- 刘朝阳;高丹;徐帆洪;
目的原核表达肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)114～281肽和人白细胞介素-24(Interleukin-24,IL-24)融合蛋白,并检测其体外抗肿瘤细胞活性。方法以人外周血单个核细胞总RNA为模板,PCR扩增TRAIL114～281和IL-24基因,经T4DNA连接酶连接成融合基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a/TRAIL114～281-IL-24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白TI经层析法纯化后,进行Western blot分析,并采用MTT法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,caspase3活性检测试剂盒检测其对不同肿瘤细胞caspase3活性的影响。结果重组表达质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;TI融合蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白纯度可达95%,且可与鼠抗人IL-24抗体发生特异性反应;经复性的蛋白能明显抑制人宫颈癌上皮细胞HeLa和人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并显著提高肿瘤细胞的caspase3活性。结论已在大肠杆菌中表达了TRAIL114～281-IL-24融合蛋白,其具有诱导部分肿瘤细胞凋亡的活性。
2010年09期 v.23 913-917页 [查看摘要][在线阅读][下载 257K] [下载次数：176 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 郑黎黎;沈薇;熊玲;
目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis Bvirus X protein,HBx)在肝组织中的表达与慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)合并肝脂肪变性的关系及其可能的机制。方法对经病理证实的18例CHB及18例CHB合并肝脂肪变性的病例标本进行血脂、肝功能、血清病毒学及病理组织学指标分析,免疫组化法检测肝组织HBx、肝X受体(Liver X receptorα,LXRα)和脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)的表达。结果两组病例生化指标、HBV血清标志物及HBV-DNA载量、肝组织炎症活动度分级及纤维化程度分期的构成比差异均无统计学意义(P>0.05);HBx、LXRα和FAS表达的阳性率差异也无统计学意义(P>0.05);但CHB合并肝脂肪变性组HBx、LXRα和FAS的表达强度明显高于CHB组,且差异有统计学意义(P<0.05);在CHB合并肝脂肪变性组中,HBx与LXRα、LXRα与FAS及HBx与FAS的表达呈正相关。结论 HBx在CHB肝组织中广泛表达,在CHB合并肝脂肪变性组的表达明显增强,提示HBx可能通过诱导LXRα进而刺激FAS表达上调,参与CHB合并肝细胞脂肪变性的发生。
2010年09期 v.23 918-921页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K] [下载次数：116 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 郑亮;赵爱华;王雯;乔来艳;贾淑珍;寇丽杰;李凤祥;吴小南;王国治;
目的观察BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫器官和免疫功能的影响,评价BCG-CpG-DNA的免疫毒性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,实验组分别注射低(100μg)、中(250μg)、高(500μg)剂量的BCG-CpG-DNA,于28d内分别经背部皮下免疫7次,分别于初次免疫后14d、末次免疫后3d和3周,检测各组小鼠免疫器官脏器系数、淋巴细胞转化功能、细胞因子释放(ELISPOT法)、T细胞亚群变化(免疫荧光法)和NK细胞杀伤活性(乳酸脱氢酶法)。结果 BCG-CpG-DNA重复给药7次,主要影响小鼠初级免疫器官,表现为脾肿大,对胸腺、肝脏和肾脏无影响;对细胞免疫功能的影响是增强淋巴细胞转化功能;降低中、高剂量组CD3+T细胞亚群含量;提高体内分泌IFNγ和IL-4的细胞数二者的比例;增强NK细胞的杀伤能力。结论 BCG-CpG-DNA重复给药累计达3.5mg,小鼠表现为免疫功能增强,对免疫器官和免疫功能无不良影响,未见免疫毒性副作用。
2010年09期 v.23 922-925+929页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K] [下载次数：260 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 倪宏波;辛九庆;姜海芳;周玉龙;王春仁;宫大庆;
目的从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5(Membrane surface protein5,MSP5)单克隆抗体识别的抗原表位。方法用MSP5单克隆抗体1D8作为靶标,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选,通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并提取阳性克隆的单链DNA,进行测序分析。结果从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与MSP5单抗1D8特异结合的噬菌体克隆,其一致序列为LING。竞争抑制试验表明,含特异序列的克隆能与MSP5重组蛋白抗原竞争。结论初步确定MSP5单克隆抗体1D8的抗原表位为线性表位,为进一步研究其在边缘无浆体诊断及新型疫苗研制中的作用奠定了基础。
2010年09期 v.23 926-929页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K] [下载次数：260 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 王小冬;孙博;王菁华;孔庆飞;谢晓丽;周明言;李娜;李呼伦;穆莉莉;
目的研究实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠发病过程中辅助性CD4+T细胞亚型的变化。方法将Lewis大鼠分为完全弗氏佐剂(CFA)早、晚期发病时对照相和EAMG早期(初次免疫后13d)、高峰期(初次免疫后50d)发病时相4组,各组分别给予相应的药物后,于发病早期和高峰期分离淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组大鼠淋巴细胞中Th1、Th2、Th17和Treg细胞的比例,ELISA法检测淋巴细胞培养上清中各种细胞因子水平。结果在EAMG发病的早期时相,与CFA组比较,EAMG组Th1、Th2、Th17细胞的比例下降,而Treg细胞比例上升;淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-4水平显著下降(P<0.05),IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-17和TGF-β水平略升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。在EAMG发病的高峰期,与CFA组比较,EAMG组Th1和Th17细胞的比例显著上升(P<0.05),而Th2和Treg细胞的比例显著下降(P<0.05),淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-17水平显著上升(P<0.05),IL-4和TGF-β水平显著下降(P<0.01),IL-6水平略上升,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论在EAMG发生过程中,4种辅助性CD4+T细胞亚型之间的平衡被打破,晚期时相中Th1和Th17细胞比例上升,而Th2和Treg细胞比例下降。
2010年09期 v.23 930-934页 [查看摘要][在线阅读][下载 450K] [下载次数：397 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 仇金鹏;邢雷;牛姝;范东艳;胡玉琳;王艳殊;任淑萍;
目的探讨硫酸锌对B段紫外线(Ultraviolet radiation B,UVB)造成的角朊细胞(Keratinocytes,KC)氧化损伤及胞内抗氧化酶活性的影响。方法取新生Wistar大鼠背部皮肤,采用中性蛋白酶和胰蛋白酶联合消化,经贴壁培养获得高纯度角朊细胞,在含10%FBS的L-DMEM+F12培养液中扩增培养。将细胞随机分为UVB组、加锌组和正常对照组,UVB组用15W的UVB进行照射,加锌组与50μmol/L硫酸锌共孵育24h后进行照射,正常对照组不照射。照射后24h收集各组细胞,进行氧化损伤指标(MDA、OH-、O2-)及胞内抗氧化酶(SOD和GSH)活性测定。结果 UVB组细胞MDA、OH-和O2-水平显著高于正常对照组(P<0.05),加锌组显著低于UVB组(P<0.05);UVB组细胞SOD和GSH水平显著低于正常对照组(P<0.05),加锌组显著高于UVB组(P<0.05)。结论硫酸锌可拮抗UVB对角朊细胞造成的氧化损伤,并提高胞内抗氧化物酶的水平。
2010年09期 v.23 935-937页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K] [下载次数：107 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨燕;蒋幼凡;
目的研究超声微泡联合pDsRed2-N1-CD/UPRT融合自杀基因治疗肺癌的机制。方法采用PCR法扩增大肠杆菌CD和UPRT基因,克隆入pDsRed2-N1载体,构建pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性菌,提取质粒,酶切及测序鉴定。将质粒与超声微泡融合,将混合物转染A549细胞,测定CD/UPRT基因的直接杀伤效应和旁效应;并检测不同强度的超声对超声微泡与质粒混合物中质粒结构、转染细胞形态及转染效率的影响。结果 pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒经酶切及测序证明构建正确。荧光显微镜下可观察到质粒在超声微泡中的分布。转染A549细胞后,随着5-FU浓度的增加,细胞生长抑制率也增加,可高达58%;在相同剂量的5-FU作用下,增加转染细胞的比例,相应的细胞生长抑制率也随之增加,可高达78%。低能量的超声波对pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒结构无明显改变,电泳条带变化不大,对转染细胞形态也无明显影响,超声介导基因转染率最高可达30%。结论超声微泡能增强CD/UPRT基因对肿瘤细胞的直接杀伤和旁效应,起到治疗肿瘤的作用;低能量的超声微泡能提高CD/UPRT基因对细胞的转染效率,且不会损伤细胞及目的基因的DNA。
2010年09期 v.23 938-941+945页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K] [下载次数：161 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 马应霞;易山;张光明;张永欣;张标;孙茂盛;
目的研究轮状病毒P[8]G1株(Wa株)在人胚肺二倍体细胞KMB17上的适应性及其免疫原性。方法将人轮状病毒P[8]G1株(Wa株)在KMB17细胞上进行适应培养,连续传代10代,免疫荧光法检测病毒的增殖情况,免疫胶体金法检测病毒的抗原性,微量滴定法检测病毒的感染性滴度,并进行病毒基因组稳定性及免疫原性检测。结果轮状病毒Wa株在KMB17细胞上连续传代后,细胞病变逐渐增快;抗原性逐渐增强;至第10代达增殖高峰,病毒滴度达4.25CCID50/ml;在传代过程中,病毒基因组核酸带型保持一致;经皮下和口服2种途径免疫小鼠,血清抗体效价均达1:8192。结论轮状病毒Wa株可在KMB17细胞上稳定增殖,病毒保持了毒株的基本生物学特性,且具有较好的免疫原性。
2010年09期 v.23 942-945页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K] [下载次数：219 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 蔡文娣;初金鑫;付辰炜;刘万顺;韩宝芹;
目的探讨氨基葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞(PMФ)免疫功能的影响。方法用壳聚糖制备氨基葡萄糖纯品,通过体外实验测定其对小鼠PMФ增殖、吞噬中性红、产生NO和IL-1能力的影响。结果氨基葡萄糖能够显著增强PMФ对中性红的吞噬能力,提高NO和IL-1的生成量,而对PMФ的增殖能力无明显影响。结论氨基葡萄糖能够活化PMФ,增强小鼠的免疫功能。
2010年09期 v.23 946-948+952页 [查看摘要][在线阅读][下载 336K] [下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 于长青;战媛媛;王长远;
目的在毕赤酵母中表达胆盐水解酶(Bile salt hydrolase,BSH)基因。方法以重组质粒pMD18-BSH为模板,PCR扩增BSH基因,克隆至毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,经AvrⅡ线性化,电转化至毕赤酵母SMD1168,PCR筛选阳性重组子,诱导表达,表达产物经Western blot进行分析。结果重组表达质粒pGAPZαA-BSH经双酶切及测序证明构建正确;经PCR鉴定阳性的重组酵母菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约35000的目的蛋白表达条带;表达的重组蛋白可与兔抗植物乳杆菌多克隆抗体发生特异性反应。结论在毕赤酵母中成功表达了BSH,为BSH结构与相关功能及高效降解胆固醇的基因工程菌株的研究奠定了基础。
2010年09期 v.23 949-952页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K] [下载次数：213 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 唐存多;高金湖;邬敏辰;
目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,并对发酵条件进行优化。方法将人工合成的hLY成熟肽基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化至毕赤酵母GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/hly,经甲醇低温诱导表达后,取发酵液上清进行SDS-PAGE分析及酶活性检测,并对培养基初始pH值、甲醇添加量、诱导温度和时间进行优化。结果人工合成的hly测序结果与GenBank中报道的核酸序列完全一致;GS115/hly经PCR鉴定,hly基因已整合入GS115基因组内;经甲醇诱导表达的GS115/hly发酵液上清具有溶菌活性,活性达30U/ml;经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约15200处可见目的蛋白条带;GS115/hly的最佳诱导条件为:培养基初始pH5.0,甲醇添加量2.0%,26℃诱导108h。结论在毕赤酵母GS115中表达了具有较高酶活性的hLY,并对发酵条件进行了初步优化。
2010年09期 v.23 953-956页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K] [下载次数：436 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 李艳英;耿厚法;班博;
目的探讨α-硫辛酸对糖尿病大鼠血糖、血脂及肝脏内腺苷酸活化蛋白激酶(Adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)α亚基(AMPKα)表达及活性的影响。方法应用高脂饮食联合腹腔单次注射小剂量的链脲佐菌素(STZ)复制2型糖尿病合并脂代谢紊乱的Wistar大鼠模型,再将模型大鼠随机分为糖尿病对照(DC)组和α-硫辛酸治疗(LA)组,并设正常对照(NC)组。NC组和DC组每只给予生理盐水2ml/d,LA组经腹腔注射α-硫辛酸60mg/kg·d,共4周。分别测定各组大鼠的体重、血糖、血脂、糖化血红蛋白(HbA1c)和肝脏内AMPKα及磷酸化AMPKα(pAMPKα)的表达水平。结果建模后、给药前及给药后,NC组大鼠血糖水平均显著低于DC和LA组(P<0.01),给药后,LA组显著低于DC组(P<0.05)。给药4周后,DC组大鼠甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和HbA1c水平均显著高于NC组(P<0.01),而高密度脂蛋白(HDL)、肝脏内AMPKα及pAMPKα的表达水平均显著降低(P<0.05);LA组大鼠TG、TC、LDL和HbA1c水平均较DC组显著下降(P<0.05),而HDL、AMPKα及pAMPKα表达水平均显著升高(P<0.05);DC组肝脏内AMPKα表达较NC组明显下降(P<0.05),LA组无明显变化(P>0.05)。结论α-硫辛酸可以通过调节肝脏内AMPKα的表达水平,进而改善糖尿病状态下的"糖脂毒性"。
2010年09期 v.23 957-960页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K] [下载次数：333 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 李运娜;于钦磊;李建华;宫鹏涛;李赫;张西臣;
目的克隆并原核表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)亲环蛋白(Cyclophilin,CyP)基因。方法收集、纯化Rh株弓形虫速殖子,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增TgCyP基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-TgCyP,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%,重组表达质粒pET-28a-TgCyP经PCR及双酶切鉴定证明构建正确。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白的相对分子质量约为26000,表达量约占菌体总蛋白的40%,Western blot显示其能被鼠抗弓形虫免疫血清识别。结论已在E.coliBL21(DE3)中表达了Rh株TgCyP,其有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。
2010年09期 v.23 961-963+966页 [查看摘要][在线阅读][下载 236K] [下载次数：166 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 苏盈盈;肖建林;王放;
目的探讨东宫泉对黑素细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,倒置显微镜下观察不同浓度东宫泉(将50倍浓缩液0、2、4、8、16、32、64倍稀释)对B16黑素瘤细胞形态的影响,MTT法检测不同浓度东宫泉对细胞增殖的影响,蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定不同浓度东宫泉对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响。结果经16倍稀释的东宫泉处理48h的B16黑素瘤细胞生长旺盛;东宫泉对B16黑素瘤细胞具有高浓度抑制、中低浓度激活的作用,8倍和16倍稀释为最佳激活浓度(P<0.05);东宫泉对酪氨酸酶亦具有高浓度抑制、低浓度激活的作用。结论东宫泉对黑素细胞增殖和酪氨酸酶均具有双向调节作用。
2010年09期 v.23 964-966页 [查看摘要][在线阅读][下载 181K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 位晓丹;高志芹;于文静;连波;吴潼;张仕状;孙业全;王滨;
目的探讨肝动脉栓塞化疗(Transcatheter arterial chemoembolization,TACE)与恩度联合应用对兔VX2肝移植瘤血管生成的影响。方法建立兔VX2肝移植瘤模型,并随机分为TACE组、抗血管生成组(TACE+动脉给予恩度)和生理盐水对照组。TACE术后14d,应用实时定量荧光PCR检测残癌组织血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的转录水平,免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(Microvessel density,MVD),并分析二者的相关性。结果TACE组VEGF mRNA的转录水平明显高于抗血管生成组和对照组(P均<0.05);抗血管生成组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。抗血管生成组MVD(33.17±6.69)明显低于TACE组(59.96±12.19)和对照组(58.88±7.82),且差异均有统计学意义(P均<0.05);TACE组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。各组肿瘤组织VEGF mRNA的转录水平与MVD的分布均呈正相关(r=0.40)。结论TACE与恩度联合应用与单纯应用TACE相比,可明显抑制肿瘤的血管生成。
2010年09期 v.23 967-969+977页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K] [下载次数：191 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 弓莉;王元占;杨培梁;刘谋荣;朱玉峰;曾俊岭;吴湘慧;
目的克隆鼠TNF家族的B细胞活化因子(Bcell activating factor of TNF family,BAFF)ORF基因,并进行原核表达及纯化。方法提取鼠新鲜脾脏组织总RNA,经RT-PCR扩增BAFF ORF基因,测序后,克隆入载体pMAL-c2x,构建重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF,转化大肠杆菌Rosseta(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果 RT-PCR扩增得到约930bp的cDNA,其序列与GenBank中登录的鼠BAFF ORF cDNA序列的同源性达99.9%;重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF经酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为76500,IPTG终浓度为0.9mmol/L,诱导时间为4h,目的蛋白的表达量最高,破菌上清和沉淀中均可见目的蛋白条带,可溶性蛋白的表达量占全菌总蛋白的49%;纯化的重组蛋白纯度可达90%,含量为0.9mg/ml,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆了鼠BAFF ORF基因,并进行了原核表达及纯化,为进一步研究其生物功能奠定了基础。
2010年09期 v.23 970-973页 [查看摘要][在线阅读][下载 302K] [下载次数：75 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 王雪云;于佳一;李红;杨世杰;李惟;
目的观察胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)模拟肽对大鼠胰岛RINm5F细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌的影响。方法将RINm5F细胞分为GLP-1组(加入30nmol/LGLP-1)、GLP-1模拟肽组(分别加入15、30和50nmol/LGLP-1模拟肽)和空白对照组,MTT法检测各组细胞的增殖情况;在不同浓度葡萄糖(4.5和20mmol/L)培养条件下,采用ELISA Kit检测各组细胞胰岛素的分泌情况;葡萄糖加棕榈酸诱导RINm5F细胞凋亡,检测各组细胞的存活率,并用RT-PCR检测各组细胞凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 GLP-1模拟肽可呈浓度依赖性地刺激RINm5F细胞增殖;可促进RINm5F细胞分泌胰岛素,这种作用随环境中葡萄糖浓度的增加而增强;与凋亡模型组比较,GLP-1模拟肽组细胞存活率增加,bcl-2基因表达增加,bax基因表达量无明显变化。结论 GLP-1模拟肽可以促进RINm5F细胞增殖和分泌胰岛素,并抑制RINm5F细胞凋亡。
2010年09期 v.23 978-981页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K] [下载次数：310 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 杨燕;张洪丹;王小溪;蒋子威;黄静;赖玉平;吴自荣;
目的从表皮葡萄球菌发酵液中分离纯化脂肽粗提物,并分析其生物学活性。方法通过酸沉淀分离和有机溶剂抽提的方法,从表皮葡萄球菌1457发酵液中得到脂肽粗提物。利用排油圈试验和薄层色谱(TLC)分析脂肽粗提物的性质,HPLC分析其纯度。小鼠皮下注射脂肽粗提物后,再经皮肤感染金黄葡萄球菌,检测其对小鼠体内白细胞的影响及抑菌作用;实时定量PCR检测其对小鼠体内β防御素14(mBD14)表达的影响。结果所得脂肽粗提物F2的排油活性大于F1;TLC分析显示,F2中存在性质相近的脂肽类同系物,纯度>60%;脂肽粗提物能减缓小鼠因感染金黄葡萄球菌引起的急性炎症,降低由感染引起的白细胞增多,并通过上调mBD14的表达抑制细菌在皮肤内的增殖。结论已从表皮葡萄球菌发酵液中成功获得了具有生物学活性的新型脂肽粗提物。
2010年09期 v.23 982-985页 [查看摘要][在线阅读][下载 312K] [下载次数：439 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 王兰;李永红;陶磊;毕华;李响;丁有学;高凯;郭莹;饶春明;
目的建立人源化叶酸受体α抗体的质控方法。方法应用基于表面等离子体共振(Surface plasmon resonance,SPR)技术的BIAcore3000系统测定人源化叶酸受体α单抗与重组人叶酸受体α的亲和力,从而反映该抗体的功能;采用ELISA法测定其抗原结合力;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定其纯度;紫外分光光度法测定其蛋白含量;毛细管等电聚焦电泳法测定等电点;其他各项指标检测按《中国药典》三部(2005版)要求进行。结果人源化叶酸受体α单抗成品的平均相对百分效价为105%,RSD为6.0%。单抗成品及参考品与叶酸受体的结合力均存在量效关系,且符合四参数方程式:Y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D,其曲线相关系数在0.98以上,成品经3次测定,相对抗原结合力平均值为97%,RSD为25%。还原SDS-PAGE分析显示,单抗成品的IgG重链和轻链百分比为98.2%;非还原SDS-PAGE分析显示,完整IgG百分比为96.7%;SEC-HPLC分析显示,单抗成品单体为99.1%,聚合体为0.9%。其他各项指标均符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论已初步建立了人源化叶酸受体α抗体的质控方法,为该制品的质量控制奠定了基础。
2010年09期 v.23 986-989页 [查看摘要][在线阅读][下载 516K] [下载次数：198 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 孔庆波;
目的分析猪、犬脾转移因子(Transfer factor,TF)的理化性质及生物学特性。方法分别对猪、犬脾TF提取物进行性状、pH值、蛋白质、氨基酸组分检测、紫外光谱分析及TF、DNA、核苷酸含量测定等理化性质分析,并进行无菌试验、热原试验、安全试验、过敏试验、免疫原性检测等生物学特性分析及生物学活性检测。结果提取的猪、犬脾TFDNA、核苷酸、氨基酸含量不同,氨基酸组分也有差异,二者均无菌,无热原、毒性、致敏性及免疫原性,且A260/280值也达到较高的指标,未黏附白细胞抑制指数(NAI)均大于20%,猪、犬脾TF每毫升约为2个活性单位。结论提取的猪、犬TF的理化性质及生物学特性与国内外报道的其他TF相符,已达到国内外同类制品的水平,可供试验和临床使用。
2010年09期 v.23 990-992页 [查看摘要][在线阅读][下载 110K] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 蒋加庆;蔡海波;胡爽;谭文松;
目的探讨pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatography,IMAC)分离含His-Tag标签的人胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白的影响,并确定最佳洗脱条件。方法在0.50mol/L盐浓度条件下,分别取pH6.0、7.0、7.8和9.04种缓冲液进行咪唑梯度洗脱;在合适的pH值条件下,分别取氯化钠浓度0.25、0.50和0.75mol/L3种缓冲液进行咪唑梯度洗脱。分析在不同pH值及盐浓度条件下洗脱融合蛋白所需要的咪唑浓度及回收率。结果在所考察的pH值范围内,洗脱融合蛋白所需的咪唑浓度随洗脱液pH值的升高而逐渐降低,当洗脱液pH值为7.8时,融合蛋白的分离效果最佳,大部分杂蛋白被0～40mmol/L咪唑洗脱液去除且不含融合蛋白,而绝大部分融合蛋白在咪唑浓度达80～200mmol/L时被洗出,总回收率达(83.7±1.0)%,且比例较高;在此pH值条件下,氯化钠浓度达0.75mol/L,才会影响融合蛋白的回收率,氯化钠浓度为0.25或0.50mol/L的洗脱液洗出融合蛋白的效果相近;在pH7.8,含0.25mol/L氯化钠的洗脱体系下,用50mmol/L咪唑溶液洗脱杂蛋白,200mmol/L咪唑溶液洗脱融合蛋白,融合蛋白的回收率和比例分别可达(85.2±2.0)%和(80.5±1.0)%。结论在所考察的pH值和盐浓度范围内,提高洗脱液pH值和盐浓度均可降低洗脱融合蛋白需要的咪唑量,但也会降低融合蛋白的回收率。
2010年09期 v.23 999-1004页 [查看摘要][在线阅读][下载 326K] [下载次数：384 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 陈宇萍;乔媛媛;解鹏;何立东;王琰;
目的优化以包含体形式表达的抗RBC/HBsAg ds-diabody的复性条件。方法在大肠杆菌BL21/λDE3中诱导表达抗RBC/HBsAg ds-diabody,收获包含体,变性后,分别经透析复性和稀释复性方法复性,并以两种特异性结合活性检测复性效果,对pH值、复性时间和温度进行优化。结果包含体经变性后,pTH-dsR30KD特异蛋白占总蛋白的85%,pTdsR-H30KD特异蛋白占总蛋白的96%;ds-diabody抗体以稀释复性效果较好;在碱性(pH8.8～10)、低温(4℃)条件下复性72h效果最好。结论优化了抗RBC/HBsAg ds-diabody包含体的复性条件。
2010年09期 v.23 1005-1008页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李玉芹;袁正求;冯岳;黎萍;周蒙;姚威;张剑;
目的探讨不同碳氮组合对小球藻Chlorella pro tothecoides CS-41异养培养油脂积累的影响。方法以不同浓度葡萄糖为碳源,尿素为氮源,异养培养小球藻,采用干重法测定小球藻生物量,氯仿/甲醇法提取总脂,并采用GC-MS分析脂肪酸含量。结果小球藻最佳生长条件的碳氮组合配比为葡萄糖浓度40g/L,尿素浓度3g/L,此时小球藻生物量达最高,为9.1g/L,脂肪酸产率最大,为1.26g/L;总脂含量最高,为4.38g/L。结论获得了碳氮最佳配比,使小球藻脂肪酸含量提高到1.26g/L,为发酵扩大化培养小球藻制备生物柴油奠定了基础。
2010年09期 v.23 1009-1013页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K] [下载次数：580 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：0 ] - 王静;潘海龙;袁良玉;严君喜;彭农;曲芙莲;
目的探讨酶标法检测抗菌素残留量的数据处理方法。方法采用卡那霉素和庆大霉素快速检测试剂盒(间接竞争ELISA法)检测乙型脑炎减毒活疫苗2种抗菌素的残留量;采用半对数直线、半对数二次曲线和对数直线3种方法,以最小二乘法对实验数据进行拟合处理,分析、比较实验点残差分布、残差平方和、相关系数和实验误差等指标。结果半对数直线拟合较差,半对数二次曲线和对数直线方程拟合较好;半对数二次曲线法中实验点在标准曲线两侧的分布较均匀,各点的残差平方和远小于半对数直线法;半对数二次曲线法和对数直线法所得标准曲线的相关系数较高,检测庆大霉素标准品的实验误差均小于半对数直线法。结论半对数二次曲线法和对数直线法均优于试剂盒推荐的半对数直线法,而在极限值处理、计算简便等方面对数直线法更优。
2010年09期 v.23 1014-1017页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 杨立宏;岳广智;徐宏山;刘欣玉;王志伟;董关木;贾丽丽;
目的验证终端干热法灭活凝血因子类制品中细小病毒的灭活工艺,并对其灭活效果进行评价。方法以猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)为指示病毒,模拟凝血因子类制品生产工艺中病毒灭活的工艺,采用96孔板微量细胞病变法检测残余病毒滴度,验证终端干热法灭活病毒的效果。结果 3家企业生产的人凝血因子Ⅷ制品经100℃加热30min灭活,病毒滴度分别下降2.01～2.31、≥3.92和3.13～3.50LgTCID50/0.1ml;冻干与加热联合作用,病毒滴度分别下降2.82～3.00、≥4.24和4.00～4.12LgTCID50/0.1ml;5家企业生产的人纤维蛋白原经100℃加热30min灭活,病毒滴度分别下降3.50～3.63、2.56～2.70、3.06～3.57、3.00～3.25和≥3.75LgTCID50/0.1ml;冻干与加热联合作用,病毒滴度分别下降4.00～4.12、3.12～3.46、4.04～4.56、3.50～3.75和≥4.63LgTCID50/0.1ml。结论终端干热法对凝血因子类制品中的细小病毒具有一定的灭活作用,但由于工艺复杂、影响因素较多,不同企业生产的同类制品的病毒灭活效果不尽相同。
2010年09期 v.23 1018-1020+1027页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K] [下载次数：341 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ]