- 徐望舒;翟东旭;赵鑫;赵恺;王丹丹;王广友;孙博;王菁华;李呼伦;
目的探讨大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞在氧糖剥夺(OGD)的条件下,晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达及其对PC12细胞损伤的影响。方法PC12细胞随机分为3组:OGD培养组(PC12细胞在无血清无糖的DMEM培养液中厌氧培养);封闭RAGE的OGD培养组(PC12细胞在加5μg/mlRAGE抗体的无血清无糖DMEM培养液中厌氧培养);对照组(PC12细胞在无血清无糖DMEM培养液中培养)。免疫组化法检测RAGE表达。收集细胞上清液,检测乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)含量,并对细胞死亡率进行检测。结果在OGD条件下PC12细胞培养8、11、20h均有RAGE表达,与对照组相比表达均明显增加,OGD培养组与封闭RAGEOGD培养组相比,LDH活性差异显著。随着厌氧时间的延长,PC12细胞死亡率明显增高,封闭RAGEOGD培养组与OGD培养组相比,PC12细胞死亡率明显降低。NO含量差异无显著意义,但与对照组相比差异显著。结论在OGD条件下,PC12细胞RAGE表达增高。RAGE的表达对细胞的损伤起促进作用。
2007年11期 793-797页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K] [下载次数：186 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：735 ] - 于丽华;李慎涛;岳丽琴;王爱华;王冠;王咏红;杨永弘;沈叙庄;
目的制备B族链球菌(GBS)表面免疫原性蛋白(Sip),研究其免疫原性及抗体保护功能,为GBS蛋白疫苗研究奠定基础。方法采用基因重组技术构建表达载体,并表达GP-Sip融合蛋白。用pET-Sip融合蛋白免疫小鼠,并免疫家兔制备多克隆抗体。Western blot检测GP-Sip蛋白特异性,ELISA检测家兔及小鼠血清中特异性抗体水平,调理吞噬试验检测Sip抗血清的功能。结果表达载体经酶切和测序证明构建正确,GP-Sip蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,纯化后纯度可达90%以上。Western blot显示GP-Sip蛋白可与pET-Sip蛋白的免疫血清发生免疫反应。ELISA显示Sip可诱发小鼠产生高水平的IgG抗体。Sip抗血清具有明显地促进吞噬细胞对GBS的吞噬作用。结论已成功构建GP-Sip表达载体,并高效表达了Sip。该蛋白具有良好的免疫原性,其抗体具有良好保护功能,可作为GBS蛋白疫苗成分或荚膜多糖疫苗载体成分。
2007年11期 798-801页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K] [下载次数：242 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：676 ] - 朱美财;占志;王雅静;蔡庆;
目的构建刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体(rserETI)原核表达载体,制备表达产物,用于tPA的纯化。方法设计合成rserETI编码序列DNA片段,以PCR法扩增出全长编码区序列,经酶切后克隆至pET9a表达载体,转化大肠杆菌JM109DE3,以IPTG诱导表达。表达产物经变性、复性、QFF层析纯化后,测定其活性,并与溴化氰活化的Sepharose偶联合成亲和层析柱,纯化rtPA。结果rserETI的表达量约占大肠杆菌菌体总蛋白的30%,复性率为80%,经QFF层析纯化后,蛋白浓度为1.58mg/ml,SDS-PAGE检测显示无杂蛋白污染,纯度大于95%,对rtPA突变体的抑制比活性为4×104IU/mg。偶联合成的rserETI-Sepharose亲和层析柱能特异性地纯化rtPA,rtPA突变体纯度达96%,比活性为5.07×105IU/mg。结论已成功构建了rserETI原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,制备的表达产物可用于rtPA的纯化。
2007年11期 802-806页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：861 ] - 吴雪伶;张春涛;刘春雨;聂建辉;种辉辉;王佑春;
目的在原核系统表达人颗粒酶B(GrB)酶原型及活性型基因,并分析表达产物的抗原性。方法从人外周血淋巴细胞中抽提RNA,用RT-PCR方法扩增人颗粒酶B序列,将其克隆至pGEX-5x-1表达质粒,与GST进行融合表达,用SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行分析。结果所克隆的GrB序列与已报道的从人体分离出的GrB完全一致。酶原型和活性型GrB与GST的融合蛋白以包涵体的形式表达,其大小与预期结果一致,并能与GrB特异性抗体发生结合反应。结论已成功构建了GrB原核表达系统,酶原型及活性型GrB均具有抗原性。
2007年11期 807-810页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K] [下载次数：77 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：804 ] - 雷连成;韩文瑜;王丽哲;吕爽;李树清;孙长江;
目的探讨猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间交叉免疫保护的关系。方法以1型和5型APP参考菌株为实验对象,分别测定半数致死量(LD50),制备灭活细菌抗原和活菌抗原,免疫昆明小鼠,检测ELISA抗体水平及交叉免疫反应,并分别以10LD501型和5型APP菌进行攻击,观察小鼠保护力。结果1型和5型APP菌对小鼠的半数致死量分别为8.0×105.3和5.1×103.83CFU/LD50,死菌抗原和活菌抗原免疫小鼠均可产生高滴度抗体,且1型与5型间存在较强的交叉免疫反应。死菌抗原和活菌抗原免疫小鼠均能对本型APP菌攻击产生保护,保护率在80%以上。1型活菌免疫小鼠对5型菌攻击保护率为70%,5型活菌免疫小鼠对1型菌攻击保护率为90%,1型、5型死菌免疫小鼠对5型、1型菌交叉攻击均无保护作用。结论1型、5型APP活菌和死菌免疫小鼠均可对本型菌攻击产生保护,两型间存在较强的交叉免疫反应,但只有活菌免疫可以产生较好的交叉免疫保护,死菌免疫不能产生交叉免疫保护。
2007年11期 811-813页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K] [下载次数：212 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：707 ] - 吴东明;黄蓓;谭阳;谭振;
目的制备14-3-3 zeta蛋白C-端多肽多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法用生物信息学分析14-3-3 zeta蛋白的同源性、亲水性和抗原性,设计并合成zeta蛋白C-端特异性的氨基酸序列,将其与牛血清白蛋白铰链;分别转化14-3-3的7个亚型质粒于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并分离纯化His-zeta融合蛋白;分别以zeta C-端多肽及zeta融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体;用Western blot分析zeta蛋白C-端多肽抗体亚型特异性,并用该特异性抗体检测zeta蛋白在COS-7细胞中的分布规律。结果在14-3-3的7个亚型蛋白存在的条件下,zeta蛋白C-端多肽抗体仅识别zeta亚型蛋白,而zeta融合蛋白抗体可以识别gamma、zeta、tau3种亚型;14-3-3zeta蛋白主要分布在COS-7细胞质一侧。结论已获得了亚型特异性的14-3-3zeta多克隆抗体,该抗体可用于14-3-3zeta免疫细胞化学等分析。
2007年11期 814-817页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：679 ] - 汪春义;戚凤春;陈桂玲;申镇维;王宣军;谢英林;盛军;
目的建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系。方法将已构建成的植物表达载体pBI121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验。结果表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同。Westernblot检测显示,在相对分子质量约17000处有特异蛋白反应带。ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31μIU/ml。小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显。结论人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达。
