- 周艳;解裕萍;吴晋元;闫姗姗;张磊;李鸿钧;
目的构建靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract-binding protein,PTB)的shRNA慢病毒干扰质粒,并对其进行鉴定。方法根据Gen Bank中登录的PTB的基因序列设计并合成2条靶向MA104细胞PTB基因的shRNA干扰序列(shPTB1、shPTB2)和1条阴性对照序列(shControl),分别插入载体p LVshRNA-EGFP(2A)Puro后,构建慢病毒重组质粒;利用HEK293Ta细胞包装针对PTB基因的shRNA的重组慢病毒颗粒;感染MA104细胞后,经Resl-time PCR、免疫荧光和Western blot法分别检测MA104细胞中PTB基因的转录和蛋白表达水平。结果 PCR及测序鉴定证明3种重组慢病毒质粒构建正确。3种重组慢病毒质粒转染HEK293Ta细胞48 h后,均可见绿色荧光表达,3组细胞的病毒滴度均为2×106 TU/ml。3种重组慢病毒感染MA104细胞48 h后均可见绿色荧光表达。经嘌呤霉素加压筛选后,p LVshPTB1-EGFP-2A和p LVshPTB2-EGFP-2A组MA104细胞仅有少量细胞于细胞核中表达,p LVshPTB1-EGFP-2A组MA104细胞中PTB基因转录及蛋白表达的水平均低于p LVshPTB2-EGFP-2A组。结论成功构建了靶向MA104细胞PTB蛋白的shRNA重组慢病毒,shRNA序列可成功下调PTB在MA104细胞中的表达,为PTB在RV增殖过程中调控作用的研究奠定了基础。
2016年01期 v.29 7-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 960K] [下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘玉杰;张晶;王芳;高新;刘蕴慧;付洁;宋海峰;
目的构建C-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)基因真核表达质粒,表达C-GPC3蛋白,并通过哺乳动物展示型全人源sc Fv抗体库筛选GPC3抗体。方法通过PCR从含有全长GPC3的质粒中扩增C-GPC3基因,将其克隆至p3457-his载体中,构建重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,转染293T细胞,对C-GPC3蛋白的表达进行Western blot鉴定。将质粒p3457-C-GPC3瞬时转染293E细胞,获得C-GPC3蛋白,采用Ni亲和柱纯化后,进行FITC标记。以本课题组构建的哺乳动物展示型全人源sc Fv抗体库为起始文库,FITC-C-GPC3抗原按照10、2和0.8 nmol/L的浓度梯度,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例约为0.1%的阳性细胞。结果重组表达质粒p3457-C-GPC3经菌液PCR和测序鉴定证明构建正确;瞬时转染293T和293E细胞均可表达相对分子质量约为25 000的C-GPC3蛋白;获得了可与C-GPC3结合的阳性率约为0.1%的阳性细胞。结论成功构建了重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,并从哺乳动物展示型全人源sc Fv抗体库中筛选出了阳性细胞,为后期全人源GPC3抗体的构建和表达奠定了基础。
2016年01期 v.29 13-17+22页 [查看摘要][在线阅读][下载 735K] [下载次数：187 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王晓辉;张海浩;俞泽煦;杨舜乔;朱艳菊;白巍;邵聪文;马绍辉;
目的分析引起病毒性脑炎(viral encephalitis,VE)的一株柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV)A9分离株(CVA9)的VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对VE患儿粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1全基因,并测序,采用Mega 6.1和Geneious 5.6.5等软件分析其序列,并构建系统进化树。结果从5份VE患儿粪便中分离到一株人CVA9,命名为A108/YN/CHN/2009,其全长VP1基因的核苷酸长度与其他CVA9一致,均为906 bp。与中国其他分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.4%~98.2%和96.4%~99.3%,而与国外分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.0%~96.0%和92.7%~99.0%。在进化树上与其他中国分离株属同一分支中不同两个亚分支,与JB141230009亲缘关系较近。结论 A108/YN/CHN/2009分离株为肠道病毒CVA9血清型,与其他中国分离株同属一个基因簇。
2016年01期 v.29 18-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 2148K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 丁鹏鹏;马文囡;朱瑞宇;陈蕴;金坚;
目的检测锌指蛋白转录抑制因子14(positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14)5′非翻译区(5′untranslated region,5′UTR)内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的活性。方法 PCR扩增PRDM14 5′UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒p RLPRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5′UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列。将重组质粒p RL-FL/5′UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5′UTR IRES元件的活性。结果 PRDM14 5′UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5′UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性。结论 PRDM14 5′UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础。
2016年01期 v.29 23-27+30页 [查看摘要][在线阅读][下载 559K] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王爽;单元春;杨尧;田鑫;魏雷雷;程涛;曹凤瑞;付思美;
目的分析吉林省首次分离的2B基因型风疹病毒株的基因特征。方法采集病例咽拭子标本,提取核酸,通过Real-time PCR进行风疹初筛,阳性标本接种于淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞(Vero cell transfected to express the human singaling lymphacyte actiration molecule,Vero/SLAM),进行病毒分离,采用RT-PCR法扩增病毒分离物的E1基因目的片段,并对扩增产物进行序列测定及分析。结果 4份咽拭子标本经Real-time PCR鉴定均为阳性,病毒分离获得2株风疹病毒株,序列测定分析结果均为2B基因型,氨基酸和核苷酸序列同源性均为100%。与全国近年流行的2B基因型比较,处于一个相对独立的分支。结论吉林省自2008年开展风疹病毒病原学监测以来,首次监测到2B基因型风疹野病毒,丰富了吉林省风疹病毒基因库。
2016年01期 v.29 28-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 562K] [下载次数：90 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 邓欣;李森;关超;王洋;刘玲玲;韩颖;李亘松;曹宇;于秉治;张国利;
目的探讨人促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力。方法取外科手术收集的50份喉鳞癌及20份癌旁组织标本,采用Western blot法检测LHRH受体的表达,免疫荧光分析法检测LHRH受体的亚细胞定位,ELISA法检测HEp-2细胞膜表面LHRH受体与LHRH-PE40的亲和力。结果 LHRH受体在喉癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(P<0.001);LHRH受体在喉癌组织中定位于细胞膜和细胞质,而在癌旁组织中定位于整个腺体周边;LHRH受体在HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的结合显示出线性和饱和性,且可被LHRH直接特异性抑制。结论 LHRH受体在喉癌组织中的过度表达及其在喉癌细胞表面与LHRH-PE40的高亲和力表明,其可能是LHRH-PE40的一个潜在的治疗靶点。
2016年01期 v.29 31-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 835K] [下载次数：177 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 陆红梅;沈金花;陈文花;朱祺;顾士康;
目的对上海市松江区健康人群麻疹、风疹、流行性腮腺炎抗体水平进行监测,为控制相应疾病,完善免疫策略提供依据。方法采用多阶段抽样法,在松江区15个镇/街道中随机抽取泗泾镇和新浜镇2个镇作为监测现场,采用分层随机抽样法,在被抽中的泗泾镇及新浜镇的本市和外来户籍人群中随机抽取8月龄~40岁共9个年龄组的健康人群作为免疫水平监测对象,依据知情同意的原则,共抽取360人静脉血各3 ml,采用ELISA试剂盒定量检测麻疹、风疹和腮腺炎Ig G抗体水平,同时开展含麻疹成份疫苗(measles-containing vaccine,MCV)免疫史的调查。结果 360名监测对象中,不同户籍、男女构成及各年龄组的人数差异均无统计学意义(P>0.05)。麻疹、腮腺炎、风疹抗体阳性率分别为96.94%、86.39%和93.61%,抗体几何平均浓度(geometric mean concentration,GMC)分别为1 152.23 m IU/ml及375.36和157.23 IU/ml。本市及外来户籍人群的麻疹、腮腺炎、风疹疫苗免疫史及抗体水平间差异均无统计学意义(P均>0.05)。各年龄组的麻疹保护性抗体阳性率及腮腺炎和风疹的抗体阳性率差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论上海现行的麻疹腮腺炎风疹联合减毒活疫苗(MMR)免疫程序有效、合理,既有助于消除麻疹,又有利于控制腮腺炎、风疹发病;拟对成年人群的不同对象开展MMR的补充免疫活动,以提高人群免疫力,减少相关疾病的发病。
2016年01期 v.29 51-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K] [下载次数：262 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：34 ] |[阅读次数：0 ] - 王睿;卜范峰;田欣欣;唐鲁豫;李雅文;李娜;
目的了解山东地区女性人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染状况以及23种亚型分布特征、多重感染情况、在不同年龄组的分布差异。方法利用反向点杂交技术,对2013年1月至2014年11月山东省内13 973份门诊女性宫颈脱落细胞样本进行HPV分型检测,分析HPV感染亚型、多重感染情况及年龄分布差异。结果13 973份样本中,共检测出阳性样本4 105份,总检出率29.38%,23种亚型型别均有感染。单一型别感染2 513份,占阳性样本的61.25%,其中高危型感染1 815份,占阳性样本的44.21%,低危型感染698份,占阳性样本的17.00%;高危型感染最常见型别依次为16、52、58、56、53、66、18、68,低危型感染最常见型别依次为6、11、81、43、42。多重感染为1 592份,占阳性样本的38.75%,高低危混合感染占55.84%,纯高危型感染占39.20%;随着合并感染的型别数增加,比例逐渐下降。小于30岁人群有较高感染率,之后随年龄增长感染率呈下降趋势,而大于50岁年龄组,感染率又有所增加。结论山东地区女性HPV感染以单重感染为主,且高危型感染占优势;高危型感染以16型为主,低危型感染以6型为主。
2016年01期 v.29 57-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K] [下载次数：165 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：22 ] |[阅读次数：0 ]
- 刘朝阳;周欣;王石磊;吕浩;孟佳帆;马雷钧;程鹏飞;
目的验证四价流感病毒裂解疫苗[quadrivalent influenza vaccines(split virion)inactivated,QIV]血凝素含量检测方法的可行性。方法采用传统的单向免疫扩散法(single-radial immunodiffusion,SRID)检测QIVH1N1和H3N2型的血凝素含量,双价抗原参考品SRID法检测两种B型(包括B/Yam和B/Vic)血凝素含量,并对该检测方法进行准确度、精密度、专属性及线性验证。结果 QIV各型的血凝素含量总体回收率为97.8%~107.6%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.59%~1.83%;试验间和试验内RSD均<5.0%;4个型别血凝素含量在10~50μg/ml范围时,标准曲线呈良好的线性,R2均大于0.980 0,定量限分别为:H1N1:4.53μg/ml,H3N2:3.83μg/ml,B/Yam:2.89μg/ml,B/Vic:5.60μg/ml;各型别流感裂解疫苗供试品和抗原参考品与对应抗血清参考品出现沉淀环,与非对应抗血清参考品不出现沉淀环。结论 QIV血凝素含量检测法是可行的。
2016年01期 v.29 61-64+69页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K] [下载次数：474 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李茂中;庞立丽;王宏;金玉;段招军;
目的分离人气管上皮细胞,并进行气液界面(air-liquid interface,ALI)培养,为呼吸道病毒研究提供良好的细胞模型。方法采用低温消化法分离人气管上皮细胞,用预包被胶原的0.4μm Transwell培养皿对传代后的气管上皮细胞进行ALI培养。利用倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫细胞化学染色和免疫组化鉴定培养细胞的生长和分化情况,同时测定细胞分化过程中的跨上皮电阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)。结果分离培养的气管上皮细胞光镜下细胞形态及免疫荧光角蛋白染色阳性,证实培养细胞为气管上皮细胞。ALI培养后的人气管上皮细胞的形态学、MUC5AC蛋白、Ⅳ型β-微管蛋白(β-tubulinⅣ)的表达及紧密连接和假复层的形成情况均与人气管组织结构类似。结论低温消化法可成功分离到活性高的上皮细胞。ALI培养的上皮细胞形态和功能与体内接近,且能较长时间维持其正常形态及功能,为呼吸道相关疾病的研究提供了理想的平台。
2016年01期 v.29 65-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 912K] [下载次数：807 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 曹增国;王化磊;李岭;金宏丽;王丽娜;冯娜;郑学星;赵国星;李倩;闫飞虎;赵永坤;王铁成;高玉伟;杨松涛;夏咸柱;
目的建立及验证西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)抗体间接ELISA检测方法,并用于评价疫苗的免疫效果。方法以纯化后的WNV E蛋白第三结构域(EDⅢ)蛋白作为包被抗原,建立WNV抗体间接ELISA检测方法,对抗原包被浓度(2.5、5、10、20、40、80μg/ml)、血清稀释度(1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320)、抗原封闭时间(0.5、1、1.5、2 h)、血清孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)、HRP标记的山羊抗马Ig G稀释倍数(1:5 000、1:10 000、1:20 000、1:40 000、1:80 000稀释)及其孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)进行优化,并验证该方法的特异性、敏感性及精密性。采用建立的方法检测WNV阴性马血清和病毒样颗粒(WNV-VLPs)疫苗免疫的马血清,与ALPHA公司试剂盒的检测结果进行比较。结果间接ELISA法最佳检测条件为:抗原包被浓度为20μg/ml,4℃包被过夜;Blocking ACE封闭液于37℃封闭1.5 h;加入血清(1:80稀释),37℃孵育1.5 h;加入HRP标记的山羊抗马Ig G(1:20 000稀释),37℃孵育1 h。该方法可特异性检测WNV阳性血清中的WNVE-Ig G抗体;阳性血清稀释至1:2 560时,检测结果仍为阳性;批内和批间的变异系数(CV)均小于7%。25份WNV阴性马血清检测结果均为WNVE-Ig G抗体阴性,经WNV-VLPs疫苗免疫的马血清中的WNVE-Ig G抗体效价水平随免疫次数的增加呈递增趋势,间接ELISA法与ALPHA公司试剂盒的检测结果完全一致。结论成功建立了WNV抗体间接ELISA检测方法,可用于疫苗免疫效果的评价,为开展WNV流行病学调查、诊断及新型疫苗的研发奠定了基础。
2016年01期 v.29 70-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K] [下载次数：308 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 王革;马超;刘晓凡;李薇;刘鹏;魏然;
目的分析转染siat7e基因的MDCK细胞(MDCK-siat7e)的悬浮特性,并建立相关质控方法。方法将MDCKsiat7e细胞接种无血清培养基BD001,37℃,130 r/min振摇培养11 d,显微镜观察不同培养时间细胞形态,并检测细胞生长浓度、活力及代谢状况。提取MDCK-siat7e细胞的m RNA,采用RT-PCR法扩增siat7e基因片段并测序。通过Real time PCR法检测不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e细胞siat7e基因的表达量。结果 MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中呈悬浮生长状态,细胞接种培养初期生长较慢,但活力较好;然后细胞生长经停滞期进入生长期,细胞生长加快且活力大于98%,细胞浓度达峰点后生长进入平台期;培养后期细胞浓度降低且活力下降。原代与传代细胞siat7e基因序列测定结果与Gen Bank公布的ST6Gal Nac V序列(AJ507292.1)一致。MDCK-siat7e细胞传至30代,仍可表达siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK细胞基因组中,并随MDCK细胞传代持续地转录和表达。结论本实验对siat7e基因的定性及表达量的分析可用于MDCK-siat7e细胞悬浮性的检测,为其作为疫苗用细胞基质的质量监控提供了依据。
2016年01期 v.29 75-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 632K] [下载次数：287 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 孙丽娟;许微微;张坤;郭骐源;刘旭光;杨松涛;王铁成;黄耕;高玉伟;夏咸柱;张雪梅;
目的建立H5N1禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并检测H5N1 AIV感染前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。方法提取豚鼠肺脏组织RNA,反转录合成cDNA,将cDNA模板按10倍系列稀释为9个浓度(1.00 E+10~1.00 E+02 copies/μl),进行PCR扩增。以β-actin为内参,建立标准曲线,比较两基因的扩增效率,验证该方法的引物特异性、重复性及灵敏度。同时用该方法检测H5N1 AIV攻毒前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。结果 c DNA模板最佳稀释度范围为1.00 E+09~1.00 E+04。豚鼠MAVS和β-actin基因的标准曲线斜率差值<0.1,R~2=0.999,扩增效率分别为100.2%和100.3%;两基因扩增溶解曲线峰单一,可扩增出清晰的目的条带,且无非特异性扩增;两基因Ct值的变异系数(CV)均<10%;灵敏度为1.00 E+03 copies/μl。感染H5N1 AIV的豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平下调。结论成功建立了H5N1 AIV感染豚鼠体内MAVS的SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并发现H5N1 AIV感染可导致豚鼠体内MAVS表达水平下调。
2016年01期 v.29 79-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 955K] [下载次数：469 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张晓杰;李荣贞;郑霞;
目的建立顶空气相色谱法测定血液制品中乙醇残留量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:Rtx-1301(30 m×0.53 mm×3μm);气化室温度:220℃;柱温:90℃;检测器温度:250℃;载气为氮气,柱流速:2.5 ml/min;氢气流速:40 ml/min;分流比:2∶1;顶空85℃平衡30 min,运行时间:5 min。确定标准曲线的线性范围,并对方法进行重复性、稳定性、准确性、检出限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantitation,LOQ)验证。应用建立的方法测定14批人血白蛋白、静注人免疫球蛋白(p H 4)样品的乙醇残留量。结果该方法色谱峰形良好,峰单一且无其他干扰。标准曲线的线性范围为1.064~21.280μg/ml;同一人血白蛋白样品重复检测6次乙醇残留量的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.34%;人血白蛋白样品于4℃放置0、4、8、12、16、20 h,乙醇残留量检测结果的RSD为2.64%;样品的平均加标回收率及RSD分别为(99.58±1.19)%和1.40%;LOD和LOQ分别为0.266和0.532μg/ml。14批样品的乙醇残留量最高为3号人血白蛋白半成品(0.004 4%),均远低于《中国药典》三部(2010版)的半成品限量要求(0.025%)。结论顶空气相色谱法操作简便,重复性、稳定性、准确性良好,可用于血液制品中乙醇残留量的检测。
2016年01期 v.29 84-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 473K] [下载次数：310 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 唐浩;张飞伟;刘晓凤;胡慧琼;杨国友;秦敏;
目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量,并对该方法进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:Agilent SB 300 C18色谱柱(规格:4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:纯化水与甲醇的体积比为20﹕80;检测波长:225 nm;色谱柱温:30℃;流速:0.8 ml/min;进样量:10μl。对方法的系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性及定量限进行验证,并用建立的方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量。结果该方法检测6份10μg/ml Triton X-100的理论塔板数在1 550~1 580之间,Triton X-100峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和无细胞百日咳纯化抗原样品中,Triton X-100能与其他物质完全分离;在2~30μg/ml范围内,Triton X-100浓度与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 01);该方法检测不同浓度Triton X-100样品的加标回收率均在98%~102%之间,RSD均不超过2%;同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日用该方法检测供试品中Triton X-100含量的RSD均小于4%;改变流动相的甲醇比例和柱温后,6次检测值的RSD分别为0.95%和0.51%;定量限可达0.5μg/ml。该方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量均较低。结论建立的HPLC法系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性良好,可用于无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量的定量检测。
2016年01期 v.29 89-92+97页 [查看摘要][在线阅读][下载 286K] [下载次数：307 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 郑允权;郭养浩;李红丽;邱明;石贤爱;
目的制备鱼蛋白胨,并进行质量分析。方法将鱼糜加工下脚料原料经绞碎、石油醚脱脂,得到鱼糜浆,用0.1%木瓜蛋白酶酶解,离心收集上清(即鱼水解蛋白胨溶液),经300 Da纳滤膜脱盐和浓缩,喷雾干燥后,获得淡黄色粉末,即鱼蛋白胨样品FZU01。对鱼蛋白胨FZU01和鱼粉蛋白的主要理化指标(澄明度、亚硝酸盐和碱性沉淀、酸碱度、含氮量、氨基氮、干燥失重、炽灼残渣)进行检测;在固定酵母提取物、Na Cl浓度、初始p H和接种量的基础上,分别用两种蛋白胨配制LB培养基,接种大肠埃希菌,检测A600值;采用分子筛高效液相色谱法(size-exclusion highperformance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测两种蛋白胨的相对分子质量。分别将50、150、300、600、900、1 200和1 500 mg/L组胺以及0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0和50.0 mg/L重金属离子(Hg2+、Cd2+、As3+、Cr6+和Pb2+)加至大肠埃希菌中,37℃培养12 h,检测A600值。结果两种蛋白胨理化指标检测结果均符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准》规定,酸碱度、含氮量、氨基氮、干燥失重和炽灼残渣之间差异无统计学意义(P>0.05),鱼蛋白胨FZU01相对分子质量主要分布在1 000以内,占92.5%,鱼粉蛋白胨相对分子质量主要分布在10 000,小于1 000占56.1%;与鱼粉蛋白胨组相比,鱼蛋白胨FZU01组生长速率明显增加(P<0.05)。随着组胺浓度的增加,大肠埃希菌的生长抑制率逐渐增加,与组胺浓度呈正相关,IC50为257.3 mg/L,当组胺浓度大于600 mg/L时,完全抑制大肠埃希菌的生长;大肠埃希菌的生长抑制率与重金属离子浓度呈正相关,Hg~(2+)、Cd~(2+)、As~(3+)、Cr~(6+)和Pb~(2+)对大肠埃希菌的IC50分别为1.35、4.67、7.37、11.04和20.19 mg/L。结论应增加蛋白质相对分子质量、组胺和重金属作为蛋白胨产品重要质量参数,控制一定的浓度限量范围,才能保证蛋白胨产品的稳定性和安全性。
2016年01期 v.29 93-97页 [查看摘要][在线阅读][下载 339K] [下载次数：550 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ]