- 刁静静;迟治平;孙迪;陈洪生;张丽萍;左锋;
目的探讨绿豆肽对RAW264. 7巨噬细胞的免疫调节作用。方法在体外培养的RAW264. 7巨噬细胞中,分别加入10、100、200和400μg/mL的绿豆肽,检测RAW264. 7巨噬细胞的增殖能力、吞噬能力、SOD酶活力、NO含量和细胞因子分泌量,同时检测绿豆肽对经脂多糖(lipo-polysaccharide,LPS)诱导的RAW264. 7巨噬细胞中细胞因子分泌和LC3、p62蛋白表达水平的影响。结果与空白对照组比较,不同浓度绿豆肽组RAW264. 7巨噬细胞的增殖率及吞噬率显著提高(P <0. 05),400和200μg/mL组的SOD酶活力、NO含量及分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著升高(P <0. 05)。各浓度绿豆肽均可显著抑制LPS诱导RAW264. 7巨噬细胞的TNF-α、IL-1β和IL-6分泌量(P <0. 05),浓度为400μg/mL时,上述细胞因子的分泌量与空白对照组差异无统计学意义(P> 0. 05)。不同浓度绿豆肽均可降低LPS诱导RAW264. 7巨噬细胞胞内LC3的含量,上调p62蛋白的表达量。结论绿豆肽可激活巨噬细胞、增加自身代谢酶活力、释放细胞因子,通过抗炎作用及抑制细胞自噬,从而提高宿主细胞的免疫功能。
2019年09期 v.32 950-957页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K] [下载次数：640 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 林垚;洪珊;蓝青萍;孙强明;
目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)在东南亚地区的感染传播情况,探讨其分子水平上的进化特征。方法用关键词和主题词检索ZIKV在东南亚地区暴发感染流行情况。在GenBank中获取ZIKV东南亚病毒株全基因序列,采用BIOEDIT软件进行比对;利用MEGA 7. 0软件绘制系统进化树;将结构蛋白核苷酸翻译获得其相应的氨基酸序列,分析突变情况;统计不同株型间结构蛋白核苷酸突变和氨基酸替代位点;预测包膜蛋白第三结构域(envelop domainⅢ,ED-Ⅲ)的二级结构。结果 ZIKV在东南亚国家均有血清学感染或回顾性检测阳性报道,其中越南、泰国和新加坡ZIKV感染病例较多,疾病负担较为严重。系统进化树表明,东南亚ZIKV株均属于亚洲型,2016年新加坡株(序列号:KY241788)与2015年巴西株亲缘关系最近,1966年分离的马来西亚株与其他东南亚株亲缘关系较远。东南亚ZIKV各株型间衣壳蛋白(capsid protein,C)的碱基突变点为22处,突变率为6. 36%,造成非同义氨基酸突变点为19处,突变率为16. 52%。前膜蛋白(pre-membrane protein,prM)的碱基突变点为51处,突变率为10. 12%,造成非同义氨基酸突变点为37处,突变率为22. 02%。包膜蛋白(envelope protein,E)的碱基突变点为141处,突变率为9. 33%,造成非同义氨基酸突变点为101处,突变率为20. 04%。ED-Ⅲ二级结构预测结果显示,在该区域2株代表株有相同数量的蛋白结合位点,代表株2(1966 Malaysia KX377336)存在1个蛋白结合位点富集区(ED-Ⅲ:55-63),而代表株1(2014 Thailand KU681081)蛋白结合位点分布较均匀,代表株2的ED-Ⅲ存在1个二硫键,而代表株1不存在,代表株1(ED-Ⅲ:79-80)存在1个解螺旋,而代表株2不存在。结论通过病例统计分析、系统发育分析、蛋白质核苷酸及氨基酸序列比较分析、ED-Ⅲ二级结构预测,为研究东南亚地区ZIKV不同株型间的生物学和流行致病性差异提供参考。
2019年09期 v.32 958-964页 [查看摘要][在线阅读][下载 775K] [下载次数：243 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 何金英;朱素芳;莎如拉;孙文芳;马玉珍;
目的研究乳酸杆菌对子宫内膜上皮细胞增殖的影响。方法以内蒙古地区68名健康生育期女性人群作为研究对象,取阴道分泌物,经条件培养基分离纯化乳酸杆菌,通过染色、酶触反应、产H2O2等试验确定其生物学性质,通过16sRNA基因扩增及测序对乳酸杆菌进行分类。将不同浓度(10、102、103和104个/mL)优势乳酸杆菌与子宫内膜上皮细胞共培养12、24、36和48 h,采用CCK-8法检测乳酸杆菌对子宫内膜上皮细胞增殖作用的影响,以确定乳酸杆菌对子宫内膜上皮细胞作用的最适浓度和时间。结果经过分离纯化得到141株乳酸杆菌,草酸铵结晶紫染色呈紫色,为革兰阳性菌,所有菌落均能产生H2O2,但产H2O2能力有差别。经16sRNA基因扩增及测序共分为6种乳酸杆菌,其中卷曲乳杆菌(L. crispatus)、格氏乳杆菌(L. asseri)和阴道乳杆菌(L. vaginalis)为内蒙古女性人群阴道中优势乳酸杆菌菌属,分别占54. 61%、24. 82%和12. 06%;不同浓度L. crispatus均能促进子宫内膜上皮细胞增殖,且乳酸杆菌浓度103个/mL、作用36 h时,子宫内膜上皮细胞增殖最显著,增殖率可达93. 10%。结论乳酸杆菌可促进子宫内膜上皮细胞的增殖,为乳酸杆菌促进子宫内膜局部的损伤修复提供了理论依据。
2019年09期 v.32 965-969页 [查看摘要][在线阅读][下载 363K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张宇辰;周瑞进;袁建彬;李文杰;臧树成;王立鹏;朗立敏;陈妍;杨焕民;
目的分析籽鹅头顶部的表型性状-羽束性状(crest trait),并预测SOX5候选基因的相关生物学功能,从而进一步揭示禽类表型性状与调控基因的作用机制。方法选取无羽束公鹅6只,有、无羽束母鹅各15只,建立两个资源群体,有羽束群(crest population,C):3只无羽束公鹅,15只有羽束母鹅;无羽束群(non-crest population,NC):3只无羽束公鹅,15只无羽束母鹅。两个试验群体同舍分组饲养,收集试验蛋孵化,通过后代表型分离比,分析羽束性状遗传规律。采集1、14、21日龄肝脏、头顶部皮肤组织,采用qRT-PCR方法测定各组织中SOX5基因相对表达量,并通过生物信息方法进行关联性分析。结果观察籽鹅表型分离比,证明无羽束性状符合隐性遗传规律,有羽束性状受常染色体显性基因调控。在1日龄雏鹅肝脏组织中,C群SOX5基因的相对表达量显著高于NC群(P <0. 01),其他时期差异虽无统计学意义(P> 0. 05),但C群仍高于NC群。随日龄增长,公鹅体重呈上升趋势,且与SOX5基因在皮肤中相对表达量变化趋势相同。经SMART、David软件预测,SOX5基因具有保守结构域,能形成具有生物学功能蛋白。结论籽鹅羽束性状类似于鸡冠表型遗传方式,受常染色体基因调控,SOX5基因为羽束性状的调控基因,且广泛参与禽类相关组织的发育过程。
2019年09期 v.32 970-976页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K] [下载次数：92 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 叶凯霞;朱华琛;赵庆新;陈洪生;
目的原核表达枯草芽孢杆菌Expansin蛋白,并分析其促进多糖糖化的活性。方法以过夜培养的Bacillus subtilis subsp. Subtilis subtilis str. 168基因组为模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin,构建重组质粒6his-expansin-6his-p ET28a(+)[heh-pET28a(+)],转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白6His-Expansin-6His(HEH);并对表达条件进行优化。产物经Ni-NTA纯化,检测其与多糖降解酶(polysaccharide degrading enzyme,PDE)(纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶)及多糖复合酶(polysaccharide complex enzyme,PCE)制剂的协同活性(synergistic activity,SA)。结果经双酶切鉴定,重组质粒heh-p ET28a(+)构建正确;融合蛋白HEH在0. 05 mmol/L IPTG 30℃诱导30 h的最适表达条件下,表达量约为1. 2 mg/m L,其相对分子质量为26 400,目的蛋白纯度达95%;该蛋白与纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶的SA分别为171. 53%、61. 95%、230. 00%,与PCE降解滤纸(filter paper)、秸秆(rice straw)的SA分别为312. 83%、356. 59%。结论重组的融合蛋白HEH与PDE均具有较高的协同作用,为Expansin在生物质木质纤维素糖化领域的应用奠定了基础。
2019年09期 v.32 977-982页 [查看摘要][在线阅读][下载 295K] [下载次数：331 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘昊;赵自冰;王新;
目的探讨黄芩苷对大肠埃希菌的抗菌活性及具可能的作用机制。方法在检测黄芩苷对大肠埃希菌最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及抑菌活力的基础上,进一步检测1倍MIC的黄芩苷对大肠埃希菌胞外乳酸脱氢酶活力、前向散射光及DNA含量的影响。结果黄芩苷对大肠埃希菌的MIC为7 mg/mL,干预2 h时即可达到抑菌活性高峰。1倍MIC的黄芩苷作用大肠埃希菌后,菌液中乳酸脱氢酶活力逐渐上升,8 h时抑菌活力高达(201. 48±19. 06)U/L。1倍MIC的黄芩苷作用大肠埃希菌2 h后,细胞体积缩小、DNA含量减少,与对照组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论黄芩苷通过对大肠埃希菌细胞膜造成损伤而增加其通透性,使菌体物质大量外渗,从而实现其抗菌活性。