2007年11期 818-820页 [查看摘要][在线阅读][下载 87K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：686 ] - 邓扬;刘殿峰;王坤;张锐;
目的研究禽流感病毒NS1A蛋白对人肺癌细胞SPC-A1增殖的影响。方法将含有NS1A基因的重组质粒pVAX1-NS1A经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,用MTT检测其对细胞增殖的抑制作用;Annexin VFITC-PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;对转染细胞的表达产物进行Western blot分析。结果NS1A蛋白能抑制人肺癌细胞SPC-A1增殖且呈时间依赖性。随着作用时间延长,重组质粒转染组细胞凋亡率可达38.17%,细胞周期中G0/G1比例升高,G1期阻滞。Western blot分析显示,重组质粒转染组细胞在相对分子质量约30000处可见特异性反应条带,与NS1A蛋白产物大小相符。结论禽流感病毒NS1A蛋白能够抑制SPC-A1细胞增殖,并诱导SPC-A1细胞凋亡。
2007年11期 821-824页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K] [下载次数：80 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：688 ] - 罗萍;许钟镐;王静;李才;
目的探讨早期糖尿病肾病(DN)转化生长因子-β1(TGF-β1)与尿白蛋白的相关性。方法RT-PCR方法测定高糖刺激的系膜细胞内及2型糖尿病小鼠肾小球内TGF-β1mRNA的转录水平;ELISA方法检测DN患者尿TGF-β1和尿白蛋白排泄率(UAER)的变化。结果高糖刺激的系膜细胞内与肥胖db/db小鼠肾小球内TGF-β1mRNA转录水平与对照组比较均明显增高。糖尿病各组患者尿TGF-β1含量均显著高于正常对照组,且UAER增加呈递增趋势,两者呈正相关。结论TGF-β1与早期DN的发生与发展密切相关,是反映早期糖尿病肾损害的重要因子。
2007年11期 825-828页 [查看摘要][在线阅读][下载 85K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：630 ]
- 邱丰;李映波;丁士磊;罗振武;宋霞;杨卉娟;张新文;陈俊英;姜述德;廖国阳;
目的比较不同浓度Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)3针免疫大鼠的中和抗体效价,为确定Sabin IPV的最佳免疫方案提供参考。方法用不同浓度的Sabin IPV对52只Wistar大鼠进行3针免疫,每针间隔1个月,每次免疫后30d采血并分离血清,采用微量中和试验测定血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型的中和抗体效价。结果大鼠经3针Sabin IPV免疫后,其Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度均显著上升,2针免疫后抗体阳转率已经达到100%,且原倍疫苗与稀释疫苗免疫大鼠后,产生的中和抗体水平差异有显著意义。结论Sabin IPV在大鼠中有良好的免疫效果,经3针免疫可产生高水平的中和抗体。
2007年11期 829-830+840页 [查看摘要][在线阅读][下载 52K] [下载次数：222 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：867 ] - 李淑云;付琨;黄浩;徐程林;付永琪;
目的应用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗。方法细胞与病毒同时接种,选择病毒增殖的适宜条件,收获病毒液,加入稳定剂,制备成冻干鸡胚细胞黄热疫苗,并进行鉴别试验、病毒滴定和疫苗保护力试验。结果病毒增殖的最适MOI为0.00046PFU/cell;最适培养温度为37℃;第2天洗换,第4天收获更合适;最适病毒感染细胞数为6.80×105～7.00×105个/ml。病毒感染鸡胚细胞后,滴度可达6.15～6.97LgPFU/ml。疫苗主要指标均达到《中国生物制品规程》(2000版)和WHO对疫苗的要求。免疫小鼠45d后,用卵黄囊疫苗4×103PFU脑内攻击,小鼠全部存活。结论在适宜的条件下,用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗,能达到WHO疫苗人用标准。鸡胚细胞有取代鸡胚卵黄囊制备黄热疫苗的可能。
2007年11期 831-833+836页 [查看摘要][在线阅读][下载 70K] [下载次数：181 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：668 ] - 姚伟;李玉;张岩锐;张英;董继刚;任魁;任雅平;
目的观察不含硫柳汞重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的免疫原性及其稳定性。方法配制12批不含硫柳汞的重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞),观察其免疫原性及在4、22和37℃保存不同时间的稳定性。结果该疫苗各项检测指标均符合《中国药典》三部(2005版)要求,实验组与对照组的效价测定结果差异无显著意义。10μg/ml疫苗22℃放置6个月和4℃放置12个月效力均未下降;20μg/ml疫苗在37℃放置4周后,效力略有下降。结论为婴幼儿提供了一种更加安全有效的重组乙型肝炎疫苗。
2007年11期 834-836页 [查看摘要][在线阅读][下载 34K] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：905 ]
- 李宏;黄剑峰;周彬;安琦;曹谊林;
目的通过对组织工程生物反应器中相关参数的测量,了解培养液的物理化学特性,为控制组织工程产品培养提供理论依据。方法从反应器中吸取第1、2和3天的培养液,采用旋转黏度计进行黏度及相关参数测量,并分别用葡萄糖分析试剂盒、尿素氮测定试剂盒和乳酸脱氢酶分析试剂盒测定葡萄糖、乳酸和氨的含量。结果当转速达到稳定时,应力、扭矩、剪切速率和角速度的值基本稳定,不同天数的黏度测量值基本保持在0.8～1.0之间;从葡萄糖、乳酸和氨的代谢可知,葡萄糖在逐渐消耗,乳酸和氨的含量在逐渐增加。结论不同天数的培养液黏度与牛顿流体的特性非常相似,黏度的变化将引起剪应力的改变。根据葡萄糖的代谢情况,生物反应器中培养的细胞材料复合物的最佳换液时间为2d。
2007年11期 844-846页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：640 ] - 李津;洪云;张国强;王昌华;许毅;张德有;冯素英;汪和睦;赵铠;
目的制备用于检测重组酵母表达的adr亚型HBsAg含量的实验参考品。方法重组酵母表达的adr亚型HBsAg溶液经纯化后,经3家实验室联合标定蛋白含量,准确稀释并加入保护剂,使抗原最终含量为10μg/ml,分装安瓿后,冷冻干燥熔封,制备成adr亚型实验参考品。再由不同实验室用不同试剂和不同方法,以联合标定的蛋白含量为定量标准,分别验证冻干参考品中adr亚型HBsAg含量及37℃放置不同时间的稳定性。并以adw亚型HBsAg标准作为定量标准,检测adr亚型参考品中HBsAg含量。结果所制备的adr亚型冻干参考品分装准确均匀;以联合标定蛋白含量为标准,不同实验室分别以珠式EIA法和RIA法所测的adr亚型冻干参考品HBsAg含量与目标含量相近,各支参考品间差异小;adr亚型冻干实验参考品37℃放置2～10周后质量稳定。以adw亚型HBsAg参考品为定量标准,所测定adr亚型冻干参考品HBsAg含量,比实际含量约高出0.6倍。结论冻干adr亚型HBsAg实验参考品可用于重组酵母表达adr亚型HBsAg的定量检测。不同亚型HBsAg检测需用各自亚型的参考品作为定量标准。
2007年11期 847-850页 [查看摘要][在线阅读][下载 44K] [下载次数：130 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：710 ] - 杨喆;刘红岩;马波;郭仁;代云波;李昌军;侯峰;谢飞;
目的考察不同甲醇流加策略对汉逊酵母(Hansenula polymorpha)高密度发酵表达重组乙型肝炎表面抗原的影响。方法在细胞生长阶段采用DO/pH在线测量的控制方法,使酵母细胞密度达到一个较高水平,诱导期比较DO-Stat/pH-Stat法和离线检测甲醇两种控制流加甲醇的方法,同时也比较用甘油和甲醇双碳源间断流加法与单纯流加甲醇法对目的蛋白表达的影响。结果诱导期用DO-Stat和pH-Stat法不能有效地提高乙肝表面抗原表达量,而离线检测甲醇的控制方法,在诱导阶段可将甲醇浓度控制在0~5g/L的范围,乙肝表面抗原表达量比DO-Stat/pH-Stat法提高了20%。甲醇氧化酶(MOX)酶活性的变化与乙肝表面抗原表达量变化存在对应关系,交替加入甘油和甲醇双碳源刺激,可以使乙肝表面抗原表达量达到395mg/L。结论已筛选出优化工艺配置,并建立了切实可行的规模化生产工艺。
2007年11期 851-854页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K] [下载次数：413 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：715 ] - 董小曼;田博;董翊;赵素华;陈秀珍;范淑兰;吕洋;
目的对滴定痘苗病毒的噬斑血吸附法进行优化,克服该方法稳定性差、结果数据偏差大的问题。方法通过预试验确定痘苗病毒的最佳稀释倍数、病毒吸附温度及鸡血球加入方法等参数。采用优化的噬斑血吸附法,对天坛株痘苗病毒的原始种子批、主种子批、工作种子批和参考苗进行滴定,计算变异系数(CV),确定试验内、试验间和不同实验人员间的精密度。利用Qstat软件分析本次与以往滴定结果之间的关系。结果病毒的最佳稀释度为10-6,最佳吸附温度为25～30℃,加入鸡血球的最佳方法为病毒吸附72h后,弃去部分培养液,再加入鸡血球。4种样品测定结果的试验内、试验间和不同实验人员间的变异系数均小于5%,病毒滴度分别为(7.12±0.18)LgPFU/ml、(7.79±0.21)LgPFU/ml、(7.88±0.17)LgPFU/ml和(7.64±0.14)LgPFU/ml,均高于以往滴定结果。本次与以往滴定结果之间存在线性相关性。结论优化了滴定痘苗病毒滴度的噬斑血吸附法,确定了天坛株痘苗病毒的原始种子批、主种子批、工作种子批和参考苗的滴度,为天花疫苗多项检定试验提供了可靠依据。
2007年11期 855-857页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K] [下载次数：169 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：596 ] - 杨青;买制刚;易俊波;
目的研究用化学发光免疫分析法(CLIA)检测人血清孕酮(PROG)。方法采用竞争抑制法,用高亲和力的多克隆抗体包被,碱性磷酸酶标记孕酮,金刚烷增敏化学发光体系作为酶底物来检测PROG。并考察试剂的灵敏度、精密性、准确性、特异性和测定范围。将试剂盒置4℃存放14个月,检测质控血清的PROG含量,考察试剂的稳定性。并与进口试剂进行比较。结果CLIA法检测PROG灵敏度达0.1ng/ml;特异度99.5%;测定范围在0.1～200ng/ml之间;用PROG浓度分别为高、中、低的质控血清测定精密性,批内和批间变异系数均小于10%,回收率在91.7%～108.4%之间;与雌二醇、雌三醇和雌酮的交叉反应率低于0.1%,与睾酮和可的松无交叉反应;试剂在4℃存放14个月,质控血清的测定值均在规定范围内;与进口全自动化学发光试剂BeckmanAccessTM相比有较好的相关性。二者测定结果的符合率为99.2%。结论化学发光法灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有很好的准确性和精密性,是现有放射免疫法的理想替代方法。
2007年11期 858-860+862页 [查看摘要][在线阅读][下载 64K] [下载次数：449 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：660 ] - 袁连根;李延成;张志勇;
目的改进冰冻红细胞解冻条件,提高红细胞回收率。方法对原解冻红细胞去甘油工艺进行改进,并在冰冻红细胞解冻过程中观察解冻温度对回收率的影响。结果改进后的去甘油工艺的红细胞回收率为(82.81±1.99)%,较改进前(80.90±0.57)%明显提高,且差异有显著意义。解冻后复温的红细胞回收率为(82.94±0.51)%,较不复温的红细胞回收率(78.82±0.96)%明显提高,且差异有显著意义。结论改进后的去甘油工艺和解冻红细胞复温均可提高红细胞的回收率。
2007年11期 861-862页 [查看摘要][在线阅读][下载 16K] [下载次数：53 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：611 ]