- 李小姣;秦婷婷;杨春;刘瑞熙;杨硕;刘兰军;刘波;武志强;
目的探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)糖蛋白B(glycoprotein B,g B)中AD2位点Ⅰ(AD-2S1)在小鼠中的免疫效果。方法将AD-2和4×AD-2S1核酸序列分别克隆至含有鞭毛蛋白的质粒p ET42b-Flj B中,构建表达载体p ET/Flj B-AD-2和p ET/Flj B-4×AD-2S1,转化大肠埃希菌Rosetta 2(DE3),IPTG诱导表达,收集Flj B-AD-2的菌体裂解液上清及Flj B-4×AD-2S1的菌体裂解液沉淀,经Superdex-200凝胶过滤层析纯化,根据蛋白含量及纯度配制无佐剂抗原(Flj B-AD-2和Flj B-4×AD-2S1)及含Al(OH)3佐剂抗原[Flj B-AD-2+Al(OH)3和Flj B-4×AD-2S1+Al(OH)3]。用制备的抗原于第0和21 d皮下免疫BALB/c小鼠,设PBS对照组,于2次免疫后1周,眼窝后穿刺采血,分离血清,ELISA法检测AD-2S1特异性Ig G及Ig G1和Ig G2a水平,中和试验检测HCMV中和抗体水平。结果纯化的Flj B-AD-2抗原相对分子质量约54 000,纯度为88.2%,蛋白含量为0.91 mg/ml;纯化的Flj B-4×AD-2S1抗原相对分子质量约50 000,纯度为96.8%,蛋白含量为0.45 mg/ml。与对照组相比,免疫组小鼠均产生不同水平的抗AD-2S1特异性Ig G抗体,Flj B-AD-2和Flj B-AD-2+Al(OH)3免疫组小鼠Ig G水平较低,Flj B-4×AD-2S1和Flj B-4×AD-2S1+Al(OH)3免疫组小鼠Ig G水平较高,其中Flj B-4×AD-2S1与Flj B-AD-2免疫组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Flj B-4×AD-2S1可诱导小鼠产生Ig G1和Ig G2a两种抗体,但Ig G2a水平较高,差异有统计学意义(P<0.05),而Flj B-4×AD-2S1+Al(OH)3诱导小鼠产生的Ig G1和Ig G2a水平差异无统计学意义(P>0.05);各免疫组小鼠血清中和抗体水平均不高于1∶4。结论 Flj B-4×AD-2S1和Flj B-AD-2均能诱导产生AD-2S1特异性Ig G,却不能诱导小鼠产生补体非依赖性中和抗体。
2015年05期 v.28 451-455页 [查看摘要][在线阅读][下载 408K] [下载次数：61 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 吴凯;樊会兰;赵志宏;周燕美;金栋;白梅;包南艳;陈瑾;李生迪;
目的比较以白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)为载体蛋白,分别与伤寒Vi多糖(typhoid Vi polysaccharide,STVi)偶联的结合物的理化特性、抗原性及免疫效应。方法分别以DT、r EPA为载体蛋白,以己二酰肼(adipyl dihydrazide,ADH)为连接剂,使Vi多糖与载体蛋白共价偶联制备多糖蛋白结合物STVi-DT和STVi-r EPA,检测其理化特性指标、抗原性,再将其于0、14、28 d免疫NIH小鼠,经眼眶采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平,分析其免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性。结果 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性指标相似。STVi-DT针对STVi、DT抗血清均具有明显抗原性,而针对r EPA抗血清无抗原性,STVi-r EPA针对STVi、r EPA抗血清均具有明显抗原性,而针对DT抗血清无抗原性。Vi多糖和Vi多糖蛋白结合物均具有动物免疫原性,STVi蛋白结合物较STVi具有更强的免疫原性,STVi-DT的动物免疫原性试验结果略优于STVi-r EPA;免疫2剂STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT明显升高,且STViDT组明显高于STVi-r EPA组(P<0.05),具有较强的免疫记忆效应;免疫STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT随免疫剂次增加和时间延长持续升高,直至稳定在一定水平,免疫持久性较好。结论 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性相似,均具有显著的免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性,而STVi-DT免疫原性、免疫记忆效应更强。
2015年05期 v.28 456-460页 [查看摘要][在线阅读][下载 303K] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 牛莹莹;刘传志;李艳红;陈元安;杨惠宇;武成;于源华;
目的原核表达醛酮还原酶AKR1C3基因,并探讨其生物学活性。方法经人工合成醛酮还原酶AKR1C3基因,克隆至质粒p ET-15b中,构建重组表达质粒p ET-15b-AKR1C3,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析镍柱纯化。采用荧光分光法检测酶活性,确定AKR1C3的最适底物,并检测金属离子对酶活的影响。用纯化蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,ELISA法检测动物血清中抗体水平,并对免疫后的兔进行血常规和生化检验,对兔和小鼠进行病理学检查。采用MTT法进行细胞毒理试验。结果重组质粒p ET-15b-AKR1C3经双酶切及PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约36 000,可溶性蛋白占菌体总蛋白的27%,纯化后纯度达95%以上。睾丸酮为AKR1C3最适底物,酶活为100.086 U;金属离子Cu2+、K+可提高AKR1C3酶活;小鼠血清中最高效价为5×104,兔血清中最高效价为6.25×104。AKR1C3对动物肝、肾等器官均有损害。AKR1C3对癌细胞生长抑制作用低于正常细胞。结论醛酮还原酶AKR1C3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,并获得高纯度、高活性的酶,对细胞生长有抑制作用,对动物肝、肾等器官均有损害,为诊断及治疗多种癌症提供实验依据。
