- 赵大鹏;郭雪;顾建阳;郭骐源;赵志芳;王思艳;陈忠强;汪洋;张兰婷;姜皓淼;邹勇;
目的比较长春生物制品研究所有限责任公司(简称长春公司)生产的无硫柳汞流感病毒裂解疫苗与国内外同类产品在动物体内的免疫原性。方法分别用长春公司、国外A公司及国内B公司生产的无硫柳汞流感病毒裂解疫苗,经后腿胫前肌肌肉注射免疫小鼠,以注射PBS的小鼠作为对照。于免疫前及免疫后14、21、28、35、42 d,经小鼠眼静脉采血,分离血清,采用血凝抑制试验(hemagglutination inhibition,HI)检测小鼠血清中的抗体滴度,并计算HI抗体几何平均滴度(GMT)、HI抗体阳转率、HI抗体GMT增长倍数和HI抗体保护率。结果各疫苗组小鼠血清中HI抗体GMT均明显高于相应时间点的PBS组(P<0.01),各疫苗组组间差异无统计学意义(P>0.05);免疫后28、35、42 d,各疫苗组的HI抗体阳转率为77%~100%,组间差异无统计学意义(P>0.05);各疫苗组HI抗体GMT较免疫前增长倍数均>2.5倍,组间差异无统计学意义(P>0.05);各疫苗组的HI抗体保护率为62%~100%,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论长春公司生产的无硫柳汞流感病毒裂解疫苗与国外A公司疫苗免疫原性水平相当,略高于国内B公司。
2016年10期 v.29 1009-1012页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 谢忠平;李华;杨水芝;谢天宏;杨婷;刘正玲;岳磊;宋霞;
目的评价CA16 K168/8疫苗候选株免疫血清对不同CA16毒株的交叉中和能力及对致乳鼠麻痹CA16临床分离株的体内中和保护能力。方法将CA16 K168/8疫苗候选株病毒纯化液辅以弗氏佐剂经背部及侧腹部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,制备高效价免疫血清。采用微量细胞病变法检测中和抗体效价;用中和抗体效价终浓度为32 U的特异性免疫血清对18株不同CA16临床分离毒株及15株EV71毒株进行交叉中和指数检测;选取中和抗体效价为16、32、64、128、256 U的特异性免疫血清对可致乳鼠产生明显麻痹作用的CA16 FY-18株进行体内中和保护水平检测。结果获得的兔抗CA16 K168/8血清对14株CA16毒株的中和效价为1∶1 024~1∶6 144,GMT值为1∶3 153;可于体外完全中和18株不同CA16毒株,中和指数为100~5 623.4,平均值为794.1,而对15株EV71临床分离株中和指数仅为0.32~5.62,平均值为2.2;体内中和保护水平随抗体效价升高而增加,呈量-效关系,当中和抗体效价达128 U时,可完全保护乳鼠不发生临床麻痹反应。结论 CA16 K168/8疫苗候选株特异性免疫血清体内、外试验结果表明其具有良好的免疫保护性。
2016年10期 v.29 1013-1016页 [查看摘要][在线阅读][下载 163K] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 喻刚;郝鹏亮;韩锡鑫;韩静;赵巍;黄晓媛;杨晓明;
目的探讨阳离子脂质体DOTAP(2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵)作为乙肝疫苗佐剂的免疫增强效果。方法薄膜蒸发复水法制备DOTAP阳离子脂质体乙肝疫苗,检测其粒径、Zata电位、包封率;将BALB/c小鼠随机分为5组:DOTAP阳离子脂质体乙肝疫苗组(DOTAP佐剂组)、不加佐剂的乙肝疫苗组(HBS组)、乙肝疫苗加铝佐剂组(铝佐剂组)、乙肝疫苗加CPG-ODN佐剂组(CPG-ODN佐剂组)以及PBS对照组,免疫剂量分别为0.2、2μg/(只·0.1ml),每个剂量10只小鼠,分别于0、28d经肌肉免疫,0、14、28、42d采血,分离血清,ELISA法检测血清中抗HBs特异性IgG抗体、亚型抗体(IgG1、IgG2a)滴度。结果制备的阳离子脂质体乙肝疫苗平均粒径200~300nm,粒径分布均匀,带正电荷,包封率在70%以上。DOTAP佐剂组血清IgG抗体水平明显高于HBS组,其中2μg剂量组差异有统计学意义(P<0.05);与铝佐剂组相比,两个剂量组差异均无统计学意义(P>0.05);0.2μg剂量组显著低于CPG-ODN佐剂组(P<0.05)。DOTAP佐剂组可同时诱导高水平的IgG1、IgG2a型抗体,两个剂量组产生的IgG1型抗体水平均与铝佐剂组相当(P>0.05),但IgG2a型抗体滴度均明显高于铝佐剂组(P<0.05);两个剂量DOTAP佐剂组产生的IgG1、IgG2a型抗体水平与CpG-ODN佐剂组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DOTAP阳离子脂质体作为重组乙肝疫苗的佐剂具有良好的免疫增强效果,其对体液免疫的增强作用不劣于铝佐剂和CPG-ODN佐剂,DOTAP佐剂可同时诱导Th2细胞和Th1细胞介导的免疫应答。
2016年10期 v.29 1017-1020+1026页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K] [下载次数：619 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 俞露;刘玉林;申兆兴;刘涵;龚士卿;王莹;吕效宇;王诗琪;张红;刘景会;
目的研制具有较长半衰期的长效重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH),构建并筛选出高表达rhGH-Fc免疫融合蛋白的细胞株。方法将hGH基因与特异位点突变后的人抗体IgG4Fc段用柔性linker连接,克隆至GS双表达载体上,构建重组表达质粒,经两次双酶切鉴定及测序分析后,将构建正确的质粒稳定转染CHO-k1细胞。通过逐渐提高蛋氨酸磺酰胺(methionine sulphoximine,MSX)浓度,ELISA法筛选高表达的细胞株;利用亲和层析初步纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE、HPLC、等电聚焦电泳分析;通过大鼠去垂体法测定长效rhGH的生物学活性,比较本课题研制的长效GH与其他普通GH的半衰期。结果重组质粒phGH-Fc-1经两次双酶切及测序鉴定,证明构建正确;成功筛选出高表达rhGH-Fc融合蛋白的细胞株,表达量可达1g/L;纯化的目的蛋白相对分子质量大小及等电点均与理论值一致,纯度可达95%以上;经大鼠去垂体体内活性测定,其比活为1.1IU/mg,依大鼠体重增长情况判断,其生物半衰期高于普通rhGH。结论成功构建并筛选出高表达长效rhGH的工程株,为后续长效rhGH的研制奠定了基础。
2016年10期 v.29 1021-1026页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K] [下载次数：338 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 郭会杰;宋冬梅;吴蕴怡;鲁卫卫;温智恒;田龙;张越;马淑花;张中洋;李秀玲;
目的评价不同形式的脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)颗粒的免疫原性。方法采用蔗糖密度梯度超速离心法分别将经56℃加热1.5 h处理和未经加热的PV进行分离纯化,收集相应组分,进行电镜观察及SDS-PAGE分析,并测定各组分的D抗原及蛋白含量。用不同PV颗粒组分分别免疫大鼠,均经腿部肌肉注射,共接种3次,每次间隔21 d,于免疫前和第1、2次免疫后21 d经眼眶采血,末次免疫后21 d经心脏穿刺采血,分离血清,微量细胞病变(CPE)抑制法检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV中和抗体几何平均滴度(GMT)。结果未经加热处理的PV可分离获得EP(蔗糖浓度16%~19%)和FP(蔗糖浓度22%~24.5%)两种病毒颗粒,电镜观察分别为空心颗粒和实心颗粒,EP经SDS-PAGE分析可见VP0、VP1和VP3病毒蛋白条带,FP可见VP1、VP2、VP3和VP4条带;经56℃加热处理的PV可分离获得HP(蔗糖浓度15%~17%)一种病毒颗粒,电镜观察为空心颗粒,SDS-PAGE分析可见VP0、VP1、VP2、VP3病毒蛋白条带。EP、FP免疫大鼠后,均可诱导产生针对PV的中和抗体,但EP诱导产生的中和抗体GMT低于FP;HP不能诱导产生中和抗体。结论未经加热的PV可分离获得EP和FP两种病毒颗粒,均具有免疫原性;经加热处理的PV仅分离获得HP一种病毒颗粒,不具有免疫原性。
2016年10期 v.29 1027-1031页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K] [下载次数：182 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 巩蔚;严丽蔚;朱文兵;张雪梅;徐婧雯;吴忠香;卢孔杰;孙明;董少忠;
目的原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能。方法采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体p GEX-5X-1,构建重组表达质粒p GEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)p Lys S,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,采用间接ELISA法检测其与阳性血清的结合性能及亲和力。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;纯化的重组蛋白RV-G相对分子质量约85 000,纯度可达85%,能与阳性血清特异性结合,且具有较好的区分性,与阳性血清的亲和力常数为1.2×1010 M-1。结论成功原核表达、纯化获得了纯度较高、特异性较好、亲和力较强、灵敏度较高的RV CTN-1株G蛋白,为研究G蛋白的抗原表位、建立针对RV G蛋白的ELISA抗体检测方法及其中和抗体的分选检测奠定了基础。
2016年10期 v.29 1032-1036页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张高峡;傅文彬;胡薇;沈琼;
目的探讨N-末端核定位序列(nuclear localization signal,NLS)对猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)衣壳蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)在汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)中组装的影响。方法分别构建表达PCV2 ORF2全长及NLS截短型重组表达质粒p MOXZ-full和p MOXZ-ΔN40,电转至HP,构建重组酵母表达菌株full-HP和ΔN40-HP,获得的两种表达产物经蔗糖密度梯度超速离心及超滤后,Western blot法检测两种表达产物的单体蛋白表达和VLP组装效率,透射电子显微镜观察VLP形态,小鼠免疫试验检测VLP的免疫原性,地高辛标记DNA杂交法检测VLP的DNA结合能力。结果与全长ORF2表达产物PCV2-VLP(full)比较,NLS截短型表达产物PCV2-VLP(ΔN40)的单体表达量略有提高,但VLP组装效率及DNA结合能力均降低。两种VLP颗粒形态相近,直径约20 nm;两种VLP免疫小鼠血清的抗体几何平均滴度(GMT)差异无统计学意义(P>0.05)。结论去除NLS可提高PCV2衣壳蛋白VLP单体的表达水平,但不是VLP组装所必须的,且可使VLP的组装率略有降低。本研究为PCV2-VLP结构和疫苗的研究奠定了基础。
2016年10期 v.29 1037-1042页 [查看摘要][在线阅读][下载 383K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 张继明;徐苏娟;
目的构建结核分枝杆菌热休克蛋白X(heat shock protein X,HspX)基因与EGFP融合基因的真核表达载体p EGFP-N1-HspX,并在小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7中表达。方法以结核分枝杆菌(H37Rv)基因组DNA为模板,PCR扩增HspX基因,定向插入至质粒p EGFP-N1的多克隆位点,经酶切及测序鉴定正确后,将质粒p EGFP-N1-HspX转染RAW264.7细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达,Real-time PCR及Western blot法鉴定HspX基因的表达。结果质粒p EGFP-N1-HspX经酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒p EGFP-N1-HspX转染24 h后,荧光显微镜下可见GFP表达,表达的重组融合蛋白Flag-HspX相对分子质量约43 000;转染组细胞中HspX基因m RNA水平明显高于空载体组(P<0.01)。结论成功构建了p EGFP-N1-HspX融合基因真核表达载体,并在RAW264.7细胞中获得表达。
2016年10期 v.29 1043-1046页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 闫飞;王曌华;刘艳玲;武伟琦;何平;张彬宇;
目的探讨人脐带间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,UCMSCs)多点局部注射后,修复烫伤皮肤创面的潜在机制。方法机械消化法分离人UCMSCs,培养至第3代后,进行形态观察、免疫表型和多向分化潜能鉴定。将第3代UCMSCs与碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)共培养14 d,免疫荧光法检测成纤维细胞标志物波形蛋白的表达;对比小鼠Ⅲ度烫伤模型多点局部注射UCMSCs后创面愈合率及创面愈合时间;Dil标记UCMSCs,局部注射后检测UCMSCs在创面局部的分布情况。结果分离培养的UCMSCs的形态、表面抗原表达及体外诱导分化能力均符合间充质干细胞特性;经b FGF诱导后可显著提高UCMSCs中成纤维细胞标志物波形蛋白的表达量;局部注射UCMSCs可显著提高烫伤小鼠的创面愈合率,UCMSCs可定植于烫伤创面下。结论 UCMSCs具有较强的成纤维样细胞分化能力,经局部注射后,可通过定植于烫伤创面而显著提高创面愈合率。
2016年10期 v.29 1047-1050+1055页 [查看摘要][在线阅读][下载 385K] [下载次数：285 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 计红;马莉;薛琳琳;李悦;郭景茹;田野;刘艳芝;彭梦玲;甄莉;杨焕民;
目的研究急性冷刺激对大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因表达量的影响。方法取健康大鼠10只,随机分为2组:冷应激组和正常对照组,每组5只。正常对照组饲养环境为24℃,冷应激组大鼠环境温度为4℃,应激时间为12 h。实验后分别取两组大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠组织样品,应用实时荧光定量PCR检测应激前后大鼠四种内脏器官ENO1 m RNA表达量。结果冷应激组肺脏与十二指肠ENO1 m RNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);肾脏与肌肉ENO1 m RNA表达水平显著下降(P<0.05)。结论急性冷刺激可通过影响肺脏、肌肉、肾脏及十二指肠ENO1基因表达调节代谢燃料的选择和应激反应程度。
2016年10期 v.29 1051-1055页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K] [下载次数：296 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 韩志国;高枫;薛娜;樊旭成;
目的对2014年10月~2015年3月乌鲁木齐市流感病原学进行监测分析,以明确乌鲁木齐市2014~2015年流感病原学特征,为流感疫情防控提供科学依据。方法对流感样病例的咽拭子样本进行流感病毒核酸检测,并利用MDCK进行病毒分离,采用血凝试验(HA)进行流感病毒型别的鉴定。结果 2014年10月~2015年3月共检测流感病例咽拭子样本1 334份,核酸检测阳性的有258份,阳性率为19.34%,其中甲型H1N1型1份,H3N2型216份,乙型BY41份。流感高峰在11和12月份,年龄以5~14岁为高发人群。共分离到流感病毒52株,整体分离率为3.76%,其中H3N2型51株,乙型BY1株。结论加强对流感的实时监测及对流感高度易感人群的防护,对我市流感的防控工作具有重要意义。
2016年10期 v.29 1066-1068页 [查看摘要][在线阅读][下载 123K] [下载次数：63 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 孔凡坤;
目的评价2010~2014年新余市疑似预防接种异常反应(Adverse Events Following Immunization,AEFI)监测工作质量,分析其发生特征。方法通过AEFI监测信息系统收集2010~2014年新余市报告的AEFI个案数据,用AEFI的监测指标进行工作质量评价,采用描述性流行病学方法对其发生特征进行分析。结果 2010~2014年新余市报告接种21种疫苗共2 162 948剂,AEFI监测病例195例(男女性别比为1.71∶1),其中一般反应125例,异常反应68例,偶合症2例,无疫苗质量事故、接种事故,无心因性反应发生;报告发生率9.02/10万剂。自2013年后,AEFI明显增加,具有明显的季节性,以7、9月份最高。AEFI监测病例48 h内报告率逐年提高至100%,48 h内调查率、3 d内调查表报告率历年均达100%。结论新余市疫苗安全性和疫苗接种服务质量较高,AEFI监测系统及时性、敏感性高。AEFI监测网络更加完善,监测工作已进入正轨。
2016年10期 v.29 1069-1072页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K] [下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 史新昌;杨靖清;韩春梅;陶磊;饶春明;
目的建立应用N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例的方法。方法利用氨基酸测序仪的摩尔归一化数据,经信号和噪音分离、信号的筛选等数据处理过程,将主肽链N-末端序列数据与其他次要序列数据分开,进而估计主肽链所占比例。将本方法计算结果与质谱结果进行比较,另用混合样品数据进行验证分析。结果本方法所计算结果基本符合实际情况,可较准确地估计主肽链比例。结论初步建立了应用N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例的方法,为相关蛋白的分析和研究提供了辅助。
2016年10期 v.29 1073-1081页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K] [下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 杜丽芳;张晓焕;高华;苏文浩;梁普兆;任秀秀;赵婷婷;卫江波;沈心亮;
目的建立检测Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 2,HSV-2)DNA拷贝的real-time qPCR方法。方法设计靶向HSV-2 g D片段的特异性引物和探针,以HSV-2基因组为模板,建立检测HSV-2 DNA拷贝的real-time qPCR方法,并进行重复性和灵敏度验证。结果 HSV-2 DNA拷贝在1×10~7~1×10~2 copies/ml范围内,线性良好,r~2>99%,灵敏度为1×10~2 copies/ml;不同稀释度参考品检测结果的批间变异系数为1.70%~5.35%,批内变异系数为1.70%~4.8%。结论与常规的以质粒为模板的real-time qPCR方法相比,以HSV-2基因组为模板建立的realtime qPCR方法的灵敏度更高,可用于生殖器疱疹临床诊断的优化。
2016年10期 v.29 1082-1086页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K] [下载次数：439 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 袁菲;于旭博;孔素娟;王晶;王欣茹;吴兵;刘方蕾;谢贵林;
目的建立测定脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物及结合物中唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法,并进行验证。方法以《中国药典》三部(2015版)测定多糖中唾液酸含量的间苯二酚-盐酸法为基础进行改良,去除有机相萃取步骤,优化方法中的检测波长(300~900 nm)及煮沸时间(10、15、20、25、30、35和40 min);并对建立方法的线性范围、中间精密度及准确度进行验证。比较改良法与《中国药典》法对样品唾液酸含量及其层析分部产物中唾液酸含量测定结果的差异,同时检测乳糖对改良法测定唾液酸含量的影响。结果方法中最佳检测波长为569 nm,最佳煮沸时间为30 min。唾液酸对照品浓度在5~40μg/ml范围内与569 nm吸收值呈良好的线性关系,R2均>0.999;3位实验人员在3个不同时间对样品中唾液酸含量测定9次结果的CV均<3%;外加5、10、20μg/ml浓度的N-乙酰神经氨酸的回收率均在95%~105%之间。改良法与《中国药典》法检测的样品唾液酸含量差异无统计学意义(P>0.05),且两种方法的层析分部图谱一致。乳糖溶液浓度超过100μg/ml时对唾液酸测定结果的干扰较大。结论本实验建立的改良唾液酸测定法具有良好的线性、精密度和准确度,可用于脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物和结合物唾液酸含量的测定。
2016年10期 v.29 1087-1093页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K] [下载次数：702 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 蔡峰;马诚;蓝天;陈思;周觉非;赵祥宇;杨溢尧;崔长法;
目的响应面法优化检测己二酸二肼(adipate hydrazine,ADH)衍化后破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)纯度的排阻型高效液相(SEC-HPLC)法。方法 SEC-HPLC层析柱Superdex 200 increase 3.2/300流动相为:20 mmol/L Na_2CO_3/NaHCO_3,150 mmol/L NaCl,pH 9.0,柱温25℃,单针检测时间60 min。采用响应面法及中心复合表面设计模型(Central Composite Face-centred,CCF)对层析柱的流速、进样量、样品浓度进行优化,通过分离度、峰对称性、峰理论塔板数、单针进样时间等评价指标,确定最优色谱参数,并在最优色谱参数下连续进样100针,验证其分离效果。结果色谱柱的最优色谱条件为:流速50μl/min,进样量5μl,样品浓度1.0 mg/ml,连续进样100针各响应量均满足优化目标。结论成功采用响应面法优化了检测ADH衍化后TT纯度的SEC-HPLC法,且优化后的方法具有良好的稳定性。
2016年10期 v.29 1094-1098+1103页 [查看摘要][在线阅读][下载 385K] [下载次数：221 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 孙燕;张香玲;陈军;刘鹏;马超;张生琰;李薇;
目的建立无血清培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株的工艺。方法分别采用VP-SFM和含5%牛血清DMEM于方瓶中培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株,比较无血清培养基培养不同代次Vero细胞间及无血清与含血清培养基培养Vero细胞间制备的狂犬病病毒滴度及效力。将2 g/L微载体cytodex-1加至250 ml spinner flask中,加入Vero细胞,37℃培养3 d,按MOI=0.02接种狂犬病病毒CTN-1V株,检测病毒收获液的病毒滴度及效力,每天显微镜下观察细胞生长情况,计算细胞比生长速率。结果无血清培养基培养不同代次Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度和效力差异无统计学意义(P>0.05);无血清和含血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度差异无统计学意义(P>0.05),但无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒效力明显高于含血清的培养基(P<0.05)。搅拌瓶微载体系统培养Vero细胞制备狂犬病病毒,细胞贴壁均匀,生长良好,收获病毒液的平均病毒滴度为6.50 lg FFU/ml,平均病毒效力为6.77 IU/ml。结论初步建立了微载体系统无血清培养Vero细胞制备狂犬病病毒的工艺,为无血清规模化制备狂犬病疫苗奠定了基础。
2016年10期 v.29 1099-1103页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K] [下载次数：569 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 狄志彪;陈新璐;张强;张盼盼;顾正位;韩春超;董祺;
目的运用响应面分析法对蛹虫草液体发酵培养基进行优化,以提高蛹虫草发酵液中抗肿瘤活性物质的含量。方法以对肝癌细胞抑制率为指标,首先进行单因素试验优选出培养基中最佳氮源及其浓度以及葡萄糖和磷酸二氢钾(KH_2PO_4)最佳浓度;再采用响应面分析法确定关键因素之间的配比。结果蛹虫草最佳液体发酵培养基为:葡萄糖浓度20.22 g/L,蛋白胨浓度17.57 g/L,KH2_PO_4浓度0.92 g/L,硫酸镁浓度0.5g/L,在该条件下,肝癌细胞抑制率为70.121%,与模型预测值(70.938%)相接近。结论运用响应面分析法对蛹虫草液体发酵培养基进行了优化,从根本上提高了各活性物质的产量,对后续蛹虫草抗癌活性的研究具有重要意义。
2016年10期 v.29 1104-1108页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K] [下载次数：339 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 赵荣丽;刘峰;薛千成;潘海龙;吕雪艳;熊慧玲;
目的建立A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的顶空气相色谱测定法,并进行验证。方法采用标准溶液加入法,以10%无水碳酸钠溶液为溶剂制备混合对照品及供试品溶液,采用顶空气相色谱法进行检测,色谱条件为:采用Agilent DB-1毛细管柱(30 m×0.53 mm×5.0μm);柱流速:4 ml/min;载气:氮气,分流比:10:1;程序升温:柱温起始温度为40℃,保持5 min,以10℃/min的升温速率升至200℃,保持2 min;进样口温度:200℃;FID检测器温度:250℃;顶空瓶平衡温度:80℃,平衡时间30 min。对方法的系统适应性、线性范围、重复性、检测限和定量限、准确性进行验证。采用建立的方法检测4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液的乙腈及三乙胺残留量。结果各待测组分理论塔板数不低于5 000,分离度不低于1.5;乙腈和三乙胺的线性方程分别为y=3 730.2 x+1.210 6和y=64 699 x+11.772,r均为0.999 9,线性范围分别为2.002~100.1μg/ml和1.508~75.40μg/ml;同一混合对照品溶液重复检测5次乙腈和三乙胺残留量的RSD值分别为1.34%和3.10%;乙腈和三乙胺检测限分别为0.020 02和0.007 54μg/ml,定量限分别为0.066 72和0.030 16μg/ml;样品高、中、低3个浓度的乙腈和三乙胺平均加样回收率分别为102.60%和101.92%,RSD分别为1.76%和4.12%。4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中均未检出乙腈及三乙胺。结论该方法具有良好的重复性、准确性,可用于A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的检测。
2016年10期 v.29 1109-1112+1120页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K] [下载次数：358 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]