2019年08期目次

疫苗研究

以霍乱毒素B亚单位为载体的甲型副伤寒多糖结合疫苗理化及生物学特性
胡玥;梁昊宇;周富昌;李颖茵;董思国;曾明;王斌;
目的制备甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特异多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)结合疫苗,并初步探讨其理化及生物学特性。方法 SPA OSP多糖原液(简称OSP多糖)经溴化氰活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亚胺(EDAC)作用下与CTB偶联,结合物经Sepharose4FF柱纯化,获得多糖-蛋白结合物,对其理化指标、血清特异性、免疫原性及血清体外杀菌力进行检测。结果制备的SPA OSP-CTB结合物(简称OSP-CTB结合物)衍化度为(2. 63±0. 13)%、多糖回收率为(74±0. 2)%;鉴别试验显示OSP-CTB结合物与SPA O诊断血清、CTB抗体均有阳性沉淀线产生;免疫小鼠血清中OSP-CTB结合物抗体滴度显著增长,阳转率达100%,血清体外杀菌抗体滴度为1∶64。结论用溴化氰活化多糖制备的SPA OSP-CTB结合物具有良好免疫原性,可进一步进行疫苗研发。
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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)渗透压摩尔浓度的质量分析
王微;段男;向春梅;杨欢;黄翟;罗正辉;赵蕊蕊;
目的分析Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)渗透压的摩尔浓度。方法选取本所2016～2018年1季度生产的92批次Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)[inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strains(Vero cells),sIPV],采用渗透压摩尔浓度测定仪检测其渗透压摩尔浓度,并对检测数据进行正态性检验。结果 2016～2018年生产的92批sIPV渗透压摩尔浓度数据符合正态分布(P> 0. 05),渗透压摩尔浓度均值为330. 38 mOsmol/kg,标准差为9. 38 mOsmol/kg。生产初期(2016年)与现阶段(2017～2018年)生产的sIPV渗透压摩尔浓度差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 sIPV渗透压摩尔浓度变化趋于稳定状态,本研究为该产品渗透压摩尔浓度限度标准的制定提供了实验依据。
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水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)在食蟹猴体内的长期毒性试验
郝新峰;张兴;宋俐霏;干玲玲;栾春芳;何玉君;田蕾;孟凡红;尹卫东;黄金凤;曹瑾;
目的评价水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)在食蟹猴体内的长期毒性。方法将50只食蟹猴随机分为5组,分别为阴性对照组(0. 9%氯化钠,2. 5 mL/只)、细胞基质对照组(SV-1细胞基质,5剂/只)、市售疫苗对照组(5剂/只)、供试品低剂量组(1剂/只)和高剂量组(5剂/只),每组10只,雌雄各半。经动物单侧或双侧后肢皮下注射,每点注射量不超过2 mL,每3周给药1次,共3次。观察动物临床表征,并进行体重、体温、心电、血细胞计数、凝血功能、血液生化、尿液、眼科、免疫指标、大体解剖、主要脏器称重、组织病理学等检查。结果各组动物临床表征、体重、体温、心电图参数、眼科检查、血液学、凝血功能、血液生化、尿液分析、T淋巴细胞亚群、细胞因子和PBMCs分泌IFNγ的淋巴细胞斑点数等指标均未见具有毒理学意义的规律性改变。ELISA法测定血清水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)特异性IgG抗体结果表明,给药后市售疫苗对照组、供试品低剂量组和高剂量组所有动物均可检测到抗体,最高抗体滴度为1∶800,该结果与荧光抗体膜抗原(fluorescent antibody to membrance antigen,FAMA)法检测结果具有可比性。各组动物脏器重量和脏器系数均未见与给药相关改变,组织病理学检查均未见与给药相关的系统毒性病理改变。结论水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)在食蟹猴体内未见与其相关的全身毒性反应,安全剂量为5剂/只。
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基础研究

促黄体激素释放激素-TAT-p53融合蛋白制备及其对肿瘤细胞增殖作用的影响
马洪圆;田园;李泽鸿;张国利;吴广谋;余晓颖;陈云雨;岳玉环;
目的制备促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探讨其抗肿瘤作用。方法以重组质粒pET28a-p53为模板,经PCR扩增目的基因,双酶切,克隆至原核表达载体p ET20b中,构建重组表达质粒p ET20b-LHRH-TAT-p53,并在E. coli中IPTG诱导表达,经金属螯合层析、DEAE弱阴离子交换层析纯化目的蛋白。取对数生长期的HeLa、BGC及MDCK细胞进行细胞活性试验,检测pET28a-p53蛋白活性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET20b-LHRH-TAT-p53构建正确;融合蛋白相对分子质量约54 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白55%;HeLa及BGC细胞加入纯化复性的重组蛋白后,细胞变圆、色暗、折光性变差,甚至裂解死亡,细胞死亡数增加,而MDCK细胞无变化;一定浓度范围内(25～120μg/m L)蛋白对HeLa及BGC细胞有明显的抑制作用。结论成功制备了LHRH-TAT-p53融合蛋白,该蛋白具有生物活性,对肿瘤细胞有杀伤作用。本研究为下一步制备靶向LHRH的肿瘤治疗药物提供了参考。
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山羊地方性鼻内肿瘤病毒重庆株基因组序列分析
沈克飞;唐达;杨柳;徐登峰;许国洋;付利芝;张素辉;
目的分析山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus,ENTV)重庆株基因组序列。方法对临床病例进行剖检、病理学观察,提取组织总RNA,进行RT-PCR扩增,对获得的ENTV-2基因组序列进行测定及分析。结果鼻内肿瘤在鼻腔后端与鼻甲筛骨黏膜紧密相连,完全阻塞鼻腔,侵入鼻窦,呈灰红色、乳头状,表面覆盖大量透明黏液。肿瘤细胞以管状和乳头状结构排列。拼接出1条长度为7 243 nt的ENTV-2 CQ株基因组序列,约占ENTV-2基因组长度的96. 2%。该序列与四川ENTV-2的同源性,最高大于97%,与山羊内源性逆转录病毒(caprine endogenous retrovirus,CERV)gag(XM_018046415_CERV)的同源性高于98%,与陕西ENTV-2的同源性为91%～92%,与英国ENTV-2(AY197548)的同源性为88%。多序列比对显示,CQ株gag基因有2处多核苷酸插入,这一序列特征与XM_018046415_CERV的gag基因相同。除了AY197548_ENTV-2单独构成Ⅱ群外,ENTV-2在羊反转录病毒进化树中构成Ⅰ群;CQ株与四川ENTV-2构成一分支,与陕西ENTV-2构成另一分支。结论该病例为山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor,ENT),提示其病原可能是1株古老ENTV-2毒株,有遗传多样性。
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IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达
邓青;杨成园;王安彦;牛仕诗;郝跃鹏;寇俊婷;孙雪娇;王晓霞;
目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定。用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果。结果经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确。IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5. 780)%和(83±3. 851)%。IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 001),表达抑制率分别为(82±2. 424)%及(77±2. 791)%。结论成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础。
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冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化及其功能的预测分析
甄莉;臧树成;郭丽;计红;陈勇;杨焕民;
目的探讨冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化,并对其功能进行预测分析。方法将大鼠置(4±0. 05)℃冷暴露12 h,同时设对照组(24℃常温饲养),qRT-PCR法检测miR-383-5p在血清和肝脏中的表达水平。应用miRanda、TargetScan和miRDB 3种软件同时对miR-383-5p进行靶基因预测,并通过DAVID 6. 8软件对miR-383-5p肝脏靶基因进行GO和KEGG分析。qRT-PCR和Western blot法检测下调BRL-3A细胞中miR-383-5p表达对部分代谢相关靶基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果冷应激后小鼠血清及肝脏中的miR-383-5p相对表达量均显著下降(P <0. 05)。生物信息学方法预测出733个在大鼠肝脏表达的靶基因,GO富集分析结果显示这些靶基因主要与细胞氧化还原过程、增殖和凋亡相关,KEGG分析结果显示富集靶基因最多的信号通路是代谢通路。下调miR-383-5p表达使BRL-3A细胞中Mtor、Pfkfb1和Apbb3基因的mRNA的转录水平显著升高(P <0. 05),Pfkfb1蛋白的表达量显著升高(P <0. 05)。结论冷应激可降低大鼠肝脏中miR-383-5p的表达量,进而通过调节Pfkfb1等靶基因的表达参与细胞的代谢、增殖和凋亡。
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地高辛标记Nkx2.1基因RNA探针的制备及应用
张凯丽;孙雨晴;王宇飞;赵虹;郝宇卉;杨丽红;白云;刘志贞;
目的制备地高辛(digoxigenin,DIG)标记的Nkx2. 1基因RNA探针,用于小鼠胚胎早期神经管发育关键时期Nkx2. 1基因表达的检测。方法巢式PCR法扩增Nkx2. 1基因,将其克隆至pGEM-T载体;以其为模板,通过Nkx2. 1特异性引物,PCR扩增RNA探针转录模板;采用T7 RNA聚合酶,制备DIG标记的正义、反义Nkx2. 1 RNA原位杂交探针。经全胚胎原位杂交(whole-mount in situ hybridization,WM-ISH)技术分析胚胎8. 5、9. 5、10. 5 d小鼠体内Nkx2. 1基因的表达情况。结果制备的探针浓度为1 521. 986 ng/mL,纯度A260/280=2. 39。Nkx2. 1基因反义探针能高效检测到Nkx2. 1基因在胚胎8. 5、9. 5及10. 5 d小鼠神经系统中表达,正义探针未能检测到表达信号。结论成功制备了特异高效的DIG标记的Nkx2. 1基因RNA原位杂交探针,为进一步研究Nkx2. 1基因在小鼠胚胎组织中的表达,探索其在神经管发育中的作用机制奠定了基础。
2019年08期 v.32 870-873+879页 [查看摘要][在线阅读][下载 435K]
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奶牛microRNA-205靶基因及调控网络的精细预测分析
沈冰蕾;韩硕;刘娟;邹紫雯;李鑫丽;罗林;武瑞;赵志辉;
目的预测奶牛microRNA-205(bta-miR-205)候选靶基因,对其进行生物信息学精细分析,构建候选靶基因参与的调控网络。方法应用miRBASE、Targetscan和miRWalk软件预测其候选靶基因,经Gene Ontology、Panther、STRING和DAVID软件进行功能注释、分类统计、蛋白质互作及KEGG通路注释和富集分析,通过Cytoscape软件绘制靶基因可能重点参与的调控网络。结果 miR-205基因成熟区序列高度保守,共筛选出288个bta-miR-205候选靶基因,其参与的主要生物进程是细胞过程、代谢过程和生物调控,主要参与形成细胞器等细胞组分,主要分子功能是结合、催化作用。MAPK3等多个候选靶基因存在基因共表达和蛋白互作关系,参与免疫系统、适应性免疫系统、基因表达(转录)、抗原加工等反应途径显著富集在鞘脂、甲状腺激素、PI3K-Akt等信号通路。结论 bta-miR-205的候选靶基因MAPK3等可能通过参与免疫系统、基因表达(转录)、抗原加工等反应途径及鞘脂、甲状腺激素、PI3K-Akt等信号通路,在奶牛炎症疾病抗性、生殖及发育过程调控中发挥重要作用。
2019年08期 v.32 874-879页 [查看摘要][在线阅读][下载 443K]
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治疗制剂

Aurora激酶抑制剂VX-680对食管癌细胞间黏附能力的影响
寇俊婷;贺春;杨成园;王安彦;牛仕诗;郭紫禅;张震;王晓霞;
目的探讨Aurora激酶抑制剂VX-680对食管癌KYSE150及EC9706细胞间黏附能力的影响。方法培养KYSE150及EC9706细胞至密度为50%时,选取不同浓度VX-680分别作用KYSE150(0. 5和1. 0μmol/L VX-680)和EC9706(0. 1和0. 2μmol/L VX-680)细胞48 h(实验组),未经VX-680处理的细胞为空白对照。采用细胞聚集及细胞分离试验分别检测两种细胞的黏附能力;采用Western blot法检测两种细胞上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平。结果细胞聚集及细胞分离试验结果显示,随VX-680浓度的增加,0. 5、1. 0、0. 1、0. 2μmol/L VX-680实验组团块均减少,体积变大致密,与空白对照组比较,各实验组团块数量差异均有统计学意义(P <0. 01);与空白对照组比较,各实验组的N_(TC)/N_(TE)值均显著降低,差异均有统计学意义(P <0. 01)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,各实验组E-cadherin蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P <0. 01)。结论 VX-680能增强食管癌细胞间的同质黏附能力,抑制食管癌细胞的恶性表型,为VX-680可能作为治疗食管癌的靶向药物提供了依据。
2019年08期 v.32 880-884+889页 [查看摘要][在线阅读][下载 446K]
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诊断制剂

梅毒螺旋体抗体快检试剂国家参考品的研制
夏德菊;王薇;许四宏;周海卫;张春涛;
目的建立梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)抗体快检试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对134批TP血浆的复核、确证,组建TP抗体快检试剂国家参考品,经多家实验室协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果 TP抗体快检试剂国家参考品由20份阴性、10份阳性、3份最低检出限及1份重复性样品组成。质量标准为20份阴性参考品中应至少18份为阴性,10份阳性参考品中应至少9份为阳性,最低检出限参考品中应至少1份为阳性,且稀释用血浆应为阴性,重复性参考品检测10次,应均为TP抗体阳性,其颜色反应应一致。参考品的均匀性及稳定性均符合国家参考品标准。结论研制的参考品可作为TP抗体快检试剂的质量控制及评价使用。
2019年08期 v.32 885-889页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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临床研究

过氧化物酶-4与胃癌发生发展的相关性
邵明洋;杨静;贾茹涵;李文慧;石大林;韩跃武;
目的分析过氧化物酶-4(peroxidase-4,Prx4)与胃癌发生发展的相关性。方法利用甲基硝基亚硝基胍(N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)诱导正常胃黏膜细胞GES-1构建癌变细胞模型,通过细胞形态、增殖率、迁移能力及集落形成能力的改变,确定MNNG最适浓度及最适诱变时间;经划痕试验、MTT法、集落形成试验、Western blot法和RT-PCR法进一步检测Prx4与胃黏膜上皮细胞恶性转化过程及转化细胞发展过程的相关性。结果MNNG最适浓度为8×10~(-5) mol/L,最适诱变时间为16 h。细胞恶性转化过程中呈现出细胞相对增殖率、迁移能力、集落形成能力整体升高的趋势;Prx4蛋白表达水平在0～16 h逐渐升高,16～24 h有所下降,而此时Prx4基因mRNA转录水平明显升高。转化细胞发展过程中呈现出细胞相对增殖率、迁移能力、集落形成能力整体逐渐升高的趋势;随着培养时间的增加,Prx4蛋白表达水平逐渐降低,Prx4基因m RNA转录水平无明显变化;但培养24 h时,恶性转化细胞mRNA基因转录水平显著高于正常胃黏膜细胞和胃腺癌细胞(P <0. 01)。结论正常胃黏膜细胞GES-1诱变16 h时已基本发生转化。细胞水平上,Prx4在转化过程中高表达,因此,Prx4主要参与并促进细胞转化过程。
2019年08期 v.32 890-898+903页 [查看摘要][在线阅读][下载 980K]
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技术方法

流感减毒活疫苗诱发黏膜IgA抗体间接ELISA检测方法的优化及其实验室内控品的制备
赵慧;周慧明;赵雪;袁若森;李娟;姜春来;李长贵;
目的优化流感减毒活疫苗诱发黏膜IgA抗体的ELISA检测方法,并制备IgA抗体实验室内控品。方法采用ELISA检测法对流感病毒抗原(全病毒及其相应HA抗原)及包被浓度(0. 5、1、2、4μg/mL)、封闭液(1%BSA、10%FBS、5%脱脂奶粉)及封闭时间(1、1. 5、2 h)、样本稀释液(含1%BSA的PBST、含2%脱脂奶粉的PBST、样本保存液)及样本作用时间(45、60、75 min)、酶标抗体稀释度(1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000)进行优化。采用优化的方法制备针对H1N1、H3N2和B型3个型别流感病毒的IgA抗体检测用实验内控品,并用该方法对接种三价流感减毒活疫苗的20名志愿者的鼻咽拭子样本进行检测。结果最适间接ELISA法检测条件为:以全病毒作为包被抗原,包被浓度为1μg/mL;以含1%牛血清白蛋白为封闭液封闭2 h;样本稀释液为2%脱脂奶粉的PBST,作用时间为60 min;酶标抗体稀释度为1∶1 000。采用优化方法制备的H1N1、H3N2、B型IgA抗体阳性实验室内控品几何平均滴度分别为23、45、35,可接受范围分别为16～32、32～64、32～64。接种疫苗后20名志愿者中3种型别IgA抗体滴度较接种前均显著增高(P <0. 001),40%～50%志愿者接种后IgA抗体滴度比接种前至少升高2倍。结论成功优化了流感减毒活疫苗诱发黏膜IgA抗体的ELISA检测方法,制备的IgA抗体的实验室内控品可用于流感减毒活疫苗接种后鼻咽拭子抗体的检测。
2019年08期 v.32 899-903页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K]
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胰高血糖素样肽-1融合蛋白生物学活性检测方法的建立及验证
罗志英;马晓楠;郭小瑞;马宁宁;
目的建立胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白(GLP1-Fc)生物学活性荧光素酶报告基因测定方法,并进行验证。方法采用电穿孔法将GLP-1受体(GLP-1R)表达载体和cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)报告基因共转染入HEK-293细胞中,通过加入潮霉素B筛选和单克隆培养,获得稳定转染的单克隆细胞株;采用药物敏感的细胞株建立报告基因生物学活性测定方法,并对方法进行优化及验证。结果筛选出GLP-1-Fc活性检测细胞株293-GLP-1R/CRE,该细胞较合适的活性检测参数为每孔接种20 000个细胞,培养10～15 h,利拉鲁肽的起始浓度为10 mg/L,作用时间5 h。采用建立的方法检测不同效价利拉鲁肽样品相对生物学活性的回收率在(90. 43±3. 29)%～(99. 87±5. 34)%之间,利拉鲁肽(标准品)与样品6次测定的EC50的CV值分别为2%和3%,二者无差异。结论建立了快速、精确的测定GLP1-Fc生物学活性的方法,为GLP-1相关的药效指标评价提供了更加客观、全面的手段。
2019年08期 v.32 904-908+914页 [查看摘要][在线阅读][下载 292K]
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螨变应原制品中苯酚含量测定通用方法的验证
张影;鲁旭;梁昊宇;胡玥;幺山山;曾明;王斌;
目的筛选一种简便、易行的苯酚含量测定方法,作为螨变应原制品中苯酚含量测定的通用方法。方法建立比色法测定苯酚含量的标准曲线,并确定线性及测定范围;用比色法测定4种螨变应原制品中的苯酚含量,进行精密性和准确性验证;将比色法与企业标准规定方法测定结果进行比较。结果比色法6次检测结果显示,苯酚浓度在0～40μg/mL范围内与吸光度值呈良好的线性关系,R2均≥0. 999 8;比色法测定4种螨变应原制品苯酚含量,日内精密性相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)不超过2. 3%,日间精密性RSD不超过3. 5%;准确性验证回收率为98%～104%。比色法测定3家企业螨变应原制品苯酚含量,结果全部符合质量标准规定,且与各自企业标准中规定方法的测定结果一致,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论利用比色法测定螨变应原制品中苯酚含量,重复性好,准确度高,操作简便,可用作该制品苯酚含量测定的通用方法。
2019年08期 v.32 909-914页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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肺炎链球菌免疫小鼠程序的优化及杂交瘤细胞株的建立
吴元元;沈荣;李雄雄;应莲芳;周晖国;徐世友;张生琰;
目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖(C polysaccharides,CPs)杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[(0. 5～2)×10~8个、(1～4)×108个、(2. 4～10)×10~8个)]、免疫间隔时间(3 d、1周、2周)、免疫途径(腹腔、腹股沟及尾静脉),同时确定抗原是否添加佐剂,间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平。采用优化程序免疫小鼠,取血清效价最高的小鼠脾细胞,经传统单克隆抗体制备技术建立肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,并检测细胞株的染色体数目及其分泌抗体的稳定性及特异性。结果确定小鼠最适免疫程序为:抗原量为(1～4)×108个,且需添加弗氏佐剂,免疫间隔时间为1周,免疫途径为腹股沟注射。最适程序免疫小鼠血清抗体效价达1∶12 000以上。建立了3株肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞,命名为A4、G8、H10株,染色体数目分别为98、102和102,分泌的抗体具有良好的稳定性和特异性。结论成功优化了肺炎链球菌小鼠的免疫程序,并建立了肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,为肺炎链球菌荚膜多糖中C-Ps含量检测方法的建立奠定了基础。
2019年08期 v.32 915-918+922页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K]
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两种低pH孵放法灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果比较
王剑锋;英志芳;徐康维;李长贵;