2019年09期 v.32 983-986页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K] [下载次数：1076 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：57 ] |[阅读次数：0 ]
- 孙彬裕;孙楠;胡泽斌;于婷;黄杰;曲守方;
目的研制抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品。方法将抗D(IgM)杂交瘤细胞培养上清液经0. 22μm滤膜无菌过滤分装,冻干制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品(简称参考品)。按YY/T 1238-2014《RhD(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)》行业标准,检测其外观、pH、特异性、亲和力及效价;并由4家实验室进行协作标定,进行瓶间精密度及热稳定性试验。结果参考品外观为白色冻干粉末,复溶后为无色或淡黄色透明液体,无摇不散的沉淀及异物;pH为7. 2;效价为1∶64;与RhD阳性红细胞有凝集反应,与RhD阴性红细胞无凝集反应;凝集时间均在15 s以内,3 min凝集块均大于1 mm2。经各实验室协作标定,随机抽取的2支参考品效价均为1∶64;37℃放置3、7、14 d的效价均为1∶64。结论成功制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品,其瓶间精密度及稳定性均较好,可用于抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)效价检测的质量控制。
2019年09期 v.32 993-995+1005页 [查看摘要][在线阅读][下载 163K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 吴尚;黄慧;余华军;庞启明;卢鑫剑;张海涛;
目的在大肠埃希菌中表达重组鲎血G因子,并检测其酶活性。方法根据大肠埃希菌偏好性优化G因子成熟肽编码序列,将G因子α亚基及β亚基克隆至原核表达载体pET32a-sumo上,分别构建pET32a-sumo/factorG-α及pET32a-sumo/factorG-β原核表达质粒,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达;产物经Ni-NTA亲和层析,SUMO蛋白酶切割融合伴侣,获得重组目的蛋白factorG-α及factorG-β;将二者等摩尔质量重组获得复合物G,荧光底物Boc-Glu-(OBzl)-Gly-Arg-MCA检测其酶活性。结果经PCR及测序鉴定,重组质粒pET32a-sumo/factorG-α及p ET32a-sumo/factorG-β构建正确;表达蛋白均以包涵体的形式存在沉淀中,表达量占菌体总蛋白的30%及45%;纯化的factorG-α及factorG-β蛋白相对分子质量约为74 000和31 000,每1 L LB培养基酶切回收蛋白分别为0. 7和1. 7 mg。factorG-α及factorG-β蛋白与荧光底物几乎不反应,而复合物G可与荧光底物反应产生较高的荧光强度。结论成功表达了具有酶活性的鲎血G因子,为进一步探讨鲎血G因子的生物学功能及新型真菌感染检测试剂盒开发奠定了基础。
2019年09期 v.32 996-1000页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K] [下载次数：229 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 周凤岩;凤淳雅;郭世杰;陶娜;
目的运用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术,分析吉林地区2014～2018年食源性疾病患者粪便样本中分离的肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)的同源性及分子流行病学特征,为鉴定溯源及防控预警提供数据支持。方法对吉林地区2014～2018年食源性疾病患者1 000份粪便样本中分离的肠炎沙门菌进行鉴定,确定血清型及PFGE分子分型,采用Bio Numerics version 6. 6软件对PFGE图谱进行数据分析,绘制聚类树状图。结果分离出符合O(1,9,12):H(g,m)的肠炎沙门菌51株,检出率为5. 1%;经聚类分析,带型相似度为51. 3%～100%,共获得12种带型,其中,PS3与PS4型菌株带型相似度为93. 7%,为近年主要流行菌株,且菌株同源性较高。结论吉林地区肠炎沙门菌PFGE型别具有多样性和复杂性,具有优势克隆系。
2019年09期 v.32 1001-1005页 [查看摘要][在线阅读][下载 429K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘欣玉;鲁旭;赵丹华;徐宏山;李玉华;
目的评价乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗SA14-14-2免疫人体后对中国流行的两种主要基因型(Ⅰ型和Ⅲ型)的免疫效果。方法收集乙脑减毒活疫苗免疫的健康儿童免疫前及免疫后28 d采集的血清样品,采用蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测血清中对中国流行的两种基因型乙脑病毒的中和抗体,并计算血清中和抗体阳转率。结果疫苗免疫后对国内流行的基因Ⅰ型和Ⅲ型乙脑病毒均产生了较高水平的中和抗体,血清中和抗体阳转率分别为90. 0%和92. 0%,几何平均滴度(GMT)分别为1︰26. 2和1︰27. 5,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论乙脑减毒活疫苗免疫人体后,对中国流行的2种基因型乙脑病毒均具有较好的免疫效果。
2019年09期 v.32 1006-1009页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K] [下载次数：292 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ]
- 许美凤;毛琦琦;赵丹;陈苏京;李亚南;李茂光;叶强;
目的建立测定b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖绝对含量的定量~1H核磁共振法(nuclear magnetic resonance,NMR,即~1H-NMR法),并进行验证。方法精密称取Hib荚膜多糖粉末,重水溶解,配制一定浓度的供试品多糖溶液;采用Bruker Avance-600型超导核磁共振波谱仪,设置NMR实验参数条件,以重水为溶剂,二甲基砜为内标物建立定量~1H-NMR法进行多糖含量测定;对该方法进行专属性、准确度、线性、精密度及耐用性验证;应用建立的定量~1H-NMR法及化学法测定5批Hib荚膜多糖含量。结果经~1H-NMR谱、~(13)C-NMR谱、~1H-~1H COSY谱及~1H-13C HSQC谱归属显示,Hib荚膜多糖的定量峰(δ_(H)5. 06)及内标物二甲基砜的定量峰(δ_(H)3. 14)分离良好,互不干扰,且不受样品内其他谱峰的干扰,方法专属性良好;供试品溶液加入100、150及200μL国际标准品,加标回收率在101%～102%;Hib多糖质量浓度在1～20 mg/mL范围,线性方程为y=0. 234 3 x-0. 002 6(R~2=1. 000 0);供试品溶液6次重复性及中间精密度测定的定量峰积分面积比值的RSD分别为0. 78%及0. 60%,精密度良好;5 mg/mL的供试品溶液在不同脉冲角度及不同延迟时间定量峰积分面积比的RSD分别为0. 07%及0. 13%,耐用性良好。5批荚膜多糖经定量~1H-NMR法及化学法检测,核糖含量均在《中国药典》三部(2015版)规定合格范围内(320～410 mg/g)。结论成功建立了测定Hib荚膜多糖含量的定量~1H-NMR法,该方法具有良好的专属性、准确度、线性、精密度及耐用性,为Hib疫苗的质量控制研究奠定了基础。
2019年09期 v.32 1010-1014+1019页 [查看摘要][在线阅读][下载 294K] [下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 赵慧;潘晖榕;李娟;林之杰;林碧珍;李长贵;
目的建立人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)特异性抗体单一稀释度ELISA检测法,并进行方法验证及初步应用。方法以HPV16及HPV18 L1病毒样颗粒蛋白作为包被抗原,血清样品采用单一稀释度稀释(未免疫血清及免疫后血清分别进行100及500倍稀释),建立HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,并验证方法的特异性、准确性、线性范围、检测限度及精密性。采用建立的方法检测自然感染HPV及接种疫苗后的血清样本(各28份),并与假病毒中和试验(pseudovirus-based neutralization assay,PBNA)检测结果进行比较。结果 100份阴性血清样本HPV16及HPV18 IgG抗体均为阴性;HPV16及HPV18抗体滴度的平均回收率分别为74%和73%;HPV16及HPV18抗体的定量检测范围分别为0. 049～0. 370 IU/mL及0. 030～0. 231 IU/mL;该方法重复性CV在2. 9%～6. 6%之间,日间精密性CV在7. 7%～11. 9%之间。接种疫苗后的血清样本检测值显著高于自然感染样本(P <0. 05),接种疫苗后的血清样本检测值与PBNA法检测结果具有显著相关性(HPV16和HPV18抗体检测结果的r值分别为0. 727和0. 800)。结论成功建立了HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,且具有较好的特异性、准确性、精密性,可用于HPV疫苗免疫效果评价及疫苗上市后抗体水平的监测。
2019年09期 v.32 1015-1019页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K] [下载次数：372 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 田九博;张丽娜;王萱;马培元;穆秀丽;孟涛涛;孟凡秀;弓韬;于保锋;
目的探索应用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测纳米级聚合物胶束(polymeric micelles,PMs)表面偶联抗体效率的方法。方法将DMPE-PEG-Maleimide、DPPE-PEG-Maleimide、DSPE-PEG-Maleimide、DOPE-PEG-Malei-mide、DLPE-PEG-Maleimide聚合物纳米胶束分别与Anti-GOLPH2抗体共同孵育,使其彼此偶联;再与SNU-423细胞共同孵育,采用FCM检测SNU-423细胞膜表面GOLPH2抗原的阳性表达率,并比较各类聚合物纳米胶束与AntiGOLPH2抗体的相对偶联效率。结果 SNU-423细胞表面GOLPH2抗原的阳性表达率为1.23%;在各类聚合物纳米胶束中,DLPE-PEG-Maleimide与Anti-GOLPH2抗体的相对偶联效率最高,且与抗体浓度呈正相关。结论应用FCM检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率的方法,能在一定程度上反映抗体与聚合物纳米胶束的抗体偶联情况,其检测结果具有一定的参考价值。
2019年09期 v.32 1020-1024页 [查看摘要][在线阅读][下载 311K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李响;史新昌;于雷;周勇;饶春明;
目的全柱成像毛细管等电聚焦电泳(whole column imaging detection-capillary isoelectric focusing electrophoresis,WCID-CIEF)及毛细管区带电泳法(capillary zone electrophoresis,CZE)检测分析重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)异构体含量。方法 5批rhEPO原液同时经WCID-CIEF法(采用4 mol/L尿素,0. 35%甲基纤维素,4%两性电解质混合溶液作为样品缓冲液,聚焦电压为3 k V,预聚焦时间1 min,聚焦时间7 min,成像波长280 nm)及CZE法(采用0. 01 mol/L NaCl、tricine、NaAC和7 mol/L Urea及2. 5 mmol/L腐胺混合溶液作为电泳缓冲液,pH 5. 55,进样压力3. 45 kPa,进样时间10 s,分离电压15. 4 kV,分离时间80 min,检测波长214 nm)检测分析异构体含量。结果 WCID-CIEF及CZE法测定5批rhEPO原液均有5～8条异构体条带,异构体含量差异无统计学意义(P> 0. 05),具有明显的相关性(r为0. 999),各峰面积占比相差总和小于3%。结论虽然WCIDCIEF谱图及CZE谱图的含义略有不同,但两种毛细管电泳方法的分析结果基本相同,均可满足rhEPO异构体的质量控质需求。
2019年09期 v.32 1025-1029页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K] [下载次数：346 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 刘春雨;张峰;于传飞;武刚;崔永霏;黄璟;王兰;
目的建立病毒灭活/去除工艺对抗CD20单克隆抗体生物学活性影响的评价方法。方法以Raji细胞株作为靶细胞,通过补体依赖性细胞毒(complement dependent cytotoxicity,CDC)作用,用CCK-8试剂进行抗CD20单克隆抗体的生物学活性检测,并验证系统适应性。以抗CD20单克隆抗体参比品计算低pH及纳米膜过滤(简称纳滤)2种病毒灭活/去除工艺前后样品的相对百分效价,并对检测结果进行统计学分析。结果抗CD20单克隆抗体CDC生物学活性存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D。该方法的曲线平行性较好,且有良好的稳定性和有效性。低pH病毒灭活工艺处理前后样品的相对效价分别为(97. 22±2. 49)%和(87. 84±5. 60)%,相对变化值的平均平方值为10. 57%;纳滤病毒去除工艺处理前后样品的相对效价分别为(87. 65±4. 31)%和(89. 43±7. 33)%,相对变化值的平均平方值为4. 17%。2种工艺3次检测间差异的单因素方差分析及处理前后配对t检验差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论以抗CD20单克隆抗体为目标抗体,建立了病毒灭活/去除工艺对生物学活性影响的评价方法,该方法具有良好的平行性、稳定性及有效性,为其他单克隆抗体类治疗药物的质量控制提供了实验依据。
2019年09期 v.32 1030-1035页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K] [下载次数：319 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张学成;马小伟;安文琪;梁雪爽;罗坚;王承勖;吴静娟;李光飞;
目的分析在低温乙醇蛋白分离法基础上引入阴离子交换层析(anion exchange chromatography,AEX)纯化工艺处理,对静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量的影响。方法检测并对比分析低温乙醇蛋白分离法及联合AEX纯化工艺制备的静注人免疫球蛋白(pH 4)制品分子量大小分布、抗补体活性(anticomplement activity,ACA)、抗-HBs效价、白喉抗体效价、IgA含量、抗体Fc段生物学活性、IgG亚型分布、N-糖基化类型、蛋白质二级结构和三级结构的异同。结果在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺处理,可大幅度降低静注人免疫球蛋白(pH 4)制品中IgA含量;有利于去除制品中三级结构发生改变的蛋白质;未对制品其他质量指标产生显著影响。结论在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺可提高静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量。
2019年09期 v.32 1036-1042页 [查看摘要][在线阅读][下载 327K] [下载次数：456 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 石刚;李红;郭丽娜;卢旭;毛琦琦;陈晓航;王欣茹;陈翠萍;叶强;
目的建立09CS中11个血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)肺炎球菌(pneumococcus,Pn)荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围。方法将细胞壁C多糖(CPS)分别与Pn22F、Pn25两个型别多糖混合,制备CPS+Pn22F和CPS+Pn25两种样品吸收液,稀释09CS后,ELISA法检测13价肺炎链球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,13PCV)的13个血清型IgG抗体水平,验证两种吸收液检测结果的一致性。将09CS作为待测血清(用CPS+Pn25稀释),第二代国际肺炎参考血清007sp为标准血清(用CPS+Pn25稀释),第一代国际参考血清89SF为质控血清(用仅含CPS的吸收液稀释),采用ELISA法连续检测待测血清52次,计算11个血清型抗体浓度平均值(GMC)、标准偏差(SD)和变异系数(CV)、U检验中99%置信区间下的正态分布范围。结果 09CS经两种吸收液吸收后,13个型别的检测结果一致性较好,r2=0. 983 5,且差异无统计学意义(P> 0. 05)。11个血清型有效定值异常率均低于20%,异常率最大的型别为Pn20,异常率为17. 3%;各型的CV为7. 55%～12. 86%,均低于15%;Pn2、Pn8、Pn9N、Pn10A、Pn11A、Pn12F、Pn15B、Pn17F、Pn20、Pn22F、Pn33F血清型荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围分别为18. 56～31. 45、13. 35～26. 61、11. 90～23. 63、14. 23～25. 74、5. 96～8. 84、3. 70～6. 47、23. 89～37. 50、10. 68～16. 90、15. 97～24. 31、10. 63～17. 61、24. 24～47. 55μg/mL。结论建立了09CS中11个血清型Pn荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围,可应用于Pn疫苗临床血清荚膜多糖抗体IgG含量的ELISA法检测。
2019年09期 v.32 1043-1047页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K] [下载次数：178 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ]