- 马绍辉;陈俊英;李华;杨卉娟;施海晶;潘玥;孙强明;李琦涵;
目的对2009年中国云南昆明地区柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CoxA16)毒株的部分VP1区进行分析,了解CoxA16的遗传特性。方法设计针对肠道病毒A群的通用引物,采用半巢式RT-PCR扩增目的片段,对PCR产物测序;使用Omiga和Mega4.1等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列比对及病毒的系统进化分析。结果200份2009年昆明市儿童医院临床诊断为手足口病或并发脑炎疑似肠道病毒感染的患者粪便标本中有52份为CoxA16感染,其中15份来自脑炎患者。52株CoxA16病毒部分VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,核苷酸序列同源性为98.5%～100%,氨基酸序列同源性为98.8%～100%;与shzh00-2、shzh99-48和107/Toyama/1990相比较,核苷酸序列同源性为92.3%～93.8%,氨基酸序列同源性为95.3%～96.8%;与国际标准株G10相比较,核苷酸序列同源性为78.5%～80.3%,氨基酸序列同源性为93.2%～94.5%;与其他13个参考株的核苷酸序列同源性为96.6%～99.5%,氨基酸序列同源性为98.3%～100%。基因系统进化分析显示,52株CoxA16均属于B基因型的一个分支。结论 2009年中国云南昆明地区CoxA16株属于B2亚型。
2012年01期 v.25 9-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K] [下载次数：274 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 毕杨;龚敏;何昀;张赟;陈洁;李廷玉;
目的构建转录因子AP2α(Activator protein 2α)重组腺病毒质粒,感染大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymalstem cells,MSCs),并检测其表达。方法从大鼠PC12细胞总RNA中PCR扩增AP2α基因,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrace-TOX,构建重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAd-Easy1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-AP2α,转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-AP2α,感染大鼠骨髓MSCs,荧光显微镜下观察RFP的表达;Real-time PCR及Western blot检测AP2α的表达。结果 pAdtrace-AP2α质粒经PCR及双酶切鉴定,均可见约1 400 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank报道一致,并正确克隆至腺病毒质粒中;重组腺病毒pAd-AP2α在HEK293细胞中包装,病毒滴度可达2.6×108pfu/ml;感染MSCs 48 h可观察到60%以上的RFP阳性细胞,经Real-time PCR及Western blot鉴定,感染后72 h,MSCs中AP2α的表达显著增高(P<0.01)。结论成功构建了携带转录因子AP2α的重组腺病毒质粒,其能有效感染MSCs,增强MSCs中AP2α的表达。
2012年01期 v.25 13-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K] [下载次数：180 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 唐卫军;张幸平;邹洪元;彭春芳;
目的研究Skp2基因表达下调对HepG2细胞生物学特性及p27和SP1蛋白表达的影响。方法构建Skp2基因干扰慢病毒质粒,包装后感染HepG2细胞,48 h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况;侵袭小室试验检测细胞侵袭能力;Western blot检测Skp2基因下调后p27和SP1蛋白的表达情况。结果与正常HepG2细胞组相比,Skp2干扰慢病毒组细胞Skp2蛋白的表达明显下调,p27蛋白表达大幅增加,细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加近两倍,G0/G1期细胞增多;SP1蛋白表达减少,浸润、迁移的细胞数减少约50%(P<0.05)。结论 Skp2蛋白表达下调抑制了HepG2细胞的增殖,促进HepG2细胞的凋亡,造成细胞侵袭能力减弱。Skp2蛋白表达下调导致p27蛋白表达上调、SP1蛋白表达下调,在上述生物学特性变化中可能发挥了重要作用,为深入探讨肝癌的病理机制奠定了基础。
2012年01期 v.25 18-22+28页 [查看摘要][在线阅读][下载 418K] [下载次数：207 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 胡敏;李少林;袁犁;王勃;
目的探讨应用γ分泌酶抑制剂(Gamma-secretase inhibitor,GSI)阻断Notch1信号通路后对人结肠癌耐药细胞株SW480/L-OHP化疗敏感性的影响。方法应用人结肠癌细胞系SW480,以反复诱导、逐渐递增奥沙利铂(L-OHP)浓度的方法,体外构建耐药细胞株SW480/L-OHP。采用CCK-8法检测细胞株对L-OHP的耐药指数,RT-PCR法检测survivin、notch1、hes1、cyclinD1基因mRNA的转录,Western blot检测Notch1和Hes1蛋白的表达。将耐药细胞分成对照组、L-OHP组(3.0μmol/L)、GSI组(10μmol/L)和GSI+L-OHP组,分别处理后,检测各组细胞的抑制率、凋亡率及survivin、notch1、hes1、cyclinD1基因mRNA的转录水平和Notch1、Nicd、Hes1蛋白的表达水平。结果与SW480亲本细胞相比,SW480/L-OHP细胞中survivin、notch1、hes1和cyclinD1基因mRNA转录水平及Notch1和Hes1蛋白表达水平均上调。GSI组耐药细胞的增殖受到抑制,GSI+L-OHP组抑制作用更明显;GSI组耐药细胞survivin、hes1、cyclinD1基因mRNA转录水平下调,Nicd和Hes1蛋白表达水平下调,GSI+L-OHP组下调更明显。结论 GSI通过阻断Notch1胞内段Nicd的释放,影响下游Hes1基因和蛋白的表达,从而抑制SW480/L-OHP细胞增殖,提高其化疗敏感性;且与L-OHP联合使用具有协同作用。
2012年01期 v.25 23-28页 [查看摘要][在线阅读][下载 362K] [下载次数：406 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 施建东;胡凝珠;赵蕊蕊;沈霏;段志青;胡云章;
目的探讨氢氧化锌与低分子量透明质酸(Low molecular weight hyaluronic acid,LHA)复合佐剂对甲肝乙肝联合抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法在甲肝乙肝联合抗原中加入不同配比的Zn(OH)2与LHA复合佐剂,经皮下免疫ICR小鼠,并设铝佐剂组、生理盐水对照组和单纯抗原组。分别于免疫后4、8、12和16周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清抗-HAV IgG和抗-HBsAg IgG水平。结果除对照组小鼠血清检测不到抗-HAV IgG抗体外,其余各组小鼠血清抗-HAV IgG水平在12周时达峰值,抗-HBsAg IgG水平在8周时达峰值,以后逐渐下降;免疫后4、8、12和16周,多数复合佐剂组抗-HAV IgG和抗-HBsAg IgG水平与抗原组和铝佐剂组相比,显著增强(P<0.05),且抗体水平持续时间较长。结论适当剂量配比的氢氧化锌与LHA复合佐剂能增强甲肝乙肝联合抗原诱导的体液免疫应答。
2012年01期 v.25 29-31+35页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K] [下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 王蕴红;张乾英;朱重阳;李鑫;张军;
目的构建人FBP17基因重组真核表达质粒,并检测其在人正常肝细胞LO2中的表达及对细胞存活率的影响。方法用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-C1-FBP17质粒,胶回收FBP17基因片段,与p3XFLAG-CMV-10载体连接,构建重组真核表达质粒p3XFLAG-CMV-10/FBP17,LipofectamineTM法转染人正常肝细胞LO2,RT-PCR和Western blot法检测转染细胞中FBP17基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,XTT法检测其对转染细胞增殖的影响。结果重组表达质粒p3XFLAG-CMV-10/FBP17经双酶切及测序证实构建正确;转染该重组质粒的LO2细胞FBP17基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显增高,且该质粒转染对细胞存活率无影响。结论成功构建了FBP17基因重组真核表达质粒,其可在LO2细胞中表达,且对细胞的存活率无影响,为进一步研究FBP17相互作用蛋白及其功能奠定了基础。
2012年01期 v.25 32-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K] [下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 徐灿;杨惠洁;余爽;陈楚;鲍依稀;
目的探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号转导通路中关键节点蛋白在人肝癌细胞株QGY中的表达及其对QGY细胞增殖能力的影响。方法通过RT-PCR和Western blot检测人正常肝细胞株LO2和QGY细胞株中TLR信号转导通路关键节点mRNA和蛋白的表达水平;采用TRAF-6-siRNA沉默关键节点蛋白TRAF-6的表达,Western blot检测沉默效果,MTT法检测TRAF-6基因沉默后QGY细胞的增殖情况。结果 QGY细胞与LO2细胞相比,MAL和TRAF-6基因表达水平明显升高(P<0.05),TRAM和TRIF基因表达水平差异无统计学意义(P>0.05);转染siRNA后QGY细胞TRAF-6蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),细胞存活率明显下降(P<0.05)。结论 TLR信号转导通路中关键节点蛋白MAL和TRAF-6在肝癌细胞中的表达水平高于在正常肝细胞中的表达水平;TRAF-6对肝癌细胞的增殖具有一定的促进作用,有望成为分子靶向治疗原发性肝癌新的作用靶点。