目的比较两种低pH孵放法对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)中脂包膜病毒的灭活效果。方法 IVIG中分别加入两种核酸类型的脂包膜病毒水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)及伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,以经典工艺(23～25℃灭活21 d)及新工艺[(37±0. 5)℃灭活9 h]低pH(pH为3. 8～4. 4)孵放法进行病毒灭活,分别检测不同灭活时间的病毒滴度,比较灭活效果。结果经典工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥5. 88 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 00 logTCID_(50)/0. 1 mL,且灭活的样品在敏感细胞盲传3代无细胞病变。新工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥4. 62 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 12 logTCID_(50)/0. 1 mL。结论两种低p H孵放法对指示病毒的灭活能力均符合国家标准,但经典工艺对两种指示病毒的灭活效果好且灭活彻底。
2019年08期 v.32 919-922页 [查看摘要][在线阅读][下载 181K]
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综述

破伤风类毒素、降低抗原含量的白喉毒素和无细胞百日咳联合疫苗的临床研究及其应用进展
郭舒杨;郭胜楠;白玉;
百白破联合疫苗的应用对预防百日咳、白喉、破伤风起到非常重要的作用。但自上个世纪80年代开始,世界各地普遍出现"百日咳重现"现象,百日咳发病率逐年升高,而成年人感染百日咳并传染婴幼儿成为重要的传播方式。WHO建议成年人接种破伤风类毒素、降低抗原含量的白喉毒素和无细胞百日咳联合疫苗(tetanus toxoid,reduced diphtheria toxoid,and acellular pertussis,Tdap)以预防百日咳。本文对部分Tdap的临床研究及其应用情况作一综述。
2019年08期 v.32 923-928+933页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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鸡尾酒疗法治疗艾滋病药物副作用的研究进展
贾小芳;谭智汨;张丽军;
艾滋病又称为获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染引起的。目前临床上一般采用高效抗反转录病毒联合治疗法(high active antiretroviral therapy,HAART),即鸡尾酒疗法来治疗艾滋病,该疗法联合使用至少3种类型的抗HIV药物,可有效控制患者体内的病毒载量,极大地延长艾滋病患者的生存时长,提高了患者的生存质量,但同时不可避免地造成了一些副反应,如皮疹、肝损伤和注意力不集中等神经精神症状。本文将对鸡尾酒疗法治疗艾滋病过程中的药物毒副作用的研究进展作一综述。
2019年08期 v.32 929-933页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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抗胸腺细胞球蛋白/抗淋巴细胞球蛋白的药理毒理学及其临床研究
徐江峰;张颂;王兰欣;黄梦;黄云霞;余健;
抗胸腺细胞球蛋白(anti-themocyte globulin,ATG)和抗淋巴细胞球蛋白(anti-lymphocyte,ALG)是一种含有抗淋巴细胞活性的免疫球蛋白液体或冻干制剂。ATG/ALG作为免疫抑制剂在肾移植、心脏移植、肝移植、骨髓移植及重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)的治疗方面已被广泛应用,且效果显著。ATG/ALG的主要生物学效应在于细胞毒T淋巴细胞。ATG/ALG对T淋巴细胞的直接作用主要通过下列途径:补体介导的T细胞溶解;阻断信号传导通路;诱导细胞凋亡;抑制细胞黏附;活化细胞的调理素化。ATG/ALG能有效地预防急性排斥反应,可使绝大多数耐激素的难治性急性排斥反应逆转。本文通过检索国内外有关ALG/ATG文献,对其药效学、药理学、药动学、毒理学、安全性、不良反应以及临床研究进行综述,以期能为ALG/ATG的生产工艺优化和合理的临床应用提供参考。
2019年08期 v.32 934-939页 [查看摘要][在线阅读][下载 219K]
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转基因生物反应器在生物制药领域的应用
秦玺;饶春明;
随着重组抗凝血酶Atryn和重组人C1酯酶抑制剂Ruconest在美国和欧盟分别获批,转基因生物反应器在生物制药领域受到了更多的重视。转基因生物反应器主要包括转基因动物的乳汁、血液、尿液、精液及蛋清等。应用转基因生物反应器,可降低药物生产成本,提高产量,且安全性更高。本文就转基因生物反应器在生物制药领域的研究和应用现状作一综述。
2019年08期 v.32 940-944页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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