- 傅生芳;寇桂英;包红;姜英;陈汉泉;余黎;周旭;
目的克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化。方法采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-F1,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化。结果重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77 000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋白可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%。结论已原核表达并纯化了HRSV F1蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础。
2011年08期 v.24 873-876页 [查看摘要][在线阅读][下载 300K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李晓艳;王景龙;张瑞;孙春辉;郎需龙;杨艳玲;屈海龙;赵勇坤;王兴龙;
目的建立羊布氏菌强毒株16M感染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的模型。方法体外分离C57小鼠骨髓原代细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和重组人白细胞介素-4(Recombinant human interleukin-4,rhIL-4)诱导分化后,倒置显微镜观察DC形态,流式细胞术鉴定其分化程度。在体外建立羊布氏菌16M感染小鼠骨髓DC模型,间接免疫荧光试验和透射电镜进行鉴定,并进行感染后羊布氏菌16M的重培养及染色观察。结果培养第5天,细胞形态符合髓源DC,伸出长的树突样和伪足样突起;第7天,细胞呈半悬浮,周围有大量突起;体外培养DC的纯度约达70%,符合试验要求。DC在感染后12 h具有最强的吞噬能力,胞内细菌量最少。重培养后经染色,可观察到羊布氏菌16M典型的细菌形态。结论成功构建了羊布氏菌感染小鼠骨髓DC模型,为进一步研究布氏菌与DC的相互作用及胞内寄生机制奠定了基础。
2011年08期 v.24 877-881页 [查看摘要][在线阅读][下载 905K] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 石艳春;韩堃;郑源强;毕力夫;
目的构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果。方法将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定。以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MTT掺入法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1∶320),显著增加Th1型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应。结论成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答。
2011年08期 v.24 882-884页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K] [下载次数：102 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 何晓燕;彭琼乐;张政;彭惠民;
目的研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制。方法将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB/c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况。结果与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51%,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ras蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关。
2011年08期 v.24 885-888+892页 [查看摘要][在线阅读][下载 376K] [下载次数：228 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王景龙;屈海龙;王秀然;郎需龙;李晓艳;王兴龙;
目的构建羊型布氏菌脂多糖O-侧链合成必需的甲酰基转移酶WbkC基因真核表达质粒,并进行鉴定。方法提取16M株羊型布氏菌基因组DNA,PCR扩增WbkC基因,克隆至psos载体上,构建诱饵重组质粒psos-WbkC,转化酵母菌株cdc25Hα,进行菌落PCR鉴定,并检测其在酵母双杂交系统中的自激活和定位情况。结果诱饵重组质粒psos-WbkC经PCR双酶切及测序证明构建正确;重组酵母菌经PCR鉴定,可扩增出约780 bp的目的基因;诱饵质粒在酵母双杂交系统中无自激活且定位正确。结论已构建了羊型布氏菌WbkC基因真核表达质粒psos-WbkC,可应用于酵母双杂交系统中,用于寻找巨噬细胞cDNA文库中与WbkC相互作用的蛋白质。
2011年08期 v.24 889-892页 [查看摘要][在线阅读][下载 231K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 谢素兰;黄爱龙;蔡雪飞;胡源;
目的原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域。方法以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/V+236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模。结果重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-MT2经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56 000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构。结论已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础。
2011年08期 v.24 893-897页 [查看摘要][在线阅读][下载 464K] [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 吴建勇;易小萍;张元兴;孙祥明;
目的将密码子优化的一系列长效促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)基因定点整合至CHO-K1细胞株中,获得高效稳定表达的细胞株。方法对EPO基因定点突变得到Darbepoetin-1序列(专利公开序列)及其同义密码子序列Darbe-poetin-2、Darbepoetin-3,并构建相应重组表达质粒pcDNA5/FRT/dbp(s),采用定点整合技术,转染CHO-K1细胞株,经ELISA和荧光定量PCR法鉴定转染细胞株,比较同一整合位点同义密码子Darbepoetin alfa蛋白表达水平的差异。蛋白样品经蓝胶亲和层析、凝胶过滤和离子交换层析后,进行SDS-PAGE、Western blot及等电聚焦电泳分析。结果重组表达质粒pcDNA5/FRT/dbp(s)经测序鉴定正确;ELISA检测表明,Darbepoetin-2的表达水平明显优于Darbepoetin-1和Darbepoetin-3,最高可达1 845 IU/ml;SDS-PAGE分析显示,纯化的Darbepoetin alfa比rHuEPO具有更高的相对分子质量,可与兔抗人EPO多抗特异性结合,且比rHuEPO具有更高的唾液酸丰度。结论获得了高效稳定表达重组Darbepoetin alfa的CHO-K1细胞株。
2011年08期 v.24 898-902页 [查看摘要][在线阅读][下载 631K] [下载次数：477 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 常冰梅;刘晓军;李美宁;张栋;张悦红;程牛亮;牛勃;
目的在毕赤酵母中分泌表达人肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF),并检测其活性。方法从真核表达质粒pRC/CMV-HGF中扩增HGF的编码基因,将其克隆入表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-HGF,电穿孔法转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达重组人HGF(rhHGF)。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,检测其对原代培养的大鼠肝细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pPIC9K-HGF经酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约80 000,表达量占菌体总蛋白的18%,可与兔抗人HGF多抗特异性结合,并可刺激大鼠肝细胞增殖。结论在毕赤酵母菌中成功分泌表达了rhHGF,表达产物具有促进肝细胞增殖的活性。
2011年08期 v.24 903-906+910页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘燕瑜;任静强;张丹;谭磊;刘存霞;靖杰;刘昊;鲁会军;金扩世;金宁一;
目的探讨Quil A对口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)疫苗的免疫增强作用。方法将O型FMDV抗体阴性的仔猪随机分为4组:1组首次免疫O型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;2组首次免疫Quil A+O型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;3组两次均免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗;4组两次均免疫PBS。首次免疫后0、14、42 d,检测猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体及细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ的水平;首次免疫后42 d,检测T淋巴细胞增殖水平。结果 2次免疫后,2组猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体水平、细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ水平及T淋巴细胞增殖率均显著升高。首次免疫后42 d,2组上述指标中除IL-2水平外,与3组和4组比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01);除IL-2、IL-10和IFNγ水平外,与1组比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01)。结论 Quil A对O型口蹄疫疫苗具有较好的免疫增强作用。
2011年08期 v.24 907-910页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K] [下载次数：241 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 余天平;张鹏;张雄;王林辉;田茗源;李昱;
目的观察胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和巢蛋白(Nestin)在血管性痴呆成年大鼠海马中的表达情况,探讨二者在血管性痴呆疾病中的作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组经麻醉、永久性双侧颈总动脉结扎(2VO)建立血管性痴呆大鼠模型,再随机分为术后1、7、14、21和28 d组;假手术组麻醉后只分离双侧颈总动脉而不结扎。不同时间点断颈处死大鼠,取大脑,切片,经苏木素-伊红染色、尼氏染色观察海马神经元的动态变化;免疫组化染色观察GFAP和Nestin在海马区的表达。结果与假手术组相比,模型组术后7 d,海马CA1区和CA3区椎体神经元显著减少,大量胶质细胞增生;术后14、21和28 d,随着脑血流的恢复,椎体神经元的数量逐渐增加,胶质细胞逐渐减少。模型组从术后1 d起,GFAP和Nestin表达即显著增加(P<0.05),GFAP的表达在术后7 d达高峰,Nestin的表达强度比GFAP稍弱一些,在术后14 d达高峰;随着脑血流供应的恢复,在术后21 d和28 d时,Nestin轻微减少,但未完全消失。结论 GFAP和Nestin在血管性痴呆模型大鼠海马中呈动态表达,表明两者在血管性痴呆疾病中可能扮演了保护角色。
2011年08期 v.24 911-914+920页 [查看摘要][在线阅读][下载 675K] [下载次数：182 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 韩红星;张文萍;张秋萍;杨燕;单万水;
目的探讨sh-hnRNP-E2逆转录病毒对32D-P210细胞诱导的白血病模型小鼠的保护作用。方法建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)模型,并进行鉴定;sh-hn-RNP-E2逆转录病毒感染32D-P210细胞24 h后,经尾静脉移植入C3H等基因雌性小鼠中,观察sh-hnRNP-E2对CML模型小鼠的保护作用。结果经鉴定已成功建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的CML模型;sh-hnRNP-E2逆转录病毒预感染32D-P210靶细胞,可促进靶细胞向粒系分化,并显著延长模型小鼠的生存期。结论 sh-hnRNP-E2逆转录病毒感染对CML模型小鼠具有显著的保护效应,是一种有效的CML体内治疗策略。
2011年08期 v.24 915-920页 [查看摘要][在线阅读][下载 610K] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王革;李睿;王秉翔;
目的探讨氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原(Recombinant protective antigen,rPA)的影响因素。方法取含不同PO43-浓度的PBS和添加EDTA的PBS,分别稀释rPA后,加入氢氧化铝,放置2～8℃及(23±2)℃作用不同时间,检测A280和A260值,计算未吸附的rPA蛋白量,并比较不同溶液中氢氧化铝对rPA的吸附效果。结果氢氧化铝对rPA的吸附率随PO43-浓度的增加而降低;PBS中添加EDTA后,氢氧化铝对rPA的吸附效果明显下降;2～8℃较(23±2)℃的吸附率略有增加,但不同时间的吸附量无明显差异;在H2O中氢氧化铝对rPA的吸附效率比在PBS中高。结论稀释缓冲液和离子强度、EDTA均可影响氢氧化铝与rPA的吸附效果,但吸附温度和时间对吸附的影响不大。
2011年08期 v.24 921-922+930页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘洪波;吴灿权;谢颖;梁洪;蔡昌学;
目的构建分泌表达鼠IFNγ(Mouse interferon-gamma,mIFN-γ)的重组卡介苗(Bacillus Calmette-Gu伢rin,BCG),并进行鉴定。方法 PCR扩增BCG抗原85B的信号肽序列,插入E.coli-BCG穿梭载体pBCG3000的启动子下游,构建分泌性重组穿梭质粒S-pBCG3000;以PHA刺激小鼠脾细胞产生的RNA为模板,RT-PCR扩增mIFNγ成熟肽的编码cDNA,插入S-pBCG3000质粒的信号肽序列下游,构建mIFNγ的表达质粒S-pBCG3000-γ;通过电穿孔技术将表达质粒转入BCG,以卡那霉素和PCR筛选重组BCG,ELISA法检测重组BCG培养滤液中的mIFNγ含量,细胞病变抑制法鉴定mIFNγ的生物活性。结果经测序、PCR扩增和酶切鉴定分析,Ag85B信号肽和mIFNγ成熟肽的编码序列均成功克隆并插入到pBCG3000的相应位点,表达质粒转化BCG后获得的重组BCG分泌mIFNγ的含量高达1 234.1 pg/ml,在L929细胞中的抗VSV活性为64 U/ml。结论所构建的重组BCG可分泌具有功能活性的mIFNγ,为进一步研究其免疫效应奠定了基础。
2011年08期 v.24 923-926页 [查看摘要][在线阅读][下载 239K] [下载次数：94 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 李长毅;王导新;张玉坤;
目的探讨三七皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对慢性血栓栓塞性肺动脉高压(Chronic thromembolismpulmonary hypertension,CTPH)大鼠心肌胶原重构的调控作用及可能的机制。方法利用二次血栓栓塞法建立大鼠CTPH模型,4周后,将正常大鼠分为A、B组,模型大鼠分为C、D组,A、C组经腹腔注射0.9%生理盐水,2 ml/d;B、D组经腹腔注射PNS,100 mg/(kg.d)。每天注射1次,4周后,测定各组大鼠的血流动力学指标、心室游离壁厚度,HE和VG染色观察心肌组织的形态学改变,Western blot检测心肌组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达。结果 C组与A组、B组比较,右心室收缩压、右室(RV)/左室(LV)游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显升高(P<0.05);经PNS干预后,D组右心室收缩压、RV/LV游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显降低(P<0.05)。结论在CTPH心肌重构过程中,PNS可以逆转右心室重构,其机制可能与上调MMP-2的表达、促进心室间质胶原的降解有关。
2011年08期 v.24 927-930页 [查看摘要][在线阅读][下载 294K] [下载次数：172 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 崔久嵬;牛超;李薇;金浩范;Boyapati Maheoh;王冠军;
目的探讨慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用。方法利用rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α体外定向诱导CML患者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)生成DC,光学显微镜和透射电镜观察所诱导的DC形态特征;流式细胞术进行表型检测;采用FISH和RT-PCR法检测所诱导的DC的白血病源性;MTT法检测其对自体CML细胞的杀伤作用。结果 CML患者PBMC在体外可诱导生成bcr/abl融合基因阳性的DC,其激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用明显强于单独应用T淋巴细胞对CML细胞的杀伤作用。结论 CML患者PBMC能够诱导生成白血病源的DC,该DC能够激活T淋巴细胞对CML细胞的特异性杀伤作用。
2011年08期 v.24 931-934页 [查看摘要][在线阅读][下载 608K] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 欧阳小波;郝亚琴;王立;
目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响及其可能的机制。方法免疫荧光检测Hh信号通路分子Shh和Gli1蛋白在SGC-7901细胞中的表达;用不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的Hh信号通路特异性阻断剂环靶明作用SGC-7901细胞48 h后,Transwell小室试验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,半定量RT-PCR检测SGC-7901细胞中Shh、Gli1和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA的表达。结果 Shh和Gli1蛋白在SGC-7901细胞中高表达;环靶明能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭,且呈剂量依赖性;Hh信号通路阻断后,SGC-7901细胞中Shh基因mRNA的表达水平无明显改变,Gli1和VEGF基因mRNA的表达水平显著下降。结论 Hh信号通路分子在SGC-7901细胞中高表达,阻断Hh信号通路可以抑制SGC-7901细胞的侵袭,可能是通过抑制Gli1下调VEGF起作用。
2011年08期 v.24 935-938页 [查看摘要][在线阅读][下载 502K] [下载次数：198 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 王玉彬;巴彩凤;哈敏文;刘寅;
目的探讨胃癌组织中分化抑制因子1(Inhibitor of DNA binding/differentiation1,ID1)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达与微血管密度(Microvessel density,MVD)的相关性。方法采用免疫组化定性分析ID1、VEGF和CD34在胃癌及癌旁非癌组织中的表达及MVD,Western blot半定量分析ID1和VEGF蛋白在胃癌及癌旁非癌组织中的表达。结果胃癌组织中ID1和VEGF的表达及MVD明显高于癌旁非癌组织,且差异均有统计学意义(P均<0.05);ID1表达阳性的胃癌组织的MVD明显高于ID1表达阴性的胃癌组织,且差异有统计学意义(P<0.001)。结论胃癌组织中ID1的表达与VEGF和MVD具有相关性,ID1可能具有促进胃癌血管生成的作用。
2011年08期 v.24 939-941页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 雒丽红;高雪军;魏然;朱莉萍;程瑞霞;郑学刚;
目的建立测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法样品用磺基水杨酸沉淀、离心除去蛋白质,上清液采用氨基柱分离,示差折光检测器进行监测,依外标法建立校正曲线,并对建立的方法进行验证。采用建立的方法测定4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的含量。结果蔗糖和乳糖的标准曲线的相关系数r2均达0.999 9以上。该方法能将两种糖完全分离;测定两种糖的特异性较好;该法检测4个浓度的蔗糖和乳糖的平均回收率分别为97.9%和100.5%,变异系数分别为1.28%和0.48%;最低检测限及定量限分别为0.01 mg/ml和0.1 mg/ml;采用该法测定的4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的变异系数分别为2.59%和1.44%。结论已建立了测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的HPLC法,该方法定量准确,重复性好,可作为生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的常规检测方法。
2011年08期 v.24 964-967页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K] [下载次数：475 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 杜洪桥;朱蓉;徐葛林;严家新;
目的比较两种亲和层析法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的效果。方法制备可溶性CHO细胞蛋白,免疫家兔,获得兔免疫血清,采用蛋白A亲和层析和抗原偶联亲和层析两种方法分别纯化兔抗CHO细胞蛋白抗体,ELISA测定抗体效价;SDS-PAGE分析抗体纯度;Western blot分析抗体的特异性。结果兔IgG经蛋白A亲和层析纯化后,ELISA效价约为1∶106,抗体纯度达81.3%;经抗原偶联亲和层析纯化后,ELISA效价可达1∶107,抗体纯度达80.6%。两种方法纯化的抗体特异性均较好。结论抗原偶联亲和层析法更适合纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体。
2011年08期 v.24 968-970页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K] [下载次数：746 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 赵荣丽;刘少祥;李书津;潘海龙;赵青;
目的采用顶空气相色谱法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量。方法采用顶空气相色谱法,以水为溶剂,甲醇为内标,测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量,并对该方法进行系统适用性、线性关系、检测限与定量限、精密性、准确性验证及初步应用。结果该方法可使待测组分得到良好分离;测定乙醇、丙酮和乙醚的线性范围分别为:2.660～532.000μg/ml(r=1.000 0)、0.530～105.400μg/ml(r=0.999 8)和0.049～9.760μg/ml(r=0.998 9),检测限分别为0.80、0.16和0.01μg/ml,定量限分别为2.66、0.53和0.05μg/ml,精密性RSD值小于5.0%,平均回收率在95.0%～105.6%之间。该法检测3个批号23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇残留量,均未超过《中国药典》三部(2010版)规定的限度。3批疫苗中均未检出丙酮和乙醚。结论顶空气相色谱法操作简便,准确可靠,可用于23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚残留量的检测。
2011年08期 v.24 971-973+976页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：326 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 李红;李茂光;唐静;梁丽;李亚南;何莉;叶强;
目的建立定量检测血清中b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)总抗体的ELISA方法,并进行初步验证。方法采用棋盘滴定法确定抗原最佳包被浓度及酶标抗体工作浓度,参考血清的线性范围及适合的底物,并验证方法的特异性、准确性及精密性。结果最佳抗原包被浓度为0.4μg/ml;最佳酶标抗体稀释度为1∶6 000;参考血清的最适线性范围为5～100 ng/ml,R2=0.997 6;选择TMB作为底物。该方法特异性较好,准确性和精密性较高。结论已成功建立了定量测定血清中Hib总抗体的ELISA方法,可逐渐替代测定血清中抗Hib IgG的方法。
2011年08期 v.24 974-976页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] [下载次数：229 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 刘朝阳;景辉;陈艳红;张斌;马相虎;朱金华;
目的建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以马抗白喉类毒素血清作为包被抗体,HRP标记的白喉絮状反应抗毒素作为酶标抗体,建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法进行重复性、特异性验证、最佳线性范围和检测限确定及初步应用。结果经验证,该方法重复性好,特异性强,白喉类毒素含量在0.976 5～125.000 0 ng/ml之间时线性关系良好,检测限为7.812 ng/ml,该方法检测了3批白喉类毒素原液,与动物实验结果基本相符。结论已建立了白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,可用于检测白喉类毒素的含量和抗原性。
2011年08期 v.24 977-979页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K] [下载次数：228 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 夏南;王青青;赖俊;康光明;
目的建立高效液相色谱测定抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白中戊二醛残留量的方法。方法取供试品,与2,4-二硝基苯肼柱前衍生化,过滤,进样。色谱条件:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶填充柱;以50%乙腈(乙腈∶水=1∶1)溶液为流动相,流速为0.9 ml/min,检测波长为360 nm,柱温30℃。用该方法检测2批供试品中戊二醛的含量,并确定该方法的检测限、定限量、准确度和精密度。结果该方法检测的2批供试品中戊二醛的含量分别为9.8和7.5μg/ml;该方法的检测限为0.61μg/ml,定量限为2.04μg/ml,在2～20μg/ml范围内,其线性相关系数为0.998 2,检测5、10、15μg/ml戊二醛的回收率分别为102.3%、101.6%和99.2%,相对标准偏差均小于4.0%。结论高效液相色谱法可以简便、准确地检测抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白中戊二醛的残留量,为其生产工艺参数的确定提供了实验依据。
2011年08期 v.24 980-982页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K] [下载次数：218 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]