2012年01期 v.25 36-38+42页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K] [下载次数：220 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李晓艳;王景龙;卜昭阳;张瑞;王兴龙;
目的原核表达并纯化羊布氏菌外膜蛋白10(Outer membrane protein,Omp10)。方法利用PCR技术扩增羊布氏菌16M株Omp10基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组原核表达质粒pET-28a-Omp10,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组Omp10经HisTrapTMFF纯化后,Western blot分析表达产物的反应原性。结果重组原核表达质粒pET-28a-Omp10经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组Omp10相对分子质量约15 000,能被羊布氏菌阳性血清所识别。结论已成功在大肠杆菌中表达了羊布氏菌Omp10,为羊布氏菌病血清学诊断方法的建立提供了材料。
2012年01期 v.25 39-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 194K] [下载次数：142 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李建瑞;李长清;刘迎梅;刘彬;
目的观察大鼠局灶脑缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,I/R)后脑实质生长抑制与DNA损伤修复相关基因β(Growth arrest and DNA-damage inducible geneβ,Gadd45β)的表达变化,探讨其神经保护作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑I/R对照组和四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组,采用线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,假手术组和脑I/R对照组均在缺血再灌注后经腹腔注射生理盐水,PDTC组经腹腔注射等剂量的PDTC(100 mg/kg)。采用Zea Longa评分法对患肢运动功能进行评分,免疫组化法检测缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达,RT-PCR法检测缺血灶周边脑组织中Gadd45βmRNA的表达。结果脑I/R对照组和PDTC组大鼠在各时间点神经功能缺损评分呈相同变化趋势,PDTC组大鼠在72 h神经功能缺损评分显著高于脑I/R对照组(P﹤0.05)。脑I/R对照组大鼠缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达在缺血再灌注后6 h开始增高,24 h达高峰,之后开始下降,但仍高于假手术组(P﹤0.05);PDTC组大鼠Gadd45β蛋白的表达在各个时间点均明显低于脑I/R对照组(P﹤0.05);脑I/R对照组大鼠Gadd45β基因mRNA在12 h的表达明显高于假手术组,24 h达高峰,之后开始下降,但72 h仍高于假手术组(P<0.05);PDTC组大鼠Gadd45β基因mRNA的表达在各个时间点均明显低于脑I/R对照组(P﹤0.05)。结论 PDTC可抑制大鼠脑缺血灶周边脑组织中Gadd45β的表达,Gadd45β可能具有神经保护作用。
2012年01期 v.25 43-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 314K] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李晗宇;王顺和;郑娟;姜蓉;
目的探讨人参总皂苷(Total saponin of panax ginseng,TSPG)对神经细胞PC12突起生长以及生长相关蛋白-43(Growth-associated protein-43,GAP-43)表达的影响。方法以0、10、20、40、80 mg/L TSPG作用于体外培养的PC12细胞,相差显微镜观察细胞的形态学改变,透射电镜观察细胞突触连接情况,显微镜测微尺测量突起长度,免疫组织化学和Western blot法检测GAP-43的表达。结果与对照组相比,TSPG处理组分化的PC12细胞直径明显增大,突起长度明显增长,并形成突触连接,GAP-43表达水平增加,以40 mg/L组最为明显。结论 TSPG可诱导PC12细胞发生分化、突起生长延伸,并可上调GAP-43的表达水平。
2012年01期 v.25 47-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K] [下载次数：217 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 袁涛;张珂;李征;王智杰;邓杰;周宇;赵兆;饶海林;张雪梅;
目的制备重组人白细胞介素-6(Recombinant human interleukin-6,rhIL-6)和聚乙二醇化rhIL-6(PEG-rhIL-6)理化工作对照品和rhIL-6冻干体外生物学活性工作标准品,用于PEG-rhIL-6制备过程中各步样品纯度、理化指标及体外生物学活性测定。方法制备rhIL-6和PEG-rhIL-6,并对其进行全面检定,作为理化工作对照品。另取精确定量的rhIL-6,用含冻干保护剂的缓冲液稀释分装冻干,制成冻干制品后对其进行全面检定及稳定性考察,作为体外冻干生物学活性工作标准品。结果两种理化工作对照品和冻干体外生物学活性工作标准品各项常规检测指标均符合暂定规程要求;两种理化工作对照品结构分析结果证实与理论值相符;冻干体外生物学活性工作标准品加速稳定性试验证明其体外活性稳定。结论制备的两种理化工作对照品和冻干体外生物学活性工作标准品可用于PEG-rhIL-6中试工艺的研究和评价。
2012年01期 v.25 50-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 277K] [下载次数：245 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 郑毅;陈全;蒋攀;刘革力;张路瑜;
目的原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应。方法从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF-α-Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,转化至大肠杆菌M15中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Western blot分析重组蛋白的反应原性。经Ni-AgaroseHis标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-Gal模拟表位的体外抗肿瘤活性。结果重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的15%,主要以包涵体形式表达;重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度约为90%,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-Gal模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应。结论成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础。
2012年01期 v.25 56-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：210 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 吴华彰;赵云利;费鸿君;李静;刘晓佳;吴守伟;
目的探讨西洋参皂甙的抗氧化功能及其对环磷酰胺(Cyclophosphamide,CP)所致小鼠遗传损伤的保护作用。方法应用总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,TAC)和抑制超氧阴离子(O2-)活力试剂盒检测西洋参皂甙的TAC和抑制O2-的活力;水杨酸比色法检测羟自由基(OH-)的清除能力;邻苯三酚自氧化法检测O2-自由基的清除能力。给昆明小鼠每天灌胃不同浓度(10、50、200 mg/kg)的西洋参皂甙,第6天起按25 mg/kg以CP染毒,连续5 d,用试剂盒检测血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的水平;常规Giemsa染色观察小鼠骨髓细胞微核的形成并计算微核形成率;构建小鼠遗传损伤模型,常规Giemsa染色观察小鼠精子畸变程度并计算精子畸变率。结果西洋参皂甙在体外模拟系统中的TAC和抑制O2-生成活力较高,分别达80和160 U/ml,对OH-和O2-的清除率达70%～80%,且呈剂量效应关系;西洋参皂甙干预可显著提高CP染毒小鼠血清中GSH-Px和SOD的活性(P<0.01),降低MDA的水平(P<0.05),拮抗CP对精子和骨髓细胞的损伤作用,西洋参皂甙各剂量组小鼠的精子畸变率和微核形成率与模型组相比,均明显下降(P<0.01)。结论西洋参皂甙具有较强的体内外抗氧化活性,对CP所致小鼠遗传损伤具有明显的保护作用,其机制可能与提高机体的抗氧化能力和增强小鼠的抗诱变能力有关。
2012年01期 v.25 61-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K] [下载次数：597 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：25 ] |[阅读次数：0 ] - 林时辉;徐昉;刘琼;
目的探讨姜黄素(Curcumin)对脓毒血症诱导的心肌功能障碍(Sepsis-induced myocardial dysfunction,SIMD)小鼠转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta-1,TGF-β1)表达的影响。方法将SD小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒血症组(Sep组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和姜黄素组(Cur组),Sep、DMSO和Cur组采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation andpuncture,CLP)复制SIMD模型,造模24 h后,Cur组经腹腔注射200 mg/(kg.d)姜黄素,Sham和Sep组经腹腔注射等量生理盐水,DMSO组经腹腔注射等量DMSO。造模成功后0、6和12 h,各组小鼠经从右颈动脉插管使用BL-410多功能监护仪监测左心室收缩压(Left ventricular systolic pressure,LVSP)、左心室舒张末期压(Left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左室内压力变化最大上升和下降速率(Maximum rate of left ventricular pressure development and decay,LV±dp/dt-max);HE染色观察心肌组织病理变化;Western blot检测心肌组织中TGF-β1蛋白的表达。结果 Cur组小鼠24和72 h存活率均高于Sep组;心脏血流动力学指标(LVSP、LVEDP和LV±dp/dt-max)在各时间点与Sep组比较,均明显上升(P<0.05或P<0.01);各种心肌损害的病理学改变与Sep组相比,从6 h开始明显减轻;心肌组织中TGF-β1蛋白的表达量较Sep组明显下降(P<0.05)。各指标DMSO组与Sep组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。心肌病理学改变、心脏血流动力学变化及TGF-β1蛋白表达变化在各时相点存在一致性。结论姜黄素对SIMD小鼠的心肌保护作用与抑制TGF-β1蛋白的表达有关。
2012年01期 v.25 65-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K] [下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 高申;于孟可;魏佳慧;刘百歌;
目的探讨雪胆甲素(CucurbitacinⅡa)对人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞增殖的影响。方法以不同浓度的雪胆甲素作用于A549细胞和小鼠原代培养的脾细胞,采用MTT法检测雪胆甲素对两种细胞增殖的影响;流式细胞术及Annexin V-PE细胞凋亡试剂盒检测雪胆甲素对A549细胞细胞周期及凋亡的影响。结果雪胆甲素对A549细胞和小鼠原代脾细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性,25～100μmol/L的雪胆甲素对A549细胞的增殖抑制率明显高于脾细胞;雪胆甲素可将大部分A549细胞阻滞于G0/G1和S期,少部分细胞阻于G2和M期,并可促进细胞凋亡。结论雪胆甲素可明显抑制A549细胞增殖,在NSCLC高效低毒的治疗药物的开发中具有重要价值。
2012年01期 v.25 69-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [下载次数：290 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：23 ] |[阅读次数：0 ] - 王宏;孙治君;钟彪;
目的探讨乌司他丁(Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人原代乳腺癌细胞增殖、侵袭及胰岛素样生长因子受体1(Insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)、血小板衍生因子A(Platelet-derived growth factor A,PDGFA)和血小板活化因子受体(Platelet-activating factor receptor,PAFR)表达的影响。方法将原代培养的乳腺癌细胞分为4组:UTI组(800 IU/ml)、TXT组(3.7μg/ml)、UTI+TXT组和培养液对照组,MTT法检测细胞的增殖活力;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Western blot检测细胞中IGF-1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果 UTI和TXT均可显著抑制人原代乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,下调细胞中IGF-1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且UTI与TXT联合使用时效果更为明显。结论 UTI能够增强TXT对人原代乳腺癌细胞的抑制作用,二者具有协同效应,这种机制可能与UTI影响IGF-1R、PDGFA和PAFR的表达有关。
2012年01期 v.25 72-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 322K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 何小进;曾德华;张雄;
