- 吴丽洁;赵俊;韩俊杰;孙芳芳;贾泽;孙景志;肖詹蓉;董建春;张萍;
目的制备A群C群脑膜炎球菌结合疫苗,并对其进行生化检测及免疫原性和抗原性分析。方法经溴化氰(CNBr)分别活化的A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖,在己二酰肼(ADH)的连接作用和碳二亚胺(EDAC)的偶联作用下,与破伤风类毒素(Tetanic toxoid,TT)形成结合物。以不同剂量的GAMP-TT和GCMP-TT的混合物免疫小鼠,检测小鼠血清中GAMP、GCMP和TT的抗体滴度,评价其免疫效果。根据剂量试验结果,制备A群C群脑膜炎球菌结合疫苗并进行抗原性检测,并与市售同类产品进行对比试验。结果制备的3批GAMP-AH和3批GCMP-AH的批间差异较小,GAMP-AH和GCMP-AH的衍生率相差较大,由GCMP-AH制备的GCMP-TT的结合率明显高于GAMP-TT(P<0.01),结合物含量差异无统计学意义(P>0.05)。GAMP-TT和GCMP-TT具有良好的免疫原性和抗原性,多糖蛋白结合物组较多糖组可诱导产生更高水平的GAMP和GCMP抗体,且具有免疫记忆。由以上两者制备的A群C群脑膜炎球菌结合疫苗生化指标、血清抗体效价与市售的同类产品差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功研制了具有良好免疫原性和抗原性的A群C群脑膜炎球菌结合疫苗,为其产业化奠定了基础。
2012年11期 v.25 1405-1409页 [查看摘要][在线阅读][下载 291K] [下载次数：381 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 连觅;裴军;高嵩;初明;陈咏冰;徐兰;岳芳桦;张德有;李津;王月丹;
目的对汉逊酵母表达的adr亚型重组乙型肝炎(简称乙肝)疫苗(adr疫苗)进行免疫学特性与功能学研究。方法采用adr疫苗与酿酒酵母表达的重组乙肝疫苗(adw疫苗)免疫转人HLA-A2基因小鼠,免疫剂量2μg/0.2 ml,于初免3周后进行第2次免疫。于第2次免疫1周后,采血,分离血清,经ELISA法检测小鼠血清中抗-HBs抗体水平。同时取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,采用HLA-A2/WLSLLVPFV五聚体荧光标记流式细胞术分析细胞中特异性抗乙肝病毒表位的CTL比例。结果 adr疫苗与adw疫苗均可诱导转基因小鼠产生抗乙肝表面抗原抗体,且抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),2种疫苗对转基因小鼠的体液免疫应答的增强作用相似;adr疫苗诱导的乙肝表面抗原特异性CTL应答作用较adw疫苗更明显(P<0.05)。结论 adr重组乙肝疫苗(汉逊酵母)诱导转基因小鼠的体液免疫应答作用与现有adw疫苗相似,但其诱导机体产生细胞免疫应答的能力更显著,可能具有更加良好的预防HBV感染作用和前景。
2012年11期 v.25 1410-1413页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K] [下载次数：198 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 周荔葆;殷建文;赵新;吴栩涛;廖辉;刘苗苗;曲格霆;甄祖刚;焦龙;吴琼;
目的应用7.5 L生物反应器,培养Vero细胞和乙型脑炎病毒,规模化生产乙型脑炎灭活疫苗。方法应用7.5 L生物反应器,分别以5、10、15、20、25 g/L的微载体密度加装,采用灌流方式培养Vero细胞,分别将P3株乙型脑炎病毒按0.005 00、0.002 50、0.001 60、0.001 25、0.001 00 MOI接种至生物反应器内,收获乙脑病毒液。经浓缩、灭活、纯化等工艺制备疫苗半成品,经疫苗灭活及纯化试验进行工艺验证,合格后分装为疫苗成品,按照《中国药典》三部(2010版)中《冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)》要求,进行疫苗全项检定。结果当微载体密度为20、25 g/L时,细胞密度可达1.2×107个/ml,病毒滴度平均达8.33～8.52 lgLD50/ml;当病毒接种量为0.001 25 MOI时,病毒最高滴度可达9.02 lgLD50/ml。经超滤浓缩后的病毒原液,使用1∶4 000β-丙内酯灭活72 h,可达到灭活效果;纯化后可去除90%以上杂蛋白。应用7.5 L生物反应器生产的6批乙型脑炎灭活疫苗,经检定各项指标均符合国家要求。结论应用7.5 L生物反应器培养Vero细胞和P3株乙型脑炎病毒,经连续灌流收获,可规模化生产Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗。
2012年11期 v.25 1414-1416页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K] [下载次数：360 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 任慧梅;李娜;吴星;方鑫;曾令冰;曾明;
目的比较包裹乙型肝炎(简称乙肝)的壳聚糖纳米粒与常规铝佐剂乙肝疫苗的免疫效果差异,并对壳聚糖佐剂的应用效果进行评价。方法采用离子交联法制备20、30及40μg/ml的包裹乙肝疫苗的壳聚糖纳米粒溶液,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径和多分散系数,BCA法测定包封率;将BALB/c小鼠随机分为4组:铝佐剂对照组、空白纳米粒对照组、常规疫苗组和壳聚糖疫苗组,肌肉注射免疫小鼠,2μg/只,隔周免疫1次,共2次。采用全自动免疫发光分析仪对小鼠血清中乙肝表面抗体进行定量分析。结果制备的载乙肝疫苗壳聚糖纳米颗粒粒径为(262.7±10.8)nm,与空白壳聚糖纳米粒粒径相比,略有减小,多分散系数为(0.228±0.016);随着抗原浓度升高、4℃放置3个月及反复冻融,纳米粒的包封率均未发生显著变化,可达80%左右;壳聚糖疫苗组在小鼠体内产生的表面抗体滴度最高可达1∶80 000以上,并从第8周起,与常规疫苗组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论壳聚糖纳米粒作为新型疫苗佐剂,具有一定的应用价值和进一步研究的意义。
2012年11期 v.25 1417-1419页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K] [下载次数：291 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 王冀邯;王槐栋;胡亚;黄红兰;聂李亚;李凡;
目的探讨重组胸腺素α1(Recombinant human thymosinα1,rhTα1)对免疫低下小鼠接种流感疫苗后免疫应答效果的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为5组:疫苗组、环磷酰胺+疫苗组、环磷酰胺+疫苗+rhTα1低浓度(0.2 mg/kg)组、环磷酰胺+疫苗+rhTα1中浓度(0.4 mg/kg)组、环磷酰胺+疫苗+rhTα1高浓度(0.8 mg/kg)组。经小鼠腹腔注射环磷酰胺,80 mg/kg,共3次,隔天给药;肌肉接种流感疫苗,1.8μg血凝素/只;皮下注射低、中、高浓度rhTα1,0.2 ml/只,每周2次,连续4周。动态监测各组小鼠血清血凝抑制(HI)抗体效价,并观察小鼠脾脏指数及脾脏形态学结构的变化。结果与疫苗组相比,环磷酰胺+疫苗组小鼠体内HI抗体效价降低,脾指数降低,脾脏组织病理形态退化;与环磷酰胺+疫苗组相比,环磷酰胺+疫苗+rh-Tα1各浓度组HI抗体效价升高,小鼠脾指数增加,脾脏组织病理形态明显改善。结论重组胸腺素α1可提高免疫低下小鼠流感疫苗接种的免疫效果,为寻找适合免疫低下人群的疫苗增强剂提供了有益的尝试。
2012年11期 v.25 1420-1422页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 邱少辉;方鑫;何鹏;梁争论;张红霞;张卫婷;赵坤福;李德桂;周根喜;郭玉芬;钟熙;胡忠玉;
目的制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品,用于重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力评价。方法选取检定合格的重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)原液,经协作标定表面抗原蛋白含量后,加入氢氧化铝佐剂和冻干保护剂,冷冻干燥制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品,并按《中国药典》三部(2010版)要求进行各项检定。经10次独立试验测定冻干参考品小鼠效力,采用Reed-Münch计算ED50值;将冻干参考品置4℃(8周)、37℃(4和8周)后分别检测疫苗效力,分析其稳定性,依据Q10法进行效期推测;并对2个生产企业10批疫苗进行效力测定,分析其适用性。结果制备的冻干参考品各项指标均符合规定,小鼠ED50均值为0.183μg,CV为50.5%;该CHO细胞效力冻干参考品蛋白含量定为20μg/ml,规格为10μg/0.5 ml;冻干保护剂、冻干工艺对乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力影响较小,冻干参考品在37℃放置不同时间,效力变化不明显,表明冻干参考品稳定性较好,有效期约为7年;10批疫苗中,不合格率为10%,表明该参考品可用于乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效力质控。结论制备的冻干参考品可作为重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效力检定的质控参考品。
2012年11期 v.25 1423-1426页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K] [下载次数：395 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 曹玉锋;徐军;时成波;孟多佳;迟春萍;王玉梅;贾媛;张剑锋;常东英;王伟善;
目的建立重组戊型肝炎疫苗工程菌三级种子库,并分析其稳定性。方法将工程菌株HEV179/BL21(DE3)复苏活化,经全面检测合格后冻干保存即为原始种子库;原始种子库传代扩增,经全面检定合格后,冻干保存即为主种子库;主种子库经传代扩增和全面检定合格后,甘油冻存即为工作种子库。对三级种子库进行全面检定,并对工程菌进行冻干及甘油冻存稳定性、甘油冻存时间稳定性及质粒稳定性检测。结果建立的三级种子库经全面检定合格;菌种冻干稳定性、甘油冻存稳定性、甘油冻存时间稳定性及质粒稳定性指标均合格,菌种生长特性、遗传和表达稳定性均未发生变化。结论成功建立了HEV179/BL21(DE3)工程菌三级种子库,菌种稳定性良好,适用于重组戊型肝炎疫苗的工业化生产。
2012年11期 v.25 1427-1430页 [查看摘要][在线阅读][下载 274K] [下载次数：556 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 段凯;李黎;
目的筛选冻干乙型脑炎减毒活疫苗非动物源性稳定剂的配方及其缓冲液。方法分别以0.01 mol/L PBS和Earles液为缓冲液,右旋糖苷-70、蔗糖、山梨醇、乳糖及组氨酸不同组合构成的冻干稳定剂,制备乙型脑炎减毒活疫苗半成品及冻干疫苗成品,观察在不同温度存放不同时间的稳定性,并检测不同配方冻干稳定剂的崩解温度(Tc)。结果 12种配方冻干稳定剂制成的疫苗半成品可在4℃1周内保持滴度稳定性,在25℃3 d内保持滴度无明显变化,3 d后滴度大幅下降;以0.01 mol/L PBS为缓冲液的稳定剂制备的疫苗的Tc值低于Earles液,以Earles液为缓冲液的D2和F2配方制备的冻干疫苗成品,在4℃及37℃放置1周后,滴度均>5.7 logPFU/ml。结论已筛选出以Earles液为缓冲液,含右旋糖苷-70、蔗糖、山梨醇、乳糖及组氨酸的稳定剂配方,用于制备冻干乙型脑炎减毒活疫苗具有良好的保护效果。
2012年11期 v.25 1431-1433页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 李千音;黄峥兰;高淼;钟梁;冯文莉;
目的构建携带HA标签的重组腺病毒Ad5F35-HF2S。方法体外合成HA标签DNA双链,以K562细胞cDNA为模板,分别扩增FKBP1、FKBP2和SH2基因,依次亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV-HA中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAd5/F35在Ad5/F35-BJ5183感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S,经PacⅠ酶切线性化后,转染AD-293细胞进行包装、扩增,获得重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,经2轮扩增后,测定病毒滴度;采用PCR及Western blot法检测感染细胞中HF2S基因的转录及蛋白的表达。结果重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S及重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S经鉴定均构建正确;经包装及2轮扩增后,重组腺病毒Ad5/F35-HF2S病毒滴度可达1013IU/ml;经PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的HF2S基因能够在AD-293细胞中表达。结论已成功构建了表达HF2S基因的重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,为研究Grb2-SH2结构域在CML中的基因治疗和作用机制奠定了基础。
2012年11期 v.25 1434-1438页 [查看摘要][在线阅读][下载 338K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 刘国超;张晶;孙晓梅;胡凝珠;胡云章;董佳妮;
目的建立豚鼠感染EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)动物模型,分析EBV对豚鼠的易感性。方法将EBV经鼻腔和口腔感染豚鼠,建立感染EBV动物模型。提取分离的豚鼠淋巴细胞总RNA,巢式PCR法检测EBNA1及BcLF1基因mRNA的表达水平;ELISA法检测豚鼠血清中抗EBV IgG抗体水平的变化。取豚鼠肝脏、肺、脾脏、腮腺进行病理分析。结果10只模型组豚鼠中有6只检测到BcLF1基因mRNA的表达,其中有4只同时检测到了EBNA1和BcLF1基因mRNA的表达;经双酶切及测序鉴定,扩增的EBNA1及BcLF1基因大小与预期相符。10只豚鼠血清中VCA IgG和EBNA-IgG抗体水平均有所升高。模型组中有5只豚鼠的肝脏、肺、脾脏、腮腺的组织发生不同程度的病变。结论豚鼠可作为EBV感染动物模型的备选动物。
2012年11期 v.25 1439-1443页 [查看摘要][在线阅读][下载 652K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 成凤;王秦;匡文斌;李朴;董晋豫;梁勤东;涂植光;
目的将腺病毒Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000对4种细胞的转染效率进行比较,以获得Ad5F35-GFP适用的细胞种类及各类细胞适用的转染方法。方法采用携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000,分别转染人慢性粒细胞白血病细胞K562、人外周血单个核细胞(PBMC)、小鼠脂肪细胞3T3-L1和肝癌细胞Hep A1-6,于转染48 h后,倒置荧光显微镜下观察转染效率,RT-PCR法检测GFP基因mRNA的转录水平。结果 Ad5F35-GFP转染K562细胞、PBMC效率均较高,分别为61%和56%,但不能有效地转染3T3-L1(5%)、HepA1-6(15%)细胞;Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000均不能有效地转染3T3-L1细胞,转染效率分别为5%、5%和6%;Ad5-GFP、LipofectamineTM2000转染Hep A1-6细胞效率均较高,分别为73%和71%。结论 Ad5F35-GFP可有效转染人造血细胞和单核细胞,为相关基因的研究及治疗领域的应用奠定了基础。
2012年11期 v.25 1444-1448页 [查看摘要][在线阅读][下载 302K] [下载次数：260 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 郭盛;张建华;吴良霞;陈凌;郝春莉;范小勇;
目的构建携带小鼠IL-17a编码基因的重组耻垢分枝杆菌(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rMs),并研究其对巨噬细胞表达炎症因子的影响。方法双酶切质粒pET28a/mIL-17a和pMFA41,转化感受态E.coli TOP10,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMFA41/mIL-17a,电转化耻垢分枝杆菌mc2155,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。分别以MOI为10∶1加入rMs、rMs+anti-IL-17A、Ms感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,并设PBS对照组。荧光定量PCR法检测转染细胞中β防御素-2(Defensinβ2,Defb-2)、巨噬细胞炎症蛋白(Macrophage inflammatory protein,MIP)-1α和MIP-2β基因mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4及IFNγ蛋白的表达水平。结果重组表达质粒pMFA41/mIL-17a经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白mIL-17A可与大鼠抗小鼠IL-17A单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约20 000处可见特异性反应条带;rMs组RAW264.7细胞中Defb-2、MIP-1α、MIP-2β基因mRNA水平较Ms组及PBS组明显升高(P<0.01);rMs组细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4和IFNγ的蛋白浓度较Ms组及PBS组明显升高(P<0.01)。结论成功构建了表达具有生物学活性mIL-17A的重组耻垢分枝杆菌疫苗,该疫苗可有效促进体外培养的巨噬细胞表达MIP、Defb2、IFN-γ及IL-4,为新型疫苗的研发奠定基础。
2012年11期 v.25 1449-1453页 [查看摘要][在线阅读][下载 407K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 刘彬;李长青;林芳昭;肖薇;赵睿;肖小璞;
目的构建大容量、多样性的人源核糖体展示(Ribosome display,RD)单链抗体(Singe chain Fv segment,scFv)库。方法收集20名健康献血者的新鲜外周血,分离淋巴细胞,提取细胞总RNA;设计兼并引物,利用RT-PCR分别扩增人抗体的VH-linker、Vκ、Vλ及Cκ基因;采用重叠PCR(SOE-PCR)技术,构建VH-linker-Vκ和VH-linker-Vλ-Cκ单链抗体库;将VH-linker-Vκ和VH-linker-Vλ-Cκ等量混合后,与pMD19-T载体连接,并转化感受态E.coli DH5α,对所构建的scFv库进行菌落PCR和测序分析。结果构建的核糖体展示单链抗体库重组率较高,转化产物经菌落PCR鉴定,均可见约1 000 bp的scFv基因片段,库容量为2.06×1013。经分析该抗体库单链抗体序列均完整,内部无终止密码子,可变区序列无一重复,多样性良好,均具有完整的体外核糖体展示框架。结论已成功构建了大容量、多样性好的人源核糖体展示单链抗体库,为进一步筛选高特异性、高亲和力的人源抗体奠定了基础。
2012年11期 v.25 1454-1458页 [查看摘要][在线阅读][下载 481K] [下载次数：239 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 陈潇;范伟;蔡枭;熊科;胡廷毅;
目的探讨her-2基因沉默对人骨肉瘤细胞株saos-2中血管内皮生长因子-A(Vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)和白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)表达的影响。方法构建her-2 shRNA重组表达质粒,转染至骨肉瘤细胞株saos-2,同时设空白对照组和shNC阴性对照组;RT-PCR检测her-2、VEGF-A和IL-8基因mRNA的转录水平;Western blot检测her-2蛋白表达的变化;ELISA法检测细胞培养液中VEGF-A和IL-8的分泌水平。结果构建的her-2 shRNA表达载体能抑制her-2基因的表达,对her-2基因mRNA的转录和蛋白表达的抑制率分别为63.05%和62.59%;转染重组质粒her-2 shRNA后VEGF-A和IL-8基因mRNA的转录水平及蛋白分泌水平均显著降低(P<0.01)。结论 her-2基因沉默后,VEGF-A和IL-8基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平明显降低,her-2基因参与了骨肉瘤细胞VEGF-A和IL-8基因的表达调控,提示her-2基因可作为研究骨肉瘤血管生成分子机理的新靶点。
2012年11期 v.25 1459-1463页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 吴静;向学熔;范小平;
目的探讨三七总皂苷对体外培养的人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cell,hPDLC)增殖、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性及表达的影响。方法采用组织块法原代培养hPDLC,并经免疫组化鉴定;分别用10、1.0、0.1和0.01 mg/L浓度的三七总皂苷处理体外培养的hPDLC,设只加含10%FBS的DMEM培养基为空白对照,分别于1、3、5、7 d后,MTT法检测其对hPDLC增殖活性的影响,酶标仪上检测细胞中ALP活性,Western blot法检测细胞中ALP蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,细胞来源于外胚间充质;MTT结果显示,0.1 mg/L浓度组在第5天和1.0、10 mg/L浓度组在第3、5天hPDLC增殖活性明显高于空白对照组(P<0.01);0.1、1.0、10 mg/L浓度组在第3、5天ALP活性明显高于空白对照组(P<0.01),1.0 mg/L浓度组APL活性明显高于其他各组(P<0.01);0.01、0.1、1.0、10 mg/L浓度组ALP蛋白表达量均明显高于空白对照组(P<0.01),以1.0 mg/L浓度组ALP表达量最高。结论三七总皂苷有促进hPDLC增殖的作用,并能增加ALP活性及其表达水平。
2012年11期 v.25 1464-1467页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K] [下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 陈哲文;金于兰;瞿爱东;马相虎;王亮;
目的对水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)Oka株(V-Oka株)与分离于临床水痘患者的野毒株进行可变区基因序列比对分析。方法提取V-Oka株和VZV临床分离株的基因组DNA,对其串联重复序列区(R区)进行PCR扩增和测序;将R3基因的纯化产物与pMD18-T载体连接,转化感受态大肠杆菌JM109,提取质粒,经双酶切鉴定及测序;将测序结果与GenBank中登录的V-Oka株基因序列进行比对分析。结果 R1～R5基因扩增产物及R3基因重组质粒的双酶切产物片段大小均与预期相符;V-Oka株较稳定,测序结果与GenBank中登录的V-Oka株R1～R5基因序列一致,野毒株R区序列呈现多态性,与V-Oka株有差异,R4区序列区别明显。结论水痘患者的致病毒株为野毒株;R4的重复单位拷贝数可为临床快速鉴别V-Oka株与野毒株提供科学的手段。
2012年11期 v.25 1468-1471页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：177 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 朱婷婷;王双;方严;练雪梅;
目的观察高脂状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar typeⅡepithelial cells,ATⅡ)株A549细胞的脂质蓄积,并探讨炎症对高脂状态下A549细胞脂质蓄积的影响及可能的作用机制。方法将A549细胞分为4组:对照组(不加药物)、高脂组(100μg/ml LDL)、炎症组(300 ng/ml LPS)、联合处理组(100μg/ml LDL+300 ng/ml LPS),处理24 h后,油红O染色观察各组细胞内脂质蓄积情况;Real-time PCR检测固醇调节元件结蛋白2(Sterol regulatory elememnt binding proteins 2,SREBP2)、HMGCoA(3-Hydroxy-3-methlglutary 1 coezyme A)还原酶和低密度脂蛋白受体(Low-density lipoprotein receptor,LDLr)基因mRNA转录水平;Western blot法检测SREBP2、LDLr和三磷酸腺酐结合盒转运体A1(ATP-binding cassette sub-family A member 1,ABCA1)蛋白表达水平。结果联合处理组细胞内脂质蓄积较对照组、高脂组及炎症组严重;与对照组相比,高脂组的SREBP2、HMGCoA还原酶、LDLr基因mRNA转录水平反馈性下调(0.54±0.09)、(0.51±0.06)及(0.34±0.06)倍(P<0.05);联合处理组各基因mRNA转录水平下调程度低于高脂组;SREBP2及LDLr蛋白表达水平的变化趋势与基因转录水平基本一致;与对照组相比,高脂组ABCA1蛋白的表达反馈性上调(2.78±0.38)倍(P<0.01);联合处理组ABCA1蛋白表达上调无高脂组明显。结论炎症可加重高脂状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞内的脂质蓄积,其机制可能与炎症干扰SREBP2-LDLr/HMGCoA还原酶通路介导的细胞内脂质稳态有关。
2012年11期 v.25 1472-1475+1481页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K] [下载次数：87 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 高兰英;刘增长;
目的构建人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)重组表达质粒pTracer CMV2-CRP,并观察其在人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelical cells,HUVEC)中的表达及其对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(Lectin-type oxidizedLDL receptor-1,LOX-1)、组织因子(Tissue factor,TF)表达的影响。方法以质粒pCR-BluntⅡ-TOPO-CRP为模板,PCR扩增CRP基因CDS序列,克隆至pTracer CMV2载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,构建重组表达质粒pTracer CMV2-CRP,转染HUVEC,设实验组(转染pTracer CMV2-CRP)、阴性对照组(转染pTracer-CMV2)及正常对照组,各组细胞经G418抗性筛选,RT-PCR及Western b1ot检测CRP基因的过表达效应及CRP的表达对HUVEC中LOX-1和TF转录及蛋白水平的影响。结果重组真核表达质粒pTracer CMV2-CRP经双酶切鉴定及测序证明构建正确。实验组细胞中,CRP基因过表达,且LOX-1和TF基因的转录及蛋白水平明显高于正常对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论已成功构建人CRP基因重组真核表达质粒pTracerCMV2-CRP,并在HUVEC中过表达CRP,且明显上调HUVEC中LOX-1和TF的表达,为进一步阐述CRP在动脉粥样硬化形成过程中的作用提供了新的实验依据。
2012年11期 v.25 1476-1481页 [查看摘要][在线阅读][下载 365K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李春莉;刘钉宾;袁颖;陶崑;史梦;冯文莉;
目的观察H2O2对Apg-2与BCR/ABL蛋白亚细胞定位的影响。方法用50μmol/L H2O2分别处理BaF3-BCR/ABL、BaF3-MIGR1及过表达Apg-2蛋白的BaF3-BCR/ABL细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞内Apg-2、BCR/ABL蛋白的亚细胞定位变化。结果 Apg-2和BCR/ABL蛋白在细胞中定位于胞浆,H2O2损伤可致Apg-2和BCR/ABL蛋白在BaF3-BCR/ABL细胞中发生核转位,Apg-2蛋白过表达可引起BCR/ABL蛋白核转位。结论 Apg-2蛋白在H2O2诱导的损伤后发生核转位,可能与BCR/ABL蛋白相互作用,保护H2O2诱导的细胞损伤。
2012年11期 v.25 1482-1484页 [查看摘要][在线阅读][下载 312K] [下载次数：61 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李玉芹;袁正求;冯跃;陈迪;穆锦秀;刘令;
目的研究调控异养培养基中碳源和氮源浓度对小球藻Chlorella protothecoides(C.protothecoides)胞内生化成分积累的影响。方法分别以葡萄糖为碳源(尿素初始浓度为3 g/L,葡萄糖浓度分别为10、20、30、40、50 g/L)、尿素为氮源(葡萄糖初始浓度为30 g/L,尿素浓度分别为3.00、0.00、0.15、0.30、0.45、0.60 g/L),避光培养小球藻细胞,收集藻液,制备冻干藻粉。采用傅里叶变换红外光谱法(Fourier transform infrared spectroscgy,FTIR)测定小球藻胞内蛋白质、油脂和碳水化合物的变化。结果当培养基葡萄糖浓度为30 g/L,尿素浓度为3 g/L时,蛋白质吸收峰强度最大,相对含量较高,碳水化合物次之,油脂含量最低;与氮充足(3.00 g/L)条件下相比,氮缺失(0.00 g/L)条件下,蛋白质吸收峰强度骤然降低43.22%,油脂增高1.41倍,碳水化合物提高6.04%。结论培养基中不同碳、氮水平可实现胞内不同大分子组分(油脂、蛋白质和碳水化合物)产量的调控,满足不同层次的工业需求。
2012年11期 v.25 1485-1487页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K] [下载次数：234 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 何星;苗承辉;李小娟;王云天;梁琪;张雪平;王荫椿;
目的对注射用A型肉毒毒素(Botulinum toxin type A for injection,商品名衡力,出口商品名BTXA)制品中的活性药用成分(Active pharmaceutical ingredient,API)的性质及2009～2011年生产的注射用A型肉毒毒素原液的比活性进行分析。方法对BTXA收获物样品进行阴离子交换层析,分离毒素复合体各组分;采用血凝试验、HPLC法、SDS-PAGE、等点聚焦电泳及N-末端氨基酸测序等方法分析A型肉毒毒素复合体及其各组分的性质;统计2009～2011年连续生产的注射用A型肉毒毒素原液的比活性数据,分析连续生产的工艺稳定性和质量重现性。结果 BTXA收获物样品在碱性条件下可被解离,解离出的A型肉毒神经毒素相对分子质量约为150 000,无血凝效价;BTXA的API为完整的单体,纯度均在99.5%以上;复合物和神经毒素的等电点分别为4.97、4.91,N-末端氨基酸测序结果与GenBank基本一致;在连续3年的生产过程中,原液比活性平均为3.0×107LD50/mg蛋白,BTXA成品中API载量约为5 ng/瓶。结论注射用A型肉毒毒素的活性成分是特异的复合体结构,可在碱性条件下解离出A型肉毒神经毒素;BTXA原液的比活性在连续3年的生产中持续稳定,具备很好的连续性,为临床使用的安全性提供依据。
2012年11期 v.25 1488-1491+1497页 [查看摘要][在线阅读][下载 347K] [下载次数：439 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 曹芳;杜瑞林;郭立君;
目的探讨酶法处理短棒状杆菌(Enzyme-digested Corynebacterium parvum product,ECPP)对荷瘤鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响。方法将NIH小鼠随机分为5组:生理盐水对照组(NS)、荷瘤对照组(CK)、阳性对照组(CPP)、低剂量ECPP组(ECPPⅠ,500μg/ml ECPP)和高剂量ECPP组(ECPPⅡ,1 000μg/ml ECPP)。除NS组经腹腔注射0.2 ml 0.9%NaCl外,其他4组小鼠均经腹腔注射0.2 ml艾氏腹水瘤(Ehrlich ascites carcinoma,EAC)细胞悬液(5.0×106个/ml),接种次日,每组小鼠腹腔注射相应药物(注射体积均为0.25 ml),每次间隔1 d,连续5次,停药次日,颈椎脱臼处死小鼠,检测腹水量;3H-TdR法检测脾淋巴细胞转化能力;流式细胞术分析T淋巴细胞亚群及NK细胞活性;RT-PCR检测脾淋巴细胞中IFNγ、TNF-α基因mRNA的转录水平。结果与CK组相比,各给药组均能明显降低小鼠腹水量(P<0.01),CPP组和ECPPⅡ组间差异无统计学意义(P>0.05),ECPPⅡ组降低腹水的能力明显高于ECPPⅠ组(P<0.01);与NS、CK及ECPPⅠ组相比,ECPPⅡ组可明显提高T、B淋巴细胞的转化能力,增加脾CD4+、CD8+及NK细胞数量(P<0.01),而与CPP组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与NS、CK和ECPPⅠ组比较,ECPPⅡ组IFNγ、TNF-α基因mRNA转录水平明显提高(P<0.01),与CPP组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ECPP能显著提高荷瘤鼠脾细胞的免疫功能。
2012年11期 v.25 1492-1497页 [查看摘要][在线阅读][下载 706K] [下载次数：62 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 谢芸芸;黎海芪;
目的研究忍冬水提物对卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏小鼠的疗效。方法建立OVA致敏小鼠模型,将OVA致敏BALB/c小鼠随机分为5组,即忍冬水提物高浓度组(H组)、中浓度组(M组)、低浓度组(L组)、模型对照组(CH组)及阴性对照组(NS组);采用小鼠足垫肿胀试验检测迟发型超敏反应;甲苯胺蓝及HE染色观察小鼠肠系膜、空肠肥大细胞及空肠绒毛上皮细胞形态;ELISA法检测小鼠血清OVA特异性IgE及IgG1、小肠黏液总IgA及OVA特异性IgA水平。结果 OVA致敏小鼠出现急性腹泻;致敏小鼠经足垫皮内激发,出现迟发型超敏反应;致敏小鼠肠系膜及空肠肥大细胞聚集、胞质颗粒外泄及空肠绒毛炎症细胞浸润;小鼠血清OVA特异性IgE及小肠黏液OVA特异性IgA水平明显升高(P均<0.01)。经H、M组忍冬水提物灌胃后致敏小鼠的一般状态、腹泻情况及空肠炎症明显缓解;OVA介导的足垫肿胀反应明显减弱;小鼠血清OVA特异性IgE及小肠黏液OVA特异性IgA水平明显降低(P均<0.01)。结论一定浓度忍冬水提物可有效缓解OVA致敏小鼠的速发型与迟发型超敏反应,其中高浓度金银花忍冬水提物效果较好。提示忍冬科植物中某些成分具有抗过敏作用。
2012年11期 v.25 1498-1502页 [查看摘要][在线阅读][下载 266K] [下载次数：186 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 彭晓凤;吴芹;蒋青松;
目的研究罗格列酮(Rosiglitazone,RSG)对高糖高胰岛素(High glucose and insulin,HGI)诱导心肌肥大中的抵抗作用及其机制。方法用HGI培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,并给予不同浓度的RSG处理;以细胞表面积、蛋白含量和心钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)基因mRNA的水平为心肌肥大指标,观察RSG对HGI诱导心肌肥大的作用;Real-time PCR和Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)和内皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因mRNA水平和蛋白的表达水平;双抗体夹心ABC-ELISA法和硝酸还原法分别检测eNOS和NO的含量。结果 HGI成功诱导大鼠心肌细胞肥大;RSG呈浓度依赖性地抑制HGI诱导的心肌细胞肥大,并明显上调HGI所致的PPAR-γ和eNOS基因mRNA水平的降低,同时增加PPAR-γ蛋白的表达水平、eNOS和NO的含量(P均<0.05)。PPAR-γ抑制剂GW9662及NOS抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)均可阻断RSG的上述作用。结论 RSG通过激活PPAR-γ受体、增加eNOS的含量、促进NO释放,从而产生抗HGI诱导的心肌细胞肥大作用。
2012年11期 v.25 1503-1507页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K] [下载次数：129 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 杜瑞林;宋宗明;刘国云;王伟;刘双军;张伟红;孙洪亮;李文娟;尹兵;
目的观察森林脑炎灭活疫苗的接种反应和免疫效果。方法对内蒙古和黑龙江2个观察区共3 134名志愿者接种森林脑炎灭活疫苗,观察接种后志愿者的局部和全身不良反应,采用森林脑炎病毒IgG抗体ELISA试剂盒检测免疫后血清抗体滴度,并计算抗体阳转率。结果接种疫苗后,在整个观察期间,所有志愿者均未发生全身反应,局部反应仅4例,不良反应总体发生率为0.13%。内蒙古观察区志愿者免疫后血清抗体GMT在1∶83.2~1∶117.5之间,总体血清抗体阳转率达88.1%;黑龙江观察区志愿者血清抗体GMT在1∶71.2~1∶84.6之间,血清抗体阳转率为86.2%。2个观察区接种疫苗后总体GMT为1∶80.4,血清抗体阳转率为86.8%。结论森林脑炎灭活疫苗接种反应轻微、免疫原性良好,可大规模推广应用。
2012年11期 v.25 1511-1513页 [查看摘要][在线阅读][下载 108K] [下载次数：158 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 叶昕;闫滨;高士锐;马玉杰;薄芳;李岩;徐虹;
目的分析哈尔滨市2011年疑似预防接种异常反应(Adverse event following immunization,AEFI)的特征,评价AEFI监测系统运转情况。方法对《疑似预防接种异常反应信息管理系统》报告的哈尔滨市2011年AEFI数据进行描述性分析。结果 2011年哈尔滨市共报告188例AEFI,以一般反应为主,占报告总数的86.7%;下半年报告的病例占全年总数的72.9%;年龄≤1岁和1岁<年龄≤2岁组报告病例最多,分别占总数的42.0%和36.2%;吸附无细胞百白破联合疫苗因接种针次多,AEFI发生数也最多,占总数的49.5%;一般反应中,报告最多的是发热、红肿、硬结,占85.1%。结论哈尔滨市AEFI及时报告率、及时调查率、调查表及时上报率等监测指标均达到较高水平。今后应加强对基层人员的培训和督导检查,在乡级单位开展网络直报,进一步提高AEFI监测系统的敏感性和及时性。
2012年11期 v.25 1514-1515页 [查看摘要][在线阅读][下载 90K] [下载次数：79 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 汤妍;苏家立;夏艳辉;冯社庄;黄易都;林伟波;杨劲英;邱志远;刘雅姬;温万敏;陈晓荣;邓友华;瞿鸿鹰;
目的观察国产无明胶冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性。方法采用随机、双盲、对照、多中心的方法,在广东省兴宁市、揭东县和梅县选择无水痘病毒暴露史的1~12岁健康儿童1 050名,分别接种国产的无明胶冻干水痘减毒活疫苗(试验组)及GlaxoSmithKline Biologicals S.A.(比利时)生产的冻干水痘减毒活疫苗(对照组),进行为期6周的安全性观察;并对其中531名受试者采集免前和免后6周双份血样,采用膜抗原荧光抗体(Fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)法检测抗体水平,评价冻干水痘减毒活疫苗的免疫原性。结果试验组和对照组全身反应的总发生率分别为6.62%和8.06%,组间差异无统计学意义(P>0.05);局部反应的总发生率分别为4.35%和9.60%,组间差异有统计学意义(P<0.01);全身反应中以发热为主,局部反应中以疼痛和瘙痒为主,除瘙痒症状(P<0.01)外,其他症状组间差异均无统计学意义。试验组和对照组免疫后抗体几何平均滴度(GMT)分别为1:126和1:140,组间差异无统计学意义(P>0.05);抗体阳转或免疫成功率分别为96.99%和96.98%,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论与对照疫苗相比,在免疫原性相近的前提下,国产无明胶冻干水痘减毒活疫苗可能会降低过敏反应的发生率,具有更高的安全性。
2012年11期 v.25 1516-1519页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K] [下载次数：317 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 何密斯;李昱;林晓;郑维萍;唐俐;
目的探讨GLI-2(GLI family zinc finger 2)和SFRP-1(Secreled frizzled-related protein 1)在髓母细胞瘤(Medulloblastoma,MB)组织中的表达及其意义。方法采用SP免疫组化法检测32份MB组织中GLI-2和SFRP-1的表达,分析两种蛋白之间及其与MB临床病理特征之间的相关性。结果 32例MB中,GLI-2和SFRP-1的阳性表达率分别为50%(16/32)和68.75%(22/32);MB中GLI-2和SFRP-1的表达在不同年龄、性别、肿瘤大小及部位中,差异均无统计学意义(P>0.05);SFRP-1在SHH-MB与NON-SHH-MB中的表达差异有统计学意义(P<0.001);GLI-2与SFRP-1在MB中的表达呈显著正相关(P<0.001)。结论 GLI-2和SFRP-1的异常表达可能对MB的发生、发展起一定的作用。GLI-2和SFRP-1可作为MB重要的生物学指标,有助于对MB患者危险度评估及患者术后放化疗方案的选择。
2012年11期 v.25 1520-1523页 [查看摘要][在线阅读][下载 263K] [下载次数：99 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 何子毅;刘赴平;胡应明;邹文涛;
目的对1例献血者血型血清学鉴定为A2B血样进行基因型分析。方法应用常规血型血清学方法进行血型鉴定;采用PCR-SSP法进行ABO初步基因分型的检测,并对ABO基因第6和第7外显子的核苷酸序列进行扩增、测序和分析。结果血型血清学鉴定为A2B亚型,基因分型为BB型,初步判定为B(A)型;基因测序发现两条等位基因第6外显子均不存在261delG及297 G/G,判定该献血者血型为B与B基因的组合,经与A101核苷酸序列比对,对第7外显子的核苷酸序列分析发现,有一条核苷酸链上有526C>G,657C>T、703G>A及803G>C点突变,另一条核苷酸链上有297A>G、526C>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C及930G>A点突变,确定该献血者血型基因型为CisAB02/B101。结论血型血清学对CisAB和B(A)判定有一定的局限性,通过核苷酸序列及分析能够明确本例献血者基因型为CisAB02/B101。
2012年11期 v.25 1524-1526页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 钱晓华;谭顺荣;杨彦基;徐巍;张格;赵根明;
目的通过对单剂水痘疫苗高接种率学校中暴发的水痘疫情分析,评估疫苗的免疫持久性。方法采用现场流行病学方法对2011年10月至2012年1月虹口区单剂水痘疫苗高接种率学校中水痘暴发疫情进行调查和分析。结果在2011年10月16日至2012年1月13日疫情暴发期间,累计发现36例水痘病例,罹患率为5.4%,症状以发热、皮疹为主,仅27.8%的病人呈轻度或中度发热,且均为轻型水痘病例。发病班级的水痘罹患率在2.2%～34.1%之间,其中,男性为21.21%,女性为19.23%,病例发病时间主要集中在11月9～13日,占总病例的36.1%,呈2、3、4代病例的传播特征;发病班级单剂水痘疫苗接种率为95.48%,未发现接种史与水痘发病有关(P>0.05),患病的相对危险度(Relative risk,RR)为0.8;接种年龄组间水痘发病率差异无统计学意义(P>0.05);36例病例中,接种疫苗与发病时间的间隔中位数为66月,进口与国产水痘疫苗接种后,水痘发病率差异无统计学意义(P>0.05);暴发疫情病例中有免疫史人群的比例显著高于散发病例(P<0.05),比值比(Odds ratio,OR)为11.3。结论单剂水痘疫苗接种,可预防重症病例,但不能完全预防水痘暴发。建议首剂水痘疫苗接种后5～6年加强接种,或在发生疫情时,对首剂接种≥5年的无水痘患病史的密切接触者进行应急接种。
2012年11期 v.25 1527-1529+1534页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K] [下载次数：435 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：39 ] |[阅读次数：0 ]
- 罗娜;蔡园;张俊;汤为学;吴小翎;何松;
目的建立维持正常肝细胞静息细胞周期状态的小鼠肝细胞的分离纯化及原代培养方法。方法对传统小鼠肝细胞分离纯化的原位两步胶原酶灌流法进行改良,台盼蓝染色法计数细胞总数并鉴定肝细胞活率;用改良的WME培养基对C57BL/6小鼠肝细胞进行原代培养,经过碘酸雪夫氏染色(Periodic acid-Schiff stain,PAS)和全自动生化分析仪鉴定肝细胞的生物学特性及功能;Western blot法检测分离纯化后的小鼠肝细胞及原代培养24、48、72、96 h小鼠肝细胞的细胞周期蛋白p16、cyclin D1和cyclin A的表达水平。结果分离纯化后可从每只小鼠肝脏稳定获取(3～5)×107个肝细胞,细胞活率达(86.68±2.46)%;原代培养96 h内的小鼠肝细胞能保持合成糖原、白蛋白、尿素的功能;原代培养小鼠肝细胞中,细胞周期蛋白p16、cyclin D1和cyclin A的表达水平与分离纯化的小鼠肝细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05),表明原代培养96 h内的小鼠肝细胞均能维持静息细胞周期状态。结论改良的分离纯化方法能稳定获得高产量、高活率的小鼠肝细胞;改良后的原代培养方法可使肝细胞维持其特异性功能、分化特性及静息细胞周期状态。
2012年11期 v.25 1530-1534页 [查看摘要][在线阅读][下载 281K] [下载次数：399 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 赵伟;胡业勤;薛红刚;李新国;刘玉兰;朱红伟;刘胜;
目的建立鹅红细胞的醛化方法,用于百日咳疫苗生产中的血凝活性测定。方法以新鲜鹅红细胞为对照,分别采用方法一、方法二醛化鹅红细胞,比较两种处理方法制备的醛化鹅红细胞的溶血性和活性,确定最佳醛化条件。结果采用方法一制备的醛化鹅红细胞的实验效果优于方法二,其测定结果与新鲜红细胞一致,在4℃保存90 d未出现溶血现象,戊二醛最佳处理浓度为1.25%,醛化时间为40 min,最佳醛化鹅红细胞工作浓度为0.8%。结论已成功建立鹅红细胞的醛化方法。
2012年11期 v.25 1535-1537页 [查看摘要][在线阅读][下载 188K] [下载次数：159 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 曹海军;叶生亮;王宗奎;张学俊;杜晞;刘彬;李志雄;狄姗姗;李长清;
目的采用正交试验法优化凝血酶原复合物(Prothrombin complex concentrate,PCC)的制备工艺。方法取DEAE-Sephadex A-50凝胶平衡体系中的柠檬酸钠、氯化钠、pH值3因素,每因素取3水平设计正交试验;称取9等份DEAE-Sephadex A-50凝胶干粉,分别采用试验设计的平衡体系进行平衡;平衡后的凝胶分别与等量健康人去冷沉淀混合血浆混合,制备凝血酶原复合物浓缩物;测定浓缩物蛋白浓度及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性,获得4种凝血因子比活;通过正交试验直观分析及直接对比法确定较优及较差比活制备条件,对确定的条件进行验证;测定平衡体系电导率,分析正交试验中平衡体系电导率与4种凝血因子比活的相关性。结果正交试验直观分析法与直接对比法确定的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ较优比活凝胶平衡条件一致:柠檬酸钠0.005~0.012 mol/L,氯化钠0.06~0.10 mol/L,pH 6.9~7.2;两种方法确定的较差平衡条件不同,分别为:柠檬酸钠0.012~0.02 mol/L、氯化钠0.1~0.14 mol/L,pH 7.2~7.5及柠檬酸钠0.005~0.012 mol/L,氯化钠0.1~0.14 mol/L,pH 7.2~7.5,经实验验证,两种方法确定的较优条件比活均优于较差条件,但两种较差条件中,直接对比法确定的条件更符合实际。平衡液电导率与4种凝血因子比活之间不存在线性关系,但在不同电导率条件下,4种凝血因子比活有较大波动,电导率9.67~10.34 ms/cm,4种凝血因子比活均较高;电导率12.16~12.90 ms/cm,4种凝血因子比活均较低。结论正交试验可用于凝血酶原复合物制备工艺优化,但不同分析方法结果有一定差异。平衡体系电导率对凝血酶原复合物比活有一定影响,在工艺优化时应予注意。
2012年11期 v.25 1538-1542页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K] [下载次数：713 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 李旭媛;王刚;费卓群;陈光;
目的经紫外-亚硝基胍(NTG)复合诱变选育高产淀粉酶菌株。方法以蜡状芽孢杆菌SWWL06(Bacillus cereusSWWL06)为出发菌株,分别经紫外、亚硝基胍(NTG)诱变原始菌株,获得最佳诱变条件;经紫外-NTG复合诱变,所得突变菌株以透明圈与菌落直径比值大小进行初筛,再经摇瓶培养进行复筛,得高产淀粉酶突变株;连续传代,检测其遗传稳定性。结果确定紫外波长254 nm,照射时间120 s,垂直照射距离20 cm为最佳紫外诱变条件;NTG浓度为0.5 mg/ml,诱变时间40 min为最佳NTG诱变条件;紫外-NTG复合诱变筛选出9株突变株,其中UV-NTG-3酶活力为3.515 U/ml,增幅最高,较原始菌株SWWL06提高3.59倍;将UV-NTG-3连续传代10次,酶活性仍可达到第一代的97%。结论已成功选育出1株高产淀粉酶菌株UV-NTG-3。
2012年11期 v.25 1543-1546+1549页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K] [下载次数：587 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：23 ] |[阅读次数：0 ] - 刘英微;王曦;张德有;杨旭琴;许宁;张昀;苏锦锋;何亚丽;王树毅;李津;
目的分析重组汉逊酵母表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)各纯化工序样品中内毒素的去除效果。方法采用鲎试剂法检测重组汉逊酵母表达的HBsAg小量工艺探索、中量工艺验证、中试纯化工艺中破碎细胞、微滤、超滤、硅胶吸附、层析、除菌过滤各工序样品的内毒素含量,计算内毒素去除率,分析各纯化工序与内毒素去除率的关系,并以重组酿酒酵母表达HBsAg各纯化工序中样品作为对照。结果重组汉逊酵母表达的HBsAg纯化过程中内毒素含量由细胞破碎样品的241 EU/ml以上降至除菌过滤样品的1.0 EU/ml以下。微滤和超滤样品内毒素去除率平均可达56%和86%,占总体纯化工艺中内毒素去除率的90%以上。结论重组汉逊酵母表达HBsAg纯化工序微滤、超滤和疏水层析均可有效去除内毒素,以超滤去除内毒素效果最明显,为重组汉逊酵母纯化工艺去除内毒素的研究提供了技术参数和实验依据。
2012年11期 v.25 1547-1549页 [查看摘要][在线阅读][下载 125K] [下载次数：313 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 江涛;李伟;谭力清;邓春兰;李明;于明安;
目的以酵母细胞壁为囊材,制备盐酸氯丙嗪微囊,并观察其稳定性。方法以载药量为评价指标,采用正交试验设计确定制备盐酸氯丙嗪微囊最佳处方和工艺,并对微囊含量的检测方法进行精密度、稳定性及准确性验证。光学显微镜观察微囊形态,考察其体外释放、高湿度和强光照射的稳定性。结果在40℃,盐酸氯丙嗪与酵母细胞壁质量比为1∶3,时间为6 h,微囊的平均载药量可达41.76%。改进的含量检测方法精密度、稳定性、准确性良好。光学显微镜下可见微囊囊壁完整,呈球形或椭球形,形态均一。盐酸氯丙嗪微囊500 min体外累积释放为94.89%。盐酸氯丙嗪微囊对湿度和光度稳定性显著增加。结论酵母细胞壁可作为囊材用于制备微囊,且能增加药物的稳定性。
2012年11期 v.25 1550-1553页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K] [下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]