- 孟胜利;徐葛林;程满荣;舒祥;雷勇良;朱风才;周敦金;王定明;明贺田;吴杰;严家新;杨晓明;
目的分析中国狂犬病病毒(RV)的遗传多样性,为我国狂犬病的预防提供理论依据。方法采用RT-PCR技术扩增26株RVN基因,并进行测序,与GenBank登录的序列进行比对,构建进化树,分析RV的基因分型和分组情况以及时间和空间的动态进化。结果中国RV分为2个大的进化分支(8组),分支Ⅰ包括1～4组,分支Ⅱ包括5～8组,组内核苷酸同源性≥93.2%,氨基酸同源性≥94.3%;组间核苷酸差异性≥8.0%,氨基酸差异性≥1.7%;运用贝叶斯中的马尔科夫链的蒙特卡洛方法,估计中国RVN基因核苷酸的平均碱基替代率为1.4089×10-4取代/位点·年,共同祖先出现在公元968年。结论中国狂犬病病毒株均属于基因1型狂犬病病毒,存在跨地域、跨宿主传播;我国分支Ⅰ狂犬病病毒株与泰国、越南、菲律宾、印度尼西亚、马来西亚等东南亚国家分离的狂犬病病毒株起源相同;分支Ⅱ的毒株在全球分布。
2010年05期 v.23 449-454页 [查看摘要][在线阅读][下载 670K] [下载次数：315 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 王玲;曹守春;杜加亮;董关木;唐青;唐建蓉;石磊泰;李加;吴小红;
目的对狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11株进行全基因序列测定,并就主要抗原位点与我国现用狂犬病疫苗生产毒株进行比较,评价CVS-11株作为抗狂犬病病毒中和抗体检测毒株的适用性。方法将CVS-11全基因组RNA分成8段进行RT-PCR扩增,分别将产物克隆入pGEM-TEasy载体中,测定全序列;用DNAStar软件包中的相应软件对基因全序列进行分析,并与5株生产用狂犬病病毒(CTN-1、aG、FluryLEP、PM和PV)进行基因比对分析和主要抗原位点比较。结果 CVS-11株基因组全长11927bp,其结构基因排列与已知其他狂犬病病毒相同,但G和M基因的非编码区偏长。CVS-11株与我国现用疫苗株的序列同源性在84.3%～99.5%之间。以相对保守的N基因作进化树分析,CVS-11株与PM株同源性最高,与CTN-1和aG株的亲缘关系较其他疫苗株远。各毒株G蛋白抗原位点存在一定的氨基酸差异。结论 CVS-11株与我国现用疫苗株具有较高的同源性;CVS-11株与不同疫苗株G蛋白抗原位点的差异可能对不同疫苗免疫效果评价产生不同程度的影响。
2010年05期 v.23 455-459页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K] [下载次数：412 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 岳丽琴;周育森;张庶民;杨永弘;沈叙庄;
目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白(SCPB)的表位,分段表达其中4个功能活性区域,并分析其免疫原性。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测SCPB的表位;分别构建C5a肽酶4个目的片段的重组表达质粒,经酶切测序正确后,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量;并经镍柱亲和层析纯化,纯化的重组蛋白进行蛋白质谱分析和Western blot分析后,皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清抗体水平。结果经预测,SCPB含1个既可结合MHC又具有B细胞表位特征的肽段。构建的4个重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,目的蛋白主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%～70%。纯化的重组蛋白纯度可达90%,质谱分析表明与SCPB的相似性很高;Western blot分析表明,可与兔抗全长SCPB多克隆抗体反应。重组F1、FE、Fn蛋白免疫小鼠血清抗体滴度较高,三者差异无统计学意义;F2a蛋白抗体滴度最低,与F1、FE和Fn蛋白差异有统计学意义。结论已成功构建并高效表达了SCPB的4个功能活性区域;Fn是重要的免疫优势表位功能区;本文为B族链球菌毒力机制的研究及亚单位蛋白疫苗的研制奠定了基础。
2010年05期 v.23 460-465页 [查看摘要][在线阅读][下载 626K] [下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 魏海峰;井玲;魏雁虹;刘辉;齐玲;赵志涛;张秀云;李才;
目的观察不同浓度氟化物在不同时间段对二维(2D)和三维(3D)培养的成纤维细胞胰岛素样生成因子-1(IGF-1)表达的影响,并探讨其在氟化物刺激成纤维细胞成骨功能方面的作用。方法在2D和3D培养系统中,将成纤维细胞L929分为对照组(F-浓度为0mg/L)和6个染氟组(F-浓度分别为0.0001、0.001、0.1、1、10和20mg/L),在不同染氟时间段(2D培养2、4、24、48和72h,3D培养4、24、48、72和96h),采用ELISA法检测细胞培养上清中IGF-1蛋白的含量;免疫组化法(IHC)检测染氟成纤维细胞中IGF-1的表达;RT-PCR法检测染氟成纤维细胞IGF-1基因mRNA的转录水平。结果染氟可明显刺激成纤维细胞培养上清中IGF-1蛋白的表达;各染氟组成纤维细胞胞浆IGF-1的阳性着色较对照组均明显增强;氟作用48h,除F-浓度为20mg/L组外,其余各染氟组成纤维细胞IGF-1基因mRNA的转录水平较对照组均有不同程度的增强,但差异均无统计学意义。结论在2D和3D两种培养条件下,氟化物均可明显刺激成纤维细胞IGF-1的表达,提示在氟化物诱导成纤维细胞成骨功能增强的过程中,IGF-1可能发挥着重要作用。
2010年05期 v.23 466-470页 [查看摘要][在线阅读][下载 414K] [下载次数：108 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘友;屈浩;石琳;刘红芹;黄丽华;张宇光;朱卫彬;
目的克隆人CD52基因,构建真核表达载体,并在CHO细胞中稳定表达。方法提取人Hut-78细胞总RNA,采用RT-PCR法扩增CD52基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52,通过脂质体法转染CHO细胞,建立稳定转染的细胞系CHO-CD52。采用RT-PCR、免疫荧光组化技术及流式细胞术检测目的基因和蛋白的表达。结果 RT-PCR扩增得到186bp的DNA片段。重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52经PCR、双酶切及测序证明构建正确。CHO-CD52细胞经RT-PCR分析,可见186bp的目的基因条带;经免疫荧光检测,可见绿色荧光分布;经流式细胞术分析,阳性细胞百分率及荧光平均值分别为98.18和193.56。结论已成功克隆了人CD52基因,并建立了稳定转染的CHO细胞系,为CD52单克隆抗体的制备及抗体药物的开发奠定了基础。
2010年05期 v.23 471-474页 [查看摘要][在线阅读][下载 497K] [下载次数：293 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘韬;金英花;张瑜;常明;王丹萍;胡林森;
目的观察热休克蛋白27(Hsp27)在蛋白酶体抑制剂PSI诱导PC12细胞帕金森病(PD)模型早期的表达变化,为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法在PC12细胞中加入终浓度为10μmol/L的PSI,建立PD细胞模型,通过吖啶橙(AO)和溴化乙啶(EB)及HE染色进行鉴定;PSI作用3h后提取蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)系统获得差异蛋白点,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOFProMS)鉴定差异蛋白。结果 PSI作用PC12细胞24h后,细胞内嗜酸性类Lewy小体形成,并发生细胞凋亡。PSI作用3h后,有6个蛋白点表达量显著变化,其中4个蛋白点表达量增加,2个蛋白点表达量降低。蛋白点1经质谱鉴定为Hsp27,表达量增加了1.74倍。结论在泛素-蛋白酶体系统(UPS)功能障碍引起PD细胞模型的早期病理变化过程中,可能通过诱导Hsp27表达量明显增加,从而抑制蛋白酶体抑制剂所引起的细胞毒性。
2010年05期 v.23 475-478页 [查看摘要][在线阅读][下载 756K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 谢忠平;杨蓉;龙润乡;李华;白惠株;廖云;蒋蕊鞠;王燕;洪超;
目的检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体,并分析HCV优势抗原表位,为HCV抗原、抗体检测及疫苗研究提供依据。方法收集经ELISA法检测抗HCV阳性血清样品90份,使用总抗体检测试剂及抗HCV分片段试剂进行检测,并用荧光定量PCR对抗体弱阳性及阴性样品进行复核,分析不同片段出现的阳性率,从而分析HCV的优势抗原表位。结果 90份抗HCV阳性的样品经总抗体检测试剂检测,其中阳性78份(86.67%);90份抗HCV阳性的样品中,分片段试剂检测1个片段以上阳性样品59份(65.56%);其中C、NS3、NS4及NS5片段抗体阳性分别为56份(94.92%)、57份(96.61%)、42份(71.19%)及47份(79.66%),NS3及C片段抗体是HCV的优势抗体。结论 HCV-C及NS3表位是HCV的优势抗原表位;HCV分片段抗体与总抗体检测试剂之间阳性检出率存在一定差异。
2010年05期 v.23 479-481页 [查看摘要][在线阅读][下载 118K] [下载次数：214 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 付世新;王瑶;罗春海;张丽;齐长学;
目的分析铜特异性转运蛋白(Ctr1)基因mRNA转录水平与细胞内铜离子浓度的相关性。方法从猪传代肾细胞PK15中扩增Ctr1基因,克隆并测序;采用半定量RT-PCR法检测不同浓度铜离子(0、7.8、15.6、31.2和62.5μmol/L)对PK15细胞中Ctr1基因mRNA转录水平的影响,以β-actin为内参;采用原子吸收光谱分析法检测细胞内铜离子的浓度。结果所扩增的Ctr1基因与GenBank公布的序列同源性达到98%;PK15细胞Ctr1基因mRNA的转录水平在铜添加量在7.8～62.5μmol/L范围内呈双相反应,各试验组Ctr1基因转录水平均低于0μmol/L;而细胞内铜离子浓度均高于0μmol/L,以Ⅳ组含量最高,且与其他各组差异有统计学意义。结论 Ctr1基因mRNA的转录水平与细胞内铜离子浓度呈负相关。
2010年05期 v.23 482-484+492页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K] [下载次数：337 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 卜秀娟;孟宪梅;柳增善;代平;
目的克隆并原核表达扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)结构基因。方法提取扩展青霉总RNA,经RT-PCR扩增PEL结构基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-PEL,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量,包涵体蛋白经变性、复性后,采用NaOH滴定法测定其酶活性。结果经RT-PCR扩增获得约780bp的PEL结构基因;所构建的重组表达质粒pET-28a-PEL经酶切及PCR鉴定正确;目的蛋白的相对分子质量约为28000,以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的10%;发酵液及复性的包涵体蛋白酶活性可达12.44U/ml。结论已成功克隆并原核表达了PEL结构基因,为获得碱性脂肪酶高产基因工程菌株奠定了基础。
2010年05期 v.23 485-488页 [查看摘要][在线阅读][下载 378K] [下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
<正>《由中国药品生物制品检定所副所长王军志研究员主编的《生物技术药物研究开发和质量控制》一书自2002年10月首次出版以来,在生物技术药物领域获得了广泛好评。应科学出版社约稿和广大读者要求,主编及编委们对原著进行了补充和修订。
2010年05期 v.23 454页 [查看摘要][在线阅读][下载 31K] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] -
<正>由中国免疫学会理事长曹雪涛院士牵头、全国免疫学各领域知名专家联合编著的《免疫学前沿进展》,于2009年12月由人民卫生出版社正式出版。免疫学是一门重要的基础学科,与临床医学紧密相关,是生物医学乃至整个生命科学中发展最快的学科之一。
2010年05期 v.23 470页 [查看摘要][在线阅读][下载 33K] [下载次数：6 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] <正>尊敬的专家、读者、作者及各位同仁:您们好!自2007年8月起,《中国生物制品学杂志》网站(www.zgswj.com.cn,中文域名:中国生物制品学杂志.com)正式运行。本站网页有杂志简介、在线投稿、稿件查询、过期目录、广告合作等您所需要的信息,欢迎登录。
2010年05期 v.23 474页 [查看摘要][在线阅读][下载 30K] [下载次数：15 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] -
<正>由中国科协等联合主办、上海市科协承办的第六届中国科技期刊发展论坛(以下简称论坛)于2010年9月7～8日在上海召开。现将有关事项预告如下(正式征文通知将在主办单位正式签发后发放)。一、指导思想深入贯彻党的十七大和十七届四中全会精神,落实中央关于深化文化体制改革的要求,进一步推进新闻出版体制改革,探讨新时期科技期刊发展战略,推动科技期刊创新与发展。
2010年05期 v.23 516页 [查看摘要][在线阅读][下载 31K] [下载次数：17 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] <正>《生物制品系统生物反应器应用技术》研讨会,由中国医学装备协会生物工程装备技术专业委员会主办,特邀荷兰APPLIKON、瑞士比欧、美国GE、德国GEA、中国医科院、兰州生物制品研究所等国内外专家作专题报告,会议定于2010年6月23～25日在北京鸿润商务酒店举办,现将有关会议事宜通知如下:
2010年05期 v.23 525页 [查看摘要][在线阅读][下载 38K] [下载次数：8 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] -
<正>为了交流微生物学与免疫学领域国内外最新研究进展,推动我国相关学科建设不断取得新的发展和成就,中华医学会微生物学与免疫学分会拟于2010年7月在上海召开"2010全国临床微生物与感染免疫学术研讨会"。届时将邀请知名专家作专题报告,同时欢迎从事相关科研、教学、医疗、疾病预防与控制、检验检疫、生物技术研发等工作的专家学者积极投稿,参会交流。
2010年05期 v.23 560页 [查看摘要][在线阅读][下载 31K] [下载次数：14 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 金扩世;韩松;鲁会军;李洋;杨尧;李昌;李霄;田明尧;金宁一;
目的观察猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗的安全性及免疫保护力。方法分别用超剂量疫苗免疫妊娠母猪和3～4周龄断奶仔猪,以观察疫苗的安全性及对妊娠母猪产仔的影响;并用3批疫苗分别免疫3～4周龄断奶仔猪,检测血清中ELISA和中和抗体效价;免疫后28d,分别用PRRSV CC株和PCV2 NM株攻毒,观察临床反应,并进行病理组织学检查,计算疫苗保护率。结果超剂量疫苗免疫对妊娠母猪和断奶仔猪均安全,无任何不良临床反应。免疫断奶仔猪后7d可检测到血清抗体,PCV2及PRRSV攻毒后的保护率均不低于80%。结论 PCVD和PRRS二联灭活疫苗安全、有效,可用于PCVD和PRRS的预防。
2010年05期 v.23 489-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 136K] [下载次数：215 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 黄镇;陈玉秋;李薇;向左云;吴凯;陶佳明;范荣坤;何建东;方祖群;
目的用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸(CDAP)代替溴化氰(CNBr)活化5型肺炎链球菌荚膜多糖,制备5型肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒素(TT)结合疫苗。方法将5型肺炎链球菌荚膜多糖溶液加CDAP活化,经ADH和缩合剂EDAC与破伤风类毒素进行偶联,经凝胶过滤柱层析纯化,得到5型肺炎链球菌多糖-TT结合物,并对其生化指标、血清学特异性、安全性及免疫原性进行检测。结果多糖-TT结合物的游离多糖含量与多糖的衍化率成反比;血清学特异性良好;经动物实验证明其安全性合格;具有良好的免疫原性,且游离多糖含量越低,免疫原性越强。结论用CDAP活化工艺制备的5型肺炎链球菌荚膜多糖-TT结合物适宜制备疫苗。
2010年05期 v.23 493-495+499页 [查看摘要][在线阅读][下载 363K] [下载次数：930 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：0 ] - 陈敬;王建华;
目的纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)外膜蛋白P6,并检测其免疫原性。方法常规培养NTHi,根据外膜蛋白P6的特性纯化P6蛋白。Lowry法测定纯化P6蛋白的含量;SDS-PAGE检测纯化P6蛋白的相对分子质量及纯度;IEF-PAGE分析纯化P6蛋白的等电点;琼脂糖双向免疫扩散试验鉴定纯化P6蛋白;以纯化的P6蛋白免疫NIH小鼠,ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平,并进行小鼠保护性试验。结果纯化的P6蛋白含量为208μg/ml;相对分子质量为16600,纯度为100%;等电点为5.49;琼脂糖双向免疫扩散试验证实所提取的蛋白为P6蛋白;ELISA检测显示,P6蛋白具有良好的免疫原性,免疫小鼠后能够诱导产生针对P6蛋白的抗体,其抗体水平呈剂量依赖关系,最佳免疫剂量为10μg/只,最佳免疫针次为3针;对20LD50NTHiSSIp/1225株攻击的小鼠保护率为80%。结论已纯化了不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6,其具有良好的免疫原性和保护效果。
2010年05期 v.23 496-499页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K] [下载次数：198 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 宋英今;金宁一;李霄;田明摇;张立树;李昌;
目的优化重组HIV-1DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法优化质粒转化条件,制备工程菌Jm109/pVAX1-MEGp24种子液,连续传30代,检测其遗传稳定性;优化培养基成分、补料基质、补料方式和培养时间,确定最佳发酵参数;并应用最佳发酵参数,于50L发酵罐进行3批中试规模的发酵,考察在发酵培养过程中质粒的稳定性和超螺旋质粒的比例。结果工程菌在连续传代30次后,质粒拷贝数基本保持稳定;最佳发酵参数为:采用以甘油为碳源的培养基,以梯度恒速流加方式补料,培养时间13h;通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌67.0～68.6g/L,质粒含量可达1.62～1.73mg/g菌,超螺旋质粒的比例达93%以上。结论已建立了稳定的重组HIV-1DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。
2010年05期 v.23 500-502+506页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K] [下载次数：286 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈保立;葛鲁娜;王世立;张翠;韩金祥;
目的建立重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)工程菌的高密度发酵工艺。方法采用摇瓶及发酵罐培养工程菌BL21/pBV221-rhBMP-7,观察不同培养基、乙酸浓度、pH值、诱导时间等对工程菌菌体生长及目的蛋白表达的影响。在优化的发酵条件下培养工程菌,当菌体A600值达100时,42℃升温诱导,并对表达产物进行纯化。结果发酵培养基与LB培养基培养的工程菌目的蛋白的表达量无明显差异;乙酸可明显抑制菌体生长及目的蛋白表达;最适于菌体生长和目的蛋白表达的pH值分别为6.8和7.6;最佳诱导时间为3h。以优化的发酵条件培养的工程菌诱导3h后,目的蛋白的表达量可达菌体总蛋白的34.9%,最终菌体A600值可达139.5;经纯化的目的蛋白纯度可达95%以上。结论已初步建立了rhBMP-7工程菌的高密度发酵工艺。
2010年05期 v.23 503-506页 [查看摘要][在线阅读][下载 317K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 姚高琼;周远大;
目的观察重组人角质细胞生长因子(rhKGF)异构体(K102)对实验性肝纤维化的预防和治疗作用。方法取90只Wistar大鼠,随机分为K102大剂量组(2.0mg/kg),K102小剂量组(0.5mg/kg)和模型对照组,用50%CCl4与精制花生油按1:1(v/v)比例混合,灌服大鼠,每周2次,同时K102大、小剂量组皮下注射相应剂量的K102,模型对照组皮下注射等量溶媒,分别连续用药6周和8周。另取36只大鼠,随机分为3组,复制肝纤维化模型后,再给予相应药物6周,同时设正常大鼠对照组(12只)。实验结束后处死各组动物,并采集血液和肝脏组织,检测肝功、肝组织羟脯氨酸含量,并进行肝脏病理和胶原特殊染色观察。结果 K102能明显改善大鼠的肝功,降低肝组织羟脯氨酸含量,与模型对照组比较,差异有统计学意义。肝脏病理观察显示,K102治疗组较模型对照组病变轻微;胶原特殊染色显示,K102治疗组中仅见少量胶原纤维。结论 K102对实验性肝纤维化有一定的预防和治疗作用,为临床研究提供了依据。
2010年05期 v.23 507-509+513页 [查看摘要][在线阅读][下载 453K] [下载次数：77 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 申苏建;吴金明;金思思;黄智铭;吴建胜;
目的制备由抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体(mab)与蓖麻毒蛋白A链(RTA)偶联而成的免疫毒素(IT),并进行鉴定。方法以N-琥珀酰胺-3(-2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)为偶联剂,制备免疫毒素EGFRmab-RTA,SDS-PAGE分析其纯度及成分,DAB显色法检测其对人肝癌HepG2细胞的结合能力。结果 SDS-PAGE分析显示免疫毒素成功构建,偶联物中EGFRmab与RTA的偶联比为1:1.16,免疫毒素基本保留了EGFRmab对HepG2细胞的结合能力。结论利用SPDP可实现EGFRmab与RTA的成功偶联。
2010年05期 v.23 510-513页 [查看摘要][在线阅读][下载 363K] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 王龙刚;王宇凯;何成;楼觉人;杨忠东;
目的对高拷贝重组毕赤酵母表达X-HBsAg的诱导策略进行优化。方法在摇瓶中分别诱导1、4、8拷贝数的重组毕赤酵母,ELISA检测X-HBsAg的表达量;在15L发酵罐中对8拷贝的重组毕赤酵母进行诱导表达,分别考察甘油浓度对菌体比生长速率的影响、过渡阶段混合补料对菌体生长及细胞相对活性的影响、诱导阶段比生长速率对目的蛋白表达的影响以及诱导阶段混合补料对目的蛋白表达的影响。结果 8拷贝的重组毕赤酵母在摇瓶中诱导表达的X-HBsAg量明显高于1和4拷贝重组子。优化的发酵诱导策略为:初始补加甘油阶段控制甘油浓度在15g/L;过渡阶段采用甲醇与甘油混合补料,控制甘油浓度在限制性浓度以下;诱导阶段采用甲醇与甘油混合诱导X-HBsAg表达,诱导初始阶段控制比生长速率在0.015/h以上,中后期在0.002/h左右;发酵92h,X-HBsAg的表达量比单纯甲醇诱导提高约67%。结论混合补料诱导较单纯甲醇诱导策略更有利于高拷贝重组毕赤酵母表达X-HBsAg。
2010年05期 v.23 521-525页 [查看摘要][在线阅读][下载 415K] [下载次数：243 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 张标;易山;张光明;谢天宏;李鸿钧;孙茂盛;
目的探讨在悬浮Vero细胞中快速扩增轮状病毒(RV)的方法。方法 Vero细胞经消化后,直接接种KMG1b7株RV。采用微量滴定法、PAGE和RT-PCR等方法比较悬浮扩增、静置培养及微载体发酵培养RV的感染性滴度、基因组核酸带型和型特异VP7基因序列;采用电镜观察和Westernblot鉴定悬浮扩增RV的形态及结构蛋白的抗原性。结果悬浮细胞扩增的RV接种24h后病毒感染性滴度达峰值,为6.00lgCCID50/ml;而静置培养和微载体发酵培养分别在接种后(96±24)h和(48±6)h达峰值,分别为(6.00±0.25)lgCCID50/ml和(6.50±0.25)lgCCID50/ml。悬浮扩增的RV基因组呈典型的4-2-3-2G1血清型带型,G1型特异基因VP7序列未发生突变。悬浮扩增的RV形态和结构蛋白的抗原性未发生改变。结论在悬浮Vero细胞中扩增RV可以缩短病毒制备周期,提高病毒收获量,有利于RV疫苗的研制或生产。
2010年05期 v.23 526-528+532页 [查看摘要][在线阅读][下载 412K] [下载次数：405 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 向军俭;陈耀强;唐勇;徐霞玲;杨红宇;刘斌;刘小峰;
目的研制检测水样品中镉离子残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条。方法采用免疫竞争法,将抗Cd2+-EDTA单克隆抗体-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,并将人工合成的Cd-iEDTA-BSA检测抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面,作为检测线(T线),3～5min后,根据颜色直观显示检测结果。对试纸条进行灵敏度、特异性和稳定性验证,并检测添标水样。结果制备的试纸条对镉离子的最低检测限为100ng/ml;除了与Hg2+-EDTA有交叉反应外,与Fe3+、Pb2+、Cu2+等类似物无交叉反应;试纸条在常温下放置8周稳定性良好;检测添标水样的结果与ICP-AES的检测结果一致。结论胶体金免疫层析法操作便捷,稳定可靠,可作为水样中重金属镉离子残留现场检测和监控的有效手段。
2010年05期 v.23 529-532页 [查看摘要][在线阅读][下载 406K] [下载次数：638 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：32 ] |[阅读次数：0 ] - 司苏晋;刘田福;雷小春;薛亮亮;张引红;
目的优化高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件。方法采用不同生长状态、转化冰浴时间、热激时间及转化后复苏时间的大肠杆菌DM1制备感受态细胞,分析转化效率。结果 A600值为0.39和0.69的菌液制备感受态细胞,转化冰浴时间为30min,42℃热激处理90s,大肠杆菌DM1的转化效率最高;转化后复苏时间对细菌转化效率的影响不明显。结论已优化了高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件,可满足大部分在质粒中进行的常规克隆的需要。
2010年05期 v.23 533-535+538页 [查看摘要][在线阅读][下载 275K] [下载次数：602 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 尉小平;王坚;范乐俊;
目的应用高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量。方法参照《中国药典》三部(2005版)附录ⅢD,采用凝胶色谱柱,以紫外吸收检测器在280nm波长处检测,按照《中国药典》三部(2005版)附录ⅢB中的公式计算人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量。分析线性关系,计算加标回收率,并验证该方法的重复性。结果乙酰色氨酸含量在0.16～0.64mmol/L的范围内与峰面积有良好的线性关系,相关系数为0.99992;3个浓度梯度(0.16、0.32和0.48mmol/L)乙酰色氨酸的加标回收率分别为100.4%、103.9%和102.8%;连续5次检测人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量,变异系数为0.46%。结论应用高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量,结果准确可靠。
2010年05期 v.23 536-538页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K] [下载次数：274 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]