目的观察姜黄素(Curcumin)对人骨肉瘤MG63细胞增殖及细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨姜黄素抑制MG63细胞生长的机制。方法体外培养MG63细胞,用不同浓度的姜黄素处理细胞不同时间,MTT法检测MG63细胞的增殖活力;RT-PCR法检测细胞内β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平;Western blot检测β-catenin和CyclinD1蛋白的表达。结果姜黄素可抑制MG63细胞的增殖,其抑制作用呈剂量-时间依赖性,当姜黄素浓度为20.00μmol/L时,对细胞增殖的抑制作用最明显;姜黄素可显著降低细胞内β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量-时间依赖性。结论姜黄素可抑制MG63细胞增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性实现的,这将为临床治疗骨肉瘤提供新的思路。
2012年01期 v.25 78-81+90页 [查看摘要][在线阅读][下载 304K] [下载次数：838 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：0 ]
- 张中洋;郭会杰;赵敏;杨永娟;郝春生;李懿;马淑花;刘宇;宁海京;张晨;陈明;田龙;李秀玲;
目的制备脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)Ⅰ型D抗原单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法采用Vero细胞培养脊髓灰质炎病毒Ⅰ型,柱层析纯化病毒抗原,SDS-PAGE鉴定病毒蛋白,HPLC分析抗原纯度,Western blot分析抗原的反应原性。以纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,筛选可分泌脊髓灰质炎病毒I型D抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体经纯化后,采用间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价、单抗的特异性及相对亲和力。分别以纯化的单抗作为捕获抗体和酶标抗体,进行配对试验,建立用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原检测的双抗体夹心ELISA方法,确定方法的最佳线性范围,并验证方法的特异性。结果纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原经SDS-PAGE分析,共显示4条蛋白条带,相对分子质量分别为约40 000、35 000、32 000和28 000;经HLPC分析,纯度达99%;小鼠免疫血清可与相对分子质量约为35 000的VP1蛋白发生特异性反应。共筛选出5株可稳定分泌脊髓灰质炎病毒I型D抗原单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,纯化的单抗仅与D抗原发生反应;2H1和3B5株单抗的效价分别为2×107和2×106,且亲和力高于其他3株单抗。采用2H1和3B5株单抗配对,可以特异性检测D抗原,而与C抗原不反应;D抗原最佳线性范围为4.300～0.071 DU/ml,R2为0.994 6。该法仅可检出脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原,而与脊髓灰质炎病毒Ⅱ型、Ⅲ型D抗原和脊髓灰质炎病毒Ⅰ型C抗原、EV71抗原、Vero细胞培养上清不发生交叉反应。结论制备了脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体,建立了可用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原特异性检测的双抗体夹心ELISA方法。
2012年01期 v.25 82-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：461 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 贾芙蓉;张宇;王超;王百惠;郝富勇;李勇;
目的评价人中性粒细胞载脂蛋白(Human neutrophil lipocalin,HNL),又称人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL),在急性细菌与病毒感染鉴别诊断中的临床意义。方法利用双抗体夹心原理建立NGAL/HNL ELISA一步检测法。采用单盲法,随机抽取2010年4月～2011年3月间在中国人民解放军第208医院就诊的单纯急性感染性疾病患者250例(单纯急性细菌性感染150例,单纯急性病毒性感染100例),采用所建立的NGAL/HNL双抗体夹心一步检测法对全部受试者血清中NGAL/HNL的含量进行检测,并结合临床诊断结果、血常规及C-反应蛋白(C-Reactive protein,CRP)检测结果,对NGAL/HNL用于急性细菌和病毒感染鉴别诊断的临床意义进行综合评价。结果细菌感染组血清NGAL/HNL、CRP、WBC、中性粒细胞(Neutrophil,NEUT)及NEUT百分比均显著高于病毒感染组(P均<0.01);血清中NGAL/HNL的含量检测用于急性细菌与病毒感染鉴别诊断的敏感性和特异性分别为84.67%和95%,其阳性预测值、阴性预测值及准确性均高于CRP、WBC、NEUT和NEUT百分比。结论 NGAL/HNL用于急性细菌与病毒感染鉴别诊断的敏感性、特异性较血常规、CRP等更高,鉴别诊断能力更好。
2012年01期 v.25 87-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K] [下载次数：346 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：22 ] |[阅读次数：0 ]
- 张秀瑜;赵耀;张文露;胡源;黄爱龙;
目的了解重庆地区不同类型乙型肝炎病毒(HBV)感染者中HBV基因型的分布特点及其临床意义。方法应用荧光定量分型PCR(GQ-PCR)法检测207例HBV感染者的HBV基因型,并用直接测序法验证其基因分型结果的准确性。结果GQ-PCR成功分型204份临床样本,3例(1.45%)未能检出,其中,B型127例,占61.35%;C型29例,占14.01%;B/C混合型48例,占23.19%。C基因型的病毒载量明显高于B基因型及B/C混合基因型(P<0.05),B基因型与B/C混合基因型的病毒载量差异无统计学意义(P>0.05)。随机选取的90份血清样本经GQ-PCR和直接测序法检测其基因型,两种方法的检测结果一致性较好(Kappa=0.834,P<0.05)。结论重庆地区HBV感染者以B型为主要基因型,其次为B/C混合型,混合感染率高于以往研究结果。C基因型患者HBV-DNA水平高于B基因型及B/C混合基因型,可能与C基因型HBV感染导致肝脏损害较重有关。
2012年01期 v.25 91-94页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [下载次数：252 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 陈超;周剑惠;李大强;刘影;付思美;曹凤瑞;田鑫;林琳;侯祥;
目的分析2010年吉林省麻疹减毒活疫苗(简称MV)强化免疫及2009～2010年麻疹类减毒活疫苗常规免疫疑似预防接种异常反应(Adverse events following immunization,AEFI)发生特征,探讨MV强化免疫及MV类常规免疫的安全性以及减少预防接种异常反应的措施。方法通过全省AEFI报告信息管理系统,收集MV强化免疫和MV类常规免疫AEFI报告的个案数据,采用描述性统计方法对相关指标进行流行病学分析。结果吉林省2010年MV强化免疫AEFI报告发生率为287.68/100万剂次;接种后≤3 d,AEFI报告333例,占总数的87.17%;2009～2010年MV类常规免疫报告AEFI发生率为62.35/100万剂次;接种后≤3 d,AEFI报告30例,占总数的58.82%。两种接种形式的AEFI报告中,男性均多于女性;临床损害均以过敏性反应多见,绝大多数病例预后良好。结论 MV类常规免疫较MV强化免疫AEFI报告发生率低,各地区的AEFI报告发生率存在一定差异,需进一步加强培训和技术指导,提高AEFI监测系统的敏感性和及时性;接种MV后≤3 d是监测的重点,应加强对受种儿童的访视,做好AEFI的主动监测,对出现的异常反应给予及时有效的治疗。
2012年01期 v.25 95-98页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 李凯;余杨;何利珍;张佳佳;李楠;
目的探讨血清HE4、CA125和T淋巴细胞亚群联合检测在卵巢癌早期诊断中的应用。方法采用酶联免疫分析(EIA)和电化学发光免疫分析(ECL IA)法分别检测卵巢恶性肿瘤患者85人、卵巢良性肿瘤患者120人和健康对照者150人血清中HE4和CA125的水平,应用流式细胞术检测各组外周血T淋巴细胞亚群的变化。结果卵巢恶性肿瘤组与健康对照组及良性肿瘤组比较,血清HE4和CA125水平均显著升高(P<0.01);外周血T淋巴细胞CD4亚群下降,CD8亚群上升,CD4/CD8比值显著下降(P<0.05);HE4、CA125和T淋巴细胞亚群联合检测的敏感性为93.7%,特异性为98.6%;Ⅰ～Ⅱ期患者外周血T淋巴细胞亚群阳性率低于Ⅲ～Ⅳ期患者,CD4/CD8比值显著高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)。结论 HE4、CA125与T淋巴细胞亚群联合检测可提高对卵巢恶性肿瘤的诊断水平,具有很好的临床应用价值。
2012年01期 v.25 99-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K] [下载次数：275 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 任莉莉;李富荣;刘冬周;齐晖;欧阳志斌;
目的分析系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者早期生长效应因子1(Early growth response1,EGR1)基因的表达,探讨SLE发病的分子机制。方法挑选位于SLE染色体连锁位点上的EGR1基因,利用实时荧光定量PCR技术,检测SLE活动期及相对静止期患者与健康对照组外周血单核细胞与T、B淋巴细胞亚群中EGR1的表达。结果 SLE患者外周血单核细胞和T淋巴细胞亚群中,EGR1基因的ΔCt值显著高于健康对照组(P<0.01),其表达明显下调;在B淋巴细胞亚群中,EGR1基因的ΔCt值略微升高,表达也呈下降趋势。在SLE患者外周血T淋巴细胞亚群中,EGR1基因的表达在活动期与相对静止期差异有统计学意义(P<0.05),活动期患者基因表达量下调趋势更为明显,SLEDAI积分与基因表达水平之间具有一定的相关性。结论 EGR1基因可能是位于5q31.1区段的一个SLE致病候选基因,且与疾病的活动性具有一定的相关性。
2012年01期 v.25 102-103+110页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K] [下载次数：181 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 樊得英;冯若飞;李向茸;张海霞;凡静静;沈心亮;马忠仁;
目的建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)抗体双抗原夹心ELISA检测方法,用于EMCV血清学调查及临床检测。方法采用EMCV基因重组蛋白VP1、VP2和2C作为包被抗原,HRP标记EMCV作为酶标抗原,建立EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法;用内部参考血清对建立的方法进行评价,并与间接ELISA法进行比较;采用所建立的方法对1 475份人血清和1 309份猪血清进行检测。结果建立的双抗原夹心ELISA法的最佳抗原包被浓度为7.5μg/ml,封闭液为10%马血清或2%鱼蛋白胨,酶标抗原稀释度为1∶400。该方法的批内和批间变异系数均小于10%;热稳定性较好;与间接ELISA法检测结果的符合率为93.5%。应用建立的方法检测人血清和猪血清中的EMCV抗体阳性率分别为16.8%和63.4%。结论已建立了EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法,该方法可靠、稳定、特异、敏感、操作简便,为EMCV抗体的临床检测提供了有效的技术手段。
2012年01期 v.25 104-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K] [下载次数：310 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 张世雄;程立均;
目的建立一种更加灵敏高效的糖蛋白染色鉴别方法。方法在高碘酸-Schiff法的基础上,通过对固定、还原、氧化等溶液配方及染色时间的改变,对电泳凝胶糖蛋白染色法进行改进,并与传统高碘酸-Schiff法进行比较。结果重组单抗样品经改进的糖蛋白染色法染色,仅重链显色,轻链不显色;再经考马斯亮蓝染液复染,轻、重链均显色;改进的染色方法的糖含量检测灵敏度为0.15μg糖,而传统高碘酸-Schiff法的糖含量检测灵敏度为3μg糖。结论已成功建立了一种新的特异性好、灵敏度高且用时短的糖蛋白染色鉴别方法。
2012年01期 v.25 108-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 140K] [下载次数：767 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：0 ] - 郑琛;孙海英;齐念民;
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)培养过程中即时监测细胞浓度的可行性。方法将6～8周龄的SD大鼠处死,分离MSCs,在24孔板上半连续灌注培养和自制的生物反应器上连续灌注培养,通过实时检测培养过程中的葡萄糖消耗率(Glucose consumption rate,GCR)、乳酸累积率(Lactic acid production rate,LPR)及相应的干细胞浓度,并计算葡萄糖的比细胞得率(qGlu)及乳酸累积比细胞得率(qLac),分析其稳定性及细胞浓度与GCR和LPR之间的关系。结果所分离培养的MSCs形态均一,轮廓鲜明,呈典型的短小梭形。在24孔板上半连续灌注培养的qGlu和qLac分别为1.84和1.74 mg/(106个.d);生物反应器连续灌注培养的qGlu和qLac分别为1.66和1.61 mg/(106个.d),二者比细胞得率均为恒值。结论 MSCs培养过程中,GCR、LPR与细胞浓度具有良好的线性关系,通过对葡萄糖浓度和乳酸浓度的测定,可以实时监测MSCs的浓度。
2012年01期 v.25 111-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 202K] [下载次数：174 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 潘婷琪;易小萍;孙祥明;张元兴;
目的建立一种用于促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)糖基化分析的更灵敏、更稳定的检测方法。方法比较固相pH梯度与载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳在灵敏度及EPO糖基化分析上的差异,并考察固相pH梯度等电聚焦电泳条带分布与唾液酸含量的关系。结果固相pH梯度等电聚焦电泳的灵敏度和分辨率明显高于载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳,可以更为客观地反映EPO的糖基化不均一性。固相pH梯度等电聚焦电泳的条带分布与唾液酸含量的测定结果基本一致。结论固相pH梯度等电聚焦电泳是一种更为理想的糖基化分析方法,可以有效分析EPO及其他重组蛋白药物的糖基化程度。
2012年01期 v.25 115-117+122页 [查看摘要][在线阅读][下载 183K] [下载次数：396 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]