- 张雪;张爱华;闭兰;赵亚杰;孙可芳;方志正;
目的在小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中表达抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体。方法真核表达质粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH经酶切和序列测定后,采用电穿孔转染技术将二者共转染SP2/0细胞,经组胺醇和霉酚酸联合筛选阳性克隆,通过ELISA、流式细胞术、RT-PCR和DNA测序的方法进行初步鉴定。结果真核表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建正确。获得2株分泌抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体的阳性SP2/0细胞克隆0925CASP2/0和1107CASP2/0,嵌合抗体表达量为0.5～2ng/ml。结论已成功地在SP2/0细胞中表达了抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体,为该抗体在其他真核细胞中的高效表达及临床应用奠定了基础。
2009年10期 v.22 945-948+952页 [查看摘要][在线阅读][下载 329K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 雷明军;买制刚;陈少娟;黄德兴;林枫;李凌云;
目的构建HCV核心(C)抗原N-端1～130aa片段的生物素化表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达。方法PCR扩增HCV C抗原N-端1～130aa片段的编码基因,拼接上生物素-蛋白连接酶底物肽序列(BSP),构建重组原核表达质粒pGEX4T-1-CN130BSP,转化大肠杆菌Rosetta,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE后,电转至硝酸纤维素膜上,以抗HCVC抗原的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素对表达产物进行分析。结果PCR扩增出约466bp的目的基因片段;质粒pGEX4T-1-CN130BSP经PCR及双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定基因无突变;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为42000,22℃诱导16h可溶性表达产物含量较高;表达的重组蛋白可被抗HCV C抗原的单克隆抗体所识别,并能特异性结合辣根过氧化物酶标记的亲和素。结论已成功构建了HCV C抗原N-端1～130aa片段生物素化表达质粒,并表达出带生物素标签的GST融合蛋白,为进一步研制HCV双抗原夹心检测试剂奠定了基础。
2009年10期 v.22 949-952页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K] [下载次数：201 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 胡琦;杨永长;刘华;喻华;肖代雯;黄波;黄文芳;
目的比较结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌分泌蛋白的指纹图谱,分析分泌蛋白表达的差异,为分枝杆菌的快速鉴别奠定基础。方法选取结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌标准菌株,培养后灭活,提取分泌蛋白,用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测菌株分泌蛋白的表达,Biomaker Wizard Software分析软件筛选差异蛋白。重复测定20次分枝杆菌分泌蛋白,评价SELDI-TOF-MS检测分枝杆菌分泌蛋白相对分子质量的重复性。结果AU芯片能捕获近30个分枝杆菌分泌蛋白峰,4个蛋白峰为分枝杆菌共有。与非结核分枝杆菌分泌蛋白指纹图谱比较,有1个蛋白峰为结核分枝杆菌所特有。SELDI-TOF-MS重复检测20次分枝杆菌分泌蛋白显示,同一蛋白峰的相对分子质量变异系数≤0.05%。结论结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌差异蛋白的发现,可能有助于分枝杆菌的鉴别。
2009年10期 v.22 953-956页 [查看摘要][在线阅读][下载 242K] [下载次数：302 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 高刚;鲁艳芹;韩金祥;赵丽;
目的研究双启动子对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的影响及双启动子的启动效率。方法分别将H1、U2、U3和U6启动子克隆至pEGFP-N1载体中的MCS位点处,构建CMV与以上各个启动子的双启动子表达载体。将重组载体转染293T细胞,荧光显微镜观察,流式细胞术检测转染效率及EGFP基因的表达效率(以荧光指数表示)。结果双启动子重组表达载体经PCR和酶切证明构建正确。流式细胞术检测表明,pEGFP-N1载体与分别插入H1、U2、U3和U6启动子的双启动子重组表达载体的转染效率分别为26.57%±1.54%、28.57%±0.99%、16.14%±1.69%、22.63%±1.77%和17.89%±1.84%;EGFP基因的表达效率分别为142.79±31.26、103.59±25.90、19.67±0.52、58.16±14.58和15.40±1.92。结论CMV与H1启动子联合驱动EGFP的表达效果与CMV单独驱动相近,而CMV分别与U2、U3和U6启动子联合驱动EGFP的表达效果显著低于CMV单独驱动。
2009年10期 v.22 957-960+967页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K] [下载次数：473 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 王新国;刘杞;孙航;梁珊;谢松丽;张宏华;
目的探讨人肝再生增强因子(hALR)对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响及其机制。方法梯度离心分离PBMC,将细胞分为正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)(5mg/L)组和ConA(5mg/L)+hALR(30mg/L)组,分别培养10min、30min、1h、2h、4h后,MTT法检测各组各时间点细胞增殖水平,钙荧光指示剂法检测细胞内游离Ca2+浓度的变化,Western blot法检测细胞内胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化程度。结果4h内,各组细胞的增殖水平差异无统计学意义,但ConA组细胞增殖水平已表现出逐渐升高的趋势。正常对照组细胞内Ca2+浓度在加入Fluo-3/AM后2h达高峰,ConA组1h达高峰,ConA+hALR组10min达高峰。正常对照组细胞内磷酸化的ERK随培养时间的延长而逐渐减少;ConA组细胞内磷酸化的ERK在30min达高峰,之后逐渐降低;ConA+hALR组细胞内磷酸化的ERK在2h前明显低于ConA组。结论hALR可能通过影响细胞内Ca2+浓度的变化峰值和磷酸化的ERK,来抑制人PBMC的免疫功能,从而影响其增殖。
2009年10期 v.22 961-963页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 姜燕;吕昌龙;
目的建立稳定表达Ag85A蛋白的K562真核细胞系,为进一步开展以阳离子脂质体为转运载体的口服疫苗的免疫原性研究奠定基础。方法将已构建的重组质粒pCDNA3.1+/Ag85A包裹阳离子脂质体LipofectamineTM 2000后,转染真核细胞K562,SDS-PAGE和Western blot分析重组Ag85A蛋白的表达。用G418筛选稳定表达Ag85A蛋白的细胞株,流式细胞术和间接免疫荧光技术检测Ag85A蛋白的表达及定位。结果重组质粒pCDNA3.1+/Ag85A转染K562细胞时,与脂质体的最适比例为2μg:2μl;转染细胞表达的Ag85A蛋白相对分子质量约为32000,且具有良好的反应原性。稳定转染3个月后,重组质粒转染的细胞有42.37%的细胞显示FITC标记,且细胞胞浆中及细胞膜上均有Ag85A蛋白的表达。结论已获得稳定表达Ag85A蛋白的K562细胞系,可用于Ag85A蛋白的大量制备及抗体方面的研究。
2009年10期 v.22 964-967页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：74 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 王学理;任林柱;李晓艳;王兴龙;
目的分析新城疫病毒TL1株F、HN蛋白基因共表达对细胞融合的影响。方法在6孔细胞培养板上将4种重组表达质粒以pCI-M+pCI-NP+pCI-F和pCI-M+pCI-NP+pCI-F+pCI-HN两种组合分别共转染BHK-21细胞,转染后48h,光镜观察细胞融合现象。在25cm2细胞培养瓶中,将4种重组表达质粒以上述两种组合分别共转染BHK-21细胞,转染后48h,收集细胞上清,离心后,电镜观察有无病毒样颗粒。结果以pCI-M+pCI-NP+pCI-F+pCI-HN组合共转染BHK-21细胞,可以观察到明显的细胞融合现象,而以pCI-M+pCI-NP+pCI-F组合共转染的BHK-21细胞则未出现细胞融合现象。两种组合共转染均形成了新城疫病毒样颗粒,包含HN蛋白基因的4种重组质粒组合共转染形成的病毒样粒子更接近于真实的新城疫病毒粒子。结论HN蛋白基因具有促进细胞融合的功能,新城疫病毒样颗粒的成功表达为新城疫病毒致病机理和新型疫苗的研究奠定了基础。
2009年10期 v.22 968-970页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 朱文赫;王涵;孙妙囡;孙德军;
目的原核表达并纯化蜂毒明肽。方法人工合成蜂毒明肽基因,与肠激酶识别序列基因串联,插入原核表达载体pGEX-2T中,构建蜂毒明肽与谷胱甘肽硫转移酶的融合表达载体pGEX-APAM。将重组质粒转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并进行纯化和肠激酶切割。结果经Western blot鉴定,表达产物具有良好的反应原性。在优化的表达条件下,融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的25.8%,且大部分以可溶性形式存在。纯化的融合蛋白纯度大于95%,每毫克融合蛋白经肠激酶切割后,可得蜂毒明肽58.5μg,回收率为81.9%。结论已成功地原核表达并纯化了蜂毒明肽。
2009年10期 v.22 971-974页 [查看摘要][在线阅读][下载 212K] [下载次数：158 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 陈卫;王玉平;庞春艳;王毅君;
目的构建Survivin-siRNA真核表达载体,并探讨其对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法化学合成4条能转录出siRNA的模板DNA,各75个碱基,退火形成2条双链DNA,双酶切后插入pSUPER.basic载体。将阳性重组质粒转染SGC-7901细胞,进行细胞计数,并用MTT法检测细胞的增殖活性;半定量RT-PCR检测细胞Survivin基因mRNA的转录水平;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果PCR和酶切鉴定表明Survivin-siRNA真核表达载体构建正确,其能下调SGC-7901细胞Survivin基因mRNA的转录水平,抑制SGC-7901细胞生长和增殖,并促进细胞凋亡,使G0/G1和亚G1期细胞增多,S期细胞减少。结论已成功构建了Survivin-siRNA真核表达载体,其能下调SGC-7901细胞中Survivin基因mRNA的转录水平,使细胞增殖减弱,凋亡增加,为RNA干扰技术应用于胃癌的基因治疗提供了一定的实验依据。
2009年10期 v.22 975-978+982页 [查看摘要][在线阅读][下载 247K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 杨艳明;王志成;王铁君;
目的观察HRE/Egr-1调控的shTRAIL基因对肺腺癌A549细胞的辐射增敏效应。方法将前期构建的含有HRE/Egr-1双敏感启动子介导的shTRAIL基因的质粒pcDNA3.1-HRE/Egr1-shTRAIL经脂质体介导,转染肺腺癌A549细胞,将转染细胞分为3组:乏氧组、照射组和乏氧+照射组,分别进行相应处理,并设正常细胞作为对照。RT-PCR检测各组细胞shTRAIL基因mRNA的转录水平;双抗体夹心ABC-ELISA检测各组细胞上清中shTRAIL的含量;平板克隆实验检测各组细胞的放射敏感性。结果乏氧组、照射组和乏氧+照射组A549细胞shTRAIL基因mRNA的转录水平及细胞上清中shTRAIL蛋白的含量均较正常对照组明显增加,其中,乏氧+照射组最高。常氧条件下,转染质粒pcDNA3.1-HRE/Egr1-shTRAIL的A549细胞和正常对照组细胞的D0值分别为1.89和3.26;而在乏氧条件下,两组的D0值分别为1.13和5.81,表明乏氧条件下质粒转染组A549细胞的放射敏感性最高。结论HRE/Egr-1调控的shTRAIL基因在乏氧和辐射条件下,能够诱导A549细胞中shTRAIL基因mRNA转录和蛋白表达水平增加,并增加细胞的放射敏感性。
2009年10期 v.22 979-982页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K] [下载次数：82 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王辉;李洪岩;康劲松;张雷;姜海荣;郑花;于春艳;
目的观察氯沙坦对肾衰大鼠肾组织肾素-血管紧张素系统(RAS)血管紧张素1型受体(AT1)、血管紧张素2型受体(AT2)、血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张素原(AGT)基因表达的影响,探讨RAS在慢性肾衰发生发展过程中的作用。方法复制阿霉素(ADR)慢性肾衰大鼠动物模型,随机分为模型(ADR)组和血管紧张素受体拮抗剂(ARB)氯沙坦(ADR+ARB)组,氯沙坦组给予氯沙坦灌胃,另设正常大鼠对照组。取各组大鼠肾组织,经HE染色进行形态学观察,半定量RT-PCR法检测AT1、AT2、ACE及AGT基因mRNA的转录水平。结果与对照组相比,ADR组大鼠肾小球和肾小管出现明显的病变,而ADR+ARB组病变明显减轻。与对照组相比,ADR组AT1﹑AGT和ACE基因表达上调,AT2基因表达下调;与ADR组相比,ADR+ARB组AT1和AGT基因表达下调;ADR+ARB组的AT2基因表达水平接近对照组,ACE基因表达下调,但仍高于对照组水平。结论慢性肾损伤的发生发展可能与AT1、AGT及ACE基因表达水平增高有关。
2009年10期 v.22 983-985页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 艾国;单成启;程远国;
目的分析影响Exendin-4二级结构稳定性的各种因素,并制备Exendin-4微球。方法利用远紫外圆二色光谱(Circular dichroism,CD)技术,分析pH值、温度、高速搅拌、油水界面对Exendin-4二级结构的影响及冰浴和蛋白质保护剂对其二级结构的保护作用。在此基础上,选用乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为成球材料,采用复乳法(W/O/W)制备Exendin-4微球,并对其理化性质进行评价。结果优化了实现Exendin-4二级结构稳定性的药剂学方法。制备的Exendin-4微球流动性良好,球形圆整,平均粒径为(25.3±3.2)μm,结构保持完好,微球的载药量约为1.0%,包封率为72.3%±2.4%,微球的释药曲线符合Higuchi释放模型,未发生明显的突释,具有良好的缓释效果。结论采取适当的药剂学方法,可以保证Exendin-4结构的稳定性并制备出理化性质合格的微球。
2009年10期 v.22 993-997页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K] [下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 陈宇萍;张国民;乔媛媛;王琰;
目的从大容量噬菌体抗体库筛选人源性抗角蛋白抗体,并构建双体抗体(Diabody)。方法以固相化的角蛋白对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选,经3～4轮筛选后,挑取克隆,ELISA法鉴定其特异性,并对部分抗角蛋白阳性抗体克隆基因进行DNA序列分析。选取活性好的克隆基因进行改造,构建Diabody表达载体。结果在抗体库的筛选过程中可见明显的富集现象,获得了29株可与角蛋白特异性结合的人源单链抗体,选取4个克隆基因进行序列分析,结果表明,4个克隆的轻链基因均属于λ轻链第1亚群,1号和8号克隆的重链基因属于人IgG第2亚群,6号和29号克隆分别属于第1和第3亚群。从表达抗角蛋白抗体的集落中挑选一个进行基因改造,构建的Diabody表达载体所表达的Diabody活性较高。结论利用噬菌体抗体技术获得了人源性抗角蛋白抗体,并改造成应用前景较好的Diabody,为开发银屑病治疗性抗体奠定了基础。
2009年10期 v.22 998-1001页 [查看摘要][在线阅读][下载 231K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 杨洪存;曲悦;冯秀萍;
目的制备重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)凝胶剂。方法以卡波姆940、甘油、1,2丙二醇为基质,加入复方保护剂(肝素钠、人血白蛋白、甘露醇和HP-β-CD),制成bFGF凝胶剂,观察25和4℃保存的稳定性,并进行家兔局部刺激试验、急性毒性试验、促烧伤创面愈合试验。结果bFGF凝胶剂在25℃保存18个月、4℃保存24个月,效价维持在原效价的80%以上;局部用药未见皮肤刺激反应和急性毒性反应;促家兔烧伤创面愈合的效果明显优于水溶液剂。结论制备的bFGF凝胶剂安全有效,具有缓释作用,稳定性良好,具有广阔的临床应用前景。
2009年10期 v.22 1002-1004页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K] [下载次数：344 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 向瑜;杨致邦;陈瀑;苏善平;郭丽媛;石海波;周汛;
目的探讨人群中白细胞介素-1B(IL-1B)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因多态性与胃溃疡、胃癌易感性的相关性。方法选取幽门螺杆菌阳性的39例胃溃疡患者、35例胃癌患者和70名健康对照者,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308和TNF-A-857基因多态性。结果疾病组与对照组中IL-1B-511各基因型频率的分布差异无统计学意义。与对照组比较,胃溃疡组TNF-A-308各基因型的频率分布、TNF-A-857各基因型的频率分布以及胃癌组TNF-A-308各基因型的频率分布差异均有统计学意义。经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生胃溃疡的危险性为OR=21.62(95%CI:2.07～226.13);与携带TNF-A-857C/C者比较,携带TNF-A-857T/T者发生胃溃疡的危险性为OR=5.37(95%CI:1.28～22.50);与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生胃癌的危险性为OR=16.41(95%CI:1.62～116.55)。结论TNF-α基因多态性与胃溃疡、胃癌的易感性相关。
2009年10期 v.22 1010-1014页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K] [下载次数：451 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 章国平;钱宝峰;孟胜利;周剑军;郑新雄;吴杰;徐葛林;
<正>2008年11月16～17日,浙江省淳安县一9月龄狼狗对潘店、鸠岭山两个自然村共7人进行了主动攻击,其中5人有较为明显的伤口暴露:Ⅲ度暴露2人,Ⅱ度暴露3人。该犬被杀死后,由淳安县疾病控制中心送武汉生物制品研究所检测,通过直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法,初步确认狂犬病病毒阳性,同时取犬脑组织,提取病毒RNA,进行RT-PCR检测,并经1日龄昆明乳鼠分离病毒,均确认为狂犬病病毒阳性。
2009年10期 v.22 1014页 [查看摘要][在线阅读][下载 46K] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 伍平;钱晓华;王树巧;凌利民;刘敏玲;徐巍;
目的了解上海市虹口区15岁以上人群麻疹抗体水平和麻疹发病情况,为制定成人麻疹免疫策略提供依据。方法定量ELISA法检测本区及外来15岁以上人群的麻疹抗体水平,与微量细胞中和法检测结果进行比较,并对1998～2007年本区和外来16岁以上人群麻疹发病资料进行分析。结果本区和外来15岁以上人群麻疹抗体平均阳性率分别为96.83%和98.21%,麻疹抗体GMT平均水平分别为1217.86和1553.73IU/ml,本区各年龄组抗体GMT水平15～19岁组最低,40岁以上组最高;外来各年龄组间抗体GMT水平差异无统计学意义,15～19岁组和30～39岁组麻疹抗体水平显著高于本区人群;ELISA法与微量细胞中和法检测结果呈正相关,回归方程有统计学意义,15岁以上人群中仅有83.5%达到麻疹抗体保护性水平;近10年来,本区与外来16岁以上人群中麻疹发病比例有逐年增高的趋势,本区发病比例显著高于外来人群。结论为消除麻疹,有必要制定成人麻疹免疫策略,其中本区成人麻疹防制策略较外来成人更为紧迫。
2009年10期 v.22 1015-1018页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K] [下载次数：72 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 王承宇;王化磊;李群;冯娜;李吉平;范泉水;黄耕;夏咸柱;
目的建立马抗H5N1亚型禽流感病毒免疫血清的精制工艺。方法以硫酸铵盐析法提取免疫马血浆中的IgG抗体,以8～256μg/mgIgG胃蛋白酶(活性单位1:3000)进行消化,以阳离子交换层析柱纯化F(ab’)2抗体,并参照《中国药典》三部(2005版)要求,对试制的样品进行检定。结果经一步50%硫酸铵和多步33%硫酸铵盐析,获得了较为纯净的IgG抗体。8μg胃蛋白酶用量可完全消化1mgIgG抗体分子,阳离子交换方法分离F(ab’)2抗体纯度可达90%以上,高于常规工艺制备的抗体纯度。以此工艺试制的样品,各项质量指标均符合《中国药典》三部(2005版)质量标准。结论已初步建立了马抗H5N1亚型禽流感病毒免疫血清的精制工艺。
2009年10期 v.22 1019-1022页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K] [下载次数：142 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 郝春生;赵敏;张晨;何薇薇;王潇潇;杨永娟;张中洋;沈心亮;李秀玲;
目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较。结果采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测,96h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1～2mm和0.5～1mm。连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%。空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为r=0.972,P=0.006。结论已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法。
2009年10期 v.22 1023-1025页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K] [下载次数：502 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 杨子义;张晴妮;
目的以破骨细胞为模型,建立抑制破骨细胞功能药物的生物活性定量测定方法。方法将小鼠RAW264.7和SP2/0细胞在含地塞米松和1,25(OH)2VitD3的破骨细胞诱导分化液中混合培养,通过TRAP染色鉴定破骨细胞的成熟。加入不同浓度的rhOPG-Fc,检测其对RAW264.7细胞增殖、分化和成熟破骨细胞活性的抑制作用,计算药物的IC50,并定量计算活性单位。结果rhOPG-Fc对RAW264.7细胞增殖抑制的IC50为0.02mg/L,其生物活性为50U/mg;对RAW264.7细胞分化抑制的IC50为0.02mg/L,其生物活性为50U/mg;对成熟破骨细胞活性抑制的IC50为0.18mg/L,其生物活性为5.5U/mg。结论以破骨细胞抑制因子为候选药物所建立的细胞学模型,可方便快速地定量测定破骨细胞抑制类药物的生物活性,且能协助判断药物的作用机理。
2009年10期 v.22 1026-1028+1035页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 李新国;袁军;张洋;孙晓芳;项美娟;杨晓明;
目的探讨Lowry法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗蛋白含量干扰现象的排除方法。方法分别应用《中国药典》三部(2005版)中Lowry法与第5版《欧洲药典》2.5.16法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液的蛋白含量,并以碳二亚胺(EDAC)为干扰性物质,验证两方法排除干扰的能力。结果同一批结合疫苗原液用两种方法测定的结果不一致,应用《中国药典》方法测定的结果明显高于第5版《欧洲药典》的方法。在多糖的活化衍生及多糖蛋白结合过程中加入EDAC、己二酰二肼(ADH)等,可干扰测定结果,使结果偏高。结论应用Lowry法测定多糖蛋白结合疫苗中蛋白含量时,应排除干扰性物质的影响。
2009年10期 v.22 1029-1031页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K] [下载次数：449 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ]