bacmid,再将重组bacmid转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒rBacCV-A2 P1-3CD,经蔗糖垫底离心和氯化铯密度梯度离心法纯化rCV-A2 VLPs,SDS-PAGE、Western blot法检测浓度及纯度,透射电镜法观察VLPs颗粒形态。结果质粒pFastBacDualCV-A2 P1-3CD经双酶切鉴定,重组Bacmid、rCV-A2VLPs经PCR鉴定,均在预期目标条带处可见清晰条带;rCV-A2 P1-3CD蛋白经IFA鉴定可见明显荧光;rCV-A2 VLPs经SDS-PAGE及Western blot分析,均可见清晰的VP0(相对分子质量约39 000)、VP1(相对分子质量约34 000)和VP3(相对分子质量约27 000)条带;透射电镜观察纯化r CV-A2 VLPs,可见直径23～33 nm的颗粒,形态和大小与CV-A2一致。结论成功构建了pFastBacDualCV-A2 P1-3CD重组Bacmid质粒,并成功表达了rCV-A2 VLPs,为今后rCV-A2 VLPs疫苗的研发奠定了基础。
2021年07期 v.34 782-787页 [查看摘要][在线阅读][下载 980K] [下载次数：334 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 哈小琴;高彩艳;李萍;陆润兰;李兵;宋月娟;邢媛;朱晓红;宋薇;买志福;
目的比较不同海拔对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)迁移及黏附功能的影响。方法选取咸阳市某医院T2DM患者25人及同期健康体检者20人,作为低海拔组,兰州市某医院T2DM患者29人及同期健康体检者20人,作为高海拔组。采集各组人群静脉血,密度梯度离心法提取PBMCs。ELISA法检测血清中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-l)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度;实时荧光定量PCR法检测PBMCs中趋化因子受体2[chemokine(C-X-C motif)receptor 2,CXCR2]、趋化因子受体4(CXCR4)和白细胞功能相关抗原-1(leukoctes function associated antigent-1,LFA-1)基因相对表达量;Western blot法检测CXCR2和CXCR4蛋白表达水平。结果高海拔组T2DM患者较低海拔组SDF-1和HIF-1α表达升高,IL-8和VEGF表达降低(P均<0.05)。高海拔组T2DM患者较健康者各基因相对表达量均降低,其中CXCR2和CXCR4基因相对表达量差异有统计学意义(P <0.001);低海拔组T2DM患者较健康者各基因相对表达量降低,但CXCR2基因相对表达量差异有统计学意义(P <0.001)。高海拔组较低海拔组CXCR2和CXCR4蛋白表达水平均降低(P <0.05),两组T2DM患者CXCR2和CXCR4蛋白表达水平均低于健康者(P <0.05)。结论随着海拔升高,T2DM患者较健康者缺氧程度加重,PBMCs迁移增强,黏附性和成血管能力减弱。
2021年07期 v.34 788-792+797页 [查看摘要][在线阅读][下载 1039K] [下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王云天;陈苏玲;苗承辉;陆俭;李晨昊;何星;
目的对A型肉毒梭菌培养基中植物水解蛋白(tryptone substitute,TS)替代胰酪蛋白胨的可行性进行分析。方法对培养基TS浓度进行筛选试验,选择最佳TS浓度进行放大培养,制备3批TSYG(植物水解蛋白-酵母浸出粉-葡萄糖)培养基,检测培养液产毒力;用3批TSYG培养基制备结晶毒素,检测结晶毒素收率;比较TSYG培养基与常规使用的TYG(胰酪蛋白胨-酵母浸出粉-葡萄糖)培养基的产毒力,并比较两者生产的收获物的关键质控参数结晶毒素收率和纯度。结果 3批TSYG培养基产毒力均≥1×105LD50/mL,符合A型肉毒梭菌产毒培养的要求;3批TSYG培养基生产的结晶毒素收率均在0.8～7.0 mg/L之间,符合注射用A型肉毒毒素的质控标准;3批TSYG培养基与TYG培养基的产毒力以及生产的收获物的结晶毒素收率和纯度相比差异均无统计学意义(P均> 0.05)。结论在A型肉毒梭菌培养过程中,用TS替代产毒培养基中的胰酪蛋白胨是可行的。
2021年07期 v.34 793-797页 [查看摘要][在线阅读][下载 978K] [下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 宋瑞卿;苏杭;张玲;张路明;马宁宁;
目的考察流加补料培养工艺中丙戊酸钠、锌离子及其浓度对表达单克隆抗体的CHO工程细胞抗体产量的影响。方法通过单因素试验筛选丙戊酸钠提高抗体产量的最佳浓度,以及可促进细胞生长并提高抗体产量的流加物质(氨基酸类、维生素类、金属离子等)及其最佳浓度。利用Minitab 17软件考察丙戊酸钠和锌离子两因子的交互作用,得到其最优水平,并进行验证。结果细胞培养第8天单次添加终浓度为1.5 mmol/L的丙戊酸钠,可使抗体产量提高(81.5±9.7)%;锌离子可促进细胞生长并明显提高抗体产量,细胞培养第3天开始,每24 h添加终浓度为90μmol/L的锌离子,可使抗体产量提高(38.3±4.3)%。丙戊酸钠和锌离子组合使用可使抗体产量分别比其单独使用提高27.0%和63.8%。结论组合使用丙戊酸钠、锌离子对CHO工程细胞抗体产量提高的比例明显优于单独使用,可能是丙戊酸钠促进抗体表达的同时抑制细胞生长,限制其提高抗体产量的潜力,锌离子的加入可减弱丙戊酸钠对细胞生长的影响,组合使用可更高效地表达抗体。
2021年07期 v.34 798-803页 [查看摘要][在线阅读][下载 1118K] [下载次数：302 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 潘翠丽;汪书哲;王兴平;罗仍卓么;魏大为;蔡小艳;马云;
目的预测分析牛miR-504(bta-miR-504)靶基因对奶牛乳房炎的调控机制。方法应用miRBASE数据库检索并分析miR-504成熟序列在不同物种中的保守性,TargetScan及miRWalk软件预测bta-miR-504的靶基因,DAVID在线软件对靶基因进行GO分类统计注释分析和KEGG通路注释分析,STRING在线软件和Cytoscape软件进行蛋白相互作用分析,采用Cytohubba软件中的11种方法计算并分析候选靶基因中的核心基因。结果 miR-504成熟区序列在不同物种间呈高度保守。共筛选出477个bta-miR-504候选靶基因,其参与的主要生物过程包括细胞内信号转导、细胞内蛋白转运和负调控MAPK活性等,显著富集于癌症、内吞、Ras、雌激素和胰岛素信号通路。与候选靶基因编码蛋白存在较多互作关系的蛋白包括TOLLIP、RIK3R1、TRAF6、EGFR、FBXL20、FBXL18、FBXO41、FBXL12等,其编码基因参与癌症、催乳激素、雌性激素、胰岛素、NF-kappa B、AMPK、Ras、TNF及心肌细胞肾上腺激素等信号通路。btamiR-504候选靶基因调控网络中的核心基因为TRAF6和CFTR。结论 bta-miR-504核心候选靶基因TRAF6和CFTR可能通过AMPK、Ras、Hepatitis C和Measles信号通路参与奶牛乳房炎的调控作用。
2021年07期 v.34 804-810页 [查看摘要][在线阅读][下载 1773K] [下载次数：242 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王晰;文朝朝;魏艳;王海龙;郭睿;赵虹;张栋;弓韬;于保锋;
目的分析肿瘤免疫调控新靶点YTH N6-甲基腺苷(m6A)RNA结合蛋白1[YTH N6-methyladenosine(m6A)RNA binding protein 1,YTHDF1]的分子结构及生物学功能。方法应用NCBI、ExPASy、SignalP、PSORTⅡ、SOPMA、STRING、SWISS-MODEL等软件工具分析YTHDF1蛋白的理化性质及其生物学功能,并通过MEGA 7软件建立YTHDF1蛋白的系统进化树。结果 YTHDF1是一种不稳定的碱性亲水蛋白质,无信号肽,无跨膜区;YTHDF1在多种肿瘤中高表达,在胃肠道肿瘤中表达最高;YTHDF1可能部分或更多定位在细胞核中;YTHDF1的二级结构主要由无规则卷曲构成;与YTHDF1相互作用的蛋白质包括WTAP、METTL3、FTO、METTL14、ALKBH5,YTHDF1主要参与RNA的转录后修饰、mRNA剪切的调控及DNA损伤修复反应。YTHDF1蛋白在进化过程中高度保守。结论 YTHDF1可能在细胞质中通过识别m6A提高蛋白翻译来促进肿瘤发生,也可能在细胞核中通过其他机制促进肿瘤发生。
2021年07期 v.34 811-815页 [查看摘要][在线阅读][下载 1338K] [下载次数：436 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 杨勇;吴永超;张飞伟;杨坤;闵宪捷;刘佐军;雍雪飞;刘少祥;潘海龙;
目的探讨培养条件对百日咳杆菌发酵中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)和丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)表达的影响。方法采用300 L全自动发酵罐进行百日咳杆菌发酵培养,培养基为百日咳S-S培养基,搅拌通气培养,培养量200 L,温度35～37℃,培养时间40 h,接种比例1∶12～1∶15。试验分为高PT表达组(搅拌转速为160 r/min,搅拌叶片为直叶,有挡板,培养0～20及21～40 h的通气量分别为600和400 L/min)、高FHA表达组(搅拌转速为220 r/min,搅拌叶片为弯叶,无挡板,培养0～20及21～40 h的通气量分别为400和600 L/min)及对照组(搅拌转速为180 r/min,搅拌叶片为直叶,有挡板,通气量为500 L/min),每组平行培养3批培养物。于培养结束时采用ELISA法检测PT及FHA含量。结果高PT表达组PT含量平均值达3.16μg/mL,比对照组(平均值2.23μg/m L)提升了41.7%(P <0.05);高FHA表达组FHA含量平均值达21.37μg/mL,比对照组(平均值11.00μg/mL)提升了94.3%(P <0.05)。结论百日咳发酵工艺中,高搅拌剪切力和较低的溶氧水平有利于PT的表达,低剪切力和高溶氧水平有利于提高FHA的产量。
2021年07期 v.34 816-818+823页 [查看摘要][在线阅读][下载 1182K] [下载次数：310 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 秦荣浦;田石华;江筠;刘敏;何成;杨宇峰;楼觉人;
目的用马来酰亚胺活化的相对分子质量40 000的聚乙二醇(MAL-PEG40K)定点修饰胰高血糖素样肽-1衍生物(glucagon like peptide-1analogue,GLP-1a),并分析修饰产物部分性质。方法采用MAL-PEG40K定点修饰GLP-1a,强阳离子交换层析分离纯化修饰混合物,SDS-PAGE及反相高压液相色谱法(RP-HPLC)检测修饰产物MAL-PEG40KGLP-1a纯度,报告基因法检测其体外活性,动物急性降血糖试验检测其体内生物学活性。结果 MAL-PEG40K-GLP-1a经SDS-PAGE及RP-HPLC分析,纯度分别为95%和98.1%,体外活性保留率为22.9%,体内具有显著降血糖作用且药效时间明显延长。结论制备的MAL-PEG40K-GLP-1a药学性质获得显著改善,有望开发为安全、长效的新型GLP-1受体激动剂。
2021年07期 v.34 819-823页 [查看摘要][在线阅读][下载 1195K] [下载次数：121 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 张小芳;唐凤鸣;
目的探讨藁本内酯(ligustilide,LIG)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的肺上皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法将人肺上皮细胞BEAS-2B分为对照组、LPS组和LPS+LIG组,分别加入空白溶剂或对应药物培养,采用CCK-8法检测LIG对LPS诱导的BEAS-2B细胞增殖的影响;流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞显微形态;转染GFP-LC3荧光质粒后,激光共聚焦显微镜观察免疫荧光;Western blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达水平。在LPS和LIG作用的细胞中加入自噬抑制剂羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)或3-甲基嘌呤(3-methylpurine,3-MA),CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果 LPS呈剂量依赖性抑制BEAS-2B细胞增殖,细胞凋亡率显著上升,LIG可有效缓解LPS诱导的细胞凋亡。LPS处理的细胞在透射电镜下可观察到线粒体形态异常,LIG+LPS组细胞观察到自噬空泡数量增加和线粒体与自噬空泡融合的现象。GFP-LC3质粒转染BEAS-2B细胞后,荧光显微镜下可见LPS组GFP聚集荧光点较对照组明显减少,加入LIG后,GFP聚集荧光点显著增加。LPS处理后,细胞凋亡相关蛋白水平上升,自噬相关蛋白水平下降,而加入LIG后,可部分逆转上述结果。加入自噬抑制剂3-MA或HCQ后,部分缓解了LIG对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的保护作用。结论 LIG可能通过促进BEAS-2B细胞的保护性自噬,减轻LPS诱导的肺上皮细胞损伤。
2021年07期 v.34 824-830页 [查看摘要][在线阅读][下载 1627K] [下载次数：477 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 李晓波;郭占龙;徐晓腾;徐文;李爽;李利;郭雪;吴业红;张雪梅;刘晓强;
目的评价四价流感病毒裂解疫苗在成人及3岁以上儿童中的免疫原性及安全性。方法采用单中心、随机、双盲、阳性疫苗对照的非劣效试验,在云南省西双版纳傣族自治州勐海县和普洱市澜沧县选择成人及3岁以上儿童共2 400名,按照1︰1︰1接种1剂试验疫苗(四价流感病毒裂解疫苗)或2种对照疫苗(上市的三价流感疫苗和含另一谱系B型的三价流感疫苗)。所有受试者于免疫前、免疫后28 d采集静脉血,分离血清,检测H1N1、H3N2和B型(B/Victoria和B/Yamagata)流感病毒血凝抑制抗体,并计算抗体阳转率、抗体保护率、抗体GMT增长倍数。观察并记录所有受试者于每次接种后30 min内、0～7 d、0～28 d的不良事件(adverse event,AE)。随访接种疫苗后6个月内的严重不良事件(serious adverse event,SAE)。结果接种1剂试验疫苗或对照疫苗后,试验组各型抗体阳转率均非劣效于对照组的相同型别,试验组BY和BV型抗体阳转率优于不含BY/BV型的对照组。试验组与对照组H1N1、H3N2、BY、BV型抗体GMT比值的95%CI下限均> 0.67,试验组各型抗体GMT均非劣效于对照组的相同型别,试验组BY和BV型抗体GMT优于不含BY/BV型的对照组。所有人群H1N1、H3N2、BY、BV型试验组和对照组各型抗体阳转率95%CI下限均> 40%。H1N1、H3N2、BY、BV型血清抗体保护率的95%CI下限均> 70%。试验组和对照组各型抗体GMT均较免疫前增长2.5倍以上。试验组、对照组A、对照组B总AE发生率分别为26.00%、25.00%和27.25%;征集性AE发生率为21.50%、21.63%和21.75%;全身反应发生率为19.63%、20.13%和19.25%;局部反应发生率为2.88%、3.00%和2.88%。试验组和对照组AE发生率差异无统计学意义(P> 0.05)。结论长春生物制品研究所有限责任公司生产的四价流感病毒裂解疫苗在成人及3岁以上儿童中使用安全性良好,免疫效果显著。
2021年07期 v.34 835-842页 [查看摘要][在线阅读][下载 1327K] [下载次数：652 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 杨祥;徐长征;陈金华;孟胜利;王泽鋆;申硕;陈晓琦;
目的分析2019年EV-A71疫苗在湖北省潜江市和谷城县两地区接种后,手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)相关肠道病毒病原谱结构及分子流行病学特征。方法采集谷城县2019年6—12月和潜江市2019年5—12月HFMD患儿肛拭子标本,通过多通道real-time RT-PCR技术对肠道病毒阳性样本进行初步分型筛选后,采用常规RT-PCR方法对肠道病毒VP1区部分基因扩增测序,通过DNAStar 7.0、MEGA 6.0等软件进行分子进化特征分析。结果共收集谷城县2019年6—12月和潜江市2019年5—12月HFMD样本520份,检出肠道病毒阳性样本490份,阳性率94.23%。其中谷城县检出肠道病毒阳性样本242份,共检出6种肠道病毒,各病原及构成比分别为CV-A6 84.30%、CV-A16 2.48%、CV-A10 7.44%、CV-A5 3.31%、CV-A4 0.83%、CV-A8 0.41%、其他未定型的肠道病毒(other enterovirus,other EV)1.24%;潜江市检出肠道病毒阳性样本248份,共检出4种肠道病毒,各病原及构成比分别为CV-A6 54.80%、CV-A16 40.4%、CV-A5 4.40%、CV-A8 0.40%。对几种主要流行的病原基于VP1分子进化树分析结果表明,谷城县和潜江市两地区的CV-A6均属于D3亚型,谷城县CV-A10属于C亚型,潜江市CV-A16属于B1b亚型,谷城县CV-A16属于B1a亚型。结论 2019年下半年,谷城县和潜江市两地区在EV-A71疫苗的干预下,HFMD病原谱为多种基因型的肠道病毒共同流行,其中CV-A6为优势病原体,未发现由EV-A71病原引起的HFMD,表明EV-A71疫苗的接种在接种地区形成了良好的保护效果。
2021年07期 v.34 843-848+852页 [查看摘要][在线阅读][下载 1718K] [下载次数：283 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 曹凤瑞;付思美;田鑫;程涛;康国俊;
目的了解2019年长春市乙型肝炎及其相关疾病(肝硬化和肝癌)的疾病负担情况。方法通过《中国疾病预防控制信息系统》、《人口死亡信息登记系统》等相关数据,运用早逝所致的寿命损失年(years of life lost,YLLs)和失能引起的寿命损失年(years of lived with disability,YLDs)评价乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者的疾病负担情况。结果2019年长春市因乙型肝炎、肝硬化和肝癌损失的健康生命年分别为7 697.50、2 319.90和12 723.7 DALYs(disability adjusted life years,伤残调整寿命年);YLLs由高到低依次为肝癌、肝硬化和乙型肝炎,分别为12 621.40、2 210.60和766.40,而YLDs则相反,由高到低依次为乙型肝炎、肝硬化和肝癌,分别为6 921.10、109.2和102.4。除乙型肝炎外,肝硬化和肝癌的DALYs主要由YLLs构成,男性略低于女性。30～<50人群乙肝和50岁以上人群肝癌患者的疾病负担一直处于较高状态,DALYs均维持在3 000以上。结论 2019年长春市乙肝肝癌的疾病负担最重,乙型肝炎次之,乙肝肝硬化较轻,与国内其他地区持平,高于全球平均水平。
2021年07期 v.34 849-852页 [查看摘要][在线阅读][下载 1218K] [下载次数：270 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 杨玫;夏娇慧;马千里;王辰皓;刘丽珺;姜崴;胡敏;郭雪;
目的评价冻干甲型肝炎减毒活疫苗[hepatitis A(live)vaccine,freeze-dried,HepA-L]上市后的安全性。方法选择四川省2020年1月1日—12月31日接种HepA-L疫苗的人群为研究对象,通过全民健康保障信息化工程中国疾病预防控制信息系统免疫规划信息系统收集接种后的不良反应发生情况,回顾性分析该疫苗的疑似预防接种异常反应(adverse event following immunization,AEFI)的分类构成及报告发生率等指标。结果共接种HepA-L疫苗1 008 154剂次,报告AEFI 268例(报告发生率26.58/10万剂),其中一般反应223例(报告发生率22.12/10万剂),异常反应30例(报告发生率2.98/10万剂),心因性反应2例(报告发生率0.20/10万剂),偶合症13例(报告发生率1.29/10万剂)。一般反应主要为发热、红肿、硬结,异常反应主要为荨麻疹及过敏性皮疹,不良反应主要集中发生在接种当天及接种后1 d。268例AEFI均已治愈或好转。结论 HepA-L疫苗具有良好的安全性,可用于适龄人群甲型肝炎的预防。
2021年07期 v.34 853-856+861页 [查看摘要][在线阅读][下载 1288K] [下载次数：214 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 徐康维;何蕊;权娅茹;苏喆;王剑锋;赵慧;李长贵;
目的制备新型冠状病毒S蛋白抗体,初步建立检测新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量的方法。方法使用新型冠状病毒重组S蛋白分别免疫羊和兔,获得抗血清。采用间接ELISA法和微量中和试验检测抗血清效价,免疫印迹试验检测抗体特异性。采用蛋白G纯化树脂分别对羊和兔抗血清进行亲和层析纯化,获得抗体。以纯化后的羊抗体作为包被抗体,兔抗体作为显示抗体,建立新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测方法。结果对羊进行4次免疫后,抗血清ELISA效价达220 000,中和抗体效价达1 536。对兔进行3次免疫后,抗血清ELISA效价达220 000,中和抗体效价达4 096。羊和兔抗体均可与新型冠状病毒S蛋白特异性结合。应用纯化后的抗体,成功建立了检测抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,该方法线性良好,R2> 0.99,可用于新型冠状病毒灭活疫苗原液抗原含量的检测。结论成功制备了羊和兔抗新型冠状病毒S蛋白高效价抗体,并初步建立了新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法。
2021年07期 v.34 857-861页 [查看摘要][在线阅读][下载 1353K] [下载次数：649 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 常恒祯;常江;战俊澎;杨馨;郭珣;刘益辛;邹德颖;任洪林;
目的比较切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析3种方法纯化包涵体重组蛋白的效果。方法筛选全长IL-1β与全长IL-1Ra重组质粒(简称IL-1β-1Ra-2重组质粒)及全长IL-1Ra重组质粒的转化感受态菌株[感受态E. coli BL21(DE3)、E. coli BL21(DE3)PLysS及E. coli BL21-Codon Plus(DE3)-RIPL]、IPTG诱导浓度(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mmol/L)、诱导温度(16和37℃)。最佳表达条件诱导的IL-1β-1Ra-2重组质粒,分别用切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析法进行纯化,确定最佳纯化方法。采用最佳表达条件分别诱导表达IL-1β-1Ra-2重组质粒及全长IL-1Ra重组质粒后,通过最佳纯化方法进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果 IL-1β-1Ra-2重组质粒及全长IL-1Ra重组质粒最佳转化感受态菌株为E. coli BL21-Codon Plus(DE3)-RIPL,最佳IPTG浓度分别为1和0.4 mmol/L,诱导温度为37℃;最佳纯化方法为包涵体复性纯化法。IL-1β-1Ra-2及全长IL-1Ra重组蛋白包涵体复性纯化产物相对分子质量分别约为10 560和19 770,纯度可达90%以上,可溶性蛋白回收量分别约为46及63 mg,且均可与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。结论相同条件下,包涵体复性纯化法获得的可溶性蛋白回收量最大,适用于相对分子质量约10 000的非高表达包涵体蛋白的纯化。
2021年07期 v.34 862-867页 [查看摘要][在线阅读][下载 1381K] [下载次数：2923 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：1 ] - 赵丽丽;朱玉强;马动;张贵民;刘忠;
目的应用3 L生物反应器,基于等P/V策略建立生产规模450 L生物反应器的缩小模型。方法应用3 L生物反应器,按照生产工艺培养稳定表达抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体的CHO细胞,培养16 d应用亲和层析纯化抗CD20单克隆抗体,分子排阻法分析抗体聚体,弱阳离子高效液相色谱法分析抗体的酸性峰和碱性峰含量,2-AB标记法检测抗体糖型含量,mini-tab软件对结果进行双单侧检验(Two One-Sided Test,TOST)分析。结果与生产规模相比,缩小规模细胞生长、二氧化碳分压(pCO_2)水平及主要代谢产物乳酸和铵离子水平基本一致,抗体表达量、聚体含量、糖型结果及酸性峰和碱性峰含量经分析,均具有等价性。结论基于等P/V缩小原则成功建立了生产规模生物反应器的缩小模型。
2021年07期 v.34 868-872页 [查看摘要][在线阅读][下载 1386K] [下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]