- 王溪;贾硕;张心馨;佟志敏;胡媛媛;金鹏;张红梅;
目的探讨辐射对肺腺癌A549细胞细胞周期的影响,观察其细胞上清外泌体TMEM88蛋白(transmembrane protein 88)的表达情况。方法取对数生长期肺腺癌A549细胞,按0、0.5、1、1.5、2 Gy剂量(剂量率1.75 Gy/min,300 Mu/min)照射细胞,培养6和12 h后,流式细胞术检测不同辐射剂量对细胞周期的影响;收集细胞上清,超速离心提取外泌体蛋白,Western blot法分析外泌体TMEM88蛋白的表达情况。结果 G2期细胞6 h检测结果显示,与0 Gy组相比,各剂量组细胞比例显著增加(P<0.001),且随照射剂量增加,细胞比例增加越明显,除0.5 Gy组与1 Gy组外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.001);12 h检测结果显示,G2期细胞比例随照射剂量增加而显著增加,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。S期细胞6 h检测结果显示,与0 Gy组相比,0.5、1.0、1.5 Gy组S期细胞比例显著增加(P<0.05);12 h检测结果显示,与0、0.5 Gy组相比,1.0、1.5 Gy组S期细胞比例显著增加(P<0.05)。随照射剂量的增加,外泌体TMEM88蛋白的表达逐渐降低,6 h检测结果显示,0 Gy组与1.5、2.0 Gy组以及0.5 Gy组与2.0 Gy组相比,差异均有统计学意义(P<0.05));12 h检测结果显示,0.5、1.0、1.5、2.0 Gy组与0 Gy组相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论辐射能够诱导肺腺癌A549细胞细胞周期阻滞,并能抑制细胞上清外泌体TMEM88蛋白的表达。
2017年08期 v.30 794-799页 [查看摘要][在线阅读][下载 363K] [下载次数：232 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 温丽敏;白欣艳;王玉晶;赵文静;张蘋;王海龙;郭睿;
目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响。方法利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技术构建真核重组表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-srpk2;在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将真核重组表达质粒及空载体pLV-EGFP2(A)Puro分别转染人胚肾HEK293T细胞,同时设空白对照组(未转染)。采用RT-PCR及Western blot法分别检测HEK293T细胞中srpk2基因mRNA转录及SRPK2蛋白的表达情况;Western blot法分析HEK293T细胞中聚合态和游离态α-Tubulin的含量。结果双酶切及DNA序列鉴定证明真核重组表达质粒pLV-EGFP2(A)Puro-srpk2构建正确,且在HEK293T细胞中实现了srpk2基因过表达。真核重组表达质粒转染组HEK293T细胞中游离态α-Tubulin含量显著低于空载体转染组及空白对照组(P<0.05),而聚合态α-Tubulin水平明显高于空载体转染组及空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了srpk2基因的真核重组表达质粒,SRPK2可促进α-Tubulin微管蛋白聚合。
2017年08期 v.30 800-805页 [查看摘要][在线阅读][下载 479K] [下载次数：220 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 苗书魁;任方;汪萍;米晓云;陆桂丽;魏玉荣;魏婕;马文戈;王延;黄炯;
目的原核表达小反刍兽疫病毒(peste-des-petits ruminants virus,PPRV)N基因,评价其抗原性,并进行生物信息学分析。方法参照GenBank中登录的PPRV(Nigeria/75/1)N基因序列,人工合成该基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),IPTG诱导N基因原核表达,表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。运用Expasy Protparam和SOPMA软件对PPRV N基因编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果成功表达了PPRV N基因,其融合蛋白相对分子质量约64 400,主要以包涵体形式存在,并可被PPRV羊免疫血清特异性识别。PPRV N蛋白含524个氨基酸,相对分子质量约57 900,亲水性氨基酸占57.63%,疏水性氨基酸占42.17%,碱性氨基酸占12.21%,酸性氨基酸占14.12%,等电点理论值为5.11;亲水性平均系数为-0.296,不稳定系数为48.20;二级结构存在242个α螺旋(占46.18%),42个β转角(占8.02%),164个无规则卷曲(占31.3%),76个延伸链(占14.50%)。结论原核表达的PPRV N蛋白具有良好的特异性和抗原性,为单克隆抗体的制备及快速诊断方法的建立提供了参考。
2017年08期 v.30 806-810页 [查看摘要][在线阅读][下载 413K] [下载次数：200 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 曹洁;姚隆;
目的研究在饱和脂肪酸软脂酸钠诱导肝细胞脂毒性凋亡过程中,蛋白激酶R样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK)/活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)/C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)信号通路的作用,对参与饱和脂肪酸诱导肝细胞脂毒性凋亡的主要UPR信号通路进行探讨。方法MTT法筛选不同浓度(0、36、72、108、144、180μmol/L)软脂酸钠作用L02和HepG2细胞株的最佳浓度后,将细胞分为正常对照组和模型组(软脂酸钠108μmol/L),甘油三酯试剂盒检测细胞内甘油三酯含量,流式细胞术Annexin V-PE/7-AAD双染检测细胞凋亡率,Western blot法检测Bip、t-PERK、磷酸化PERK(p-PERK)、ATF4、CHOP蛋白的表达。将PERK shRNA转染L02和HepG2细胞沉默PERK基因,以Control shRNA作为对照,将细胞分为Control shRNA、Control shRNA+软脂酸钠、PERK shRNA、PERK shRNA+软脂酸钠组,Western blot法检测t-PERK、ATF4、CHOP蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果软脂酸钠成功诱导建立肝细胞脂变模型。在体外实验中,软脂酸钠能够诱导肝细胞发生脂肪变性以及脂变肝细胞凋亡,细胞凋亡率随软脂酸钠诱导时间延长而增加,与对照组相比,模型组48 h细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。软脂酸钠诱导L02和HepG2细胞0、12、24、48 h,各时间点Bip、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白的表达呈时间依赖性增加(P<0.05)。在使用和不使用软脂酸钠诱导下,PERK shRNA组细胞t-PERK蛋白表达水平显著低于Control shRNA组(P<0.05);软脂酸钠诱导下,与Control shRNA组相比,PERK shRNA组细胞ATF4和CHOP蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率也明显降低(P均<0.05)。结论饱和脂肪酸能够诱导脂变肝细胞凋亡,并且启动过度内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress),激活PERK/ATF4/CHOP信号通路。阻断PERK通路能够在一定程度上抑制脂变肝细胞凋亡,提示ER stress UPR信号途径PERK/ATF4/CHOP参与了饱和脂肪酸诱导的肝细胞脂毒性凋亡。
2017年08期 v.30 811-818页 [查看摘要][在线阅读][下载 545K] [下载次数：590 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 王颖;王欣卉;徐炳政;张东杰;佐兆杭;刘淑婷;宫雪;
目的探讨酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)对急性汞中毒小鼠的排汞及对机体氧化损伤的修复作用。方法经颈部皮下注射氯化汞生理盐水溶液建立急性汞中毒小鼠模型。酵母源MT-1及MT-2的低、中、高剂量组(0.16、0.40、0.80 mg/kg bw)均于每日同一时间灌胃给药,连续给药14 d,同时设模型组(等体积生理盐水)、阳性对照组(DMPS,0.80 mg/kg bw)及正常组小鼠(等体积生理盐水)。末次灌胃给药后小鼠禁食12 h,测量小鼠体重,检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,机体总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量;同时测定血液、肝脏和肾脏中汞离子的含量。结果与正常组小鼠比较,模型组小鼠体重显著下降(P<0.05);血清SOD、GSH-Px活力及T-AOC显著降低(P<0.05),MDA含量及血液、肝脏、肾脏中汞离子含量显著上升(P<0.05)。与模型组小鼠比较,除两种低剂量MT组外,其他剂量MT组小鼠体重均显著上升(P<0.05);各MT组小鼠血清SOD、GSH-Px活力及T-AOC均明显升高(P<0.05),MDA含量及血液、肝脏、肾脏中汞离子含量均明显降低(P<0.05),且高剂量MT效果最佳。结论两种酵母源MT对急性汞中毒小鼠具有良好的排汞作用,并可修复机体的氧化损伤,且作用效果与给药剂量呈正相关。
2017年08期 v.30 819-823页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K] [下载次数：166 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 刘伟;关智媛;王静;郑婷;
目的观察低切应力对高血压颈动脉血管重构作用的影响,并初步探讨其信号转导机制。方法分离猪右侧颈总动脉,建立血管体外培养模型,实验分为高切应力组(切应力20 dyn/cm~2,对应灌洗液的流量为200 ml/min)、低切应力组(5 dyn/cm~2,对应灌流液的流量为50 ml/min)及对照组(未经培养的新鲜血管)。镜下测量颈动脉内径及壁厚度,并计算壁横截面积;TUNEL法检测切应力对体外培养猪颈总动脉血管平滑肌细胞凋亡影响;Western blot法检测切应力对体外培养猪颈总动脉血管组织中RhoA、P-MYPT-1、P-ERK1/2、P-JNK和P-P38蛋白表达影响。结果与对照组和高应力组比较,低应力组血管壁厚度和壁横截面积明显增加(P<0.05),血管内径明显变小(P<0.05),内径/壁厚比值明显降低(P<0.05);血管平滑肌细胞TUNEL染色阳性细胞明显增多(P<0.05),凋亡率显著增加(P<0.05);血管组织中RhoA、P-MYPT-1、P-ERK1/2、P-JNK和P-P38蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。结论低切应力对体外培养高血压颈动脉血管重构具有显著地诱导作用,其机制可能与其激活RhoA/ROCK信号,从而引起胞质内丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)的3个成员(ERK1/2、JNK、P38)的磷酸化反应有关。
2017年08期 v.30 824-827+832页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K] [下载次数：139 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 马秋平;王敏力;侯继锋;王箐舟;
目的建立重组人血白蛋白产品中异丙醇残留量检测的气相色谱法。方法色谱条件:DB-624毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm,3μm);进样口温度150℃;检测器为FID,温度200℃;空气流量400 ml/min;氢气流量40 ml/min;载气为高纯氮气,流量6.0 ml/min;程序升温:起始温度60℃保留5 min,以40℃/min升至120℃,保持3 min;分流进样,分流比为5∶1;进样量为1μl。以正丁醇为内标,对建立的方法进行专属性、精密度、准确度、耐用性验证,确定该方法的线性范围和检测限。用建立的方法检测3批重组人血白蛋白样品中异丙醇残留量。结果异丙醇浓度在10~300μg/ml范围内,与异丙醇与正丁醇峰面积比的线性关系良好(r=0.999 9),最低检出限为0.09μg/ml;该检测条件下与异丙醇性质相似的甲醇和乙醇对异丙醇的测定基本无影响;异丙醇与正丁醇峰面积比3次检测结果的RSD为0.4%,精密度良好;不同浓度异丙醇分别与重组人血白蛋白等体积混合,3次检测结果的回收率在94.2%~105.0%之间,准确度良好;不同检测器温度和不同进样口温度条件下测定的色谱峰面积的平均RSD分别为1.6%和2.2%,对测定结果基本无影响。3批重组人血白蛋白样品均未检测出异丙醇残留,符合《中国药典》三部(2015版)推荐标准。结论建立的气相色谱法快速、准确,可用于检测重组人血白蛋白中异丙醇的残留量。
2017年08期 v.30 847-849+854页 [查看摘要][在线阅读][下载 170K] [下载次数：342 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 崔熠可;赖玉清;黄惠明;陈静华;周跃平;闫冀;吴磊;
目的优化啤酒花中8-异戊烯基柚皮素(8-prenylnaringenin,8-PN)的提取及含量测定方法,并进行验证。方法采用L_8(4~1×2~2)正交试验,料液比为1∶15,利用回流法提取啤酒花中的8-PN,反相高效液相色谱法测定啤酒花中8-PN的含量[色谱分离条件:ODS C18反相柱(4.6 mm×250 mm,0.45μm),用乙腈、1%甲酸进行梯度洗脱,流速:1.2 ml/min,检测波长:288 nm,柱温:30℃]。探讨提取溶剂(甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯)、提取时间(40、60 min)、提取温度(40、60℃)对啤酒花中8-PN提取含量的影响。结果以正丁醇为提取溶剂,料液比为1∶15,利用回流提取,提取温度40℃,时间40 min,测得啤酒花中8-PN的最高提取含量为79.1 mg/kg。该方法的标准曲线相关系数R~2=0.999 8,线性范围为0.001~0.1 mg/ml,检出限为0.122 mg/L;检测浓度为0.03 mg/ml标准液的保留时间和峰面积的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于1%,加标回收率在98%~102%之间。结论优化的方法可简便、准确地测定啤酒花中8-PN含量,为啤酒花中8-PN的进一步分离、纯化提供了实验依据。
2017年08期 v.30 850-854页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K] [下载次数：304 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 闻晓波;张玲玲;张峣;刘阳阳;倪宏波;冉旭华;
目的建立检测牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的Taq Man荧光定量PCR方法。方法根据GenBank中公布的BPIV3序列,选取P基因上保守区域设计特异性引物及TaqMan-MGB探针。优化反应体系,建立实时荧光定量PCR方法,并对方法的特异性、重复性和敏感性进行验证。结果标准曲线在104~108copies/μl范围内具有良好的线性关系,R~2达到0.999,斜率为-3.203,扩增效率为105.2%。利用该方法对BPIV3a及BPIV3c进行检测,结果为阳性,对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(infectioils bovine rhinotraeheitis virus,IBRV)进行检测,结果呈阴性。3个浓度质粒标准品,重复3次检测,CV均小于1.5%。建立的方法对质粒的最小检出量为1.0×10~2 copies/μl。结论建立了能够检测BPIV3a及BPIV3c的TaqMan-MGB探针实时定量PCR方法,该方法特异性较强,重复性及敏感性良好,为早期诊断及定量分析提供了更快速、稳定、可靠的方法。
2017年08期 v.30 855-859页 [查看摘要][在线阅读][下载 291K] [下载次数：261 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 冯玉超;王长远;张东杰;
目的响应面法优化超声辅助红小豆蛋白糖基化反应。方法利用超声波辅助机制,对红小豆蛋白进行糖基化改性。通过单因素试验,在确定超声温度、超声功率、超声时间、pH、红小豆蛋白-氨基葡萄糖质量比和红小豆蛋白浓度对红小豆蛋白接枝度和褐变度影响的基础上,经Design-Expert 8.0.6.1软件进行响应面分析。结果最终确定最佳反应条件为:超声温度70℃,超声功率250 W,超声时间28 min,pH 7,红小豆蛋白-氨基葡萄糖质量比1∶1,红小豆蛋白浓度8.5 mg/ml;在此条件下进行验证试验,测得接枝度为56.07%,与理论预测值(56.79%)相差0.72%。结论成功优化了超声辅助红小豆蛋白糖基化反应,确定了最佳工艺,为改善红小豆蛋白的功能性、红小豆精深加工及新产品的研发提供了参考。
2017年08期 v.30 860-867页 [查看摘要][在线阅读][下载 418K] [下载次数：289 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 石亮;黄晓娜;张德利;李秋睿;徐国亮;闻向华;高源;
目的验证电子束辐照对细胞工厂进行灭菌的有效性。方法采用不同剂量(20、25、30、35 kGy)电子束辐照对细胞工厂进行灭菌处理,用辐照的细胞工厂培养2BS细胞,并进行无菌、表面微生物检测,同时利用短小芽孢杆菌指示剂验证不同剂量电子束对细胞工厂灭菌的有效性。确定辐照后细胞工厂的保存时间、耐运输和潮湿性。结果20 kGy的电子束只能满足10层细胞工厂辐照灭菌要求,≥25 kGy的电子束可有效对细胞工厂进行灭菌,能够满足GMP的无菌要求;20 kGy的电子束可对细胞工厂表面10~6 cfu/ml的短小芽孢杆菌完全杀灭,≥25 kGy的电子束对放在细胞工厂中间位置的106 cfu/ml的短小芽孢杆菌能够完全杀灭,灭菌后保存6个月内能够保证无菌,且耐运输和潮湿。结论电子束可有效对细胞工厂进行灭菌处理,且具有灭菌彻底、无污染、无残留、不需加热、可自动化运行、对产品及包装材料无损伤等优点。
2017年08期 v.30 868-871页 [查看摘要][在线阅读][下载 197K] [下载次数：252 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 姚昕;卞莲莲;高帆;王一平;毛群颖;李长贵;徐苗;梁争论;
<正>近年来,手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)已成为我国主要的公共健康问题,研发疫苗是控制HFMD的有效措施。目前我国3家企业完成肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗Ⅲ期临床试验,并均已上市。中国食品药品检定研究院(NIFDC)研发的EV71中和抗体国家标准品和抗原标准品在疫苗的研发和质控中发挥了积极作用。
2017年08期 v.30 878-883页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K] [下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 毛群颖;卞莲莲;高帆;姚昕;徐苗;梁争论;
<正>2016年11月16日,中国食品药品检定研究院(以下简称中检院)网站发布了《EV71疫苗质控和评价技术要点》。该技术要点为中检院第一个针对疫苗质控和评价方面具体技术规范的文件,详细阐述了我国创新性EV71疫苗生产和研发过程中的质量控制要点。解读该指导性文件的起草背景,明确其
2017年08期 v.30 884-886页 [查看摘要][在线阅读][下载 78K] [下载次数：416 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 崔晓雨;李薇;权娅茹;袁力勇;李长贵;
<正>麻疹、腮腺炎、风疹是具有高度传染性的经呼吸道传播的病毒性疾病。其中麻疹可引发高烧和皮疹,并造成失明、脑炎或死亡。腮腺炎病毒可导致腮腺炎症、发烧、头痛和肌肉酸痛,并可引起病毒性脑膜炎等严重并发症。风疹在儿童中通常症状较轻,但在怀孕早期感染风疹可能导致胎儿死亡或先天性风疹综合征,进而导致严重的大脑、心脏、眼睛及耳朵的先天缺陷。由于儿童作为极易感人群,感染麻疹、腮腺炎、风疹可产生严重的后果,但目前世界范围内最好的方式就是通过接种麻疹、腮腺炎、风疹
2017年08期 v.30 887-892+896页 [查看摘要][在线阅读][下载 630K] [下载次数：183 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 马锐;郭中平;
<正>水痘减毒活疫苗系采用水痘-带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)接种人二倍体细胞,经培养,收获病毒,加入适宜稳定剂冻干制成,用于预防由VZV感染引起的急性传染病,目前属于国家免疫规划管理中的二类疫苗。该产品于2000年在我国批准上市,2015年首次纳入《中国药典》(Chinese Pharmacopoeia,ChP)三部收载。本文
2017年08期 v.30 893-896页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K] [下载次数：346 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] 下载本期数据