2015年05期 v.28 461-467页 [查看摘要][在线阅读][下载 1140K] [下载次数：395 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 张皓淳;宋立先;万红霞;马鸣潇;曲祖乙;费东亮;钟义;
目的原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1(wt VP1)基因进行优化(opti VP1),将基因wt VP1和opti VP1分别克隆至p GEX-6P-1原核表达系统,构建原核表达质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1,分别转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并对诱导温度、IPTG终浓度及诱导时间进行优化,诱导蛋白经Western blot鉴定;重组蛋白经GSH-琼脂糖凝胶层析纯化;分别用PBS、纯化的GST标签蛋白、纯化的重组蛋白及CSBV纯化病毒免疫小鼠,经间接ELISA法检验各组小鼠的血清抗体效价。结果优化后的VP1基因序列降低了密码子影响指数,提高了密码子适应指数;质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1经鉴定证明构建正确;最佳诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,30℃,220 r/min诱导8 h;诱导表达蛋白占菌体总蛋白百分比由wt VP1菌株(5.49±0.30)%提高至opti VP1菌株(59.7±0.51)%,纯化后纯度可达0.5 mg/ml;兔抗GST标签抗体及兔抗CSBV血清均与优化后的重组蛋白发生特异性反应;重组蛋白组小鼠二免后可产生较高水平抗体,明显高于PBS组和GST标签蛋白组(P<0.05)。结论通过密码子优化实现了CSBV结构基因VP1的高效表达,表达蛋白可诱导小鼠机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性,为探讨CSBV感染的分子发病机制和制备抗CSBV病毒的多克隆抗体奠定了基础。
2015年05期 v.28 468-474页 [查看摘要][在线阅读][下载 2116K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 李萍;孙静;王陈芸;李彦涵;李建芳;乌美妮;王海漩;余柄廷;胡凝珠;胡云章;
目的探讨壳寡糖(chitooligosaccharide,COS)佐剂对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗Hep A-l 18 EU+不同剂量COS(100μg、500μg、1 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg)组、阴性对照组(生理盐水)、抗原对照组(Hep A-l 18 EU)和铝佐剂对照组[Hep A-l18 EU+Al(OH)3200μg],每组6只,各组均经皮下注射ICR小鼠,200μl/只。于免疫后的第4、8、12和16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV特异性Ig G抗体水平。在实验期间,观察小鼠的健康状况,并于免疫16周后,取COS最佳剂量组及阴性对照组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织,制备病理切片,进行对比观察。结果除阴性对照组外,各组小鼠免疫4周后均产生抗-HAV Ig G抗体,并随着时间的延长呈上升趋势,在第8周时均达峰值,随后逐渐下降;COS 2.5 mg、5 mg和10 mg组小鼠血清在各时期的抗体水平均显著高于抗原对照组和铝佐剂对照组(P<0.05),且能维持较长时间,至16周抗体水平仍与铝佐剂对照组相当,差异无统计学意义(P>0.05),其中COS5 mg组在整个试验过程中产生的抗体水平均最高,且与2.5 mg组峰值水平差异有统计学意义(P<0.05),与10 mg组水平相当,至免疫后16周,COS 5 mg组与10 mg组抗体水平差异有统计学意义(P<0.05)。COS最佳剂量为5 mg/只。试验期内,观察小鼠各项生理指标未见异常,COS 5 mg组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织均未观察到病变。结论 COS可显著增强HAV疫苗诱导小鼠的体液免疫应答,有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂。
2015年05期 v.28 475-478页 [查看摘要][在线阅读][下载 1076K] [下载次数：263 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 陈玉秋;何建东;范荣坤;吴凯;樊会兰;钱雯;王铭;郑鑫;陈南萍;张梦霏;黄镇;
目的用不同活化剂进行22F型肺炎球菌荚膜多糖(type 22F streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide)的活化,并探讨其多糖蛋白结合物的免疫原性。方法分别用溴化氰(cyanogen bromide,CNBr)和1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)作为22F型肺炎球菌荚膜多糖的活化剂,1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)作为链接剂,制备22F型肺炎荚膜多糖衍生物(3批Pn22FpsADH1和3批Pn22Fps-ADH2);在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的作用下,将衍生物与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)共价结合,经凝胶过滤柱层析纯化,得到22F型肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合物(3批Pn22Fps-TT1和3批Pn22Fps-TT2);并对其生化指标、血清学特异性、免疫原性及异常毒性进行检测。结果衍生物Pn22Fps-ADH2的衍生率及回收率均略高于Pn22Fps-ADH1;结合物Pn22Fps-TT2的生化指标检测结果相对Pn22Fps-TT1较好;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均可与22F型肺炎球菌诊断血清特异性结合;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均具有良好的免疫原性;无异常毒性。结论 CNBr和CDAP均可作为22F型肺炎球菌荚膜多糖活化剂,经活化和结合反应,其抗原位点得到较好保留,但CDAP作为结合疫苗多糖的活化试剂效果更佳。
2015年05期 v.28 479-482+487页 [查看摘要][在线阅读][下载 341K] [下载次数：550 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 王长远;全越;许凤;张敏;
目的分析pH处理对米糠蛋白理化特性及结构的影响。方法制备米糠蛋白,经不同pH值的缓冲液处理后,分别采用福林酚法、ANS荧光探针法、DNTB法、荧光光谱法、SDS-PAGE法检测米糠蛋白的溶解性、表面疏水性、游离巯基含量、蛋白质三级结构和亚基组成。结果 pH为4、6时,米糠蛋白的溶解性最低;而pH<4和pH>6时,米糠蛋白的溶解性均有不同程度的升高,且在碱性条件下,米糠蛋白的溶解性比在酸性环境中更好。米糠蛋白的溶解性与表面疏水性、游离巯基含量呈正相关。pH处理对米糠蛋白的荧光光谱有一定影响,使其微环境发生了变化。在酸性环境中,米糠蛋白的亚基组成有明显变化,高相对分子质量的亚基解聚为低相对分子质量的亚基;而中性及碱性环境对米糠蛋白的亚基组成无影响。结论本实验分析了pH处理对米糠蛋白溶解性、表面疏水性、游离巯基、荧光光谱和亚基组成的影响,为米糠蛋白在食品工业中的应用提供了参考。
2015年05期 v.28 483-487页 [查看摘要][在线阅读][下载 449K] [下载次数：432 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 于文静;鞠吉雨;初金鑫;张金宝;连波;杜长青;赵春玲;
目的原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶c DNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3′RACE和5′RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶c DNA序列的3′端和5′端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体p ET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性。结果经3′端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因c DNA 3′端序列,再经5′RACE技术扩增获得约770 bp的c DNA 5′端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶c DNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30%,上清纯化后纯度可达95%;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用。结论原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据。
2015年05期 v.28 488-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 949K] [下载次数：198 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 杨臣臣;毕艳红;曾韦锟;井申荣;黄芬;
目的构建信号调节蛋白-α(signal regulatory protein-α,SIRP-α)基因真核表达质粒,并于A549细胞中进行表达。方法提取Hep G2细胞总RNA,RT-PCR扩增SIRP-α基因片段,克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)-EGFP中,构建真核表达质粒pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP。将重组表达质粒转染A549细胞,转染24 h后,荧光显微镜下观察转染情况;转染48 h后,RT-PCR检测SIRP-α基因的转录水平;转染72 h后,Western blot法检测SIRP-α蛋白的表达。结果经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP构建正确;转染pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP的A549细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光;RT-PCR检测结果可见243 bp目的条带,Western blot检测显示SIRP-α存在。结论成功构建了真核表达质粒pc DNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP,并于A549细胞中有效表达,为进一步研究SIRP-α与肺癌的相关性奠定了基础。
2015年05期 v.28 493-496页 [查看摘要][在线阅读][下载 395K] [下载次数：102 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李冀;杨慧;唐蕊华;李晶;李琦;邵燕;呼延霆;黄庆生;师俊玲;
目的原核表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)转肽酶区,并进行纯化及鉴定。方法 PCR扩增编码PBP2a转肽酶区的mec Af基因片段,克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-6p-mec Af,经双酶切(Bam HⅠ和Eco RⅠ)及测序鉴定正确后,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21进行诱导表达;经蛋白亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组表达质粒p GEX-6p-mec Af经双酶切(Bam HⅠ和Eco RⅠ)及测序鉴定证明构建正确;表达产物的相对分子质量约63 000,表达量约占菌体总蛋白的14.5%,纯化后纯度达90%。结论成功构建了PBP2a转肽酶区的原核表达质粒,目的蛋白在E.coli中获得高效表达,为制备单克隆抗体及建立MRSA快速检测方法奠定了基础。
2015年05期 v.28 497-500页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K] [下载次数：203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 王春娥;石继春;王珊珊;陈翠萍;叶强;
目的探讨以荧光酶联免疫竞争抑制法(简称Uni CAP法)代替放射性吸附抑制试验(radioallergosorbent test,RAST)测定螨变应原点刺制品生物活性的可行性。方法分别将螨变应原皮肤点刺制品中屋尘螨、粉尘螨点刺液及相应参考品进行系列稀释后,分别与等体积尘螨阳性血清混合,并设阴性对照及100%抑制对照。分别采用γ放射免疫计数器(RAST法)和Immuno CAP 100E全自动过敏原分析仪(Uni CAP法)测定特异性Ig E(s Ig E)浓度,计算点刺样品的生物活性。结果采用Uni CAP法测定结果的RSD值均低于20%。粉尘螨点刺液用两种方法测定的结果基本一致,而屋尘螨点刺液的结果相差较大,但均在标准范围内。结论以Uni CAP法替代RAST法测定点刺液活性具有可行性,可缩短制品的检验时限,并减少了对操作人员及环境的危害。
2015年05期 v.28 514-517页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 段盼盼;杨帆;耿兴良;龙云凤;郭琦;龙艺;王明清;廖国阳;李卫东;
目的通过试验设计(design of experiments,DOE)方法和统计学分析快速优化Vero细胞无血清培养基。方法以DMEM/F12为基础培养基,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验考察7种添加物胰岛素、人转铁蛋白、透明质酸、牛血清白蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子和高密度脂蛋白对Vero细胞生长的影响,以CCK-8测定的吸光度值(A490)为响应值,优化Vero细胞无血清培养基。用最优化的因子浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞,对优化结果进行验证。结果通过Plackett-Burman试验筛选出胰岛素、牛血清白蛋白和人转铁蛋白对Vero细胞生长影响较大;采用最陡爬坡试验和Box-Behnken试验进一步优化,Design-Expert 8.06软件进行回归分析,得到胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白的最佳浓度分别为5.625μg/ml、14.034μg/ml和3.92 mg/ml,在此优化条件下的A490值为2.3,较基础培养基提高了3.41倍。用最优的胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞的A490值为2.148,为预测值的93.4%,符合度较高。结论应用DOE方法快速高效地优化了Vero细胞无血清培养基,为无血清培养基的研制奠定了基础。
2015年05期 v.28 518-522页 [查看摘要][在线阅读][下载 477K] [下载次数：723 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 薛建华;黄雪怡;徐水清;
目的建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数。方法以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线。提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线,再根据10 ng CHO基因组中含有的单拷贝基因的数量,分别计算得到抗体的轻链和重链基因在CHO细胞中的拷贝数。结果分别建立了抗体轻链和重链基因的拷贝数标准曲线,标准曲线的相关系数均在0.99以上,PCR扩增效率分别为91.6%和91.8%,具有良好的特异性。随着细胞培养代次的增加,轻链基因和重链基因的拷贝数均出现降低的现象。结论成功建立了实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻链和重链基因的拷贝数,可用于外源抗体基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究,也为高表达细胞株的获得提供了一种检测方法。
2015年05期 v.28 523-527页 [查看摘要][在线阅读][下载 917K] [下载次数：563 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 孙振鹏;孙燕;范秀娟;王名强;包红;李薇;
目的利用Vero细胞生物反应器微载体培养技术规模化培养轮状病毒重配株LH9(G4型)。方法用3 L生物反应器,以4 g/L载体浓度培养Vero细胞,待细胞浓度达1.8×106个/ml时,分别用含2、1、0.75、0μg/ml胰酶的DMEM培养液,35℃连续培养21 d,观察细胞生长状态。分别按0.5、0.1、0.05、0.01 MOI接种轮状病毒重配株LH9(G4),培养过程中每日取样,检测病毒滴度以及葡萄糖、乳酸含量。根据培养过程中葡萄糖、乳酸含量的变化,确定病毒培养过程中的收获时间,优化培养工艺。结果在反应器中用含不同浓度胰酶的DMEM培养Vero细胞,细胞形态良好,与不含胰酶的DMEM培养液培养的细胞无明显差异;按0.05 MOI接种后的病毒收获液滴度较高,可达7.0 lg CCID50/ml,且持续时间较长;通过对病毒培养液中葡萄糖、乳酸含量的监测,调整了培养过程中的收获时间,收获次数增加至4次,可收获病毒液4个工作体积,病毒高峰滴度可达8.5 lg CCID50/ml。结论采用生物反应器微载体系统培养轮状病毒重配株LH9(G4),可显著提高病毒滴度,通过对培养过程的优化,增加了病毒收获量,为进一步规模化生产轮状病毒疫苗奠定了基础。
2015年05期 v.28 528-530+535页 [查看摘要][在线阅读][下载 716K] [下载次数：256 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 宗向坤;朱卫华;赵一洋;杜琳;
目的探讨核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)法在福氏宋内双价痢疾多糖结合疫苗生产工艺中的应用。方法利用Agilent 600 MHz核磁共振仪分别对福氏2a痢疾多糖和宋内痢疾多糖重复结构单元进行1H NMR和13C NMR质量分析,并对生产工艺中的多糖、多糖衍生物及多糖结合物重复结构单元进行了1H NMR结构解析和对比。结果多糖的1H NMR和13C NMR数据及图谱与文献高度一致;结合工艺中各步多糖的1H NMR分析证实了双价痢疾多糖结合工艺的反应机理。结论在双价痢疾多糖结合疫苗的研发过程中,NMR法可直接地检测多糖化学结构,对原料多糖及整个衍生过程中多糖的结构及修饰程度实施质控。
2015年05期 v.28 531-535页 [查看摘要][在线阅读][下载 1150K] [下载次数：316 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 施雨露;孙成艳;张贯石;聂彩霞;潘润泽;付勤;刘永茂;
目的建立乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)蛋白的纯化方法。方法采用新鲜的乳腺癌组织制备匀浆液,经60%饱和硫酸铵盐析沉淀法进行乳腺癌组织蛋白的粗提;再通过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和两次Sephacryl S-200分子筛层析进一步纯化HER2蛋白;纯化蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果纯化后HER2蛋白相对分子质量为185 000;HER2蛋白可与兔抗人HER2多克隆抗体发生特异性结合。结论建立的纯化方法获得了具有免疫学活性的HER2蛋白,为HER2单克隆抗体的制备奠定了基础。
2015年05期 v.28 536-539页 [查看摘要][在线阅读][下载 766K] [下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 韩来辉;董少晨;王佳凤;李井涛;
目的建立沙门菌PCR-ELISA检测方法,并进行验证。方法根据沙门菌inv A基因设计PCR-ELISA引物及探针,进行PCR扩增、核酸杂交及ELISA检测,对变性反应条件、杂交探针浓度、杂交时间和温度及显色时间进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行敏感性、特异性及重复性验证。用建立的PCR-ELISA方法检测人工染菌的22批中药丸剂及27批液体乳中的沙门菌,并与PCR及GB4789方法进行比较。结果 150 mmol/L Na OH变性液可使核酸变性最彻底,50 pmol/ml地高辛标记探针为最适浓度,50℃60 min为最佳杂交时间和温度,最佳显色时间为50 min;阴性、阳性的阈值为0.265。该方法最低检测限为0.5 pg/μl,灵敏度高;能针对性地扩增沙门菌的特异性片段,检测特异性强;检测结果的批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好。人工染菌的22批中药丸剂和27批液体乳的PCR-ELISA方法检测阳性率明显高于PCR法,与GB4789方法检测阳性率基本一致。结论优化后的PCRELISA方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可快速检测食品、药品中的沙门菌。
2015年05期 v.28 540-543页 [查看摘要][在线阅读][下载 363K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]