- 李计来;徐静;王娟;吴刚;崔文禹;赵莉;许丽锋;
目的原核表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),纯化HBcAg病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),并对其理化性质进行鉴定。方法根据大肠杆菌密码子偏爱性对HBcAg基因进行密码子优化,全基因合成优化基因,克隆至载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-HBcAg,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。重组蛋白经盐析和层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot、电镜观察、等电点分析、高效液相色谱(HPLC)分析和N-末端氨基酸测序等进行鉴定。结果重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为21 000,为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的21.6%;纯化后其纯度可达99.4%,具有良好的反应原性,VLP形成良好,结构均一,等电点在pH 6.0～6.9之间,HPLC分析形成T3和T4两种不同结构,N-末端序列正确,无氨基酸降解。结论已成功构建了HBcAg原核表达质粒,并获得了高纯度的HBcAgVLP,为进一步研究HBcAg VLP的生物学特性奠定了基础。
2011年10期 v.24 1121-1125页 [查看摘要][在线阅读][下载 412K] [下载次数：329 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 李世彬;李江;贺志良;姜柯安;张璐渝;刘革力;马永平;
目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,电转化法将重组质粒转化入双歧杆菌,提取质粒,进行PCR及双酶切鉴定。结果重组表达质粒pBEX-vp4经酶切、PCR和测序证明构建正确;在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达相对分子质量约87 000的重组VP4蛋白,表达量较低,以包涵体形式表达,可与羊抗人轮状病毒多克隆抗体特异性结合;经PCR及双酶切鉴定,重组质粒pBEX-vp4已成功转入双歧杆菌中。结论重组表达质粒pBEX-vp4可在大肠杆菌中表达RV VP4蛋白,并可经电转化法有效地将重组表达质粒转化入双歧杆菌,为下一步在双歧杆菌中进行表达及研制基于双歧杆菌表达系统的RV重组亚单位口服活疫苗奠定了基础。
2011年10期 v.24 1126-1129页 [查看摘要][在线阅读][下载 263K] [下载次数：133 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 赵荣茂;郭丽;吴超;王健伟;洪涛;
目的构建人IgG Fc标签融合表达载体,表达并纯化H5 HA1融合蛋白。方法以pCAGGS载体为基础,依次插入IL-2信号肽及人IgG Fc片段,构建人IgG Fc标签融合表达载体。将H5 HA1克隆至含人IgG Fc标签的融合表达载体pCAGGS-F-IL-2/Fc中,瞬时转染293T细胞,进行融合蛋白的表达。表达的蛋白经Protein G亲和层析一步法纯化。结果人IgG Fc标签融合表达载体经酶切及测序证明构建正确;在293T细胞中分泌表达的H5 HA1与人IgG Fc的融合蛋白HA1-Fc相对分子质量约75 000,转染后72和96 h表达量最高;纯化的融合蛋白纯度达90%以上,含量为1.63μg/ml。结论成功构建了人IgG Fc标签融合表达载体,表达并纯化了HA1-Fc融合蛋白,为流感病毒侵入及免疫机制的研究奠定了基础。
2011年10期 v.24 1130-1133页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K] [下载次数：744 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 王稣佳;胡敏;章帆;施琼;罗进勇;周兰;张彦;翁亚光;
目的探讨有丝分裂期检查点蛋白BubR1在乳腺癌细胞发生紫杉醇耐药中的作用。方法设计并合成针对BubR1基因的特异性干扰RNA(siRNA)片段,连接入穿梭质粒后,包装成腺病毒(Ad-BubR1-siRNA),感染MCF-7细胞,采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot法评价BubR1干扰对MCF-7细胞BubR1基因和蛋白表达的影响。分别通过cck8试验、染色体计数分析、细胞集落生成试验、Hochest染色和细胞划痕试验评价干扰BubR1后,MCF-7细胞在紫杉醇作用下增殖、染色体稳定性、凋亡及迁移能力等生物学功能。结果重组腺病毒的滴度为1010 pfu/ml,其能有效抑制BubR1基因在mRNA和蛋白水平的表达。干扰BubR1表达后,MCF-7细胞在紫杉醇作用下表现为增殖和迁移能力增强,染色体不稳定性增加,集落生成能力增强,凋亡能力下降。结论下调BubR1基因可能导致乳腺癌细胞MCF-7对紫杉醇的耐药性增强。
2011年10期 v.24 1134-1139页 [查看摘要][在线阅读][下载 750K] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 赵娜;李世杰;徐晓芳;吴威;范大为;宫鹏涛;李建华;张西臣;
目的原核表达曼氏血吸虫虫卵白细胞介素-4诱导因子(IL-4-inducing principle of schistosoma eggs,IPSE),并制备小鼠多克隆抗体。方法人工合成IPSE基因,采用PCR技术克隆其成熟体开放阅读框,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-IPSE。转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析后,应用组氨酸标签蛋白纯化柱纯化包涵体蛋白,免疫BALB/c鼠,制备多克隆抗体。结果克隆的IPSE基因与GenBank中登录的基因序列同源性为100%;重组表达质粒pET-28a-IPSE经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为16 000,以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%,可与鼠抗His单抗特异性结合;用纯化的包涵体蛋白免疫BALB/c小鼠后,获得的特异性抗血清效价为2×10-4,该血清可与IPSE蛋白发生特异性反应。结论已原核表达、纯化了曼氏血吸虫IPSE蛋白,并制备了高滴度的特异鼠抗血清,为进一步从日本血吸虫中筛选相似蛋白及研究其功能奠定了基础。
2011年10期 v.24 1140-1143页 [查看摘要][在线阅读][下载 257K] [下载次数：116 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈宇;刘孝菊;薛萍;龚守良;李校堃;
目的在烟草中瞬时表达人角质细胞生长因子1(Keratinocyte growth factor 1,KGF1),旨在寻求一种低成本﹑方便﹑大量生产rhKGF1的方法。方法以重组质粒pET3c-hKGF1为模板,通过PCR法扩增hKGF1基因片段,插入经改造的马铃薯病毒X双元表达载体pGR107中,冻融法转化感受态农杆菌GV3101,以获得的GV3101-pGR107-rhKGF1侵染烟草。以绿色荧光蛋白基因(smGFP)为报告基因,建立马铃薯X病毒(PVX)瞬时表达体系。用紫外灯连续20 d观察经GV3101-pGR107-smGFP侵染的烟草中smGFP的表达。经RT-PCR法分析烟草中rhKGF1基因mRNA的转录,SDS-PAGE﹑Western blot分析烟草中rhKGF1蛋白的表达。结果重组表达质粒pGR107-rhKGF1经PCR及测序证实构建正确;转化的农杆菌GV3101-pGR107-rhKGF1侵染的烟草中目的蛋白的表达量在第8天达最大。目的蛋白rhKGF1在烟草中获得成功表达。结论在烟草中瞬时表达了rhKGF1,为其单克隆抗体的制备及产业化奠定了基础。
2011年10期 v.24 1144-1147页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K] [下载次数：284 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 金戈;张亮;徐晓艳;黄荣忠;马丽华;邓婧;李文娟;房亮;谢鹏;
目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达的重组蛋白进行亲和层析纯化。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET-41a-p24构建正确;表达的重组p24蛋白相对分子质量约24 000,表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式表达;纯化的重组蛋白纯度达85%左右,可与鼠抗BDV p24单克隆抗体特异性结合。结论已成功原核表达并纯化了重组BDV p24蛋白,为进一步建立BDV相关免疫学检测方法奠定了基础。
2011年10期 v.24 1148-1151页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：58 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张大鹤;易小萍;张元兴;孙祥明;
目的制备适于重组CHO细胞培养的无血清培养基(Serum-free medium,SFM)。方法在本室制备的无血清、低蛋白培养基SFMC的基础上,开发支持重组CHO-K1细胞生长的无动物源、无蛋白培养基(Protein-free midium,PFM,以柠檬酸铁、硫酸锌和酵母水解物替换SFMC中的转铁蛋白、胰岛素和动物组织水解物)及化学成分确定的培养基(Chemically definedmedium,CDM,以PFM培养基为基础,通过调整和优化氨基酸的浓度和其他部分营养物质浓度制备),评价各种无血清培养基的适应性、稳定性以及冻存、复苏性能,并分别在125 ml摇瓶和1.4 L生物反应器中进行培养。结果 CHO-K1细胞在PFM和CDM中生长良好,经125 ml摇瓶培养,最高细胞密度分别为9.3×106和7.3×106个/ml,最大细胞密度与SFMC培养基相比,分别提高了107%和62%。经1.4 L搅拌式生物反应器流加培养,PFM培养基的最高细胞密度可达9.8×106个/ml,培养216 h时,细胞活性仍维持在80%,重组蛋白表达量达110.5 mg/L;采用CDM培养基经流加培养,CHO-K1细胞最大密度可达9.5×106个/ml,但细胞培养时间较PFM培养基短。结论在SFMC培养基的基础上,成功开发出培养效果更优的PFM和CDM培养基。
2011年10期 v.24 1152-1156页 [查看摘要][在线阅读][下载 340K] [下载次数：1081 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 肖潇;梅浙川;邱烈旺;刘卉;吕琳;
目的观察叉头转录因子1(Forkhead transcription factor 1,FoxO1)基因沉默对水通道蛋白9(Aquaporin 9,AQP9)在正常人肝细胞L-02中表达的影响。方法将4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4及阴性对照质粒FoxO1-NP经脂质体介导瞬时转染L-02细胞,荧光显微镜下观察转染效率,筛选FoxO1基因沉默效率最佳的干扰质粒转染的肝细胞,经RT-PCR及Western blot法从mRNA及蛋白水平检测其对AQP9表达的影响,并在转染后不同时间点,经荧光定量PCR检测AQP9的转录时间谱。结果 4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4均有不同程度的沉默效果,其中以FoxO1-shRNA2沉默效果最佳,与对照组相比,AQP9在L-02细胞中的mRNA及蛋白水平的表达均下降,且差异均有统计学意义(P<0.05);AQP9的表达随着转染后时间的延长而降低,在转染后60 h达抑制峰值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FoxO1基因沉默对AQP9在正常人肝细胞中的表达有明显的影响,为下一步采用染色质免疫共沉淀技术研究不同时间点FoxO1与AQP9启动子区IRE结合水平的动态变化提供了依据。
2011年10期 v.24 1157-1161页 [查看摘要][在线阅读][下载 480K] [下载次数：147 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 高荣凯;王欲晓;张海荣;周丽君;曲佳;
目的构建适合选择感染性噬菌体(Selectivelyinfectivephage,SIP)技术筛选的蛋白Ⅲ-α-银环蛇毒素(α-Bungarotox-ins,α-BTXs)融合蛋白表达质粒。方法从银环蛇毒腺中提取总RNA,RT-PCR扩增α-BTXs基因,插入表达载体pTTMIN,转化E.coli XL1-Blue,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE、Western blot及竞争抑制ELISA法检测融合蛋白的表达。结果获得的α-BTXs基因序列与相关报道完全一致;融合蛋白表达质粒构建正确;融合蛋白的表达量可达菌体总蛋白的20%,可与抗蛇毒素血清发生特异性反应,且保持了α-BTXs的抗原性。结论成功构建了蛋白Ⅲ-α-BTXs融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中表达了融合蛋白,为利用SIP技术筛选抗α-BTXs人源抗体奠定了基础。
2011年10期 v.24 1162-1164+1173页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 胡慧琼;潘海龙;顾洁;黄锴;徐永革;杨国友;秦敏;
目的探讨2-苯氧乙醇对无细胞百日咳(aP)原液及无细胞百白破联合疫苗(DTaP)安全性及免疫原性的影响。方法分别制备以2-苯氧乙醇和硫柳汞作为防腐剂的aP原液,并配制以2-苯氧乙醇作为防腐剂的DTaP疫苗,对其安全性及免疫原性进行检测,并检测DTaP疫苗中2-苯氧乙醇的抑菌效果。结果分别以2-苯氧乙醇和硫柳汞作为防腐剂制备的aP原液的安全性及免疫原性各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);以2-苯氧乙醇作为防腐剂的DTaP疫苗各项检定指标均符合《中国药典》三部(2005版)要求,DTaP疫苗及于37℃放置1个月的DTaP疫苗经无菌检查均合格。结论 2-苯氧乙醇可替代硫柳汞用作DTaP疫苗的防腐剂。
2011年10期 v.24 1165-1167页 [查看摘要][在线阅读][下载 135K] [下载次数：270 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 艾丽梅;宋盈盈;苏荣英;
目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cell,CIK)与树突状细胞(Dendritic cell,DC)共同培养后获得的DC-CIK细胞体外抗白血病细胞株K562的免疫效应。方法分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),在细胞因子的作用下诱导成DC和CIK细胞,将两种细胞共同培养3 d获得DC-CIK细胞,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞表型;以共培养3 d的DC-CIK作为效应细胞,以PBMC、DC、CIK细胞单独培养作为对照,K562细胞作为靶细胞,采用MTT法检测各组细胞的杀伤活性,ELISA法检测各组细胞培养上清中白细胞介素-17(IL-17)水平,并分析IL-17与杀伤细胞间的相关性。结果 DC-CIK细胞增殖最快;收获的细胞大部分以成熟DC为主,CIK细胞主要是具有杀伤作用的淋巴细胞;DC-CIK细胞杀伤K562细胞的活性和分泌IL-17的水平均明显高于对照组(P<0.05),且随着IL-17释放量的增加,细胞毒性增强。结论 DC-CIK细胞通过分泌细胞因子的作用杀伤白血病细胞。
2011年10期 v.24 1168-1170+1176页 [查看摘要][在线阅读][下载 212K] [下载次数：207 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 孙营;陈静;陈少华;曹璟;熊薇;陈鄂湘;薛红刚;李新国;项美娟;
目的研究氢氧化铝佐剂的过敏性反应。方法取豚鼠42只,随机分为7组:A(lOH)31.5 mg/ml组、A(lOH)34 mg/ml组、A(lOH)3 7 mg/ml组、A(lOH)3 10 mg/ml组、A(lOH)3 13 mg/ml组、阴性对照(生理盐水)组和阳性对照(1%BSA)组,致敏,12 d后,分别经豚鼠静脉注射各浓度的A(lOH)3、生理盐水和1%BSA,观察各组豚鼠的反应及相关症状出现和消失的时间。另取豚鼠24只,随机分为4组:A(lOH)3 1.5 mg/ml组、A(lOH)3 4 mg/ml组、阴性对照(生理盐水)组和阳性对照(1%BSA)组,经豚鼠背部皮肤分别皮内注射抗血清,48 h后,各组分别静脉注射1.5 mg/ml、4 mg/ml的A(lOH)3、生理盐水和1%BSA+1%伊文思蓝染料(v/v=1∶1),进行激发;30 min后,测量豚鼠皮肤内层的蓝色斑点大小。结果全身主动过敏试验中,氢氧化铝浓度在4 mg/ml以下,豚鼠无过敏反应,7和10 mg/ml时为过敏反应强阳性,13 mg/ml时为过敏反应极强阳性。皮肤被动过敏试验中,A(lOH)3 1.5和4 mg/ml组豚鼠均未出现过敏反应。结论氢氧化铝浓度在4 mg/ml以下无过敏反应,较安全可靠。
2011年10期 v.24 1171-1173页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K] [下载次数：537 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 王海漩;胡云章;胡凝珠;
目的探讨硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)与氢氧化锌复合佐剂对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)重组抗原表位多肽疫苗诱导小鼠体液免疫的增强作用。方法将HS(100μg)与氢氧化锌(1.0 mg)复合佐剂与高(100μg/0.1 ml)、中(50μg/0.1 ml)、低(25μg/0.1 ml)剂量的HCV重组抗原表位多肽疫苗混合后免疫小鼠,并设阴性对照组(生理盐水)、无佐剂组、铝佐剂组、HS单一佐剂组和氢氧化锌单一佐剂组。于免疫后4、8、12、16、20周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度。结果除阴性对照组外,各实验组小鼠血清中均检测出HCV特异性IgG抗体。抗原高剂量复合佐剂组在各时间点的HCV特异性IgG抗体滴度均显著高于无佐剂组、铝佐剂组、HS单一佐剂组和氢氧化锌单一佐剂组(P均<0.05);抗原中剂量复合佐剂组小鼠产生的抗体滴度与铝佐剂组相当。结论 HS与氢氧化锌复合佐剂能有效增强HCV重组抗原表位多肽疫苗诱导的小鼠体液免疫应答,且能够在一定程度上降低抗原的使用量。
2011年10期 v.24 1174-1176页 [查看摘要][在线阅读][下载 133K] [下载次数：185 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 张影;杨英超;张瑾;薄淑英;辛晓芳;王国治;
目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与BCG-DNA和A(lOH)3佐剂联合免疫小鼠的免疫效果。方法将BALB/c小鼠随机分为5组,分别经小鼠头背部皮下注射20μg STAg、50μg BCG-DNA+20μgSTAg、50μg A(lOH)3+20μg STAg、50μg BCG-DNA+50μg A(lOH)3+20μg STAg,对照组注射生理盐水,共免疫4次。末次免疫后1周处死小鼠,采血分离血清,并制备脾细胞悬液,ELISA法测定小鼠血清IgG值及抗体效价;ELISPOT法检测分泌特异性IFNγ的淋巴细胞数量。结果 A(lOH)3+BCG-DNA+STAg组小鼠血清抗体效价和IgG值及产生特异性IFNγ的淋巴细胞数量均显著高于STAg组、BCG-DNA+STAg组和A(lOH)3+STAg组(P<0.05)。结论 STAg联合BCG-DNA和A(lOH)3佐剂能诱导小鼠产生更强的体液免疫和细胞免疫应答,A(lOH)3与BCG-DNA佐剂对弓形虫STAg具有免疫协同效应。
2011年10期 v.24 1177-1179页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K] [下载次数：138 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ] - 王长远;任晚霞;李春艳;王龙戬;
目的对新型低胆固醇发酵香肠进行安全性评价。方法依据GB15193-2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》,对低胆固醇发酵香肠进行第一、二阶段的食品毒理学试验,包括急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验和30 d喂养试验。结果新型低胆固醇发酵香肠对小鼠毒性极微或无毒性;小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验和Ames试验结果均为阴性;30 d喂养试验表明,对Wistar大鼠各项指标均无明显影响。结论新型低胆固醇发酵香肠属实际无毒级,未见任何遗传毒性作用。
2011年10期 v.24 1180-1182+1186页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K] [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
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<正>ATCC发布三个新的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养细胞系,用于支持未分化胚胎干细胞系和iPS细胞系的生长。DR4 MEF(ATCC誖SCRC-1045TM)带有抗生素耐药基因,可以耐受新霉素(G418)、嘌呤霉素、潮霉素和6-硫基鸟嘌呤。SNL76/7(SCRC-1049TM)是一个克隆,来自于具有G418抗性和鼠类LIF高表达的STO细胞系。SNLP 76/7-4(SCRC-1050TM)是一株带有嘌呤霉素抗性的克隆,来自于SNL 76/7。要了解更多信息,请访问www.atcc.org/MEF6。
2011年10期 v.24 1125页 [查看摘要][在线阅读][下载 70K] [下载次数：14 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,由中华人民共和国卫生部主管,系中华预防医学会系列杂志之一,为报道我国生物制品研究开发重大成果和最新进展的国内唯一生物制品专业学术期刊。主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。主要设有基础研究、预防制品、治疗制品、诊断制品、实验技术、临床观察、研究简报、综述、述评、会议快讯、消息等栏目。本刊已被美国《化学文摘》(CA)、美国《生物学文摘》(BA)、俄罗斯《文摘杂志》(AJ)、荷兰《医学文摘》(EM)、波兰《哥白尼索引》(IC)、美国剑桥科学文摘(CSA)、美国《乌利希期刊指南》(Ulrich's)、美国汤姆森.路透数据库(WOS)、英国
2011年10期 v.24 1129页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K] [下载次数：11 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] -
<正>由中国药品生物制品检定所副所长王军志研究员主编的《生物技术药物研究开发和质量控制》一书自2002年10月首次出版以来,在生物技术药物领域获得了广泛好评。应科学出版社约稿和广大读者要求,主编及编委们对原著进行了补充和修订。第二版仍分为上下两篇,共30章。上篇系统地介绍了生物技术药物的研制、开发和非临床研究的全过程以及贯穿于全过程的质量控制要点和技术要求,同时在原有内容基础上,增加了生物技术药物药效学研究和临床观察的章节,并根据药效学研究基本原则,结合生物技术药物特点作了详细介绍。并在其他章节里补充了近年来相应领域的最新研究成
2011年10期 v.24 1202页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K] [下载次数：38 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。
2011年10期 v.24 1229页 [查看摘要][在线阅读][下载 98K] [下载次数：18 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] -
<正>由中国免疫学会理事长曹雪涛院士牵头、全国免疫学各领域知名专家联合编著的《免疫学前沿进展》,于2009年12月由人民卫生出版社正式出版。免疫学是一门重要的基础学科,与临床医学紧密相关,是生物医学乃至整个生命科学中发展最快的学科之一。《免疫学前沿进展》是国内第一本及时反映国、内外免疫学研究现状与进展的专著。本书的编者都是免疫学相关领域学术造诣精深、研究成果卓著的专家,其工作受到国、内外同行的高度关注和认可,有着很高的国内、
2011年10期 v.24 1232页 [查看摘要][在线阅读][下载 41K] [下载次数：11 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] <正>《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和中国生物技术集团公司长春生物制品研究所主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。在选择来稿时注
2011年10期 v.24 1235页 [查看摘要][在线阅读][下载 52K] [下载次数：15 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] -
<正>《中国药学大辞典》收集词汇近26 000条,涉及药用动物、植物、矿物、中药和方剂、药用化学物质、化学药物、药剂学、药物化学、中药学和生药学、微生物药学、生物药学、药物分析、药理学和毒理学、医院药学、临床药学、药学史、药事管理、信息科学、药学相关学科和专业、技术和设备、教育学名词等方面内容。定价352元。联系方式单位名称:国家食品药品监督管理局信息中心期刊处
2011年10期 v.24 1238页 [查看摘要][在线阅读][下载 44K] [下载次数：8 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] <正>《中国药学术语词库与主题词表》是科技部的重点科技基础性项目。书本产品《中国药学主题词表》是我国第一部涵盖药学及其相关学科主题词的主题词表。对图书文献的编辑、出版、标引、编目、建库、查新、文献数据库建设、数据库检索、咨询服务、信息交换和国内外学术交流等起着重要作用。《中国药学主题词表》共收录正式主题词34000多条,非正式主题词近20000条。精装本上、下册,定价570元。电子产品《中国药学术语词库》是在《中国药学主题词表》收录内容的基础上,增加收录了药学常用主题词10000余条,并配以专门的检索使用软件作为强大的技术支撑,实现了《中国药学主题词表》的电子化查询。光盘,定价5780元。
2011年10期 v.24 1242页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K] [下载次数：14 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] -
<正>本刊刊号:CN11-4395/R,ISSN 1009-0959,广告经营许可证:京西工商广字第0111号。国家食品药品监督管理局主管,国家食品药品监督管理局信息中心主办。2009年为月刊,大16开本,160页,每册定价23元。邮发代号2-492。读者可在附近邮局订阅或拨打"11185"电话订阅。开户名:国家食品药品监督管理局信息中心开户行:建设银行北京展览路支行
2011年10期 v.24 1248页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K] [下载次数：19 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 李士学;侍俊超;周微;袁丽;肖龙文;宋文飞;曹锦艳;张英;
目的制备特异性和非特异性猪脾转移因子(Transfer factor,TF),并比较二者的理化特性及免疫活性。方法采集免疫猪和非免疫猪脾脏,采用冻融-透析法提取猪脾特异性和非特异性转移因子,检测二者的理化性质;E-玫瑰花环试验检测二者的活性;利用环磷酰胺复制小鼠免疫抑制模型,MTT法检测二者对小鼠淋巴细胞转化的影响。结果特异性及非特异性猪脾转移因子蛋白含量分别为0.392和0.026 mg/ml,核酸含量分别为1.130 6和0.987 7μg/μl,无菌试验、热原试验和安全试验均未出现异常,符合相关规定要求。特异性和非特异性猪脾转移因子均可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,增加E-玫瑰花环的形成率。特异性猪脾转移因子对免疫抑制小鼠、生理盐水组小鼠及正常小鼠外周血淋巴细胞转化均有明显的免疫增强作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),且特异性猪脾转移因子的免疫增强作用显著高于PHA组(P<0.01);而非特异性猪脾转移因子对免疫抑制小鼠、生理盐水组小鼠及正常小鼠外周血淋巴细胞转化均无明显的免疫增强作用(P>0.05),且明显低于PHA对照组(P<0.05)。结论特异性猪脾转移因子比非特异性猪脾转移因子具有更明显的免疫增强作用。
2011年10期 v.24 1190-1192页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K] [下载次数：315 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 张鹏;余天平;张雄;李昱;
目的探讨姜黄素(Curcumin)对慢性脑缺血大鼠脑组织海马CA1区损伤的修复作用及其机制。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎建立慢性脑缺血大鼠模型,术后24 h,将模型大鼠随机分为单纯缺血组、姜黄素高剂量(100 mg/kg)治疗组和姜黄素低剂量(50 mg/kg)治疗组,另设假手术对照组和正常对照组。姜黄素高、低剂量治疗组分别经腹腔注射100和50 mg/kg姜黄素,单纯缺血组、假手术组和正常对照组腹腔注射等量的DMSO,每天1次,连续14 d。给药14 d后,取各组大鼠脑组织,HE染色和尼氏染色观察海马CA1区的形态学变化,免疫组化法观察海马CA1区神经胶质微丝酸性蛋白(Glial fib-rillaryacidic protein,GFAP)和巢蛋白(Nestin)的表达。结果与假手术组相比,单纯缺血组大鼠海马CA1区锥体细胞和尼氏小体丢失,细胞核固缩,星形胶质细胞肥大并大量增生;经姜黄素治疗后,神经元损伤明显减轻,同时伴有GFAP和Nestin阳性细胞大量增加,姜黄素高剂量治疗组与单纯缺血组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能显著增强慢性脑缺血大鼠脑组织海马CA1区GFAP和Nestin蛋白的表达,减轻神经元损伤,对慢性脑缺血损伤有一定的治疗作用。
2011年10期 v.24 1193-1196页 [查看摘要][在线阅读][下载 333K] [下载次数：209 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 钟彪;孙治君;付裕;王宏;
