- 李薇;赵祖波;李建强;程瑞霞;王军;王智永;张晓宇;王玉琳;
目的对肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)Lanzhou01株进行分离、鉴定,并分析其生物学特性,为EV71疫苗候选毒株的筛选奠定基础。方法从兰州市手足口病患者的粪便样本中分离EV71,经蚀斑克隆传代后,RT-PCR法检测其特异性;Vero细胞甲基纤维素蚀斑法分析病毒的毒力;克隆病毒的VP1基因,进行序列测定及分析;扫描电镜观察病毒的形态;以不同的MOI接种Vero细胞,观察细胞病变,并绘制病毒的增殖曲线;连续传代,分析VP1基因和氨基酸序列,并测定毒力,检测其遗传稳定性。结果经细胞传代和蚀斑克隆,获得增殖性能稳定的分离株,RT-PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析可见约250bp的特异性条带;经VP1基因测序与进化树鉴定为EV71,其与浙江、深圳等地的EV71分离株的核苷酸序列同源性均大于99%,属于C4基因亚型;电镜下观察病毒颗粒为球形,直径20～30nm;该病毒在Vero细胞上培养后产生典型的细胞病变,毒力为6.8LgPFU/ml;经Vero细胞连续传30代,不同代次的病毒VP1基因序列的核苷酸序列同源性大于或等于99.6%,氨基酸序列几乎没有明显变异,毒力也无明显改变。结论已成功分离1株EV71,其生物学特性良好,为灭活疫苗的研制及疫苗候选株的筛选奠定了基础。
2010年12期 v.23 1277-1281页 [查看摘要][在线阅读][下载 501K] [下载次数：191 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 周乔丹;米粲;胡迎春;李刚;吴德昌;霍艳英;
目的研究10号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源体(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)再表达对细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达、活性氧(ROS)和DNA氧化损伤水平及细胞抗氧化能力的影响。方法采用Western blot法比较Pten-/-MEFs细胞(对照细胞)与PTEN再表达的Pten-/-MEFs细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达差异;采用化学/荧光发光法分析对照细胞与PTEN再表达细胞内基础ROS水平差异;采用中性单细胞凝胶电泳比较不同浓度(0、0.01、0.05、0.10mmol/L)H2O2处理后,对照细胞与PTEN再表达细胞内DNA双链断裂(DSBs)的变化。结果与对照细胞相比,PTEN再表达细胞中Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD蛋白的表达水平增高,细胞内基础ROS水平降低,DSBs减少,细胞抵抗外源性H2O2的能力增强。结论 PTEN可能通过对Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD等抗氧化蛋白的表达调控,增强细胞抗氧化能力,清除细胞内过量的ROS,从而保护细胞免受氧化压力导致的DNA氧化损伤,维持基因组稳定性。
2010年12期 v.23 1282-1285+1290页 [查看摘要][在线阅读][下载 449K] [下载次数：213 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 聂艳桃;何太平;雷韬;葛永红;柏玉碧;张聪明;宋春雷;谭晓晶;唐菁燕;杨波;
目的构建免疫抗体文库,并筛选亚nM高亲和力人源抗体。方法采用破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)免疫的高效价人B淋巴细胞,经PCR扩增可变区基因,构建免疫抗体文库,并筛选高亲和力人源抗体。将获得的抗体基因片段转换成全分子,进行真核表达和纯化,并与人抗TT多克隆抗体进行比较分析。结果构建的人破伤风免疫噬菌体抗体库库容为4.5×106,多样性符合引物设计要求,经筛选获得相对亲和力为10-10M的高亲和力人源抗体,其体内中和活性高于人多克隆抗体。结论根据抗体基因使用频率设计引物构建小容量免疫抗体文库,可获得亚nM的高亲和力人源抗体,该策略可用于抗感染性疾病人源抗体的开发。
2010年12期 v.23 1286-1290页 [查看摘要][在线阅读][下载 303K] [下载次数：178 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 佘茜;徐蕾;何永林;靳志栋;张丹;杨春;
目的构建结核分枝杆菌PPE68基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增PPE68基因,将其克隆至pET-32a(+)载体中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPE68,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果重组表达质粒pET-32a(+)-PPE68经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE68基因序列一致。表达的Trx-PPE68融合蛋白相对分子质量约为57000,表达量约占菌体总蛋白的41%,可与结核分枝杆菌免疫小鼠血清发生特异性反应。纯化的重组蛋白纯度约为93%。结论已成功构建了结核分枝杆菌PPE68基因重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPE68,原核表达并纯化了重组蛋白,为PPE68作为结核病特异性诊断抗原的开发及重组BCG疫苗的研制奠定了基础。
2010年12期 v.23 1295-1298页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K] [下载次数：225 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 龚敏;毕杨;江伟;张小娟;张赟;魏小平;陈洁;刘友学;李廷玉;
目的体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化,并探讨诱导微环境对其分化的影响及分化后的自发逆转现象。方法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志。采用改良神经元诱导液[Modified neuronal induction media(MNM)]定向诱导MSCs,免疫荧光检测神经细胞表面标志。观察胎牛血清(FBS)浓度、细胞密度、MNM剂量、新鲜与使用过的MNM等不同诱导微环境对MSCs成神经分化的影响。结果 MSCs经MNM诱导后,6h即可见尼氏体,表达神经元特异性表面标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和微管相关蛋白-2(MAP-2)。随着诱导微环境的改变,MSCs成神经分化率及神经元表面标志表达亦发生改变,且分化后的神经元样细胞可自发逆转。结论 MSCs能够在MNM微环境中定向成神经分化,但诱导微环境的改变可以从量和质两个层面影响MSCs定向分化。
2010年12期 v.23 1299-1303+1307页 [查看摘要][在线阅读][下载 433K] [下载次数：241 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 杨健;王朝莉;冯丽;
目的探讨致病性大肠杆菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)外膜蛋白Intimin及其受体Tir在EPEC致HeLa细胞线粒体功能障碍中的作用。方法将EPEC外膜蛋白Intimin及其受体Tir删除株、相应质粒互补株或染色体互补株感染HeLa细胞,用线粒体膜电位(Mitochondria membrane potential,MMP)检测试剂JC-1染色细胞线粒体,通过多功能酶标仪检测MMP水平,Western blot检测Intimin的表达及Tir的转位。结果与野生型菌株相比,Eae删除株和Tir删除株感染细胞的MMP功能显著减弱(P<0.05),Eae删除株功能能被质粒表达相应蛋白所互补,Tir删除株不能被质粒表达Tir互补,但可被染色质表达野生型Tir或TirY474S互补,而染色质TirS434A突变株不能引起明显的MMP下降。结论 Intimin和Tir是参与线粒体功能障碍的重要分子;TirS434在线粒体功能障碍中起重要作用。
2010年12期 v.23 1304-1307页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K] [下载次数：72 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张苜;余应喜;
目的探讨黄芪多糖对胃癌细胞SCG-7901上清液中培养的树突状细胞(Dendritic cells,DC)分化成熟及功能的影响,分析黄芪多糖抗癌的作用机制。方法将人外周血分离的单核细胞加入含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF)和重组人白细胞介素的培养液中,随机分为空白组(以RPMI1640培养液培养)、干预组(以黄芪多糖干预后的胃癌细胞上清液培养)、对照组(以胃癌细胞上清液培养)。混合培养48h后,显微镜下观察DC成熟过程中的形态学变化,流式细胞术检测DC的表型(CD40、CD80),混合同种淋巴细胞增殖反应(Mixed lymphocyte reaction,MLR)检测DC的增殖效应。结果与对照组比较,空白组和干预组DC的CD40和CD80的表达均明显增加(P<0.05),刺激同种淋巴细胞增殖效应明显增强(P<0.05);干预组DC CD40和CD80的表达阳性率及刺激同种淋巴细胞增殖效应均明显低于空白组(P<0.05)。结论在体外,黄芪多糖可有效对抗胃癌细胞上清液引起的对DC分化成熟和功能的抑制。
2010年12期 v.23 1308-1311页 [查看摘要][在线阅读][下载 385K] [下载次数：294 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 李淑丽;汪静;解如山;陈红菊;李国才;
目的分析人初乳中溶菌酶(Lysozyme,LYZ)的理化特性及其抗菌活性。方法取产后3d内的产妇乳汁,根据人LYZ标准曲线,求得其中的LYZ活性。将人初乳分别置于60、72、85和100℃水浴中孵育0、1、3、5、10、15、20和30min后取样,检测其中LYZ的活性,分析其热稳定性;将经稀释的人初乳分别调pH值至2.0、4.0、5.0、7.4、9.0和10.0,37℃孵育30min,检测其中LYZ的活性,分析其对pH值的敏感性;将不同的金属离子加入人初乳中,使其终浓度为10mmol/L,测定不同金属离子对人初乳中LYZ活性的影响;采用平板扩散法检测人初乳中LYZ的抑菌谱,并挑选敏感菌株进行定量抑菌试验。结果人初乳中LYZ的活性为(9650±236)U/ml,在60℃～85℃和pH2.0～10.0的条件下均可保持较强的活性,对多种金属离子具有一定的耐受性。人初乳中LYZ对多种革兰阳性及阴性细菌具有不同程度的抑菌作用,但对白色念珠菌无抑制作用。结论人初乳中的LYZ稳定性强,抗菌谱广,具有广泛的应用价值。
2010年12期 v.23 1312-1314+1319页 [查看摘要][在线阅读][下载 413K] [下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 罗欣;姚珍薇;漆洪波;刘丹丹;陈国庆;
目的观察p38MAPK特异性抑制剂SB203580对缺氧致人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。方法将HUVECs分为正常对照组、缺氧培养组、SB203580+正常对照组和SB203580+缺氧培养组,培养24h后,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Western blot分析各组细胞p38MAPK蛋白及其磷酸化水平;Transwell小室模型检测各组细胞的迁移率;ELISA法检测各组细胞培养上清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)及可溶性Endoglin(sEng)的含量。结果与正常对照组相比,缺氧培养组细胞的凋亡率、p38MAPK的磷酸化水平、sFlt-1及sEng含量显著增加(P<0.01),细胞体外迁移能力下降;SB203580+缺氧培养组细胞的凋亡率、p38MAPK的磷酸化水平、sFlt-1和sEng的释放较缺氧培养组均下降,体外迁移能力增强(P<0.05);磷酸化p38MAPK的释放水平与sFlt-1及sEng含量呈正相关(r1=0.69,P<0.05;r2=0.71,P<0.05)。结论 SB203580通过特异性阻断p38MAPK信号转导通路,对缺氧培养的HUVECs产生保护作用。
2010年12期 v.23 1315-1319页 [查看摘要][在线阅读][下载 521K] [下载次数：372 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 王丹;郭景茹;刘胜军;杨焕民;孙东波;薛琳琳;宿甲子;邓效禹;
目的克隆并分析籽鹅卵巢产蛋性能相关基因EST1的全长cDNA序列。方法利用实时荧光定量PCR技术对EST1基因在籽鹅产蛋前期与产蛋期卵巢中mRNA表达水平进行检测,并采用RACE(Rapid amplification of cDNAends,RACE)技术对该基因全长cDNA序列进行克隆,应用生物信息学预测方法对其编码的蛋白质进行分析。结果籽鹅产蛋期卵巢组织中EST1基因mRNA的表达水平显著高于产蛋前期(P<0.05)。经RACE技术获得EST1基因全长cDNA序列长1715bp,具有单一的完整开放阅读框(ORF,14～1318bp),推测编码蛋白含434个氨基酸残基,相对分子质量为107100,等电点为5.00。该蛋白为细胞质内蛋白,含3个跨膜螺旋,蛋白序列中含1个信号肽切割位点。结论经分子生物学软件进行蛋白质功能预测,初步确定EST1基因为籽鹅α-烯醇化酶蛋白基因,推测该基因可能参与籽鹅产蛋性能的分子调控。
2010年12期 v.23 1320-1324+1332页 [查看摘要][在线阅读][下载 978K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 赵岩;林风武;李才;
目的观察不同浓度糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)及AGEs作用不同时间对大鼠肾小球系膜细胞尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)及G蛋白偶联受体(G-protein-couple receptor,GPR14)mRNA表达的影响。方法制备AGE-BSA,体外培养大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial Cells,MC),加入不同浓度的AGE-BSA(终浓度分别为0、25、50、100和200mg/L),37℃孵育24h;加入100mg/L AGE-BSA,分别培养0、2、8、16和24h,以不含葡萄糖的BSA作为对照。收集细胞,采用RT-PCR检测各组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达。结果 AGE-BSA各组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达量均随AGEs浓度的增加而增加,50、100和200mg/L与0mg/L组比较,差异有统计学意义(P<0.05);100mg/L AGE-BSA各组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达量随着作用时间的延长而增加,作用8、16、24h组与0h组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。BSA组MC UⅡ及GPR14mRNA的表达量无明显增加(P>0.05)。结论 AGEs能上调大鼠MC UⅡ及GPR14mRNA的表达。
2010年12期 v.23 1325-1328页 [查看摘要][在线阅读][下载 309K] [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 冉永刚;游颜杰;
目的表达、纯化重组人肺癌抑癌基因1(Tumorsuppressor in lung cancer1,TSLC1)蛋白,并制备其多克隆抗体。方法采用RT-PCR法扩增TSLC1基因全长编码区序列,克隆入原核表达质粒pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,免疫家兔,ProteinA亲和层析纯化抗血清,并经Westernblot分析其反应原性。结果重组表达质粒pQE30-TSLC1经双酶切及测序鉴定证明构建正确。重组TSLC1蛋白的表达量约占菌体总蛋白的14%,主要以包涵体形式存在。纯化的重组蛋白纯度为93.4%,可与小鼠抗His-Tag单克隆抗体发生特异性反应。以其制备的多克隆抗体具有良好的抗原识别特异性。结论已成功制备TSLC1多克隆抗体,为深入研究TSLC1分子的生物学活性奠定了基础。
2010年12期 v.23 1329-1332页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K] [下载次数：144 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 陈哲文;金于兰;瞿爱东;马相虎;王亮;杨忠东;
目的观察水痘减毒活疫苗Oka株(V-Oka)的传代稳定性。方法将V-Oka病毒在人二倍体细胞MRC-5上连续传代至50代,观察病毒的培养特性。选择32、34、38、42、46、50代病毒进行病毒滴度测定和鉴别试验,提取病毒DNA,对V-Oka的主要基因(ORF31、ORF62、ORF68、R区)进行PCR扩增和测序,并对序列进行分析。结果 V-Oka连续传代至50代,其培养特性、细胞病变一致,病毒滴度为5.0～5.6LgPFU/ml。与GenBank中登录的V-Oka序列比较,32～50代的V-OkaORF31、ORF62、ORF68、R区序列稳定,并趋于减毒型。结论 V-Oka传代至50代,生物学和分子遗传学特性稳定。
2010年12期 v.23 1333-1337页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K] [下载次数：330 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 刘方蕾;吴兵;王晶;袁菲;赵志强;杨明;谢贵林;
目的按初步确定的工艺,制备A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A Neisseria meningococcus capsular polysac charide,GAMP)与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)的结合物,通过监测关键工艺参数,分析该工艺的稳定性。方法制备8批GAMP-TT结合物,经Sepharose4FF柱层析纯化后,进行各项生化鉴定,采用双向免疫扩散试验检测其抗原性,以结合物皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗TT IgG抗体水平。结果制备的8批结合物工艺关键参数较稳定,均保持GAMP抗原特异性;免疫小鼠后,均可诱生较高水平的血清抗GAMP IgG抗体,并可诱生免疫加强应答。结论该制备工艺稳定,为GAMP-TT结合疫苗的研制提供了参考。
2010年12期 v.23 1338-1342页 [查看摘要][在线阅读][下载 358K] [下载次数：224 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 徐斌;王弢;周园;李睿;刘毅;
目的优化麻疹减毒活疫苗的冻干工艺。方法以预冻过程(温度、时间)、升华干燥过程(温度、时间、真空控制值)、解析干燥过程(温度、时间、真空控制值)冻干参数为影响因素,应用L(827)正交试验设计冻干曲线,对8批麻疹减毒活疫苗半成品进行冻干,采用直观分析法的综合平均值R()iⅠ和极差R(i)j分析不同批次冻干制品的干损率、病毒滴度、热稳定性和残余水分,筛选最优因素水平组合,并对其进行适用性验证。结果优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺参数为:预冻:温度5～-25℃、时间0.5h,温度-25～-40℃采用大于1℃/min的冻结速率,温度-40℃、保持时间3h;升华干燥:温度-40～-20℃、时间1.5h、真空控制值0.16mbar,温度-20℃、保持时间8h、真空控制值0.16mbar,温度-20～30℃、时间5h、真空控制值0.16mbar;解析干燥:温度保持30℃、时间6h、真空控制值0.005mbar,以优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺冻干的制品成型良好,干损率平均为1.36%,稳定性好,残余水分在1.62%～1.67%之间。结论优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺适合麻疹疫苗大规模生产。
2010年12期 v.23 1343-1346页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K] [下载次数：417 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 朱为;毕慧;王月红;王晓;
目的观察冻干A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗的稳定性,并比较A(lOH)3佐剂和磷酸盐缓冲液(PBS)复溶疫苗的免疫效果。方法将冻干疫苗于2～8℃放置36个月,每隔6个月取样,测定游离多糖含量、分子大小等,观察疫苗的稳定性。分别用A(lOH)3和PBS两种稀释液复溶疫苗后,计算吸附率并免疫小鼠,采用ELISA法测定小鼠血清中抗多糖IgG抗体滴度。结果疫苗于2～8℃放置30个月,各项质量指标均合格。A(lOH)3稀释液复溶疫苗的吸附率为100%。以两种稀释液复溶的疫苗均可诱导小鼠产生高滴度的抗多糖IgG抗体及免疫记忆反应,且A(lOH)3稀释液明显优于PBS稀释液。结论冻干A群脑膜炎球菌结合疫苗具有良好的稳定性,A(lOH)3佐剂可作为其稀释液。
2010年12期 v.23 1347-1349+1356页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K] [下载次数：265 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 兰敏超;姚元存;
<正>超滤膜通常按相对分子质量和膜面积来分类,常用的超滤膜相对分子质量有1000、5000、10000、100000、500000、1000000等;常用膜面积有0.1、0.5、2.5m2不等。超滤膜是依据透过比膜孔相对分子质量小的物质,截留比其相对分子
2010年12期 v.23 1342页 [查看摘要][在线阅读][下载 49K] [下载次数：92 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 肖大平;史惠强;邵洁;戚前明;
目的建立一种新型、快速的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)分泌蛋白抗原85B(Ag85B)免疫电化学检测方法。方法先在玻碳电极(Glassy carbon electrode,GCE)表面电沉积一层纳米金,通过静电吸附固定普鲁士蓝壳聚糖(Chitosan-prussian blue,CS-PB)纳米复合物,利用壳聚糖的氨基功能团固定微米金磁微粒(Au-Fe3O4),再吸附兔抗Ag85B多克隆抗体,制得电流型免疫传感器。测定电极制备过程的电化学特征,通过原子力显微镜对免疫传感器进行表征,确定免疫传感器的最佳pH值、反应时间、检测线性响应范围及检测下限,验证该方法的特异性和重复性,并与ELISA检测结果进行比较。结果原子力显微镜结果表明,Au-Fe3O4与兔抗Ag85B多克隆抗体可连接到电极表面。在最佳pH值(pH7.5)和反应时间(12min)的条件下,该传感器响应的峰电流值与Ag85B浓度在10～500ng/ml的范围内呈良好的线性关系,检测下限可达10ng/ml,且具有良好的特异性和重复性。免疫传感器与ELISA检测结果的吻合性较好。结论已成功制备了检测Ag85B的免疫传感器,该传感器制备简单,操作便捷,灵敏度高。
2010年12期 v.23 1373-1376+1383页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 刘冰;王承宇;杨松涛;高玉伟;王铁成;夏咸柱;
目的对精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白疏水层析方法进行优化。方法将胃蛋白酶直接加入制备好的高效价马抗H5N1禽流感病毒血清进行消化裂解,再加入饱和度为26%的硫酸铵溶液,盐析沉淀离心一次后,直接进行疏水层析进一步纯化F(ab′)2抗体。结果连续洗脱依次出现6个蛋白峰,50min左右,洗脱峰3开始出现,其中含大部分F(ab′)2抗体,此时硫酸铵摩尔浓度约为1.0～1.1mol/L。阶段梯度洗脱,当硫酸铵摩尔浓度降至1.0mol/L时,大量F(ab′)2片段被洗脱下来,纯度达90%以上。结论优化了精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白的疏水层析方法,降低了硫酸铵用量,减少了离心次数,生产周期也大大缩短。
2010年12期 v.23 1377-1379页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K] [下载次数：303 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 杨英俊;陈辉;
目的建立实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因水平。方法提取人全血基因组DNA,常规PCR扩增hTERT基因,与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α,提取重组质粒pMD18-T-hTERT作为定量检测的标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行方法的验证。采用建立的实时荧光定量PCR法检测肝癌患者和健康人血浆中hTERT DNA的水平。结果重组质粒pMD18-T-hTERT经PCR及测序鉴定证明构建正确。以该重组质粒为标准品绘制的标准曲线在103～108copies/μl浓度范围内线性关系良好,相关系数R2为0.997;批内及试验间变异系数分别为0.86%和1.44%;特异性良好。肝癌患者血浆hTERT DNA水平显著高于健康人(P<0.05)。结论已成功建立了肝癌患者血浆hTERT DNA的实时荧光定量PCR检测方法,为临床通过检测血浆hTERT DNA辅助诊断肝癌提供了良好的工具。
2010年12期 v.23 1380-1383页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K] [下载次数：215 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]