- 李涛;曾贵利;陈勇;余少红;王晓波;龚建平;
目的探讨小片段RNA干扰抑制乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因及其蛋白表达在裸鼠体内逆转人肝癌组织多药耐药(MDR)的可行性。方法建立裸鼠多药耐药肝细胞癌模型,随机分为A组和B组,A组(对照)注射生理盐水40μl+Lipo-fectamine200010μl,B组注射BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP40μl+Lipofectamine200010μl,两组均行瘤内注射1次。5d后,各组均经腹腔注射阿霉素5mg/kg化疗,每5d给药1次,共4次。彩色B超测量肿瘤体积;化疗结束后1周处死裸鼠,RT-PCR及Westernblot法检测各组裸鼠肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平。结果B组每次化疗后肿瘤体积均明显缩小;除第1次化疗外,其余各次化疗后肿瘤体积均小于A组;化疗结束后,B组与A组相比,肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平和BCRP蛋白的表达水平均明显降低。结论BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP可有效降低裸鼠肝癌组织BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平,在一定程度上逆转MDR,为从基因水平逆转MDR提供了初步的实验依据。
2009年12期 v.22 1161-1163+1168页 [查看摘要][在线阅读][下载 257K] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：814 ] - 马雷钧;杨月莲;周锋;杨菲茹;马相虎;
目的分析生产用流感病毒H3N2型疫苗株血凝素蛋白HA1基因变异对病毒特性的影响。方法比较2005～2008年间上海生物制品研究所流感病毒H3N2型各疫苗株的生产数据,并对H3N2型各疫苗株的HA1基因序列数据进行分析。结果各疫苗株中,A/NewYork/55/2004(NYMCX-157)的血凝素得率最高,A/Brisbane/10/2007(IVR-147)最低;2006～2007年度疫苗候选株A/Wisconsin/67/2005(NYMCX-161B)的病毒复制能力优于A/Hiroshima/52/2005(IVR-142);各疫苗株的氨基酸差异均未直接涉及到HA1蛋白二硫键组成位点,直接涉及到HA1蛋白抗原决定簇位点、HA1蛋白糖基化位点和HA蛋白受体结合位点的变异分别有3处(140、156和193位)、1处(165位)和1处(225位)。结论2005～2008年间各流感病毒疫苗株血凝素得率因株而异,HA1蛋白抗原决定簇位点变异属于正常的不同毒株间的差异;糖基化位点、二硫键组成位点和受体结合位点基本保守;还需进一步研究部分位点氨基酸变异是否与病毒复制能力密切相关,并探讨改善复制能力的可能性。
2009年12期 v.22 1164-1168页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K] [下载次数：93 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：834 ] - 马迪;姜宏宇;王轶楠;葛敬岩;柳忠辉;台桂香;
目的探讨激活素A(ActivinA)及其ⅡA型受体(ActRⅡA)在刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠急性肝损伤时的表达及其作用。方法尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤,测定血清转氨酶水平判断肝脏组织损伤程度,实时定量RT-PCR检测ActivinA及ActRⅡAmRNA转录水平;应用抗ActivinA和ActRⅡA抗体进行阻断试验,测定血清转氨酶水平,HE染色观察肝组织病理学变化。结果ConA诱导的急性肝损伤模型小鼠血清转氨酶水平明显升高,ActivinA及ActRⅡAmRNA转录水平也明显高于对照组;体内应用抗ActivinA和ActRⅡA抗体阻断ActivinA和ActRⅡA的作用,均可不同程度减轻肝损伤。结论ActivinA是介导ConA诱导小鼠急性肝损伤的重要致病因子,阻断ActivinA的表达或其作用途径,可能成为治疗肝损伤疾病的有效靶点。
2009年12期 v.22 1169-1171+1175页 [查看摘要][在线阅读][下载 531K] [下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：821 ] - 时成波;徐军;王堃;贾重来;徐冬冬;盛军;
目的构建高效表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的CHO工程细胞株。方法从pCIneo质粒出发,构建含有改造了稀有密码子的HBsAgS基因和启动子弱化的二氢叶酸还原酶(DHFR)转录单位的新型表达载体,利用脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经3轮氨甲喋呤(MTX)梯度加压筛选和单克隆筛选,获得高效表达HBsAg的CHO工程细胞株,并对HBsAg的分泌动态进行检测。结果所构建的新型表达载体pCI-DS经PCR及酶切鉴定,证明构建正确,转染CHO/dhfr-细胞后,经筛选得到高效表达HBsAg的CHO工程细胞株3F9,表达量达9.21μg/106个细胞·48h。单层细胞培养动态表明,3F9株细胞能在40d内稳定高效表达HBsAg。结论已成功构建稳定高效表达HBsAg的CHO工程细胞株,为提高HBsAg的产量创造了条件。
2009年12期 v.22 1172-1175页 [查看摘要][在线阅读][下载 299K] [下载次数：330 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：678 ] - 何侃;孙超;战卓;金英花;
目的克隆人Bid基因,原核表达并纯化目的蛋白。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增人Bid基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到588bp的DNA片段,重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid经双酶切鉴定和测序表明构建正确。表达的目的蛋白相对分子质量约48000,表达量约占菌体总蛋白的50%,纯化后纯度可达97%。结论已成功克隆并原核表达了人Bid基因,得到纯度较高的Bid蛋白,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。
2009年12期 v.22 1176-1178页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] [下载次数：88 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：720 ] - 莫琳;陈忠明;胡迎春;米粲;吴德昌;霍艳英;
目的研究Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其可能的机制。方法采用半定量RT-PCR法和克隆形成试验比较Pten+/+MEFs与Pten-/-MEFs两种细胞中同源重组修复相关基因Rad51mRNA转录水平的差异,并比较两种细胞对辐射敏感性的差异和辐射后Rad51基因mRNA转录水平的差异及其可能的机制。结果与Pten+/+MEFs细胞相比,Pten-/-MEFs细胞中Rad51基因mRNA的转录水平和对辐射的敏感性显著降低;辐射后以及PI3K/AKT信号通路抑制剂LY-294002作用后,Rad51基因mRNA的转录水平明显增高。结论Pten缺失后Rad51基因表达异常,Pten可能通过PI3K/AKT信号通路来调控Rad51基因的表达。
2009年12期 v.22 1179-1182+1186页 [查看摘要][在线阅读][下载 671K] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：715 ] - 李霞;张西臣;张国才;李建华;宫鹏涛;徐鹏;
目的构建旋毛虫感染诱导的小鼠乳腺癌MCF-7细胞基因表达变化的cDNA消减文库,探讨旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞基因表达的变化。方法复制MCF-7细胞小鼠模型,设对照组和旋毛虫感染组(实验组),采用抑制性消减杂交技术构建旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,并利用反向Northernblot技术对所获得基因的特异性表达进行验证。结果成功构建了旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,克隆的目的基因片段大小分布在200～500bp之间,20个阳性克隆的测序结果经BLAST比对,获得差异表达的已知功能基因8个和未知功能基因4个,这些基因在小鼠乳腺癌细胞中均有表达,而在肌肉组织中无表达。结论旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞差异表达基因上调,其中RB基因可能与乳腺癌细胞的生长抑制密切相关,为在基因水平研究旋毛虫抗肿瘤机理奠定了基础。
2009年12期 v.22 1183-1186页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：643 ] - 张立将;卢觅佳;由振强;杨红忠;周国亮;宋翼升;郭春娟;袁文佶;宣尧仙;王金福;
目的研究人脐血造血干/祖细胞(HS/PCs-HUCB)对裸鼠的致突变作用。方法取雄性BALB/c裸鼠,随机分为5组:HS/PCs-HUCB高、中、低剂量组及阴性、阳性对照组,HS/PCs-HUCB高、中、低剂量组分别经尾静脉注射1.25×109、3.75×108和1.25×108个细胞/kg,阴性对照组经尾静脉注射含1%人血白蛋白的0.9%NaCl注射液,50ml/kg,阳性对照组经腹腔注射环磷酰胺,50mg/kg,每d给药1次。微核试验连续给药2d,末次给药24h后取骨髓细胞涂片,Giemsa染色,每组裸鼠计数12000个骨髓嗜多染红细胞(PCE)中微核细胞数;精子畸形试验连续给药5d,首次给药后第35天取附睾,精子滴片,伊红染色,每组裸鼠计数1500个精子的形态。结果HS/PCs-HUCB各剂量组裸鼠的微核率和精子畸形率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义,各组间精子畸形类型构成比差异无统计学意义,畸形精子以无定形为主,其次为无钩、双头、双尾、双体、胖头等;而阳性对照组的微核率和精子畸形率均显著高于阴性对照组。结论HS/PCs-HUCB对裸鼠无致突变作用。
2009年12期 v.22 1187-1189页 [查看摘要][在线阅读][下载 456K] [下载次数：44 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：671 ] - 孙珉丹;耿兴花;陈志;罗萍;
目的探讨中国长春地区汉族人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)C-1562T基因多态性与IgA肾病易感性的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分别检测长春地区汉族88例IgA肾病患者和133例健康对照者的MMP-9C-1562T基因多态性,比较两组的基因型和等位基因的频率,分析其与IgA肾病易感性的相关性。结果IgA肾病患者MMP-9C-1562T基因型频率分布为:CC型65例(0.739),CT型23例(0.261),TT型无;健康人的频率分别为:CC型77例(0.579),CT型53例(0.398),TT型3例(0.023),两组基因频率分布差异具有统计学意义。IgA肾病患者和健康人等位基因C频率分别为0.869和0.778,等位基因T频率分别为0.131和0.222,两组等位基因的分布频率差异也具有统计学意义。结论中国长春地区汉族人MMP-9C-1562T基因多态性可能与IgA肾病的易感性有关,C等位基因可能是其易感基因。
2009年12期 v.22 1190-1192页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K] [下载次数：83 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：814 ]
- 范行良;李长贵;王大燕;方捍华;李凤翔;白东亭;王军志;
目的研制甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品。方法收集甲型H1N1流感病毒及其他病毒培养物,用实时荧光PCR方法逐一进行验证。参考品通过协同标定,确定最低检出限范围,7家单位进行适用性检测。反复冻融观察其稳定性。结果所用的3株病毒经实时荧光PCR验证,特异性良好,经基因芯片进一步验证,均为甲型H1N1流感病毒,且无其他病毒核酸污染,经7家单位检测,符合国家参考品标准要求;反复冻融3次后,稳定性良好。结论建立了第1套甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品及相应的质量标准,并已被国家有关部门批准正式使用。
2009年12期 v.22 1193-1195页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K] [下载次数：341 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：712 ] - 刘少祥;彭维;刘盛涛;刘晓华;吴玉权;余可;易维维;周卫;
目的观察乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗(SA14-14-2)病毒原液及成品疫苗的稳定性。方法取3批乙脑减毒活疫苗病毒原液,分别于20～25、2～8、-18～-22及-38～-42℃储存,间隔一定时间取样,检测病毒滴度;将2～8、-18～-22及-38～-42℃储存的在观察末期符合规定的病毒原液制备成品疫苗,观察其于2～8℃储存的稳定性。结果3批疫苗病毒原液在20～25℃储存16h、2～8℃储存12d、-18～22℃冻存3个月及-38～-42℃冻存6个月,病毒滴度均符合《中国药典》三部(2005版)的要求;由2～8℃储存12d、-18～-22℃冻存3个月、-38～-42℃冻存6个月的病毒原液所制备的成品疫苗2～8℃储存24个月,病毒滴度下降缓慢,且热稳定性良好,符合《中国药典》三部(2005版)的要求。结论乙脑减毒活疫苗病毒原液的稳定性随温度的变化而变化,温度越低,稳定性越好;所制备的相应成品疫苗,在观察期内稳定性良好。
2009年12期 v.22 1196-1198页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K] [下载次数：213 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：836 ] - 傅泳航;杨向阳;李茹冰;夏书奇;王翠玲;王增松;谢飞群;段祥;曾振飞;张宜俊;
目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)联合重组鼠白介素-12(rmIL-12)对免疫小鼠诱导细胞免疫应答的影响。方法以不同给药方式、不同剂量的HBsAg联合rmIL-12免疫C57BL/6J小鼠,ELISA法检测小鼠血清及脾淋巴细胞中IFNγ及IL-4的水平。结果HBsAg+rmIL-12高剂量组免疫的C57BL/6J小鼠,其脾淋巴细胞IFNγ水平明显高于BALB/c小鼠;3种不同给药方式均可诱导C57BL/6J小鼠血清和脾细胞IFNγ水平明显升高,三者之间差异无统计学意义;HBsAg+rmIL-12高、中、低剂量组免疫C57BL/6J小鼠血清可诱导IFNγ水平明显升高,且呈剂量依赖性,脾细胞IFNγ水平在中、低剂量组均未产生效应,高剂量组明显升高,而对IL-4无明显影响。结论rmIL-12可显著增强HBsAg诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型,对于发展治疗性乙肝疫苗具有潜在的应用价值。
2009年12期 v.22 1199-1202页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [下载次数：133 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：810 ] - 安静;白慕群;翟雷;寇桂英;张晋瑾;周旭;
目的探讨原核表达HPV16L1蛋白的变性、纯化及复性条件,并对复性效果进行评价。方法将重组质粒pET28a-L1转化E.coliBL21(DE3),经放大培养诱导表达后,收集菌体,超声破碎后提取包涵体,并对其进行洗涤、变性,离子交换层析纯化,然后稀释复性。经电镜观察、红细胞凝集试验以及免疫原性分析,对复性效果进行评价。结果L1蛋白在8mol/L尿素中溶解不完全,SDS、硫脲和高pH值可提高其溶解度;纯化后的L1蛋白纯度可达90%;电镜可观察到VLP,并能凝集小鼠红细胞。免疫家兔后,可产生高滴度的抗体。结论复性的HPV16L1蛋白在体外可自我折叠形成具有正确空间构象的VLP,且具有较好的免疫原性,为进一步研制HPV16预防性疫苗及诊断试剂盒奠定了基础。
2009年12期 v.22 1203-1205+1209页 [查看摘要][在线阅读][下载 483K] [下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：774 ]
- 崔文禹;徐静;李树香;刘敬;王欣怡;赵玉秀;陈蕾;沈心亮;
目的制备肠道病毒71型(EV71)单克隆抗体,并进行初步鉴定。方法将RD细胞和Vero细胞培养的EV71原液通过氯化铯超速离心纯化,分别作为免疫抗原和检测抗原,制备单克隆抗体。通过Westernblot分析、间接免疫荧光试验和ELISA法鉴定单抗的特异性。采用间接ELISA法测定单抗的酶标效价,微量细胞培养中和试验测定单抗的中和效价。结果获得1株可稳定分泌抗EV71单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单抗可与EV71特异性结合,酶标效价为1∶204800,中和效价为1∶28。结论已成功筛选出1株分泌抗EV71的单抗细胞株,为建立EV71疫苗抗原含量测定方法奠定了基础。
2009年12期 v.22 1210-1212页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K] [下载次数：308 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：799 ] - 潘勇兵;田生和;李国喜;全家妩;
目的制备抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞外段(sTRAIL)的单克隆抗体。方法用重组sTRAIL免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,捕获ELISA筛选阳性克隆,制备腹水抗体。间接ELISA测定单抗效价,并进行单抗亚类、特异性鉴定及杂交瘤细胞染色体和单抗识别位点分析。将杂交瘤细胞体外连续培养3个月及冻存6个月后,检测细胞培养上清的效价。结果3株杂交瘤细胞分泌的单抗均为IgG1型,腹水单抗效价均高于10-6,杂交瘤细胞染色体数介于94～98条之间,均识别sTRAIL分子上线性表位。细胞体外连续培养3个月及冻存6个月后的上清效价保持稳定。结论已成功制备了3株可稳定分泌抗sTRAIL单克隆抗体的杂交瘤细胞,为TRAIL的定性定量检测及组织表达分析奠定了基础。
2009年12期 v.22 1213-1215页 [查看摘要][在线阅读][下载 683K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：685 ] - 张月兰;马可;赵玉秀;张晋梁;宏阳;马乐;牛志彬;赵硕;王辉;
目的观察Vero细胞HCP试剂盒的稳定性。方法将Vero细胞HCP试剂盒分别于2～8℃和37℃放置不同时间,检测试剂盒的灵敏度、特异性、准确性及精密性。结果试剂盒在2～8℃放置10个月的特异性及灵敏度均较好;检测参考品的回收率在91.7%～114.8%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。37℃放置7d,试剂盒的灵敏度仍可达12.5ng/ml;放置10d,检测参考品的回收率在85%～115%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。结论Vero细胞HCP试剂盒于2～8℃放置10个月及37℃放置7d的稳定性较好,仍可正常使用。
2009年12期 v.22 1216-1218页 [查看摘要][在线阅读][下载 125K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：676 ] - 陈伟;李娟;陈味味;李雪頔;刘群英;
目的评价刀额新对虾主要变应原36kD和68kD蛋白在临床检测虾过敏症特异性IgE方面的应用。方法以纯化的刀额新对虾主要变应原36kD和68kD蛋白为抗原包被酶标反应板,采用间接ELISA法检测1301份人血清样品中的特异性IgE,对其中血清特异性IgE阳性者进行虾类食物过敏反应的回顾性调查。结果1301份血清中,特异性IgE阳性的有127份,阳性率为9.76%(127/1301)。回顾性调查表明,特异性IgE阳性个体均有虾类食物过敏史,与血清学检测结果相一致。结论刀额新对虾主要变应原36kD和68kD蛋白针对血清特异性IgE的检测具有较高的特异性和敏感性,适用于研制临床检测虾过敏症的ELISA试剂。
2009年12期 v.22 1219-1220页 [查看摘要][在线阅读][下载 111K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：766 ]
- 杨云凯;韩凝;李军;孙成金;刘君;张振龙;陈彪;董小曼;
目的观察重组人干扰素β1b(rhIFNβ1b)治疗复发缓解型多发性硬化症(RRMS)的安全性及临床疗效。方法选择20名健康志愿者,分为1.5、3、6和9MIU4个剂量组,每天按剂量皮下注射1次rhIFNβ1b,连续注射8d,观察药物的安全性、耐受性和药代动力学。选择101例RRMS患者,随机分为观察组(52例)和对照组(49例),每周3次分别注射6MIU的rhIFNβ1b和25mg人血白蛋白,用药1年后,2组均注射6MIU的rhIFNβ1b,每周3次,用药1年。定期随访并进行各项指标及核磁共振成像(MRI)检查,观察药物的临床疗效,同时进一步观察安全性。结果安全性观察显示,rhIFNβ1b在9MIU剂量范围内耐受性良好。观察组和对照组分别注射rhIFNβ1b后,可显著减少RRMS患者头部与脊髓中病灶数量或缩小病灶体积,并显著降低复发率,且随着用药时间的延长,效果更加明显。结论rhIFNβ1b安全性和耐受性良好,临床影象学评价疗效显著。
2009年12期 v.22 1221-1224页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K] [下载次数：221 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：975 ] - 石翠英;田亚娟;乔芳;刘敬闪;何路军;
目的分析1例新生儿血小板减少性紫癜(NAIT)血清中免疫抗体的特异性。方法采用固相凝集法检测患儿及其母亲血清中是否存在抗父亲/抗丈夫血小板抗体,用PAK12试剂盒鉴定血清中的抗体是抗-HLA还是抗-HPA,用ELISA法(PRA)鉴定HLA抗体的特异性,用SSOP法进行父亲、母亲和患儿HLA-Ⅰ类基因分型,用PCR-SSP法进行父亲、母亲和患儿HPA抗原1-5系统基因分型。结果该例NAIT患儿血清中存在来自母体的HLA-Ⅰ类抗体和HPA抗体;HLA-Ⅰ类抗体为抗-Bw6;父亲和患儿的HLA-B位点的宽特异性均为Bw4,Bw6,母亲为Bw4;患儿HPA抗原1-5系统基因型与父亲相同,有3a,母亲没有3a。结论在对NAIT患儿进行实验室诊断时,除注意HPA抗体的作用外,也应重视HLA-Ⅰ类抗体的作用。
2009年12期 v.22 1225-1227页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K] [下载次数：115 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：751 ] - 陈海平;杨倩;罗林云;李丽;王亚龙;崔玉华;周仲良;赵军;过琴媛;
目的观察麻疹长-47株纯化毒种制备的麻疹减毒活疫苗在8～10月龄人群中的接种反应及免疫原性。方法选择无麻疹疫苗免疫史及接种禁忌证的8～10月龄健康婴儿298人为观察对象,采用非随机分组,并按2∶1设置分为观察组和对照组。观察疫苗接种后的局部和全身反应及血清抗体水平。结果两种疫苗接种后均未出现局部反应,全身反应以发热反应为主。观察组出现发热反应34例(16.50%),对照组18例(19.57%),二者差异无统计学意义。观察组和对照组接种后血清麻疹血凝抑制抗体阳转率均为100%,抗体GMT分别为19.25和20.49,二者差异无统计学意义。结论麻疹减毒活疫苗(纯化毒种)对8～10月龄健康婴儿具有良好的安全性和免疫原性。
2009年12期 v.22 1228-1229+1235页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K] [下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：654 ]
- 龙润乡;谢忠平;杨蓉;李华;白惠株;董承红;刘龙丁;李琦涵;
目的建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并进行验证及初步应用。方法以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素-亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。采用该方法检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量。结果所建立的BA-ELISA法在EV71蛋白含量625～156.25ng/ml之间线性关系最佳,R2达0.9976,灵敏度为78.125～156.25ng;与包括CoxA16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约103～104CCID50的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒。结论用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考。
2009年12期 v.22 1230-1232页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K] [下载次数：565 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：28 ] |[阅读次数：690 ] - 王树毅;朱亭玉;齐璇;纪云;李贺;王明莹;周根喜;李津;
目的优化重组酿酒酵母工程菌发酵培养基的配方,提高其表达HBsAg的水平。方法采用正交试验法对培养基配方进行优化,并对最佳培养基配方进行验证。结果最佳培养基配方为:在每50ml基础培养基中添加50%的甘油0.9ml和50%的蔗糖0.4ml,维持pH值为5.0。与基础培养基相比,以此培养基培养的工程菌表达HBsAg的水平平均可提高26%。结论在发酵过程中适当补充甘油和蔗糖,可以提高重组酿酒酵母工程菌表达HBsAg的水平。
2009年12期 v.22 1233-1235页 [查看摘要][在线阅读][下载 172K] [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：810 ] - 宣姚吉;周祥山;张元兴;
目的建立实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的方法。方法采用双标准曲线法,分别利用含有GAP基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,建立标准曲线。将含有外源GFP基因的毕赤酵母基因组进行实时荧光定量PCR,通过标准曲线计算出外源GFP基因在毕赤酵母基因组中的拷贝数。结果毕赤酵母GAP基因Ct值与起始拷贝数对数的回归方程为:y=-3.612x+39.28,GFP基因Ct值与起始拷贝数对数的回归方程为:y=-3.544x+37.99,GAP基因和GFP基因的反应效率分别为0.89和0.90,两条标准曲线的相关系数均为0.999,且均有良好的重复性。检测10个转入GFP基因的毕赤酵母菌株,筛选到9个单拷贝整合GFP基因的菌株和1个多拷贝整合GFP基因的菌株。结论已建立了检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的实时荧光定量PCR法,该方法能够筛选出不同外源基因拷贝数的毕赤酵母菌株。
2009年12期 v.22 1236-1239+1243页 [查看摘要][在线阅读][下载 1021K] [下载次数：1451 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：707 ] - 方舸;钱刚;连亚光;杨燕珠;李金屏;
目的应用毛细管气相色谱法同时检测吸附百白破疫苗及相关生物制品中三氯甲烷和甲苯的残留量。方法采用HP-5色谱柱,设置进样口温度为200℃,检测器温度为250℃,柱温为40℃,进样体积为1μl,分流比为10∶1。优化色谱载气(氮气)流速进行定位,确定最低检出限和定量限,并进行线性、重复性、准确性(加样回收)试验及样品测定。结果最佳色谱载气(氮气)流速为1ml/min;在确定的色谱条件下,三氯甲烷和甲苯的分离效果良好,最低检出限分别为0.50和0.38μg/ml,最低定量限分别为2.10和1.12μg/ml;重复性好;线性关系良好,相关系数均不低于0.9995;平均回收率分别为102.9%和100.8%。检测的6批制品的三氯甲烷和甲苯的残留量均符合规定。结论气相色谱法可同时检测吸附百白破疫苗等生物制品中三氯甲烷和甲苯的残留量。
2009年12期 v.22 1240-1243页 [查看摘要][在线阅读][下载 255K] [下载次数：229 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：699 ] - 赵伟栋;韩文瑜;冮森林;雷连成;王大力;孙长江;李铁峰;杜涛峰;张俊敏;
目的建立牛布氏杆菌特异性抗体间接ELISA检测方法,并进行初步应用。方法用大肠杆菌表达的牛布氏杆菌重组BP26蛋白作为检测抗原,用棋盘滴定法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立间接ELISA方法,并进行验证。采用建立的间接ELISA方法与传统的试管凝集试验同时检测116份血清样品,评价二者的符合率。结果间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被量5μg/孔;待检血清稀释倍数1∶200,作用时间60min;酶标二抗作用时间60min;封闭液为5%BSA,作用时间45min。S/P值≥0.363者判为阳性,S/P值≤0.291者判为阴性,介于两者之间判为可疑。该方法精密性良好,特异性较强,敏感性较高,与传统的试管凝集试验检测结果的符合率为93.3%。结论已成功建立了检测牛布氏杆菌特异性抗体的间接ELISA方法,为布氏杆菌病的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。
2009年12期 v.22 1244-1246+1250页 [查看摘要][在线阅读][下载 421K] [下载次数：385 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] |[阅读次数：752 ] - 伍伟健;苏凯;魏波;
目的推导出一种符合实际工作的Rh血型基因及其单倍型频率估计方法。方法基于目前普遍使用5种血清鉴定Rh血型的实际情况,根据Hardy-Weinberg定律,得出每种表现型频率和相应遗传型频率之间的关系,从而推导出计算Rh血型基因及其单倍型频率的公式;应用本文方法及另一种方法进行实例计算,并比较结果。结果计算结果显示,两种方法算出的P值均大于0.05,显示观察值与期望值差异无统计学意义,Hardy-Weinberg吻合度良好,但用本文方法算出的P值较大。结论本文方法符合目前检测Rh血型的实际情况,且估计其基因及单倍型频率的效率较高,是一种效果良好的改进型Rh血型单倍型频率估计方法。
2009年12期 v.22 1247-1250页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K] [下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：648 ]