- 王美菊;刘颖;罗兴;杨春亭;于三科;许洪林;
目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotides,CpG-ODN)与A(lOH)3或Montanide ISA720等组成的复合佐剂在小鼠体内促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生CD8+CTL反应的能力。方法以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)为抗原,分别以CpG X1、A(l OH)(3即Alum)、Montanide ISA720、CpG X1+Alum和CpG X1+Montanide ISA720为疫苗佐剂,分别于0和4周经肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,体积均为100μl,分别含20μg OVA、20μg CpG X1、74μl Montanide ISA720和/或100μg Alum。通过胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤试验评价不同佐剂对细胞免疫应答的影响,通过表达OVA的黑色素瘤和李斯特菌攻击模型评价不同佐剂在免疫预防和免疫治疗中的作用。结果与OVA组相比,A(lOH)3本身不能有效诱生小鼠的细胞免疫应答;CpG X1或Montanide ISA720单独使用能够在一定程度上增强抗原特异性CD8+T细胞的IFNγ分泌和CTL活性,但不增强抗原特异性CD4+T细胞反应。两种复合佐剂具有比单佐剂更强的细胞免疫佐剂效应,其中CpG X1+MontanideISA720只能增强抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的IFNγ分泌,而CpG X1+Alum不仅能够增强抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的IFNγ分泌,还能够增强CD8+CTL的杀伤活性。在黑色素瘤和李斯特菌攻击模型中,CpG X1+Alum佐剂显示出良好的预防和治疗效果。结论 CpG X1与A(lOH)3组成的复合佐剂能够有效促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生功能性CD8+CTL反应。
2012年09期 v.25 1085-1090页 [查看摘要][在线阅读][下载 552K] [下载次数：492 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 姜柯安;贺志良;宋方洲;马永平;
目的原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果。方法采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达的重组K88和LTb蛋白纯化、复性后,进行SDS-PAGE分析。分别用K88单独、K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠,以生理盐水作为对照,每次间隔1周,共4次,末次免疫后10 d,分离血清,并收集鼻腔和小肠黏膜冲洗液,间接ELISA法检测各组血清特异性IgG和黏膜sIgA抗体水平。结果重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组K88和LTb蛋白相对分子质量分别为28 100和12 500,表达量分别约占菌体总蛋白的35%和40%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度均可达95%以上。K88联合LTb滴鼻免疫组血清特异性IgG及鼻腔、小肠黏膜冲洗液中特异性SIgA水平均较K88单独免疫组和对照组明显增高,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论在大肠杆菌中高效表达并纯化了重组K88和LTb蛋白,K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠后,可增强特异性血清抗体反应,且诱导了黏膜免疫应答,为将来开发新型的ETEC基因工程疫苗奠定了基础。
2012年09期 v.25 1091-1094页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：281 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 熊慧玲;王公孝;许蓉华;谭柯;邹澄川;王学林;刘璐;吴先礼;何琴;林建平;
目的优化C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)结合疫苗的制备工艺。方法分别采用衍化的降解多糖与TT结合、衍化TT与降解多糖结合和1-氰基-4-二甲基氨基吡啶.四氟化硼(CDAP)活化降解多糖后衍化再与TT结合的方法制备C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物PSAH-TT、PS-AHTT和PSCDAPAH-TT,并进行生化指标和抗原性检测,与溴化氰(CNBr)活化多糖衍化与TT的结合物PSCNBrAH-TT进行免疫原性比较,确定最适制备工艺,并制备2批结合疫苗,与市售疫苗进行免疫原性比较。结果 3种方法制备的多糖蛋白结合物生化指标存在差异,以PSCDAPAH-TT收率最高,且均保持了多糖的抗原性及免疫原性,并有免疫加强效应;PSCDAPAH-TT免疫2针后抗体GMT水平高于PSAH-TT和PS-AHTT,差异有统计学意义(P<0.05),3针后抗体GMT水平仍高于PSAH-TT和PS-AHTT,但差异无统计学意义(P>0.05),PSCDAPAH-TT免疫2针和3针后抗体GMT水平均高于PSCNBrAH-TT,且2针后差异有统计学意义(P<0.05),3针后差异也无统计学意义(P>0.05),但制备的2批PSCDAPAH-TT疫苗免疫2针和3针后的抗体GMT水平均明显高于市售疫苗,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经CDAP活化降解多糖后衍化再与载体蛋白结合制备的疫苗具有较好的免疫原性。
2012年09期 v.25 1095-1098页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K] [下载次数：493 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 黄维金;朱蓉;赵晨燕;徐静;万延民;齐影;刘强;王文波;温智恒;周艳;孟淑芳;俞永新;王佑春;
目的制备病毒载体疫苗滴度测定用国家标准品。方法以鸡胚成纤维细胞制备痘苗病毒,经密度梯度超速离心纯化后,加入天花疫苗保护剂,分装冻存,分发至我国4个不同实验室,按照统一的结晶紫染色蚀斑法实验方案进行协作标定,每次实验稀释后取2个稀释度,每个稀释度设5个平行孔,计算各实验室检测结果的几何均数,对标准品中痘苗病毒滴度进行赋值。检测病毒标准品于不同温度下保存不同时间的稳定性,并对病毒标准品的各项质量指标进行检定。结果 4个实验室共测定44次,4个实验室间的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),各实验室检测结果的几何平均数为3.05×106PFU/ml,95%CI为2.00×106～4.65×106PFU/ml,标准差为0.09,总变异系数1.41%。制备的痘苗病毒标准品于4℃可稳定放置10 d,37℃放置稳定性较差。制备的痘苗病毒标准品装量检查合格(1 ml/支);pH值为6.9;无菌试验合格;分装重量精密性为0.95%。结论制备的痘苗病毒标准品可作为痘病毒载体疫苗滴度测定用标准品。
2012年09期 v.25 1099-1101+1105页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K] [下载次数：392 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 贺志良;姜柯安;宋方洲;马永平;
目的表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性。方法将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化E.coli M15,0.5 mmol/L IPTG诱导表达。表达的融合蛋白6×His-FasA经Ni-Agarose His纯化和复性后,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,每次100μg,共免疫3次,间隔2周,末次免疫10 d后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果重组表达质粒pQE-30-fasA经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的6×His-FasA融合蛋白相对分子质量约为18 500,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%;纯化的蛋白纯度可达95%,浓度为0.6 mg/ml,免疫小鼠所得抗血清效价为1∶125 000。结论已成功在E.coli M15中表达了6×His-FasA融合蛋白,纯化的融合蛋白免疫原性良好,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础。
2012年09期 v.25 1102-1105页 [查看摘要][在线阅读][下载 229K] [下载次数：194 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ]
- 费东亮;毛靖宇;宋英今;马鸣潇;
目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法采用RT-PCR法从感染CSBV的蜜蜂幼虫总RNA中扩增结构蛋白VP3基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,双酶切鉴定并测序,通过与SBV-KOR、CSBV-UK株VP3基因序列的比对,获得LN-QY株VP3基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列,建立VP3蛋白的3D结构。在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP3结构蛋白的空间构象较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于4个区域:25-50,101-109,112-120,250-268氨基酸区段,其中,可能出现抗原表位的2个区域在100-150和250-300氨基酸区段,应作为抗原表位研究的重点区域。结论预测了CSBV LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位,为CSBVVP3蛋白单克隆抗体的制备以及表位疫苗的设计奠定了理论基础。
2012年09期 v.25 1106-1111页 [查看摘要][在线阅读][下载 693K] [下载次数：214 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 刘晔;房丽君;赵敬慧;张守峰;张菲;扈荣良;
目的鉴定我国狂犬病流行毒株JX08-45适应细胞培养后(命名为JX08-45CC株)的生物学特性。方法通过全基因组序列分析比对、小鼠脑内和外周攻毒试验和免疫原性试验,分别对JX08-45CC株的基因组特点、毒力和免疫原性进行鉴定。结果 JX08-45CC株的基因组序列与JX08-45株比对,共出现16个核苷酸突变点和7个氨基酸突变点,其中6个氨基酸变异发生在G蛋白(333位精氨酸未改变)编码区,L蛋白仅有1个氨基酸突变;在G蛋白氨基酸变异中,4个突变序列在其他细胞适应毒株CVS-11、CTN-1、Nishigahara、SAG2、Flury-LEP和SRV9中也普遍存在。JX08-45CC株培养滴度≥107TCID50/ml时,脑内接种小鼠的致死率为100%,滴度为102～106TCID50/ml时,脑内接种小鼠的致死率为20%～80%;滴度为105～108TCID50/ml时,外周肌肉接种小鼠,致死率为10%～70%;脑内和外周攻毒小鼠的潜伏期均为7～9 d,并于发病后24～48 h死亡。JX08-45CC株与狂犬病病毒CVS-11、ERA、SRV9和Flury-LEP株的中和抗体滴度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论已对JX08-45CC株的基因组序列、毒力和免疫原性等生物学特性进行了鉴定,为开发具有我国自主知识产权的兽用狂犬病灭活疫苗候选株奠定了基础。
2012年09期 v.25 1112-1114+1120页 [查看摘要][在线阅读][下载 181K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张浩;乌美妮;王海漩;胡凝珠;胡云章;
目的制备氢氧化锌[Zn(OH)2]胶体,并检测其单独或与三磷酸腺苷二钠(Disodium adenosine tripho-sphate,简称ATP)联用对狂犬病疫苗诱导小鼠体液免疫应答的增强作用。方法采用葡萄糖酸锌作为锌源,与NaOH反应制备Zn(OH)2胶体溶液,对其进行纯化及检测,并进行小鼠急性毒性试验;将不同剂量的Zn(OH)2胶体单独或与不同剂量的ATP联用,与狂犬病疫苗(0.25 IU)混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组和抗原对照组,每组8只,Zn(OH)2和Zn(OH)2+ATP和生理盐水对照组采用单次免疫,抗原对照组分别免疫1、2、3、5次,分别于初次免疫后4、8、12、16周采血,分离血清,检测血清中抗狂犬病病毒特异性IgG抗体水平。结果所制备Zn(OH)2胶体溶液最大吸收波长为213 nm,可观察到明显的丁达尔现象,浓度为6 mg/ml,经光学色差显微镜及扫描电镜观察合格,小鼠急性毒性试验未观察到急性毒副作用。大部分佐剂组抗体水平高于抗原单次免疫组,但均未达到抗原5次免疫组水平;0.27和0.21 mg Zn(OH)2组在初次免疫后8周内有高水平抗体产生;0.27 mg Zn(OH)2组在初次免疫后16周出现抗体水平反弹性升高;0.18 mg Zn(OH)2+1.0 mg ATP组和0.18 mg Zn(OH)2+0.5 mg ATP组在初次免疫后4周内产生的抗体水平较高,之后逐渐下降;2次和3次免疫抗原对照组在初次免疫后8周内,其抗体水平不及佐剂组。结论所制备的Zn(OH)2胶体佐剂单独或与ATP联用均可增强狂犬病疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答,且安全性良好,有望应用于疫苗生产。
2012年09期 v.25 1115-1120页 [查看摘要][在线阅读][下载 427K] [下载次数：199 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 胡艳灵;陈统球;黄明;戚凤春;崔燕萍;潘翔;
目的分析甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)Js-4株经人二倍体细胞MRC-5传代后的核苷酸序列变异情况。方法将HAV Js-4株经Vero细胞适应14代获得的原始株Js-4-V14经人二倍体细胞MRC-5于35℃连续适应培养15代,取其中8个适应株(Js-4-M2、Js-4-M3、Js-4-M4、Js-4-M5、Js-4-M10、Js-4-M12、Js-4-M14、Js-4-M15)及原始株,提取病毒基因组RNA,通过RT-PCR扩增病毒全基因组,采用生物信息学软件DNAstar Lasergene 7进行序列分析。结果 8个适应株全基因组与Js-4-V14株的核苷酸序列同源性在99.8%～100.0%之间;第5代适应株在5′-NCR(101～200 bp)发生较大变异,表现为105～157 bp缺失,之后该突变稳定遗传;第10、12、14、15代适应株在2A(3 012～3 210 bp)区段3 122位点发生点突变;8个适应株和Js-4-V14毒株与野毒株HM175为同一基因亚型,均为IB型;9个毒株的主要抗原位点与野生株HM175完全一致。结论 HAV Js-4-V14株在MRC-5细胞传代适应过程中,主要抗原位点未发生突变,其与细胞适应性和病毒增殖有关的基因在传代早期已经变异,传代后期这些变异保持相对稳定。
2012年09期 v.25 1121-1124页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 章帆;湛晓琴;宋培培;胡敏;施琼;翁亚光;
目的利用RNA干扰技术下调野生型着丝粒蛋白E(Wild type centromere protein E,CENP-EWT)基因的表达,观察CENP-EWT基因沉默对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法将HCT116细胞分为空白对照组、空载体转染组和CENP-EWT shRNA转染组,转染48 h后,采用巢式PCR检测细胞中CENP-EWT基因mRNA的转录水平;MTT法检测细胞的增殖活力;Hoechst法检测细胞的凋亡比例;Transwell小室试验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果与空白对照组和空载体转染组相比,CENP-EWT shRNA转染组可有效抑制CENP-EWT基因的转录水平(P<0.05);CENP-EWT shRNA转染组细胞的增殖活力明显下降(P<0.05);细胞凋亡比例明显增加(P<0.01),细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论 CENP-EWT基因沉默能够抑制人结肠癌HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡,但同时能增强细胞的迁移和侵袭能力。
2012年09期 v.25 1125-1129页 [查看摘要][在线阅读][下载 578K] [下载次数：130 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 高明珠;朱瑞宇;陈蕴;金坚;
目的构建双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞内进行表达。方法分别以pEGFP-N1和pDsRed-N1为模板,PCR扩增EGFP和DsRed基因,插入表达载体pCI中,分别构建重组表达质粒pCI-EGFP和pCI-DsRed,利用载体上BglⅡ和BamHⅠ为同尾酶的特点,将两个表达质粒酶切后拼接,构建双启动子双报告基因重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP,转染293T细胞,荧光显微镜观察EGFP和DsRed的表达,Western blot和流式细胞术检测EGFP和DsRed蛋白的表达。结果重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP经酶切鉴定和测序证实构建正确,两启动子为顺向相连;EGFP和DsRed蛋白在293T细胞中可同时正确表达。结论成功构建了双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞中表达,为实现两种外源基因在真核细胞内的同步表达及示踪提供了有效的分子工具。
2012年09期 v.25 1130-1134页 [查看摘要][在线阅读][下载 401K] [下载次数：488 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 赵玉娇;龙海亭;潘玥;陈俊英;杨丽娟;岳耀斐;孙强明;
目的研究Ⅳ型登革病毒中国株LD34在人胚肺二倍体细胞KMB17上的传代适应性及其生物学特性。方法将Ⅳ型登革病毒中国株LD34在C6/36细胞上扩增,并采用微量细胞病变法测定病毒的感染性滴度。以2.0 MOI的病毒接种KMB17细胞传代培养,筛选KMB17细胞适应株,并进行培养条件的优化。将Ⅳ型登革病毒中国株LD34 KMB17细胞适应株连续传10代,测定病毒的感染性滴度,免疫荧光法检测病毒的抗原性,RT-PCR法扩增登革病毒的特异性基因。结果筛选出的Ⅳ型登革病毒中国株LD34在KMB17细胞上的最佳培养条件为病毒接种MOI 0.4,培养基血清浓度5%;其感染KMB17细胞后可产生明显的细胞病变(CPE),连续传10代,病毒滴度达7.75 CCID50/ml;第10代病毒的抗原性呈阳性;第10代病毒能扩增出511 bp的登革病毒特异性基因和393 bp的Ⅳ型登革病毒特异性基因。结论获得了Ⅳ型登革病毒中国株LD34 KMB17细胞适应株,病毒保持了原始毒株的基本生物学特性,且具有较好的抗原性。
2012年09期 v.25 1135-1138页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 陈智嘉;谷励;王景龙;许小敏;陈思嘉;
目的原核表达并纯化翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)。方法以人乳腺癌细胞系MCF-7总RNA为模板,PCR扩增TCTP基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。His Trap FF层析柱纯化重组蛋白后,进行Western blot鉴定。结果克隆的目的基因序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为20 000,主要以包涵体形式表达;纯化后纯度为80%,可与兔抗人TCTP多克隆抗体特异性结合。结论已成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化了TCTP,为进一步研究其在肿瘤等疾病发生、发展及治疗中的作用奠定了基础。
2012年09期 v.25 1139-1142页 [查看摘要][在线阅读][下载 237K] [下载次数：92 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王琳;王海漩;李建芳;李彦涵;胡凝珠;胡云章;
目的研究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)与氢氧化铝联合佐剂对HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将NAD与氢氧化铝按不同剂量联合后,与不同剂量的HBsAg混合,分别经肌肉注射免疫ICR小鼠1针或2针(间隔2周),每只注射0.2 ml,并设阴性对照组(生理盐水)、单纯抗原对照组、单纯铝佐剂对照组和单纯NAD对照组,共23组,每组6只。分别于末次免疫后2、4、6、8、10、12周采血,分离血清,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg IgG水平;试验期内,观察小鼠是否发生异常状况;14周后,取最佳剂量免疫组及阴性对照组小鼠心、肝、脾、肺组织做组织切片,进行病理分析。结果阴性对照组在各时间点均未检测到抗HBsAg IgG抗体,除联合佐剂12组外,其余各组血清抗HBsAg IgG抗体水平均在末次免疫后第6周达峰值,随着时间的延长,抗体水平呈下降趋势;联合佐剂14组(HBsAg 2μg+氢氧化铝100μg+NAD 2.5μg)产生的抗体水平最高,且持续时间较长,其对HBsAg的体液免疫增强效应显著优于单纯抗原对照组、单纯铝佐剂对照组及单纯NAD佐剂对照组(P<0.05)。试验期内,各组小鼠均未出现异常反应;最佳剂量免疫组(14组)及阴性对照组组织切片观察结果显示,均为发生病变。结论 NAD与氢氧化铝联合佐剂能显著增强HBsAg诱导的小鼠特异性体液免疫应答,在免疫剂量范围内,联合佐剂安全性良好。
2012年09期 v.25 1143-1146页 [查看摘要][在线阅读][下载 352K] [下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 段江洁;田静;姜蓉;汪维伟;
目的观察去上皮羊膜及其浸提液体外诱导骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向上皮细胞的分化,并探讨其机制。方法从胎儿四肢长骨分离BMSCs,扩增后采用流式细胞术分析第3代(P3)细胞表面抗原(CD29、CD34、CD71和HLA-DR)的表达,并用4,6-乙酰基-2-苯基吲哚(DAPI)标记第4代BMSCs(P4-BMSCs)。机械法去除正常胎盘羊膜上皮,制成去上皮羊膜,并制备去上皮羊膜浸提液。将DAPI标记的BMSCs接种于羊膜上,设加或不加表皮细胞生长因子(Epidermal growth factor,EGF)、类胰岛素1号生长因子(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)、羊膜浸提液诱导组及细胞爬片对照组,体外诱导培养后,采用免疫荧光组织(细胞)化学染色学法检测各组细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)、EGF-R和IGF-1-R的表达,并于诱导后第10天计算CK阳性细胞率。结果原代BMSCs呈典型旋涡状生长,P3细胞表达CD29和CD71,不表达CD34和HLA-DR。羊膜组和细胞爬片组BMSCs在加入EGF或IGF-1诱导后,表达EGF-R和IGF-1-R的时间较未加生长因子的对照组提前2～4 d,表达CK的时间提前2～6 d,单用羊膜组或羊膜浸提液组的表达时间差异无统计学意义(P>0.05);诱导第10天,单用羊膜或羊膜浸提液诱导组的CK阳性细胞表达率明显高于细胞爬片对照组(P<0.05);羊膜与EGF、IGF-1联合诱导组高于单用羊膜组(P<0.05);EGF诱导组高于IGF-1诱导组(P<0.05)。结论羊膜及羊膜浸提液、外源性EGF和IGF-1在体外均可诱导BMSCs向上皮细胞分化,羊膜可能主要通过其所含的细胞因子诱导BMSCs向上皮分化。
2012年09期 v.25 1147-1151页 [查看摘要][在线阅读][下载 395K] [下载次数：90 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 郑凤娇;王翠玲;王增松;郭桂铃;李文棠;谢飞群;牛丽红;罗群方;张宜俊;
目的探讨重组人白介素-12(Recombinant human interleukin-12,rhIL-12)对辐射损伤新生儿脐带血造血干细胞凋亡及其胞内STAT5、STAT4和丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)表达的影响。方法收集16份新生儿脐带血,分离单个核细胞,经终浓度分别为0.01、0.1和1 ng/ml的rhIL-12处理24 h后,用直线加速器以4 Gy X射线单次照射24 h,用流式细胞仪分析CD34+造血干细胞的凋亡率;并观察CD34+造血干细胞经1 ng/ml rhIL-12体外活化15和30 min后,细胞内STAT5、STAT4和MAPK蛋白的表达水平。结果 rhIL-12对辐射损伤引起的新生儿脐带血CD34+造血干细胞凋亡具有明显的下调作用(P<0.01),且呈剂量依赖性(P<0.01);rhIL-12与新生儿脐带血CD34+造血干细胞共同孵育15和30 min,均可显著上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平(P<0.01或<0.001),下调STAT4蛋白的表达水平(P<0.05或<0.01),且均呈时间依赖性(P<0.001或<0.05)。结论 rhIL-12对辐射损伤的新生儿脐带血造血干细胞具有抗凋亡作用,并能上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平。
2012年09期 v.25 1152-1155页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 杨清平;周知;吕波;陶勇;李胜难;罗小红;殷清华;
目的研究小剂量长春新碱(Vincristine,VCR)和恩度(Endostar,Endo)联合用药对横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RMS)BALB/c裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用,并探讨其机制。方法经BALB/c裸鼠右侧腋部皮下注射RMS细胞PLA-802悬液,建立RMS的皮下移植瘤动物模型;接种RMS后第8天,将选模成功的裸鼠随机分为对照组(注射生理盐水)、VCR组、Endo组和联合组,注射部位均为腹腔,注射体积均为0.2 ml/(只.日),每3 d称重1次,并测量肿瘤的长短径,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,2周后处死裸鼠,称量瘤重,并计算抑瘤率;RT-PCR和Western blot法检测移植瘤细胞中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;免疫组化法检测VEGF和CD31的分布和表达。结果裸鼠接种PLA-802细胞第8天,RMS裸鼠模型复制成功,裸鼠成瘤率为84%(42/50);联合组裸鼠体重和移植瘤的体积、重量均明显小于对照组、VCR组和Endo组(P<0.01);VCR组、Endo组和联合组抑瘤率分别为31.41%、20.75%和48.41%;与对照组相比,VCR组、Endo组和联合组裸鼠移植瘤细胞中VEGF基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著下降,且以联合组下降最明显(P<0.05);免疫组化结果显示,联合组VEGF和CD31的表达水平明显低于其他3组。结论小剂量VCR和Endo对RMS的皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,而联合用药能起到增效作用,其机制可能是通过抑制肿瘤的血管生成而发挥其抑制作用。
2012年09期 v.25 1156-1160页 [查看摘要][在线阅读][下载 318K] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李丹丹;张梅;李萍;温新元;孙自强;班博;
目的观察β3肾上腺素能受体激动剂BRL37344对3T3-L1前脂肪细胞分化及相关基因mRNA转录的影响,并探讨其抗肥胖的作用机制。方法将3T3-L1前脂肪细胞分为4组:空白对照组、常规分化组、BRL37344处理组、常规分化+BRL37344组。采用油红O染色法初步判断各组脂肪细胞的分化情况,RT-PCR法检测各组脂肪细胞分化过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(Peroxisome proliferators activated receptorγ2,PPARγ2)、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(Adipocyte fatty acidbinding protein,aP2)、脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)基因mRNA的转录水平。结果经不同浓度的BRL37344处理8 d后,3T3-L1前脂肪细胞中PPARγ2、aP2、LPL基因mRNA的转录水平均下调,且呈剂量依赖性,其中10-7mol/L BRL37344作用明显;在不同的分化时间点,经10-7mol/L BRL37344处理后,细胞分化相关基因与相应对照组相比,均呈下调趋势(P<0.05)。结论β3肾上腺素能受体激动剂BRL37344可能通过下调脂肪细胞分化相关基因的转录,抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。
2012年09期 v.25 1161-1164+1170页 [查看摘要][在线阅读][下载 317K] [下载次数：254 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 龙丽;唐良萏;
目的研究绿茶提取物表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(Epigallocatechin-3 gallste,EGCG)对人卵巢癌HO-8910细胞增殖及细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨EGCG抑制卵巢癌细胞生长的机制。方法用不同浓度的EGCG(10、20和40μg/ml)处理体外培养的人卵巢癌HO-8910细胞不同时间(24、48和72 h),采用MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期的变化;RT-PCR和Western blot分别检测细胞中β-catenin和下游靶基因CyclinD1 mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果 EGCG可明显抑制HO-8910细胞的增殖活力,且抑制作用呈剂量-时间依赖性(P<0.05);40μg/ml EGCG干预后,HO-8910细胞主要阻滞于G0/G1期,且在48 h阻滞作用最为明显;EGCG可显著降低HO-8910细胞中β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量-时间依赖性(P<0.01)。结论 EGCG可抑制HO-8910细胞的增殖,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关,提示EGCG可能在卵巢癌的治疗中具有一定的应用前景。
2012年09期 v.25 1165-1170页 [查看摘要][在线阅读][下载 432K] [下载次数：256 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 杨巍;张英林;牛坤伟;黛文丸;小保方技利;李航;蔡云;李敬轩;付海英;
目的研究灵芝精粉与灵芝孢子粉对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响,并比较二者在肿瘤治疗中的免疫调节作用。方法经C57BL/6小鼠右腋皮下接种1×106个Lewis肺癌细胞,建立小鼠Lewis肺癌模型。于接种肿瘤细胞次日至第20天,分别隔日灌胃灵芝孢子粉(D1)、灵芝精粉001(D2)及灵芝精粉002(D3),剂量均为0.5g/kg,同时设立对照组和肿瘤组(灌胃等体积生理盐水)。监测各组小鼠体重及瘤体积,第21日处死小鼠,称量瘤重,并无菌制备脾细胞悬液,检测小鼠NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+、CD8+T细胞和B细胞数量,淋巴细胞转化试验检测脾细胞中T、B细胞增殖功能。结果与对照组比较,肿瘤组小鼠脾细胞中T、B细胞增殖功能、细胞数量及NK细胞杀伤活性均有不同程度的下降。与肿瘤组相比,3种灵芝制剂均可提高Lewis肺癌模型小鼠NK细胞的杀伤活性和T、B细胞增殖功能,其中,以D2作用最为明显(P<0.05);3种灵芝制剂均可不同程度地提高Lewis肺癌模型小鼠CD4+、CD8+T细胞数量,其中,以D3作用最为显著(P<0.05)。3种灵芝制剂对Lewis肺癌模型小鼠的体重、瘤重、瘤体积及B细胞数量均无明显影响。结论灵芝制剂对Lewis肺癌小鼠的免疫功能具有正向调节作用,其中灵芝精粉的作用优于灵芝孢子粉。
2012年09期 v.25 1171-1175页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K] [下载次数：652 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：1 ] - 阳明明;钟健;蒋电明;
目的观察川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对雪旺细胞(Schwann cells,SCs)合成与分泌神经生长因子(Nervegrowth factor,NGF)的影响,探讨其促进周围神经损伤修复的可能机制。方法采用DMSO溶解TMP,将SCs分为正常对照、溶媒对照组和不同浓度TMP组(终浓度分为25、50、100和200μg/ml),作用24 h后,通过MTT法和流式细胞术分析TMP对SCs增殖和凋亡的影响,Real-Time PCR与ELISA法分别检测TMP在mRNA和蛋白质水平对SCs合成与分泌NGF的影响。结果 TMP对SCs的增殖活力及凋亡均无影响。溶媒对照组、25、50μg/ml TMP组NGF基因mRNA水平和细胞培养上清中NGF含量与正常对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);100、200μg/ml TMP组与正常对照组相比明显增高(P<0.05),两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TMP可促进SCs合成与分泌NGF,且该作用具有浓度依赖性,这可能是其促进神经损伤修复的机制之一。
2012年09期 v.25 1176-1179+1184页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 李亚南;梁丽;李艳萍;叶强;
目的观察A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌(Meningococcal group A&C/Haemophilus influenzae type b,ACHib)多糖结合疫苗的免疫原性。方法采用开放、完全随机、盲态观察的方法,将1 800名观察对象分为临床试验组和对照组,每组各900名,两组又按3个年龄段分为3～5、6～11和12～71月龄组。试验组仅经上臂三角肌肌内注射试验疫苗(ACHib多糖结合疫苗),对照组分别经左右上臂同时注射两种对照疫苗(A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗和Hib结合疫苗)。3～5月龄组免疫3针,每针间隔1个月;6～11月龄组免疫2针,每针间隔1个月;12～71月龄组免疫1针。分别于免疫前、全程免疫后30～35 d采集静脉血,分离血清,采用功能性抗体杀菌力法检测A、C群脑膜炎球菌血清杀菌抗体滴度,间接ELISA法检测Hib抗体水平,并计算抗体阳转率及抗体增长倍数。结果免疫后,3个年龄段的试验组与对照组血清A、C群脑膜炎球抗体和Hib抗体阳转率差异均无统计学意义(P>0.05)。3个年龄段试验组与对照组易感和非易感人群A、C群脑膜炎球菌抗体滴度差异均无统计学意义(P均>0.05),而试验组Hib抗体水平低于对照组,且差异有统计学意义(P<0.001)。结论 ACHib多糖结合疫苗具有良好的免疫原性,可作为上述3种病原菌的预防制剂推广使用。
2012年09期 v.25 1190-1194+1197页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K] [下载次数：451 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：0 ] - 英志芳;王剑锋;李娟;李艳萍;李荣成;李长贵;
目的评价脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)在中国婴儿中的免疫持久性。方法选择广西壮族自治区平乐县11个乡(镇)的372名健康婴儿,随机分为2组:176名婴儿分别于2、3、4月龄接种1剂IPV疫苗,196名婴儿分别于2、3、4月龄口服1粒脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(Oral poliovirus vaccine,OPV)。两组均于基础免疫后1个月及18月龄时采集静脉血,采用微量中和试验检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体(Neutralizing antibody,NA)滴度。结果两组婴儿接种疫苗后18月龄时血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均明显低于基础免疫后1个月。18月龄时IPV组血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA阳性率明显低于基础免疫后1个月,且差异均有统计学意义(P均<0.001);OPV组差异无统计学意义(P=0.111)。IPV组部分婴儿在18月龄时血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA滴度小于1︰8,比例分别为11.4%、17.1%和18.2%。结论 IPV基础免疫后至18月龄时,婴儿抗脊灰病毒抗体保护水平下降,需进行加强免疫。
2012年09期 v.25 1195-1197页 [查看摘要][在线阅读][下载 176K] [下载次数：248 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王亚珠;李瑛;范晋奇;肖培林;凌智瑜;殷跃辉;
目的探讨血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)基因rs4340和rs4343多态性与心房颤动(简称房颤)的相关性。方法选择重庆地区4家三甲医院就诊的102例房颤患者及同期住院的无房颤病史患者100例,抽取患者静脉血,分别提取基因组DNA,采用单核苷酸多态性-限制性片段长度多态性(Single nucleotide polymorphism,restriction fragmentlength polymorphism,SNP-RFLP)法及基因测序检测ACE基因rs4340和rs4343的基因型。结果房颤组ACE基因rs4340多态性的基因型及等位基因分布与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),房颤组rs4343的基因型和等位基因分布与对照组间差异有统计学意义(P<0.001或P=0.001)。与对照组相比,房颤组GG+AG基因型频率明显高于AA基因型频率(P<0.001)。II/AA基因型在房颤组中出现的频率明显少于对照组(P=0.001),而II/AG基因型在房颤组中出现的频率明显高于对照组(P=0.002)。房颤组中rs4340和rs4343各基因型左房前后径与右房横径差异均无统计学意义(P>0.05);而将两位点联合分析发现,携带II/AA基因型房颤患者的左房前后径和右房横径均明显小于其他基因型(P<0.001),同时,携带II/AG基因型房颤患者的左房前后径和右房横径均明显大于其他基因型(P<0.001)。结论 ACE基因rs4343多态性与房颤显著相关,II/AA基因型是房颤发生发展的保护因子,而II/AG基因型是预测房颤发生发展的危险因子。
2012年09期 v.25 1198-1202页 [查看摘要][在线阅读][下载 323K] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 杨平;苟欣;陈雪莲;齐玉增;
目的探讨血小板源性生长因子-D(Platelet-derived growth factor D,PDGF-D)和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(Epidermal growth factor receptor typeⅢmutant,EGFRvⅢ)在膀胱移行细胞癌(Bladder transitional cell carcinoma,BTCC)中的表达及其临床意义。方法分别采用RT-PCR法和免疫组织化学SP法检测PDGF-D和EGFRvⅢ在80例BTCC组织和10份癌旁正常组织中的转录及表达情况,并分析二者与患者临床病理特征之间的相关性。结果 BTCC组织中PDGF-D和EGFRvⅢ在mRNA和蛋白水平上的表达均显著高于癌旁正常组织(P<0.05);PDGF-D和EGFRvⅢ的表达与BTCC不同病理分级和TNM分期有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤单发和多发、初发和复发无关(P>0.05);PDGF-D与EGFRvⅢ的表达呈正相关(r=0.994,P<0.01)。结论 PDGF-D和EGFRvⅢ在BTCC组织中的表达与病理分级及TNM分期明显相关,可作为判断BTCC恶性程度、浸润与进展的重要生物学指标。
2012年09期 v.25 1203-1206+1210页 [查看摘要][在线阅读][下载 406K] [下载次数：63 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 毕华;高凯;范文红;陶磊;丁有学;史新昌;饶春明;
目的对重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factor receptor,TNFR)-抗体融合蛋白的受体结合活性检测方法进行改进。方法采用夹心ELISA法对系列稀释的重组人Ⅱ型TNFR-抗体融合蛋白供试品和参比品进行检测,通过四参数方程拟合,计算二者的半数有效浓度(EC50),分析其受体结合活性。对改进的方法进行精密性和准确性验证,并与原方法进行比较。结果重组人Ⅱ型TNFR-抗体融合蛋白供试品和参比品均存在量效关系,符合四参数方程y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D;3批重组人Ⅱ型TNFR-抗体融合蛋白经3次测定,受体结合活性分别为(133±8)、(114±4)和(138±9)BU,符合其质量标准中受体结合活性65～135 BU的规定,变异系数分别为6.02%、3.51%和6.52%;1批供试品经3次重复测定,回收率为(107.67±7.50)%;3批供试品采用原方法和改进方法分别重复测定3次,受体结合活性差异均无统计学意义(P>0.05)。结论改进的方法精密性好,准确性高,可作为重组人Ⅱ型TNFR-抗体融合蛋白受体结合活性的常规检测方法。
2012年09期 v.25 1207-1210页 [查看摘要][在线阅读][下载 323K] [下载次数：280 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 殷波涛;李佩珊;李时君;张春燕;陈妍;李方和;
目的建立A群脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)排溢法ELISA,并进行验证及初步应用。方法采用改良过碘酸盐氧化法制备抗GAMP-HRP。以抗GAMP单克隆抗体包被酶标板,抗GAMP-HRP作为酶标抗体,建立检测GAMP的排溢法ELISA。采用棋盘滴定法确定包被抗体及酶标抗体的最佳工作浓度,并对其特异性、敏感性及重复性进行验证。采用建立的排溢法ELISA检测GAMP-TT系列层析样品中的GAMP抗原活性,并与传统一步法ELISA及二步法ELISA进行比较。结果建立的排溢法ELISA的包被抗体最佳浓度为20μg/ml,酶标抗体最佳工作浓度为1∶128。该方法的特异性良好,敏感性与一步法和二步法相当,批内和批间变异系数与一步法相当;该方法检测GAMP-TT层析样品中的GAMP抗原活性的结果与二步法ELISA基本一致。结论排溢法ELISA的操作步骤与一步法ELISA大致相似,但较二步法ELISA显著简化,其对一步法ELISA中Hooks效应的纠正效果与二步法ELISA相同。
2012年09期 v.25 1211-1213页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王剑锋;英志芳;李长贵;
目的验证低pH条件下胃蛋白酶-甲苯消化法对不同核酸类型的脂包膜病毒的灭活效果。方法以水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)作为RNA指示病毒,以伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为DNA指示病毒,将破伤风免疫血浆样品经低pH(3.2±0.2)、0.2%甲苯、6～12活力单位胃蛋白酶处理后各取27 ml,分别加入3 ml指示病毒(9∶1),在(30.0±1)℃水浴中分别振摇10、30、60、90 min灭活病毒。以Vero细胞、PK-15细胞为基质,采用96孔细胞病变法检测残余病毒滴度,验证病毒灭活效果。结果破伤风免疫血浆样品经低pH胃蛋白酶及甲苯消化处理90 min后,VSV和PRV两种指示病毒的灭活效果分别为3.12～3.88和5.25～5.38 logTCID50/0.1 ml。结论采用低pH胃蛋白酶-甲苯消化法对破伤风免疫血浆中PRV灭活效果较好,而对VSV灭活效果有待提高。
2012年09期 v.25 1214-1215+1219页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K] [下载次数：144 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 刘菊;刘少祥;徐永革;林明显;卢德芬;
目的采用半定量法对乙型脑炎减毒活疫苗皮下感染入脑动物试验进行方法学验证。方法引入逐日观察打分的方法,将皮下感染入脑试验由定性转变为半定量动物试验,验证该方法的精密度(重复性)、中间精密度、准确度、特异性。结果皮下感染入脑试验半定量检测方法具有良好的精确度(重复性),中间精密度及特异性。各项验证参数均达到预先设定的可接受标准。结论该方法与用途一致,且与供试品相适宜,可用于乙型脑炎减毒活疫苗的质量控制。
2012年09期 v.25 1216-1219页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [下载次数：98 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘朋飞;周余来;冯业童;吴昊昱;刘迪;董超;吴璇;石毅;
目的采用非灌流法分离大鼠肝星形细胞(Hepatic stellate cell,HSC),并进行鉴定。方法采用非灌流法结合酶消化法分离大鼠肝脏细胞,密度梯度离心进一步分离HSC,油红染色检测HSC胞质中的脂滴,免疫组化法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(Desmin)及神经胶质酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。结果非灌流法结合酶消化法可成功分离大鼠HSC;密度梯度离心纯化的HSC经油红染色,细胞核周围可见红色脂滴;该细胞中α-SMA、结蛋白及GFAP的免疫组化染色结果均呈阳性,细胞着色率可达90%以上。结论成功建立了大鼠HSC的非灌流分离模式,所获得的HSC纯度较高,该方法稳定简便,具有一定的推广应用价值。
2012年09期 v.25 1220-1222页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K] [下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘金华;吴月丹;史艳宇;刘阳;吴连鹏;
目的分析市售不同厂家DNA聚合酶中的宿主细胞核酸残留。方法根据E.coli 16S rRNA基因序列设计特异引物及探针,建立基于Taqman探针技术的Real-time PCR检测方法,检测基因工程制品中E.coli的核酸残留。结果建立的Real-time PCR法检测市售不同厂家的DNA聚合酶中均有宿主细胞E.coli核酸残留,但不同来源的DNA聚合酶其宿主细胞核酸残留量不同。结论应用PCR方法检测基因工程产品,尤其是E.coli制备的生物制品时,应注意DNA聚合酶中核酸残留对检测结果的影响;应用Real time PCR法定量检测时,建议将Ct值控制在30以内,以减小DNA聚合酶背景残留物的影响。
2012年09期 v.25 1223-1224+1229页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张珊瑚;吴海莲;李存香;戴瑞霞;祁芝珍;
<正>鼠疫噬菌体裂解试验是经典的鼠疫病原学诊断方法之一,也是鼠疫病原学"四步检验"中最主要的一项检验。在现行的鼠疫诊断标准中,仍将鼠疫噬菌体裂解试验的结果作为鼠疫菌的判定依据。在鼠疫诊断试验中所采用的特异性噬菌体为φA1122
2012年09期 v.25 1225页 [查看摘要][在线阅读][下载 35K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]