- 李建勋;肖斌;孙朝晖;王露霞;陈丽丹;曹玲;王丽志;李林海;
目的原核表达代谢型谷氨酸受体4胞内段(metabolic glutamate receptor 4 intracellular,GRM4 intracellular,GRM4 intra),并用Ni柱进行纯化。方法采用PAS(PCR-based accurate synthesis)法合成GRM4 intra基因序列,将目的片段和质粒p Czn1双酶切后,经连接,构建重组质粒pCzn1-GRM4 intra;将重组质粒转化至Rosseta菌株,IPTG诱导GRM4 intra蛋白的表达,表达的蛋白利用Ni柱亲和层析法纯化。结果经测序和双酶切鉴定证明质粒pCzn1-GRM4 intra构建正确;在IPTG诱导下,质粒能够在Rosseta菌株中高效表达,表达的蛋白相对分子质量约18 400,主要以可溶性性形式存在,纯度> 90%。结论成功获得了原核表达的GRM4 intra蛋白,为利用体外pull down方法鉴定GRM4的相互作用蛋白提供了参考。
2019年02期 v.32 134-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 443K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张海霞;王兴陇;王丹;李倩;韩玉梅;赵克学;梁浩勤;邓盈盈;李向茸;李琼毅;冯若飞;
目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检测EMCV VP2基因mRNA的转录情况,免疫组化法及Western blot法检测EMCV VP2蛋白的表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcDNA3. 1-VP2构建正确。EMCV VP2基因m RNA及蛋白可在CHO细胞中正常转录及表达,且EMCV VP2蛋白可与兔抗EMCV阳性血清发生特异性结合,主要分布于CHO细胞膜上。结论成功构建了重组质粒pcDNA3. 1-VP2,并有效地在CHO细胞中进行了表达,为EMCV VP2基因体外表达及其功能的进一步研究奠定了基础。
2019年02期 v.32 139-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 327K] [下载次数：185 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 席珏敏;陈俊英;李多;邱丽娟;潘玥;王晓丹;孙强明;
目的探讨甲醇诱导浓度和诱导时间对登革病毒(dengue virus,DENV)四型联合重组包膜蛋白Ⅲ区(envelope domainⅢ,EDⅢ)表达的影响,以期实现该蛋白在毕赤酵母中的高效表达。方法采用不同浓度甲醇(0. 05%、0. 1%、0. 25%、0. 5%、0. 75%、1%、1. 5%、2%、2. 5%、3%、5%、7. 5%)诱导表达带His标签的DENV四型联合重组EDⅢ蛋白,分别诱导18、24、30、48、72 h,样品经Western blot检测。最佳条件下诱导表达的蛋白液经Ni-Agarose His亲和层析纯化后,进行10%SDS-PAGE检测。结果最佳甲醇诱导浓度为2. 5%,最佳甲醇诱导时间为72 h。纯化产物经10%SDS-PAGE检测,于相对分子质量约41 000处可见单一目的蛋白条带,纯度为99%。结论当甲醇浓度为2. 5%,诱导时间为72 h时,可实现DENV四型联合重组EDⅢ蛋白在毕赤酵母中的高效表达。
2019年02期 v.32 144-146+151页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K] [下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 郭冰峰;张少宁;安文琪;梁雪爽;张静静;马小伟;
目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经亲和层析和复性后,免疫豚鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA检测多抗的免疫反应性以及效价。结果成功构建了pET-28b-M重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,经亲和层析及透析获得纯化的重组M蛋白,制备的多克隆抗体可与M蛋白发生特异性结合,效价达1∶21 870。结论成功优化表达了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制备了高效价的多克隆抗体,为后续M蛋白生物学分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基础。
2019年02期 v.32 147-151页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K] [下载次数：295 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 文送娇;陈曦;洪珊;席珏敏;王晓丹;陈俊英;潘玥;叶超;管娇琼;林垚;孙强明;
目的分析登革病毒1型(Dengue virus type 1,DENV-1)Ⅰ～Ⅴ基因亚型基因组全长核苷酸及氨基酸序列差异。方法通过GenBank搜索DENV-1 5个不同基因亚型的全长基因组序列,获得其相应的氨基酸序列。采用BIOEDIT软件,统计基因亚型间核苷酸突变和氨基酸替代位点,分析其相似度,通过RNA二级结构在线预测网站预测DENV-1不同亚型间3′UTR的二级结构差异,蛋白结构在线预测网站预测主要流行于中国的Ⅰ及ⅤDENV-1基因亚型结构蛋白的二级结构,对其氨基酸组成及编码序列中可能存在的蛋白结合区域等进行差异分析。结果DENV-1 5个基因亚型核苷酸相似性为91. 40%～94. 50%,氨基酸序列相似性为97. 11%～98. 38%,5个基因亚型各自编码3 392个氨基酸,其中共有195个位点有氨基酸的变化。DENV-1不同亚型的3′UTR的二级结构各不相同。DENV-1基因型为Ⅰ、Ⅴ的775个氨基酸中占组成比例最多的均是苏氨酸(T),Ⅰ型可能的蛋白结合位点有26个,多聚核苷酸结合位点有9个。Ⅴ型可能的蛋白结合位点有24个,多聚核苷酸结合位点有7个。他们均有相同数量的螺旋和跨膜螺旋。结论通过对DENV-1 5个不同的基因亚型的全长核苷酸和氨基酸序列的比较分析,及Ⅰ、Ⅴ基因亚型结构蛋白二级结构的预测,为研究DENV-1不同基因型之间的生物学和致病性差异提供参考。
2019年02期 v.32 152-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 324K] [下载次数：188 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 王青海;王旭;王倩;张璐;秦京宁;
目的分析2010～2017年北京市西城区狂犬病暴露后人群流行病学特征,了解该区疫情动态和规律,为控制狂犬病发病提供科学依据。方法将2010～2017年北京市西城区狂犬病门诊登记表录入Epidata数据库,使用SPSS 13. 0软件和Excel 2003进行资料的描述性统计分析。结果 2010～2017年北京市西城区狂犬病免疫门诊共处理动物致伤患者121 906例,全部给予狂犬病疫苗接种;致伤动物以犬为主,占71. 68%;春夏季为动物致伤高峰期,占54. 23%;动物致伤比例女性高于男性,男女性别比为1∶1. 31;20～29岁年龄组致伤比例最高,占27. 08%;在职人员占致伤者总数的56. 40%;致伤部位以手部为主,占59. 69%;Ⅲ级暴露比例有下降趋势,被动免疫制剂使用率为31. 28%,有上升趋势。流动人群聚集区是一犬伤多人事件的高发区域。结论应继续加强狂犬病防治知识宣传教育;政府和群众应加强犬只管理,提高动物疫苗接种率;规范一犬伤多人事件、器官移植等特殊暴露的应急处置;将狂犬病暴露人群应急接种狂犬病疫苗和被动免疫制剂的费用纳入医保。
2019年02期 v.32 165-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K] [下载次数：194 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] |[阅读次数：0 ] - 邓鹏飞;杨来宝;杨天;王琦璋;周翠萍;费怡;
目的分析上海市浦东新区14岁以下儿童麻疹发病的影响因素,为麻疹防控提供参考。方法采用1∶1配对的病例对照研究,选择2016～2017年浦东新区14岁以下儿童麻疹确诊病例,以年龄、性别、户籍、居住地相匹配的无麻疹患病史的儿童作为对照,比较两组的人口学、暴露史、麻疹免疫史等信息。结果共调查对象122例,单因素logistic分析显示,有公共场所出入史、医院暴露史和离沪史是麻疹发病的危险因素,儿童麻疹免疫史、母亲麻疹免疫史是保护因素;多因素logistic分析显示,有公共场所出入史和医院暴露史是麻疹发病的危险因素,儿童麻疹免疫史是保护因素。结论麻疹防控应确保儿童麻疹疫苗接种的及时性和规范性,控制院内感染,加强公共场所和医疗机构的麻疹防控宣教,提高人群麻疹防护意识。
2019年02期 v.32 169-172+180页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：87 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 邱泊宁;胡星星;闫飞虎;王翀;崔健男;盖微微;曹增国;王化磊;赵永坤;杨松涛;夏咸柱;
目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)_2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,原核表达的MERS-CoV刺突蛋白S受体结合域(S-receptor binding domain,S-RBD)为抗原蛋白制备免疫亲和柱,提取制备抗原特异性IgG或F(ab’)_2。间接ELISA法检测各样品的活性,MERS假病毒中和试验检测样品的中和活性,BCA法测定样品的浓度,并计算收率。结果所制备的特异性IgG与特异性F(ab’)2的纯度分别为90. 1%和92. 8%,收率分别为8. 7%和3. 07%;在相同的浓度下,所制备的特异性IgG或F(ab’)_2的活性和中和活性均高于对照组中的血清总Ig G或总F(ab’)_2。结论成功制备了马抗MERS-CoV特异性IgG或F(ab’)_2,为建立更加安全与高效的抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2制备工艺奠定了基础。
2019年02期 v.32 173-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 423K] [下载次数：189 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 程嘉君;高飞;秦倩茹;夏凤艳;尹良鸿;钱永常;谢利军;
目的筛选护肤生物制品辅料中重组人表皮细胞生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)抑制剂。方法以BALB/3T3细胞构建模型,采用MTT法对配制好的rhEGF及单组分辅料样品进行生物活性检测,筛选出对rhEGF活性有影响的辅料。通过建立的动物模型,观察rhEGF对皮肤切割伤的促愈合作用,进一步验证筛选出的辅料对rhEGF生物活性的影响。结果经细胞模型筛选的25种辅料中,大分子透明质酸钠和黄原胶显著抑制rh EGF活性。动物模型进一步验证rhEGF具有促兔表皮切割伤愈合的作用,平均愈合时间较生理盐水组提前1～3 d,并呈现良好的剂量效应,随剂量升高,促愈合作用进一步增强,剂量为100μg/m L时,促创面愈合效果最佳。0. 4%黄原胶组和10μg/mL rhEGF+0. 4%黄原胶联合给药组兔创面愈合时间均较生理盐水组晚1 d,黄原胶抑制rhEGF促皮肤切割伤愈合的作用,与细胞模型结果一致。0. 4%透明质酸钠组和10μg/m L rhEGF+0. 4%透明质酸钠联合给药组的兔创面愈合时间均较生理盐水组提前2 d,并且与10μg/mL rhEGF组愈合时间相同,与细胞模型结果不一致。结论黄原胶在细胞和动物模型中均可抑制rhEGF活性,为rhEGF在护肤生物制品中的应用配方提供了理论依据。
2019年02期 v.32 181-185页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K] [下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 黄成潭;陈英;宁荣良;廖超;陈小锋;李文佳;
目的运用实验设计(Design of Experiment,DOE)方法优化筛选表达胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白的CHO细胞用培养基,以提高细胞生长密度及目的蛋白表达量。方法采用Minitab软件对实验进行DOE优化筛选。考察不同基础培养基、流加培养基及其策略优化对CHO活细胞密度(viable cell density,VCD)与GLP-1融合蛋白表达的影响,确定最适培养基组合。结果从15种基础培养基中筛选出3组基础培养基,从5种流加培养基中筛出1种流加培养基,并在此基础上优化了相关流加补料策略。经最适培养基组合验证,试验组CHO细胞的VCD最高为(19. 90±0. 78)×10~6个/mL,对照组最高为(14. 30±0. 60)×10~6个/mL;试验组GLP-1融合蛋白表达最高为2. 51 g/L,对照组小于1. 51 g/L,目的蛋白表达量优化后较优化前提高了80%以上。结论优化后的培养基组合显著提高了CHO细胞生长密度及目的蛋白产量,DOE方法是一种短期快速提高蛋白表达的有效方法。
2019年02期 v.32 186-192+198页 [查看摘要][在线阅读][下载 378K] [下载次数：391 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 胡小华;唐爽;王海伟;马义静;杜琳;朱卫华;
目的建立测定9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物原液中游离多糖含量的检测方法。方法对9V型肺炎球菌多糖溶液进行不同浓度的脱氧胆酸钠(NaDOC)酸沉处理,选择仅沉淀结合物而不沉淀多糖的最佳处理条件,筛选出所能沉淀蛋白的最大浓度;对建立的方法进行准确度、精密度、专属性及线性验证。结果 9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物原液的最佳NaDOC酸沉处理条件为2%NaDOC-0. 05 mol/L HCl;蛋白浓度低于200μg/m L时,NaDOC酸沉处理条件沉淀蛋白的效果最佳。准确度试验的回收率在90%～99%之间;实验内及实验间均具有良好的精密度(CV均小于10%);在10～100μg/mL范围内采用蒽酮硫酸法测定糖浓度的曲线,线性良好,r~2> 0. 998;NaDOC的终浓度在0. 25%以下,对蒽酮硫酸法检测无干扰。结论 NaDOC酸沉淀法能很好地分离结合物原液中的结合物与游离多糖,具有良好的重复性和准确性,可用于测定9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物原液中的游离多糖含量。
2019年02期 v.32 193-198页 [查看摘要][在线阅读][下载 261K] [下载次数：407 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ] - 刘莹;张春琪;刘玉林;俞露;韩慧利;刘涵;王莹;龚士卿;刘琳琳;刘照惠;
目的对重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)原液中残余DNA检测的实时荧光定量PCR(以下简称QPCR)法和DNA探针杂交法进行对比。方法提取3批rhGH原液中残余DNA,经SYBR GREENⅠ荧光染料法对残余DNA进行QPCR检测,对建立的方法进行准确度、精密度及引物特异性验证,并与《中国药典》三部(2015版)中规定的DNA探针杂交法检测的残余DNA含量进行比较。结果 QPCR法对3批rhGH原液残余DNA含量均可定量,灵敏度可达7. 5 fg。标准品DNA浓度在7. 5 fg/μL～750 pg/μL范围内线性关系良好,R2为0. 998,加标回收率为78. 40%～106. 45%。两种方法检测的3批rhGH原液残余DNA含量均小于《中国药典》三部(2015版)中规定的10 ng/剂量的要求。结论 QPCR法高效快捷,通过DNA与染料结合可实时监控PCR过程中的每一步反应,减小污染,对样品中残余DNA可进行准确定量,比DNA探针杂交法更适用于样品中残余DNA含量的检测。
2019年02期 v.32 199-202页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K] [下载次数：263 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李冰;朱鸿;张凤华;郑欣宁;谷娅楠;
目的制备快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagin circle card test,RPR)实验室内质控品,并对其稳定性进行评价。方法选择肝炎病毒标志物、梅毒螺旋体特异性抗体/非特异性抗体和HIV抗体均为阴性的血清,选择肝炎病毒标志物和HIV抗体均为阴性,梅毒螺旋体非特异性抗体为阳性的血清,将阳性和阴性血清分别混匀,2 643×g离心10 min去除蛋白质沉淀,56℃加热30 min灭活传染性病原体,经0. 2μm滤膜过滤除菌。阴性质控品使用RPR阴性血清基质制备;用阴性血清基质稀释阳性血清基质制备1∶2~+阳性质控品。将阴性和阳性质控品按7 d使用量分装,冷冻保存在-70和-20℃,检测6个月冷冻保存的稳定性及2～8℃保存1周的开瓶稳定性,并进行瓶间差验证。结果质控品-70和-20℃6个月冷冻保存的稳定性及复融后2～8℃保存1周的开瓶稳定性均良好;两种储存条件保存的质控品均无甁间差。结论自制的RPR试验室内质控品6个月内稳定性和均一性均良好,能满足临床实验室日常质控活动。
2019年02期 v.32 203-206页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张改梅;陈磊;李国顺;肖海峰;李进;郭林;刘思航;徐颖之;朱芮波;刘建凯;顾美荣;
目的建立检测重组肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)(汉逊酵母)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC),并进行验证。方法建立SEC-HPLC法检测EV71 VLP纯度,并对该方法的专属性、精密度、检测限、定量限、耐用性及拖尾因子等指标进行验证。结果空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现。重复性试验中原液参比品保留时间和峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0. 14%和0. 21%,3批分析原液保留时间RSD均<0. 3%,峰面积RSD均<0. 8%;中间精密度试验原液参比品和3批分析原液保留时间RSD均<0. 2%;峰面积RSD均<2. 0%。检测限为样品浓度2. 5μg/mL,进样体积20μL;定量限为样品浓度10μg/mL,进样体积20μL。耐用性试验中原液参比品在不同浓度流动相中连续进样3次,保留时间和峰面积RSD均<2. 0%。原液参比品和3批分析原液目的峰的拖尾因子为1. 210±0. 01,RSD为0. 90%。结论建立的SEC-HPLC方法专属性、精密度、耐用性良好,适用于EV71(汉逊酵母)VLP纯度的检测。
2019年02期 v.32 207-210+214页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K] [下载次数：386 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 易佳炜;程露;冉铁成;徐俊;
目的建立静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中活化Ⅺ因子(activated factorⅪ,FⅪa)活性凝血酶生成试验(thrombin generation assay,TGA)的测定方法。方法采用自动校正凝血酶生成(calibrated automated thrombogram,CAT)分析仪,建立IVIG中FⅪa活性检测方法,并确定方法的线性范围和检测限,验证方法的精密度和准确性。采用建立的方法对4家血液制品公司的29批IVIG产品进行FⅪa活性定量测定。结果 FⅪa浓度在3. 34～27. 84 mIU/mL范围时,与凝血酶峰值浓度(peak thrombin concentration,PTC)呈良好的线性关系,回归方程为Y=-0. 022 8 X~2+1. 891 6 X+10. 282,R~2=0. 989;检测限为2. 76 mIU/mL;供试品的6次测定结果 RSD为12. 9%;低、中、高浓度加标样品的回收率分别为86. 7%、116. 7%、121. 6%,RSD分别为16. 4%、19. 8%、8. 4%。29批IVIG产品中,不同厂家及相同厂家不同批次间FⅪa活性均存在一定差异。结论建立了用于检测IVIG产品中FⅪa活性的TGA方法,且具有良好的线性、精密性及准确性,可用于评价IVIG产品的致血栓风险。
2019年02期 v.32 211-214页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K] [下载次数：190 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 张志晓;张希;郑颖;范泉水;
每年因有毒动物咬伤引发严重临床症状甚至死亡的病例众多。到目前为止,世界公认的最有效的救治药物为抗血清。但传统的抗血清往往通过采用有毒动物成分复杂的全毒免疫马和羊等动物获得,效价受到一定影响;另外,用于患者时不可避免地存在异源过敏和血清病风险。而具有预防作用的毒素疫苗研究相对较少。因此,本文综述了近年来在有毒动物新型免疫原和毒素疫苗方面的研究进展,以期为制备更有效的抗血清和毒素疫苗提供参考。
2019年02期 v.32 215-219页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K] [下载次数：134 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 徐世友;于飞飞;应莲芳;
液-液萃取等传统方法无法满足不断提高的生物分子分离要求,浊点萃取(cloud point extraction,CPE)以其良好的分离效果被广泛应用。本文基于Triton Ⅹ-114 CPE法在生物分子分离中的应用进行了概述,主要涉及CPE原理、过程、应用及技术改进。
2019年02期 v.32 220-227页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K] [下载次数：372 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 牛春阳;薛琳琳;计红;李士泽;
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是缺乏开放阅读框架,长度约为200 nt～100 000 bp,且不编码蛋白质的转录本。lncRNA的表达受到发育调控,具有组织及细胞特异性。目前认为,lncRNA执行重要的生物学功能,涉及转录调控、细胞内物质运输和染色体重塑,参与细胞分化、生长发育、应激反应和疾病发生发展等多种生物学进程。本文在介绍lncRNA的特征、分类、调控机制的基础上,重点对lncRNA的生物学功能进行综述。
2019年02期 v.32 228-232+237页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K] [下载次数：2752 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：54 ] |[阅读次数：0 ] - 李雯雯;黄勇;
传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)能引起急性、高度接触性传染病,严重危害全球家禽业。目前主要通过接种疫苗来控制该病,但效果不佳。中和表位能使中和抗体与相应抗原相互作用,中和抗体能抵御病毒感染、消除病毒并防止病毒传播和扩散,在免疫中发挥重要的作用。因此鉴别出中和表位对预防和控制疾病以及有效疫苗和诊断试剂的发展十分重要。本文主要通过该病毒的四个结构蛋白来介绍其中和表位,以期对IBV中和表位的深入研究提供参考。
2019年02期 v.32 233-237页 [查看摘要][在线阅读][下载 190K] [下载次数：281 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ]