- 陈敬;张燕斌;刘钰;王雪薇;钟佑秀;王平;刘梅影;
目的在原核系统中表达肠产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)不耐热肠毒素B亚基(heat labile enterotoxin B subunit,LTB)和耐热肠毒素(heat stable enterotoxin)突变体(STN12S)的融合蛋白,联合环鸟-腺二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,cGAMP)和dmLT(double mutant heat-labile enterotoxin)佐剂初步评价其保护效果并进行免疫反应分析。方法构建表达质粒pET28α-LTB-2xSTN12S,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍柱纯化,将纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白联合dmLT和cGAMP佐剂(为抗原+dmLT+cGAMP组;同时设空白对照组、感染对照组、抗原组),均经皮下途径免疫BALB/c小鼠,免疫2针,间隔2周,末次免疫2周后滴鼻攻击ETEC-HN临床分离株(LT+/ST+),2周后称重,取眼眶静脉血及脾淋巴细胞进行体液和细胞免疫分析。结果重组质粒pET28-LTB-2xSTN12S基因测序正确,纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白相对分子质量约20 000,纯度为93%,与霍乱毒素(cholera toxin,CT)和ST多抗均能发生特异反应。抗原+dmLT+cGAMP组小鼠诱导的免疫保护均高于感染对照组和抗原组(P均<0.05),诱导的针对LTB-2xSTN12S血清IgG抗体水平及针对LTB和ST抗原特异性IgG抗体水平均高于其他组(P均<0.05);脾淋巴细胞培养上清中抗LTB-2xSTN12SIgG抗体水平及针对LTB-2xSTN12SLTB抗原特异性IgG抗体水平均显著高于其他组(P均<0.01),诱导的脾淋巴细胞抗原特异性IL-4、IL-6、IL-17和IFNγ细胞因子分泌细胞数量均高于其他组(P均<0.05)。结论经原核表达系统成功表达并纯化了LTB-2xSTN12S融合蛋白,LTB和ST抗原性良好,联合cGAMP和dmLT佐剂对同时表达LT和ST临床分离株的攻击具有保护效果,并检测到显著的特异性体液和细胞免疫反应。
2020年12期 v.33 1345-1351页 [查看摘要][在线阅读][下载 746K] [下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李春艳;张睿;林洪娟;杨雪;马坤;刘玥;郑美慧;朱保钢;解辉;柴博雅;
目的分析无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液的批间一致性,并对其组分进行鉴定。方法测定4批无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液的糖蛋白含量、总蛋白含量、残留DNA含量及内毒素含量;采用SEC-HPLC法检测原液的纯度。将峰2组分经还原烷基化酶解后,进行LTQ orbitrap velos质谱分析,并应用Proteo Wizard软件鉴定组分。结果 4批疫苗原液的狂犬病病毒糖蛋白含量均值为31.78%,相对偏差为6.44%;总蛋白含量均值为167.04%,相对偏差为2.73%;残留DNA含量均<200 pg/剂,内毒素含量均<100 EU/mL;SEC-HPLC色谱图保留时间变化较小,峰1相对峰面积均值为93.1%,相对偏差为2.5%;峰2相对峰面积均值为6.9%,相对偏差为34.0%。峰2组分主要为狂犬病病毒颗粒裂解物、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、Vero细胞来源泛素蛋白及痘病毒泛素蛋白。结论无人血白蛋白冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液批间一致性良好,成功鉴定了峰2的成分。
2020年12期 v.33 1352-1356页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K] [下载次数：393 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 冯石军;刘雨;陈珺;段素琴;饶清;陈俊英;管娇琼;
目的鉴定并分析2018年湖南省登革病毒2型(dengue virus 2,DENV-2)分离株的非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1)基因。方法利用试剂盒提取登革热患者血清RNA,RT-PCR法鉴定病毒类型及扩增11株分离株NS1基因,并进行基因测序。应用MEGA 7.0软件分析分离株与DENV-2标准株(KM204118)的NS1基因核苷酸及氨基酸序列,利用最大似然法(1000 Boot strap replicate)构建NS1基因的系统进化树。结果共获得11株分离株的NS1基因,经比对发现,除分离株HNNS201804和HNNS201810外,其余分离株在NS1基因第585位碱基由T变为C(无义突变);HNNS201806的NS1基因第936位碱基由C变为T(无义突变)。11株分离株NS1基因其他突变位点均相同,共68处发生碱基突变,其中9个为有义突变。11株分离株与China-ZJ(2017-MH110594)、China-GZ(2018-MK564485、2015-KX621245、2017-MK564483)、Thailand(2017-LC410191)、Singapore(2016-MF314189)、Philippines(2015-KU517847)有较近的亲缘关系。结论 2018年湖南省11株分离株均为DENV-2,可能是浙江或广州输入株,也可能是泰国、新加坡和菲律宾等东南亚国家的输入株。
2020年12期 v.33 1357-1362页 [查看摘要][在线阅读][下载 758K] [下载次数：91 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 康志明;赵琪;郑锦秀;杨婷;杨利军;杨涛;
目的通过体内外试验探讨新型小肽ωKWR抑制血小板聚集效应并进行毒性分析。方法于家兔耳缘静脉采血并分离富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP),检测ωKWR体外抗血小板聚集作用;小鼠肺动脉栓塞试验检测ωKWR体内抗血小板聚集作用;小鼠尾出血模型检测ωKWR对生理性止血的影响;急性、亚急性毒性试验及小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验检测ωKWR对小鼠的急性、致畸、致突变毒性及大鼠的亚急性毒性。结果体外血小板聚集试验显示ωKWR最大有效浓度为40μmol/L;肺栓塞试验显示ωKWR具有良好的抑制体内血小板聚集效果;尾部出血时间显示ωKWR在有效浓度范围内不延长生理性止血时间;毒性试验结果显示ωKWR未见急性毒性;亚急性毒性试验结果显示ωKWR对实验动物各脏器和生化指标无明显影响;骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验显示ωKWR对生殖系统无影响。结论新型抗栓小肽ωKWR可抑制病理性的血小板聚集,但对生理性止血无影响。动物毒理学试验提示ωKWR具有较高的安全性。
2020年12期 v.33 1363-1369+1375页 [查看摘要][在线阅读][下载 2409K] [下载次数：182 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 平芳;杨洵;金佳佩;蔡雪飞;
目的探讨在枯草芽孢杆菌中分泌表达乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核心蛋白(HBV core protein,HBc)的可行性。方法 PCR扩增HBc基因片段,插入pBE S-DNA穿梭质粒的MCS区域,构建重组质粒pBE S-DNA/HBc,将其线性化后与分泌信号肽DNA(SP DNA)连接产物转化大肠埃希菌Stellar感受态细胞,收获全部阳性菌落,并将提取的混合质粒转化至枯草芽孢杆菌RIK1285感受态细胞,ELISA法筛选分泌表达HBc蛋白的阳性菌落,选取分泌表达量最高的菌株放大培养,培养上清经亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE及Western blot分析重组蛋白HBc的分泌表达。结果经双酶切和测序鉴定,重组质粒pBE S-DNA/HBc构建正确。随机挑选的50株重组枯草芽孢杆菌经鉴定有16株含HBc基因,其中4株培养上清中检测到重组蛋白HBc的阳性表达。经SDS-PAGE分析,重组蛋白HBc在培养上清中呈单体、二聚体及多聚体状态;经Western blot分析,重组蛋白HBc能与HBc抗体特异性结合。结论重组蛋白HBc在枯草芽孢杆菌中可实现分泌表达,并具有抗原活性。
2020年12期 v.33 1370-1375页 [查看摘要][在线阅读][下载 1224K] [下载次数：300 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 徐嫄;邹兴启;万建青;王兆;李翠;何天慈;夏应菊;杨延丽;宋艳民;张松平;朱元源;赵启祖;
目的考察灭活口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)粒子146S抗原标准品的稳定性。方法采用高效液相体积排阻色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SE-HPLC)检测灭活FMDV粒子146S抗原标准品在不同保存条件下(-80及4℃保存0～180 d;4℃振荡保存0～7 d;-80℃保存0～150 d,每30 d冻融1次,共5次)的抗原含量变化,采用直线拟合法对监测数据进行统计学分析,考察稳定性。结果获得溯源146S抗原标准品标准曲线方程为y=65 010 x-29 389,R2=0.998 8;不同保存条件下的灭活FMDV粒子146S抗原标准品含量变化分析显示,-80℃保存0～180 d、4℃振荡保存0～7 d、-80℃反复冻融5次,拟合直线方程分别为y=-0.159 5 x+63.215、y=-0.079 1 x+63.697和y=-0.635 7 x+63.881,|β1|均<t0.95,(n-2)·s(β1),斜率不显著,未观测到不稳定性;4℃保存0～180 d,拟合直线方程为y=-2.278 2 x+64.801,|β1|> t0.95,(n-2)·s(β1),斜率显著,观测到不稳定性。结论制备的灭活FMDV粒子146S抗原标准品于-80℃条件下能满足长期贮存和冻融使用,于4℃条件下能满足短期冷藏运输。本文为146S抗原标准品的研制提供了技术数据支持。
2020年12期 v.33 1376-1380页 [查看摘要][在线阅读][下载 399K] [下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 潘晓瑜;林婧娴;韩晋辉;朱俊访;罗燕娜;
目的构建单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法针对HSV-2 UL27、UL29基因,各筛选干扰效率最佳的shRNA片段相连接,构建双基因共表达慢病毒载体,并转染HEK293细胞作为干扰组,另设空白对照组(不做任何处理)和阴性对照组(转染不针对任何基因的慢病毒载体)。转染48或24 h后接种HSV-2,RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中目的基因mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测各组细胞的存活率。结果干扰组UL27和UL29基因mRNA的表达抑制率可达(78.61±2.14)%和(84.86±1.52)%,同时gB和ICP8蛋白的相对表达量明显下降(P均<0.05),细胞的存活明显率提高(P均<0.05)。结论构建的HSV-2 UL27、UL29双基因shRNA重组慢病毒表达载体能在HEK293细胞中表达,为后续HSV-2的基因治疗奠定了实验基础。
2020年12期 v.33 1381-1385页 [查看摘要][在线阅读][下载 884K] [下载次数：283 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 王莹;刘玉林;朱秋媚;孙瑞欣;刘莹;俞露;李继宏;富锐丽;郑全莉;常军亮;刘景会;
目的通过剂型比对探讨卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液的剂型优势。方法将长春生物制品研究所有限责任公司在研卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液与同公司市售注射用重组人干扰素α2b各3批,同时置(25±2)℃避光条件下储存,0、1、2、3和6个月取样,亲和层析前处理浓缩后样品,分别进行非还原型SDSPAGE、SEC-HPLC、质谱肽图、质谱二硫键分析,比对两种剂型中蛋白聚合、降解、修饰产物种类及变化趋势;未经处理样品直接进行生物学活性检测,比对两种剂型有效性指标的变化趋势。结果 SDS-PAGE和SEC-HPLC分析结果相符,两种剂型在加速比对研究周期内均可见蛋白二聚体产生,冻干制剂可见多种蛋白多聚体产生,液体制剂仅见单一种类的蛋白多聚体产生,冻干制剂的电泳纯度和色谱纯度下降趋势较液体制剂明显;质谱分析结果显示,两种剂型均产生了乙酰化修饰产物、氧化修饰产物和二硫键错配产物,两种剂型内各种修饰产物的变化趋势趋于一致;两种剂型生物学活性无明显下降趋势,稳定程度相似。结论长春生物制品研究所有限责任公司卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液(25±2)℃存放6个月内聚合产物少,蛋白纯度下降速度慢,生物学活性稳定无降低趋势,极具剂型优势。
2020年12期 v.33 1386-1391+1397页 [查看摘要][在线阅读][下载 1075K] [下载次数：215 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 王建锋;叶星;南建军;安晨;宋兰兰;毛晓燕;
目的初步筛选抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方组成。方法以PBS为缓冲体系,聚山梨酯-80(Tween-80)为表面活性剂,乙二胺四乙酸(EDTA)为抗氧化剂及溶液不同pH值为关键因素,实验设计(Design of Experiment,DOE)10组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,分别进行加速稳定性试验[40℃保存0、1、7及14 d],分析单克隆抗体主要质量属性[分子排阻-高效液相色谱(size-exclusive-high performance chromatography,SEC-HPLC)和毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)分析纯度,毛细管等点聚焦(capillary isoelectric focusing,cIEF)分析电荷变异体,动物实验检测抗体效价)]变化,初步确定制剂最适配方。结果单克隆抗体制剂经SEC-HPLC分析,1、2、9及10制剂配方组纯度较好,经CE-SDS分析,1、2、7～10制剂配方组纯度较好;经cIEF分析电荷变异体,2及9制剂配方组保护效果较好;经动物实验检测,1、2、7～10制剂配方组抗体效价较好;初步确定2及9制剂配方组为最适制剂配方。结论初步筛选出2组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,Tween-80浓度及制剂溶液pH值可能是影响抗体稳定的主要因素。本研究为单克隆抗体制剂的进一步优化提供了方向及依据。
2020年12期 v.33 1392-1397页 [查看摘要][在线阅读][下载 668K] [下载次数：331 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 韩飞;张帅帅;
目的比较抗幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pylori adhesin A,HpaA)蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)(HpaA-IgY)及抗H.pylori HP1188 IgY(HP1188-IgY)在BALB/c小鼠体内预防和治疗H.pylori感染的最低浓度,并评价治疗效果。方法 Western blot鉴定HpaA-IgY及HP1188-IgY抗原特异性。制备1×109 CFU/mL H.pylori菌液,将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组(灌喂H.pylori菌液0.5 mL)、阴性对照组(以布氏肉汤替换H.pylori)、预防组(先灌喂1、3、5 mg/mL HpaA-IgY或HP1188-IgY及PBS各1 mL,再灌喂H.pylori菌液0.5 mL)、治疗组(先灌喂H.pylori菌液0.5 mL,再灌喂1、3、5 mg/mL HpaA-IgY或HP1188-IgY及PBS各1 mL)。处理完成后,取各组小鼠胃组织进行H.pylori培养、快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)及组织学检查,观察H.pylori定植及炎症反应情况。结果经Western blot分析,HpaA-IgY及HP1188-IgY分别与重组HpaA和HP1188蛋白发生特异性结合。阳性及PBS对照组小鼠感染率均为100%。与PBS对照组比较,5 mg/mL HpaA-IgY及3 mg/mL HP1188-IgY预防组和治疗组感染率均降低,RUT、H.pylori定植及炎症程度评分均显著降低(P均<0.05),均达到较理想的预防和治疗效果。结论 HpaA-IgY及HP1188-IgY对感染H.pylori小鼠均有预防和治疗双重作用,剂量选择HP1188-IgY优于HpaA-IgY。本文为制备防治H.pylori感染的口服生物制品提供了参考。
2020年12期 v.33 1398-1402+1408页 [查看摘要][在线阅读][下载 489K] [下载次数：188 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 张丽芝;白贵杰;杨英英;任克明;刘方蕾;罗树权;沈荣;
目的应用多重PCR法鉴定脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)A、B、C、W135、Y 5个血清群,验证在基因水平鉴定疫苗用菌种血清群的适用性,并与实验室经典细菌培养法和血清凝集试验进行比对。方法提取标准Nm血清群A、B、C、W135、Y的基因组DNA,针对5个血清群Nm荚膜多糖合成基因上的特异序列,应用多重PCR方法对目的片段进行扩增,根据PCR扩增产物的碱基片段大小不同区分这5个血清群;采用PCR方法鉴定7株Nm分离菌种的血清群;并与实验室传统细菌培养法和血清玻片凝集试验比对。结果多重PCR方法能够鉴定Nm,并同时完成血清分群鉴定。该方法特异性和灵敏度(最低检测限为基因组DNA 0.1 ng)均较高。7株Nm分离菌种PCR检测结果与实验室经典培养法和血清玻片凝集试验结果一致,其中1株为血清群A群,1株B群,2株C群,1株W135群,2株Y群。结论多重PCR方法对Nm检测的特异性和灵敏度均优于传统细菌培养法和血清玻片凝集试验,可同时检测Nm菌种的种特异基因和群特异基因,提高了分群鉴定的准确性。此外,试验结果客观,且可长期保存和追溯性查询,有利于疫苗用菌种的质量控制。
2020年12期 v.33 1414-1420页 [查看摘要][在线阅读][下载 1848K] [下载次数：207 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 卫辰;吴燕;龙珍;黄元礼;王丽婵;马霄;
目的建立定量分析以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中百日咳鲍特氏菌气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法,并进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:色谱柱BioC18,流动相A为0.1%甲酸水溶液(V/V),流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液(V/V),进样量为5μL,柱温为30℃,流速为0.3 mL/min;MS条件:电喷雾离子源正电子模式,电压为3.0 KV,离子源温度为300℃,脱溶剂管温度为250℃,雾化器流速为3 L/min,干燥气流速为10 L/min,采用多反应监测模式(multi reaction monitoring mode,MRM)检测TCT。验证方法的线性范围、灵敏度、精密度及准确度。采用该方法对国内外公司生产的组分百白破联合疫苗33批成品、63批原液、80批纯化蛋白进行TCT筛查及定量分析。结果 TCT标准溶液在20.66～661 ng/L范围内,与TCT的定量高子通道922.3> 719.3峰面积线性良好,线性方程为Y=3 555.9 X-3 368,R2=0.996;检出限为2.58 ng/L,定量限为10.33 ng/L;20.65、82.625及330.5 ng/L TCT标准溶液重复检测5次TCT峰面积的RSD分别为2.23%、4.61%和4.40%;66.1及33.05 ng/L的加标样品回收率分别为104.1%和94.4%。所有组分百日咳联合疫苗成品及原液样品均无TCT检出,纯化蛋白样品仅有一家公司的1批黏附素(pertactin,PRN)蛋白的裂解菌体浓缩液检出65.5 ng/L TCT,其后序工艺样品均未检出。结论成功建立了定量分析组分百白破联合疫苗中TCT的LC-MS/MS方法,该方法灵敏度高,准确度、精密度及线性良好,可用于我国组分百白破联合疫苗的TCT定量定性检测。
2020年12期 v.33 1421-1425+1430页 [查看摘要][在线阅读][下载 376K] [下载次数：233 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 姜英;雷清;张巧玲;陈继军;杨俊杰;
目的建立汉逊酵母表达的重组诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法,并进行验证。方法采用磁珠法提取汉逊酵母基因组DNA,获得标准品,建立q PCR标准曲线,并进行专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证。结果专属性验证结果显示,与对照制剂(注射用水、缓冲液、Vero细胞和CHO细胞培养上清DNA)相比,建立的方法对汉逊酵母DNA具有特异性扩增曲线;线性验证中5次试验标准曲线相关系数(R2)均> 0.98;准确度验证试验不同浓度样品的加标回收率在95.12%～105.72%之间,均在70%～130%范围内;重复性和中间精密度验证试验相对标准偏差(RSD)均小于30%;耐用性验证中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的RSD为20.75%,不同蛋白浓度供试品检测结果的RSD为27.11%,均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论建立的方法专属性、线性、准确度、精密度和耐用性均符合要求,可用于检测重组诺如病毒类病毒颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗中残余宿主DNA。
2020年12期 v.33 1426-1430页 [查看摘要][在线阅读][下载 355K] [下载次数：456 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 谢姗姗;李欣;朱晓艳;张杜鹃;赵青;汪伟;
目的分析采用拉曼光谱技术对乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料进行快速鉴别的可行性。方法使用拉曼光谱仪对乙型脑炎减毒活疫苗不同批次、不同规格生产用关键辅料(蔗糖、乳糖、尿素、磷酸二氢钾、十二水磷酸氢二钠)进行扫描。对同一辅料不同部位多次采集,建立相应拉曼光谱方法和图谱库,并用以上辅料进行性能确认。选择与乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料化学结构类似的物质(葡萄糖和二水合磷酸二氢钠)进行专属性验证。结果用手持式拉曼光谱仪对乙型脑炎减毒活疫苗生产用关键辅料进行检测,在分析中未发现偏差,采集的样品图谱与标准图谱一致,与《中国药典》四部(2015版)鉴别结果一致。检测与乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料化学结构类似、性状相近的物质则显示失败,表明拉曼光谱仪建立的方法准确,专属性强,仪器性能可靠。结论拉曼光谱鉴别方法符合相关法规要求,可用于乙型脑炎减毒活疫苗生产用辅料的快速鉴别检测。
2020年12期 v.33 1431-1435页 [查看摘要][在线阅读][下载 716K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张丽君;于佳;韦钦钦;石岩;魏然;刘晓凡;
目的研究PCR技术在疫苗生产过程支原体检测中应用的可行性。方法选择GP03和MGSO作为引物,与《中国药典》三部(2015)规定的3种支原体阳性株(肺炎支原体、口腔支原体和猪鼻支原体)进行16s r RNA序列比对分析和特异性扩增检测,确定引物适用性。以支原体阳性株为PCR模板,进行浓度梯度试验和不同代次扩增,确认PCR法的检测限和精密度。以口服轮状病毒活疫苗生产过程中20个细胞培养物为样品,分别采用PCR法、液体培养法和固体培养法检测,对比三种方法的检测结果。结果 GP03和MGSO适用于支原体检测。PCR法与液体培养法、固体培养法检测结果一致,同时具备操作简单和检出结果快速的特点。结论 PCR技术可作为疫苗生产过程中检测支原体的一种手段。
2020年12期 v.33 1436-1440+1444页 [查看摘要][在线阅读][下载 1022K] [下载次数：870 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：4 ] - 吕兴凯;王吟;任科云;胡尚杰;何昆;陈爱芳;张帆;
目的通过毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性。方法将人血浆经Blue Bestarose FF亲和层析、EzFast Phenyl FF疏水层析、EzFast CM FF阳离子层析、EzFast DEAE FF阴离子层析4步纯化后,采用毛细管电泳法对市售人血白蛋白及各层析步骤产物纯度进行分析,并计算回收率。结果市售人血白蛋白纯度为96.6%,出峰时间为19.68 min,包含二聚体、单聚体和多聚体。亲和层析、疏水层析、阳离子交换层析和阴离子交换层析产物的出峰时间分别为19.667、19.867、19.867、20.075 min,与市售人血白蛋白基本一致,纯度分别为90.0%、93.4%、99.9%和99.9%,回收率分别为49.59%、35.49%、24.12%和17.56%。结论人血白蛋白纯化工艺的有效性良好,获得的人血白蛋白纯度较高,但回收率较低。
2020年12期 v.33 1441-1444页 [查看摘要][在线阅读][下载 362K] [下载次数：514 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 车运诚;曾琼瑶;张文静;
多聚嘧啶区结合蛋白1(polyrimidine tract binding protein 1,PTBP1)是一种选择性剪接蛋白,通过对Pre-mRNA的选择性剪接以产生多样化的mRNA,从而参与多基因表达的转录调控过程,在肿瘤细胞存活、增殖、转移等过程中发挥重要作用。在不同肿瘤中,PTBP1的表达水平及生物学功能不同,机制之一可能在于其结合的相互作用蛋白不同。另外,PTBP1与神经系统退行性病变、高血压的发病有关,还参与机体免疫及细胞衰老。本文就PTBP1的结构、功能及其与疾病的相关性等方面作一综述。
2020年12期 v.33 1445-1449页 [查看摘要][在线阅读][下载 197K] [下载次数：233 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 蒋如如;李欣;哈小琴;
抑郁症是世界范围内常见的精神疾病,心理及药物治疗是抑郁症的常用治疗方法,但治疗后期大部分抑郁症患者对治疗产生抗性,目前迫切需要一种新型抗抑郁治疗方式来改善这一现状。近年来,随着干细胞在疾病建模及细胞治疗方面的应用,神经干细胞(neural stem cell,NSC)及诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,i PSC)模拟人体神经系统的技术也越来越成熟,对抑郁症的发病机制、病理生理学及抗抑郁药物的作用机制也得到了更深的了解。本文就抑郁症的发病机制、NSC及i PSC构建抑郁症模型和细胞治疗策略作一综述,为抗抑郁治疗提供新的认知。
2020年12期 v.33 1450-1453+1459页 [查看摘要][在线阅读][下载 190K] [下载次数：996 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张逸驰;李媛媛;
杆状病毒是节肢动物特异的DNA病毒,具有双链环状结构,基因排列紧凑,最初因为其高度的特异性,在病虫害防治方面起到了重要作用。1983年人类首次构建杆状病毒载体并成功表达了β-干扰素蛋白,此后,杆状病毒表达载体(baculovirus expression vector,BEV)系统在生产重组病毒、表达重组蛋白、提高重组蛋白稳定性、产量及翻译后修饰等方面不断优化,昆虫细胞-BEV系统成为四大常用表达系统之一。本文主要介绍BEV系统优化最新方法和关键要素。
2020年12期 v.33 1454-1459页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K] [下载次数：2236 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：27 ] |[阅读次数：0 ] - 赵靖;潘祝平;
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种严重的慢性全身性自身免疫性炎症疾病,致残率高,给患者及家属带来巨大的经济负担。已有的RA治疗药物随着临床应用范围的扩大,其不良反应如感染和癌症发生率增加等也逐渐暴露;而且部分患者对已有治疗药物无响应或不能持续响应。因此,RA治疗药物的开发一直是自身免疫疾病相关药物研究中的难点之一。本文主要针对治疗RA靶向细胞因子和免疫细胞的生物制剂、创新疗法的作用机制及研究进展作一综述,旨在为今后RA的治疗和药物研发提供思路。
2020年12期 v.33 1460-1465页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K] [下载次数：1169 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：23 ] |[阅读次数：0 ]