- 沈琼;雷建强;周朝明;张高峡;
目的在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒18型(Human papilomavirus 18,HPV18)L1蛋白,纯化病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),并检测其免疫原性。方法将含HPV18 L1基因的酵母表达质粒pHPV18 L1电转化毕赤酵母X-33,甲醇诱导表达,重组HPV18 L1蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析后,经离子交换层析、分子筛层析纯化,采用SEC-HPLC分析纯度;动态光散射和透射电镜分析粒径分布和结构;并通过小鼠半数有效剂量(ED50)和大鼠抗体滴度测定分析其免疫原性。结果 HPV18 L1蛋白在毕赤酵母中获得了有效表达,相对分子质量约为55 000,可与小鼠抗HPV18 L1单抗特异性结合;经纯化的HPV18 L1 VLPs纯度为99%,且颗粒大小均一,直径约50 nm;经吸附铝佐剂后,免疫小鼠的ED50为0.006 68μg;并可诱导大鼠产生较高的抗体滴度。结论 HPV18 L1可在毕赤酵母中高效表达并自动形成VLPs,该VLPs经纯化、吸附铝佐剂后具有良好的免疫原性,为工业化生产HPV18 L1疫苗奠定了基础。
2012年02期 v.25 129-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K] [下载次数：369 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 佟芳;赵玉秀;王辉;梁宏阳;马可;马乐;牛志彬;杨阳;刘颖;张月兰;
目的采用WAVE生物反应器培养Vero细胞制备乙型脑炎病毒灭活疫苗。方法利用2 L WAVE生物反应器和微载体经半连续方式培养Vero细胞,每24 h取样,观察细胞生长情况,实时监测葡萄糖浓度。待细胞长至单层时,以0.03～0.5 MOI接种乙型脑炎病毒。待细胞病变率达25%时,开始收获病毒液,病毒收获液经纯化后,制备乙型脑炎灭活疫苗,按《中国药典》三部(2010版)要求检测各项指标。结果 Vero细胞培养至6 d在微载体上长成致密单层,接种病毒后2 d,细胞病变率达25%,开始收获病毒液,收获量为1 L/d,可连续收获5～7 d,总计5～7 L病毒原液;病毒培养至第4天滴度达峰值,为8.54 LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到《中国药典》三部(2010版)要求。结论初步建立了WAVE生物反应器培养Vero细胞制备乙型脑炎灭活疫苗的方法。
2012年02期 v.25 134-136页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K] [下载次数：367 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：1 ] - 刘蓉娜;方习静;张爱华;杨晓明;张雅婷;闭兰;
目的构建结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407,并检测其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法以基因重组卡介苗(rBCG)AERAS-422基因组为模板,PCR扩增Rv3407基因,构建真核表达质粒pVAX1-Rv3407,转染293T细胞,采用免疫荧光法及Western blot法检测Rv3407蛋白的表达。结果 PCR扩增获得长300 bp的Rv3407基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv3407经双酶切及DNA测序证明构建正确;转染48 h后,Rv3407蛋白在293T细胞中有效表达,且主要分布在细胞质中。结论成功构建了结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407,为新型结核病疫苗的研制奠定了基础。
2012年02期 v.25 137-139+147页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K] [下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ]
- 张俊;张涛;王勃;李少林;
目的构建hsa-miR-150慢病毒表达质粒,并鉴定其感染肝癌细胞系Hep3B后miR-150的表达水平。方法根据hsa-miR-150序列化学合成hsa-miR-150基因片段,克隆至慢病毒载体pGIPZ上,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150,转染包装细胞293T进行包装,检测病毒滴度。收获并浓缩重组慢病毒颗粒,稳定转染Hep3B细胞,流式细胞术检测GFP的表达率;荧光定量PCR检测miR-150的表达水平。结果重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150经菌落PCR及测序证实构建正确;重组慢病毒的滴度约为5.7×108 TU/ml;稳定转染Hep3B细胞后,GFP的表达率为(97.78±1.14)%,重组慢病毒转染组miR-150的表达水平较空白对照组增加约6倍(P<0.05)。结论成功构建了hsa-miR-150慢病毒表达质粒,其在Hep3B细胞中可高效表达,为进一步研究miR-150的生物学功能奠定了基础。
2012年02期 v.25 140-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K] [下载次数：200 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张军;韩钰;蔡富强;秦烨;夏燕;王艳林;
目的克隆人腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)cDNA,原核表达并纯化重组AdoMetDC蛋白。方法采用巢式RT-PCR法从人宫颈癌HeLa细胞株总RNA中克隆人AdoMetDC cDNA,插入载体pET-15b中,构建原核表达质粒pET-15b/AdoMetDC,转化大肠杆菌Rossetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的重组AdoMetDC蛋白。结果克隆出编码全长人AdoMetDC的cDNA序列,并构建了重组原核表达质粒pET-15b/AdoMetDC;表达的重组AdoMetDC蛋白经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约35 000、30 000、14 000的前酶、自催化分裂后的α亚单位和β亚单位;前酶和β亚单位可被Ni-NTA树脂有效纯化;纯化的重组蛋白可被抗His抗体和抗AdoMetDC抗体特异性识别。结论原核表达并纯化了人AdoMetDC,为其功能研究和临床应用奠定了基础。
2012年02期 v.25 144-147页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 吴燕;刘北忠;王翀;钟梁;朱丹;王春光;黎亮;高艳军;
目的构建JTV1基因siRNA重组表达质粒,转染K562细胞,鉴定其干扰作用。方法人工合成靶向JTV1基因的siRNA干扰序列,克隆至载体pGeneSil-1上,构建重组表达质粒pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA,转染人K562细胞,经G418稳定筛选后,采用RT-PCR及Western blot法分别检测重组表达质粒对K562细胞中JTV1基因转录和翻译的影响;MTT法检测抑制JTV1基因的表达对K562细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA经测序证明构建正确;其转染K562细胞后,细胞JTV1基因的转录和翻译水平均明显降低;抑制JTV1的表达可促进K562细胞增殖。结论已成功构建了pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA质粒,并获得了稳定的JTV1基因表达受抑的K562细胞克隆,为进一步研究JTV1基因的功能及其与肿瘤的相关性奠定了基础。
2012年02期 v.25 148-151+156页 [查看摘要][在线阅读][下载 484K] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张顺;潘小霞;袁静;文喻玲;陈元鼎;
目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB-Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,对VP3基因进行分子系统进化及基因型分析。结果重组表达质粒pET-VP3经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为98 000,以包涵体形式存在;重组VP3蛋白可被抗SA11株全病毒豚鼠免疫血清识别;迄今发现的A组RV VP3可分为7个基因型,TB-Chen株和SA11株VP3基因分别属于M2型和M5型。结论成功原核表达了A组人RV TB-Chen株VP3蛋白,为进一步研究VP3的结构功能及开发新型RV疫苗、诊断试剂和治疗药物奠定了基础。
2012年02期 v.25 152-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 钱冠华;董君军;段昌柱;彭惠民;
目的构建乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒,并检测HBx对人正常肝细胞株L02细胞增殖的影响。方法以pcDNA3-HBV质粒为模板,PCR法扩增HBx基因编码区全长序列,将其克隆至pIRES2-EGFP荧光真核表达载体中,构建重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx,转染L02细胞,筛选稳定表达HBx的细胞,RT-PCR法检测细胞中HBx基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中HBx蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力。结果重组荧光真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该质粒的L02细胞可检测到HBx基因mRNA的转录及蛋白的表达,与空质粒pIRES2-EGFP转染的L02细胞相比,增殖活力明显提高。结论成功构建了HBx基因荧光真核表达质粒,并获得了能稳定表达HBx蛋白的L02细胞株,为进一步研究HBx对细胞周期调控通路的影响及探索HBx导致的与HBV相关的HCC的分子机制奠定了基础。
2012年02期 v.25 157-160页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K] [下载次数：169 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 崔雪玲;葛敬岩;李晨光;孙洋;牛立慢;刘海岩;柳忠辉;王轶楠;
目的探讨激活素受体相互作用蛋白(Activin receptor-interacting protein,ARIP)1及2(ARIP1,2)在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及作用。方法采用免疫细胞化学染色法检测RAW264.7细胞中ARIP1,2的表达;将质粒CAGA-lux、CMV-gal分别与表达质粒pcDNA3-ARIP1、pcDNA3-ARIP2或空质粒pcDNA3共转染RAW264.7细胞,应用激活素A刺激,检测细胞内报告基因转录荧光素酶的活性;实时定量RT-PCR检测ActRⅡA mRNA的表达。结果免疫细胞化学染色结果显示,小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞表达ARIP1,2;RAW264.7细胞过表达ARIP1,2均能抑制Activin A诱导的特异基因转录;过表达ARIP2可抑制RAW264.7细胞ActRⅡA mRNA的表达,而过表达ARIP1对ActRⅡA mRNA的表达无明显影响。结论 ARIP1,2在小鼠巨噬细胞中共表达,并具有下调激活素信号传导的作用,但其作用方式不同。
2012年02期 v.25 161-163+167页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 王勇;陈虹;卜友泉;
目的构建带有GFP标签的RAS鸟苷酸释放因子2(RAS guanine nucleotide releasing factor 2,RASGRF2)真核表达质粒,并建立稳定表达RASGRF2的肺癌细胞株。方法用SgfⅠ和NotⅠ双酶切RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒,回收RASGRF2基因片段,亚克隆入pCMV6-GFP载体中,构建重组表达质粒RASGRF2-pCMV6-GFP,转染肿瘤细胞H1299,倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白的定位。经G418筛选并建立稳定表达RASGRF2的细胞株,RT-PCR及Western blot法检测RASGRF2的表达。结果经双酶切及测序证实RASGRF2基因成功克隆至真核表达载体pCMV6-GFP中;重组RASGRF2-GFP蛋白在H1299细胞中主要在胞质中表达;经RT-PCR及Western blot证实,RASGRF2在H1299细胞中稳定表达。结论成功建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株,为进一步研究RASGRF2基因的功能奠定了基础。
2012年02期 v.25 164-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：115 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 杜佳妮;陈磊;龙凤英;江文正;
目的克隆人颗粒酶A(Granzyme A,GzmA)基因,在大肠杆菌中进行表达,并初步优化表达条件。方法通过RT-PCR扩增人GzmA基因,插入原核表达载体pET24a(+)中,构建重组表达质粒pET24a-GzmA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并对诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值进行优化。结果重组表达质粒pET24a-GzmA经双酶切和测序,证实GzmA基因已正确插入载体中,且序列正确;表达的重组蛋白相对分子质量约29 000,且可与小鼠抗His单抗特异性结合;工程菌的最佳诱导温度为37℃,IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值对重组蛋白的表达量影响较小。结论成功克隆了人GzmA基因,并在大肠杆菌中进行了表达。
2012年02期 v.25 168-170+175页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 郝亚琴;欧阳小波;代剑波;王立;
目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路与上皮间质转换(Epithelial-mesenchymal transitions,EMT)在胃癌侵袭转移中的作用及分子机制。方法分别用环靶明、Snail siRNA、空质粒及环靶明+Snail siRNA的混合物处理人胃癌SGC-7901细胞,并设常规培养对照组,48 h后,采用RT-PCR法检测各组细胞中Gli1、Snail及E-cadherin基因mRNA的转录水平;Transwell小室试验检测细胞侵袭能力的变化;异质黏附试验检测各处理因素对细胞异质黏附能力的影响。结果与对照组相比,环靶明干扰组和联合干扰组细胞Gli1基因mRNA的转录水平明显降低(P<0.05),环靶明干扰组、Snail siRNA组及联合干扰组Snail基因mRNA的转录水平明显降低(P<0.05),而E-cadherin基因mRNA的转录水平明显升高(P<0.05);环靶明干扰组、Snail siRNA组及联合干扰组中细胞的侵袭能力及异质黏附能力明显低于对照组(P<0.05)。结论 Hh信号通路可能通过Gli1调控Snail而参与调控EMT的过程,从而在胃癌的侵袭转移中发挥重要作用。
2012年02期 v.25 171-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 411K] [下载次数：436 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 周伟;陈鹏飞;吴小翎;姜蓉;徐艳华;
目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植后对实验性肝纤维化大鼠的作用及其机制。方法直接贴壁法分离纯化雄性SD大鼠BMSCs;将30只雌性SD大鼠分为3组:正常组、肝纤维化模型组和BMSCs移植组,模型组和BMSCs移植组经皮下注射40%四氯化碳(CCL4),每周3次,复制大鼠肝纤维化模型,建模8周后,BMSCs移植组经尾静脉移植2×106个BMSCs,3 d后再次移植相同剂量的BMSCs,12周后处死各组大鼠,取外周血,分离血清,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)水平;取肝组织进行HE、VG染色,观察肝脏病理变化;免疫组化法和荧光定量PCR法检测肝组织中Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen,ColⅠ)和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,荧光定量PCR法检测TGFβ1和Smad3 mRNA的表达。结果 BMSCs移植组较模型组大鼠肝组织纤维化程度明显加重;BMSCs移植组ALT和AST水平较模型组明显升高(P<0.05),ALB水平较模型组明显降低(P<0.05);ColⅠ和GFAP在模型组和BMSCs移植组纤维条索中有大量表达,BMSCs移植组中ColⅠ和GFAP mRNA及蛋白的表达量明显高于模型组(P<0.05);模型组和BMSCs移植组中TGFβ1和Smad3 mRNA的表达量明显高于正常组(P<0.05),且BMSCs移植组中TGFβ1和Smad3mRNA的表达量明显高于模型组(P<0.05)。结论 BMSCs移植可加重大鼠肝纤维化,BMSCs通过上调TGFβ/Smad信号传导通路的TGFβ1和Smad3的表达促进肝纤维化的进展。
2012年02期 v.25 176-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 360K] [下载次数：296 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ] - 田晶;唐欣;巴彩凤;杨蕾芳;
目的检测BALB/c小鼠感染猪附红细胞体(Mycoplasma suis)后脾脏中白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、白细胞介素-6(IL-6)的变化。方法用纯化的猪附红细胞体感染BALB/c小鼠,设生理盐水对照组,分别于感染后1、3、5、7、9 d后,无菌采集脾脏,RT-PCR法检测小鼠脾脏中IL-17、TGF-β、IL-6 mRNA的表达。结果小鼠感染猪附红细胞体后第1、3、5、7、9天,脾脏中IL-17和IL-6 mRNA的表达量均明显高于对照组(P<0.05),且分别于第5、7天达峰值;感染后第1、3、5、7天,TGF-βmRNA的表达量均高于对照组(P<0.01),且于第3天达峰值;IL-17与IL-6的变化趋势呈正相关(r=0.568),TGF-β与IL-6的变化趋势呈负相关(r=-0.645)。结论小鼠感染猪附红细胞体后出现IL-17、TGF-β、IL-6水平升高的现象,且分别于第5、3、7天达峰值。本研究为附红细胞体病免疫调节机制的研究提供了实验依据,也为临床免疫治疗奠定了理论基础。
2012年02期 v.25 181-184页 [查看摘要][在线阅读][下载 311K] [下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 朱良荣;管小琴;祁明美;王立娟;
目的探讨抵抗素(Resistin)在非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠胰岛素抵抗(Insulinresistance,IR)中的作用。方法采用改良高脂饲料喂养大鼠建立NAFLD IR大鼠模型,以基础饲料喂养的大鼠作为对照组。分别于开始造模后6、8、10周分别采集2组大鼠血清及肝脏组织,测定血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG)和空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)含量,并计算胰岛素敏感性指数(Insulin sensitivity index,ISI);HE染色观察肝脏病理学改变;RT-PCR和Western blot检测肝组织中胰岛素受体底物-2(Insulin receptor substrate-2,IRS-2)、抵抗素(Resistin)和核因子(NF-κB)基因的mRNA转录水平和蛋白的表达水平,并进行相关性分析。结果改良高脂饲料喂养的大鼠一般状况发生改变,显示模型复制成功;TG、TC、ALT和AST值的测定及肝组织学检查证实模型组大鼠存在高血脂和肝功损害,且有IR的现象存在;与对照组比较,模型组Resistin和NF-κB的mRNA转录水平和蛋白表达水平均明显增高,且呈时间依赖性(P<0.05),Resistin与NF-κB的表达呈正相关;IRS-2的mRNA转录水平和蛋白表达水平逐渐下降,且呈时间依赖性(P<0.05),与Resistin的表达呈负相关。结论 NAFLD中IR的发生可能与胰岛素信号通路有关,涉及其始动因素IRS-2的减少和Resistin的增加。Resistin不仅能抑制IRS的磷酸化而影响胰岛素上游信号的正常传导,还可能通过激活NF-κB抑制其下游通路的传导,而加重IR反应。
2012年02期 v.25 185-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 夏羿凡;余娴;张健;
目的构建p16基因真核表达质粒,并鉴定其在骨肉瘤U-2OS细胞中的表达。方法提取HeLa细胞总RNA,扩增p16基因,克隆至真核表达质粒pcDNA3-HA中,构建重组表达质粒pcDNA3-HA-p16,转染U-2OS细胞,免疫荧光及Westernblot法鉴定p16/HA的表达。结果重组表达质粒pcDNA3-HA-p16经双酶切及测序证实构建正确;p16/HA在U-2OS细胞中成功表达,且主要分布于细胞核。结论成功构建了p16基因真核表达质粒,并在U-2OS细胞中成功表达。
2012年02期 v.25 190-192页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K] [下载次数：91 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 张帆;周剑惠;陈超;徐鑫;王爽;常新;魏雷雷;于佳动;
目的分析1例接种麻疹减毒活疫苗第9天出现麻疹样症状病例的麻疹病毒基因特征,以确定是麻疹疫苗相关病例还是偶合麻疹野病毒感染。方法提取该病例咽拭子标本核酸,采用RT-PCR法扩增麻疹病毒核蛋白(Nucleoprotein,NP)基因羧基末端450个核苷酸片段后测序,分析其与全球24个基因型麻疹野病毒代表株、中国疫苗株(Shanghai-191)基因的亲缘关系以及核苷酸、氨基酸序列同源性。结果该病例感染的病毒属于H1a基因亚型麻疹野病毒。与中国H1基因型麻疹野病毒流行株代表株核苷酸和氨基酸序列的同源性较高,分别为97.5%～99.5%和96.6%,而与麻疹病毒中国疫苗株(Shanghai-191)核苷酸和氨基酸序列同源性较低,分别仅为91.2%和86.7%。结论该例接种麻疹减毒活疫苗后出现麻疹样症状的病例为偶合H1基因型麻疹野病毒感染所致,非麻疹疫苗相关病例。
2012年02期 v.25 209-211页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K] [下载次数：140 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 费晓莉;刘林;
目的探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hemapoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)受者外周血单核细胞趋化蛋白-2(Monocyte chemoattractant protein-2/C-C motif ligand 8,MCP-2/CCL8)和白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)水平变化与急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的相关性,为临床早期诊断aGVHD提供可靠指标。方法 20例行allo-HSCT的患者(实验组)和16例行自体造血干细胞移植患者(对照组)在预处理前(移植前14 d)、预处理后回输干细胞前(移植前1 d)、移植后连续8周每周1次采用ELISA法检测患者血清中MCP-2和IL-12水平;对发生aGVHD的患者,在临床症状出现后检测次数调整为每周2次。结果对照组和实验组患者血清中MCP-2和IL-12水平在预处理前与预处理后回输干细胞前比较,均无明显变化(P>0.05)。对照组和实验组患者移植后7 d时血清中MCP-2和IL-12水平与预处理后回输干细胞前时比较,也无明显变化(P>0.05)。实验组中有6例患者发生aGVHD,于移植后16～52 d出现aGVHD临床症状,与移植后7 d时比较,血清中MCP-2和IL-12水平首次升高时间早于其临床症状出现时间;6例aGVHD患者在诊断时血清中MCP-2和IL-12水平较移植后7 d时明显升高(P<0.05),经抗aGVHD治疗获得缓解后,上述指标又较诊断时明显下降(P<0.05);实验组aGVHD患者血清MCP-2、IL-12水平首次升高时间分别为移植后11～46 d和11～49 d,此段时间内血清MCP-2、IL-2水平显著高于此段时间内未发生aGVHD组和对照组(P<0.05)。实验组未发生aGVHD患者在造血干细胞回输后的第2～8周血清MCP-2、IL-12水平与预处理后回输干细胞前时比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MCP-2和IL-12与aGVHD具有相关性,且其水平变化时间早于临床症状出现时间,检测血清中MCP-2和IL-12水平有助于aGVHD发生的早期诊断。
2012年02期 v.25 212-216页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨春;刘兰军;高昌茜;刘瑞熙;秦婷婷;容新宗;张航;
目的分析四川地区供浆员中巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)中和抗体效价分布及体内持续情况。方法建立CMV中和抗体检测方法,检测四川地区8个浆站采集的2 002份健康人血浆中CMV中和抗体水平,并对其中44位供浆员进行1年跟踪检测;对同一供浆员进行4年长期追踪检测。结果四川地区供浆员血浆CMV中和抗体效价主要分布在1∶16～1∶64之间,阳性率(≥1∶8)高达98.35%,其中效价≥1∶192的占8.04%;44名供浆员CMV中和抗体水平在1年内保持稳定;一名供浆员在4年内CMV中和抗体效价保持较高水平。结论四川地区供浆员中CMV自然感染率较高,部分供浆员CMV中和抗体水平较高,且在较长的时间内保持稳定,本研究为CMV特异性人免疫球蛋白的研制提供了依据。
2012年02期 v.25 217-219页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 赵娟;李希宁;李相军;杨旻;任立群;
目的探讨自体皮肤成纤维细胞(Fibroblasts,Fbs)与毛发角蛋白(Hair keratin,HK)复合填充材料在面部除皱中的作用,为其在医学美容中的应用提供实验依据。方法采用消化分离法对人Fbs进行原代培养,并按不同比例与HK颗粒进行复合培养,台盼蓝排斥法检测细胞的存活率,MTT法检测细胞的增殖活力,ELISA法检测培养液中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ,ColⅠ)的含量。将志愿者耳后部Fbs与HK颗粒共培养后回注至面部皱纹真皮层内,观察除皱效果。结果 HK与Fbs的比例为1∶2时,细胞的存活率、增殖活力及培养液中的ColⅠ含量均最高;志愿者术后4周,注射部位手感柔软,顺应性良好,无僵硬、挛缩等情况出现,皱纹的填充效果良好,外形改善明显。结论自体Fbs与HK复合填充材料能明显促进面部皱纹的修复,本研究为其临床应用提供了实验依据。
2012年02期 v.25 220-223页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K] [下载次数：428 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 兰四友;张德芬;邓述恺;王荣丽;杨小琼;
目的探讨核因子-κB-p65(Nuclear factor-κB-p65,NF-κB-p65)与基质金属蛋白酶-1(Matrix metalloproteases-1,MMP-1)在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移、凋亡的相关性。方法收集50例手术切除的NSCLC组织及15例癌旁正常组织标本,RT-PCR法检测NSCLC及癌旁正常组织中NF-κB-p65 mRNA的表达,免疫组化法检测MMP-1蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果 NSCLC组织中NF-κB-p65 mRNA的表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05);在腺癌组织中的表达量显著高于鳞癌组织(P<0.05);NSCLC组织中MMP-1蛋白阳性率显著高于癌旁正常组织(P<0.01);NF-κB-p65 mRNA和MMP-1蛋白的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、病理类型有关(P<0.05或<0.01),与年龄、性别无关(P>0.05);直线相关分析发现,NSCLC组织中NF-κB-p65 mRNA与MMP-1蛋白的表达相关;NSCLC组织中的细胞凋亡指数显著低于癌旁正常组织,且与NF-κB-p65 mRNA的表达量呈负相关(r=-0.547,P<0.001)。结论 NSCLC组织中NF-κB-p65 mRNA与MMP-1蛋白的表达具有相关性,NF-κB-p65 mRNA的表达与细胞凋亡指数呈负相关,NF-κB-p65通过一定的途径调控MMP-1蛋白的表达,NF-κB与MMP-1共同参与了肿瘤发生、发展的过程,NF-κB-p65发挥抗凋亡作用。
2012年02期 v.25 224-227+232页 [查看摘要][在线阅读][下载 299K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王敏;梁航;王丽娜;孟繁峥;
目的观察干扰素γ(Interferonγ,IFNγ)治疗毛细支气管炎的疗效。方法将符合毛细支气管炎诊断标准的患儿80例随机分为治疗组和对照组,每组40例,两组患儿均采用规范综合治疗,治疗组在此基础上加用IFNγ,每日1次,连续5 d,观察两组患儿临床症状和体征消失时间,并检测免疫学指标。结果治疗组临床治疗总有效率明显高于对照组(P<0.01);临床症状、体征消失时间均明显短于对照组(P<0.01或<0.05);血清IgE和IL-4水平较对照组明显降低(P<0.01),而IFNγ水平明显高于对照组(P<0.01)。结论 IFNγ可有效缩短毛细支气管炎的病程,提高治愈率,并可减轻机体的免疫反应。
2012年02期 v.25 228-229+236页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K] [下载次数：68 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 徐军;陈子扬;单鹏;崔颖杰;马占山;
目的初步建立明胶微球制备工艺,并检测微球性质。方法按明胶浓度、pH值、硫酸钠浓度不同配比制备明胶微球,根据成球情况(包括微球均匀度、成球率、碎屑量、粘连现象),筛选微球制备最佳条件。以IFNα2b为模型药物,以最佳条件制备明胶微球,检测IFNα2b活性,并计算包封率。结果在50℃条件下,明胶浓度为40 g/L,调节pH值为3.4和3.6,硫酸钠浓度为300 g/L时,制备的明胶微球较好,平均粒径为18μm,直径范围在15～20μm之间的微球占70%以上,包封率在85%以上。结论所制备的明胶微球可用于缓释注射剂的制备。
2012年02期 v.25 230-232页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K] [下载次数：1397 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：0 ] - 王颖;安宇;张东杰;姚笛;柳增善;
目的制备氯霉素(Chloramphenicol,CAP)完全抗原,并对其进行鉴定。方法采用重氮化法制备免疫抗原(CAP-BSA)和检测抗原(CAP-OVA),琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE鉴定其偶联后效果;紫外扫描法分析CAP与BSA和OVA的分子结合比;BCA法测定偶联蛋白的浓度;将CAP-BSA经小鼠腹腔免疫,采血分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价。结果琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析显示,两种完全抗原偶联成功;CAP与BSA和OVA的分子结合比分别为28︰1和21︰1,蛋白浓度分别为3.16和2.28 mg/ml;CAP-BSA能够刺激小鼠产生高效价的抗CAP抗体。结论成功制备了CAP完全抗原,为下一步获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体奠定了基础。
2012年02期 v.25 233-236页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K] [下载次数：215 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 蔡阳;任真;何学军;吴华;乔红群;
目的建立纤维蛋白胶抗体间接ELISA检测方法,并进行初步应用。方法采用纤维蛋白胶作为包被抗原,建立检测纤维蛋白胶抗体的间接ELISA法,优化反应条件,并对方法的精密性及特异性进行验证。采用建立的间接ELISA法检测纤维蛋白胶免疫兔血清抗体。结果间接ELISA法的最佳反应条件为紫外灯管垂直照射酶标板20 min后,选择0.05 mol/L的碳酸氢钠溶液(pH 9.6)作为包被缓冲液,以10μg/ml的纤维蛋白胶4℃包被过夜,以含10%小牛血清的PBS封闭,0.1%PBST为抗体稀释液,纤维蛋白胶多克隆抗体和HRP标记的羊抗兔IgG的工作浓度分别为1∶2 500和1∶4 000,反应条件均为37℃孵育l h,底物显色条件为37℃孵育15 min,终止液为2 mol/L硫酸。该方法精密性良好,特异性较强。以建立的间接ELISA方法检测给药1、2、4、6周的兔血清抗体,发现给药2周后兔血清抗体水平明显升高,6周时开始下降。结论成功建立了纤维蛋白胶抗体间接ELISA检测方法,可用于兔免疫血清纤维蛋白胶抗体的检测。
2012年02期 v.25 237-240页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 胡业勤;曾凯;龚静;张波;陈静;薛红刚;李新国;项美娟;
目的应用中空纤维超滤技术纯化脱毒后的无细胞百日咳抗原。方法采用中空纤维超滤法纯化脱毒后的无细胞百日咳抗原,并从纯化样品的纯度、回收率及效价等方面与透析法进行对比。结果超滤法去除无细胞百日咳抗原溶液中脱毒剂和色素的效率更高(3 h内即可完成),且所得原液的回收率较高(92.1%),效价(11.166 IU/ml)也高于透析法(9.211 IU/ml)。结论应用中空纤维超滤技术纯化无细胞百日咳抗原可替代透析工艺。
2012年02期 v.25 241-242页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K] [下载次数：346 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]