目的探讨乌司他丁(Ulinastatin,UTI)单独和联合泰索帝(Taxotere,TXT)对人原代乳腺癌细胞增殖、侵袭、凋亡和环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)、前列腺素E-2(Prostaglandin E-2,PGE-2)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)表达的影响。方法采用酶消化法提取人乳腺癌组织中的癌细胞,进行原代培养,将细胞随机分为4组:空白对照组、UTI组(800 IU/ml)、TXT组(3.7μg/ml)、UTI+TXT组,采用MTT法、Transwell小室试验和流式细胞术分别检测细胞的增殖、侵袭和凋亡;半定量RT-PCR和Western blot检测细胞COX-2、IL-10基因和蛋白水平的表达;ELISA检测细胞PGE-2的分泌。结果与对照组相比,UTI和TXT均能抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭,并促进凋亡,UTI与TXT联合作用更显著;UTI、TXT单独和联合处理后,细胞COX-2、IL-10的表达均较对照组明显下降,并有效降低了PGE-2的分泌水平。结论 UTI和TXT均能抑制乳腺癌细胞的体外生长,UTI可增强TXT的抑制作用,其机制可能与UTI降低COX-2、PGE-2、IL-10的水平有关。
2011年10期 v.24 1197-1202页 [查看摘要][在线阅读][下载 393K] [下载次数：108 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 任卓;纪红梅;
目的探讨二甲双胍对棕榈酸诱导的脂肪变性成肌细胞内甘油三酯(Triglyceride,TG)含量的影响。方法取Wistar大鼠乳鼠骨骼肌进行原代细胞培养,取第5代成肌细胞,分为5组:对照组(加入正常培养基)、模型组(PA组,加入0.25 mmol/L棕榈酸诱导24 h)、干预组(Met 1、2、3组,加入0.25 mmol/L棕榈酸诱导24 h后,分别加入2.5、5.0和7.5μg/ml的二甲双胍,继续培养24 h)。油红O染色观察细胞内脂滴的变化,计算脂肪变性率;并检测细胞内TG的含量。结果成功建立了成肌细胞脂肪变性模型。模型组较对照组脂变细胞数量明显增多,细胞内TG含量显著增加(P<0.01),而经不同浓度二甲双胍作用后,各干预组脂变细胞数量减少,细胞内TG含量显著下降(P<0.01),与二甲双胍浓度呈正相关。结论二甲双胍可显著减少TG在成肌细胞内的沉积,促进成肌细胞的脂代谢,抑制脂肪变性的形成,具有明显的降脂作用。
2011年10期 v.24 1203-1205+1213页 [查看摘要][在线阅读][下载 355K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 张慧斌;付震宇;
目的验证肌氨肽苷注射液生产工艺对病毒的去除/灭活能力。方法以鸡新城疫病毒(Newcastle diseasevirus,NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)作为指示病毒,采用超滤、高温灭菌法去除/灭活病毒,用SPF鸡胚和鸡成纤维细胞进行病毒去除/灭活效果验证,并进行质量检测。结果超滤和高温灭菌后,指示病毒均未检出,盲传复壮无隐性感染,各样品的质量检测结果均符合肌氨肽苷注射液国家药品标准规定。结论在肌氨肽苷注射液生产工艺中,采用超滤和高温灭菌联合法去除/灭活病毒有效。
2011年10期 v.24 1206-1207+1216页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 傅思武;毛敏燕;苏露;米友军;
目的纯化艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)B毒素,并鉴定其生物学特性。方法将艰难梭菌VPI10463株经透析培养,50%饱和硫酸铵盐析,酸沉淀,收集上清液浓缩后,先采用分子筛Sephacryl S-300层析,收集目标蛋白峰,再进行DEAE Sepharose FF和DEAE Sephadex A-25离子交换层析,并对纯化产物进行各项生物学特性鉴定。结果最终纯化的艰难梭菌B毒素蛋白浓度为1.25 mg/ml;Vero细胞毒性为8.0×109 CU/mg;经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈单一条带,相对分子质量约为220 000,纯度为99.9%;免疫双扩散试验显示单一沉淀线。结论成功纯化了艰难梭菌B毒素,获得的B毒素纯度和细胞毒性较高,免疫反应性良好,为艰难梭菌毒素及其相关疾病的研究和防治奠定了基础。
2011年10期 v.24 1217-1219+1223页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K] [下载次数：316 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 王宁;王青波;李静;周思杭;李天成;
目的采用分子尺寸排阻高效液相色谱(Size-exclusion HPLC,SE-HPLC)法检测戊型肝炎类病毒颗粒(Hepatitis Evirus-like particle,HE VLP)。方法分别采用超速离心法和Sephacryl S-200HR凝胶层析法制备HE VLP,对两种方法制备的HE VLP进行SDS-PAGE、Western blot、电镜观察、动态光散射及SE-HPLC分析,建立SE-HPLC定性、定量分析HE VLP的方法,并利用该方法对不同时间点培养上清HE VLP进行定量分析。结果 SDS-PAGE及Western blot分析显示,两种方法制备的HE VLP均可见相对分子质量约为50 000的目的蛋白条带,浓度和纯度基本一致,且具有相同的反应原性;电镜观察可见,超速离心法制备的HE VLP为直径约30 nm的均匀空心颗粒,层析纯化的HE VLP则为大量不规则的团块及少量空心颗粒;动态光散射分析显示,超速离心法制备的HE VLP只有1个峰,颗粒直径为27.2 nm,纯度大于98%,层析纯化的HE VLP颗粒半径2～120 nm不等;SE-HPLC分析显示,HE VLP含量在1～40μg范围内与峰面积呈线性相关,且精密性良好;利用该法能够对病毒细胞培养液中的HE VLP进行实时定量。结论 SE-HPLC可以对HE VLP进行定性、定量分析。
2011年10期 v.24 1220-1223页 [查看摘要][在线阅读][下载 330K] [下载次数：435 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 袁军;李新国;瞿明霞;
目的建立一种b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗中游离多糖含量新的检测方法。方法分别对标准蛋白溶液、多糖溶液和标加衍生多糖(AH-PRP)的结合物原液进行脱氧胆酸钠(NaDC)酸沉淀处理,观察该方法对蛋白和多糖的沉淀效果。分别采用NaDC酸沉淀法和乙醇分步沉淀法测定结合疫苗原液中的游离多糖含量。结果不同浓度的标准蛋白溶液经NaDC酸沉淀法处理后,沉淀中蛋白的回收率在96%～99%之间;不同浓度的多糖溶液经NaDC酸沉淀法处理后,上清中的多糖回收率在99%～106%之间;该方法对结合物中的游离多糖能起到很好的分离效果;两种方法测定结合疫苗原液中的游离多糖含量差异有统计学意义(P<0.01)。结论 NaDC酸沉淀法能专一性地沉淀蛋白物质,对游离多糖无沉淀作用,该方法具有良好的重复性和准确性,可用于测定Hib结合疫苗中的游离多糖含量。
2011年10期 v.24 1224-1226页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K] [下载次数：490 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：0 ] - 薛力刚;史艳宇;祝长青;宋战昀;王振国;刘金华;
目的建立蜜蜂黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)的RT-PCR快速检测方法。方法根据BQCV全基因组序列,在其3′端1 000 bp的区域内设计1对特异性PCR引物,从受BQCV感染的蜜蜂的蛹样品中提取总RNA,进行RT-PCR,并对该法的特异性、敏感性及重复性进行验证。结果从BQCV全基因组序列中可扩增出700 bp的基因条带。该方法可扩增0.1 ng的BQCV DNA;仅能在BQCV中扩增出700 bp的目的基因条带,在蜜蜂急性麻痹病病毒、残翼病病毒、蜜蜂囊状幼虫病病毒中均未扩增出目的基因条带;对相同样品进行多次检测,均在700 bp处出现目的条带。结论已成功建立BQCV RT-PCR快速检测方法,该方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于黑蜂王台病的快速诊断和混合感染的鉴别诊断。
2011年10期 v.24 1227-1229页 [查看摘要][在线阅读][下载 206K] [下载次数：134 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 翟景波;滕利荣;黄宝玺;
目的选育高产蛹虫草菌株,提高蛹虫草菌种的菌丝体产量和活性成分含量。方法以蛹虫草CGMCC5.699为原始菌株,采用亚硝基胍对其进行诱变,以菌丝体生长速度和菌落大小进行初筛,以菌丝体干重和菌丝体中腺苷、多糖蛋白和甘露醇(虫草酸)含量为指标,采用摇瓶方法进行复筛,得到高产蛹虫草诱变株,连续传代考察其遗传稳定性。结果共筛选出33株菌丝体干重和腺苷、多糖、蛋白、甘露醇含量均较高的诱变菌株,其中有8株能获得稳定遗传突变特征,H4025株菌丝体干重和腺苷、多糖、蛋白、甘露醇含量较未经诱变的原始菌株分别提高了103%、545%、43.5%、51.9%和42.7%。结论已成功选育出1株高产蛹虫草诱变菌株H4025。
2011年10期 v.24 1230-1232页 [查看摘要][在线阅读][下载 135K] [下载次数：395 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：0 ] - 封琳;王桂珍;李阳;李任强;
目的应用免疫亲和层析技术快速纯化猪瘟病毒抗体。方法将猪瘟病毒接种于猪传代肾细胞PK-15中培养,收获并纯化猪瘟病毒,将其与环氧氯丙烷活化的Sepharose-4B偶联,制备免疫亲和层析柱,从猪瘟病毒高免疫猪血清中纯化猪瘟病毒抗体,分别应用SDS-PAGE和ELISA进行抗体纯度和活性检测。结果自制免疫亲和层析柱的偶联率为0.36 mg抗原/g载体;纯化的猪瘟病毒抗体纯度高,活性强,抗体回收率占猪血清总蛋白的2.45%。结论已建立了成本低、可快速有效纯化猪瘟病毒抗体的免疫亲和层析法。
2011年10期 v.24 1233-1235页 [查看摘要][在线阅读][下载 170K] [下载次数：460 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]