- 张红军;马迪;陈芳芳;柳忠辉;台桂香;
目的研究激活素受体相互作用蛋白2(ARIP2)在小鼠肝细胞中的表达及调控。方法采用半定量PCR技术检测ARIP2 mRNA在Hepal-6细胞中转录水平的动力学变化规律及其调控因素。结果Activin A刺激Hepal-6细胞ARIP2 mRNA的转录水平呈时间依赖性升高,刺激早期(4h)无明显变化,12h后显著升高。信号传导激动剂PMA和LPS刺激He- pal-6细胞24h,均可上调ARIP2 mRNA的转录水平,而A23187则抑制其转录。ARIP2过表达明显抑制Hepal-6细胞ActRIIA mRNA的转录水平,对ActRIIB则无影响。结论ARIP2作为激活素信号传导抑制蛋白,其表达受多种因素影响。ARIP2可能通过影响ActRIIA表达,参与激活素作用后期的信号传导负反馈调节过程。
2007年10期 713-716页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 闫志勇;王斌;宋旭霞;李荣贵;钱冬萌;丁守怡;
目的对从双齿围沙蚕消化道内分离的菌株Y5进行纤维蛋白溶解活性检测及系统分类鉴定。方法用纤维蛋白平板法检测Y5的纤维蛋白溶解活性,并从形态、生理、生化、DNA(G+C)含量、脂肪酸成分、16S rRNA基因序列及系统发生分析等方面进行分类鉴定。结果菌株Y5为革兰阴性杆菌;DNA(G+C)含量为47.5%;主要脂肪酸成分为C_(18:1)ω7c,C_(16:1)ω7c,C_(16:0),C_(10:0)3-OH;16S rRNA基因序列与9种已确定的海单胞菌一致性为93%～97%;在系统发生树中与其他海单胞菌位于同一类群中;该菌株在纤维蛋白平板上显示出明显的纤维蛋白溶解活性。结论菌株Y5属于海单胞菌属。该菌株具有纤维蛋白溶解活性,有望为开发溶栓药物提供又一重要资源。
2007年10期 717-720+732页 [查看摘要][在线阅读][下载 318K] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 潘风光;郑梅竹;周玉;卢士英;罗翔丹;艾永兴;
目的研究鸡马立克病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT) mRNA转录水平的影响,并探讨meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建重组载体pcDNA-meq,转染CEF细胞,利用Taq- Man探针,经实时荧光定量RT-PCR检测meq基因对CEF细胞chTERT mRNA转录水平的影响,并用TRAP法测定端粒酶活性。结果meq基因能激活CEF细胞中chTERT mRNA的转录,在48h的转录水平是72h的16倍,端粒酶活性在转染后48h是转染后72h的12倍。结论meq基因可能是MDV基因组中的主要致瘤基因,可以在体外导入正常的CEF细胞中,激活端粒酶的活性。
2007年10期 721-724页 [查看摘要][在线阅读][下载 470K] [下载次数：102 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘建巨;王建文;宋娅莉;
目的利用毕赤酵母表达系统表达人血管抑制因子Vasostatin(120～180aa),经纯化后,观察其抑制血管内皮细胞增殖的活性。方法采用PCR技术扩增出人血管抑制因子Vasostatin(120～180aa)的全长cDNA序列,将其克隆至真核表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母KM71,以甲醇诱导表达,并进行Western blot检测及金属螯合层析纯化。采用MTT法检测纯化的血管抑制因子对血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-Vasostatin(120～180aa)经菌落PCR、酶切和测序鉴定,证明构建正确。经Western blot检测可见一条特异条带,纯化后的蛋白纯度达88.76%,浓度为300μg/ml,在体外可抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖。结论人血管抑制因子Vasostatin(120～180aa)可在毕赤酵母中以分泌形式表达,并具有抑制血管内皮细胞增殖的活性。
2007年10期 725-728+740页 [查看摘要][在线阅读][下载 623K] [下载次数：90 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张淑子;张海红;于湘晖;孔维;李维;
目的观察人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的体液及细胞免疫应答。方法将含有33个黏蛋白1重复区序列(33m)的重组质粒pVR1012-33m,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并加强免疫2次,每次100μg,间隔2周,分别以空载体pVR1012和生理盐水为对照。末次免疫后取小鼠血清及脾淋巴细胞,Western blot检测血清抗体特异性,LDH法检测CTL反应活性,MTS/PMS法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果重组质粒免疫组小鼠血清中检出了MUC1 VNTR抗原特异性抗体。用重组质粒pVR1012-33m免疫BALB/c小鼠后,在效靶比为100:1和33:1时,可显著地诱导特异性CTL应答。在MUC1 VNTR抗原肽的刺激下,免疫小鼠脾淋巴细胞得到增殖,与空载体和生理盐水对照组相比,差异均有显著意义。结论DNA疫苗pVR1012-33m在BALB/c小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为预防、治疗性MUC1 VNTR疫苗的研制提供了一定的实验依据。
2007年10期 729-732页 [查看摘要][在线阅读][下载 323K] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 任翔;胡凝珠;胡云章;瞿素;兰芸;
目的用咪喹莫特作为透皮佐剂,研究HBV亚单位抗原、HAV灭活疫苗与抗原以及HBsAg DNA疫苗的透皮免疫效果。方法聚氧乙烯十二烷基醚硫酸钠和苯基哌嗪混合之后,溶于等体积PBS缓冲液和无水乙醇混合液中,制成透皮剂。将其分别与HBV亚单位抗原、HBsAg DNA疫苗和HAV灭活抗原及疫苗混合后,涂抹于小鼠脱毛的背部皮肤表面,同时涂抹咪喹莫特佐剂,分别在2、4、6、8、12、20周用ELISA法检测血清中的抗体水平。结果在透皮免疫2周时,即可在加咪喹莫特佐剂的HBV亚单位抗原组和HBsAg DNA疫苗组中检测到血清抗体,8周时抗体滴度达到最高水平;无佐剂的2组在4周才检测到抗体,但加佐剂的HAV灭活抗原透皮免疫无明显佐剂作用。结论咪喹莫特对HBV亚单位抗原和HBsAg DNA疫苗透皮免疫具有明显的佐剂作用。
2007年10期 733-735页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K] [下载次数：187 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ]
- 张萍;王欣茹;张新庄;侯亚莉;杜琳;谢贵林;
目的探讨1型、14型肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中糖链长度和免疫原性的相关性,以解决多糖结合物难以纯化的问题。方法肺炎球菌荚膜多糖经过乙酸水解成为寡糖,与原糖采用相同的方法与破伤风类毒素结合,免疫小鼠后检测抗体水平,并与原糖结合物进行比较。结果小鼠体内均能产生较高的抗体水平,且具有免疫加强效应,寡糖结合物与原糖结合物的免疫原性差异无显著意义。结论1型、14型肺炎球菌的荚膜多糖经酸水解降解,不影响结合物的免疫原性。
2007年10期 736-740页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K] [下载次数：312 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 袁彦宝;郭岩;代长海;李宇辉;张莹;李光谱;胡晓明;于洪涛;
目的研究白介素-2佐剂狂犬病疫苗的免疫学效果。方法将人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗原液与基因工程白介素-2按一定比例混合,制成白介素-2佐剂狂犬病疫苗,另将疫苗原液加氢氧化铝,制成铝佐剂狂犬病疫苗。将白介素-2佐剂疫苗、氢氧化铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗分别于0、7d经腹腔免疫昆明小鼠,0.5ml/只,并在免疫前和免疫后4、6、10、17、2、31、45和59d,眶静脉采血,用快速免疫荧光灶抑制试验检测小鼠血清中和抗体。同时于0、7d经腹腔免疫BALB/c小鼠,0.5ml/只,第15天取脾检测淋巴细胞转化率。结果白介素-2佐剂疫苗与氢氧化铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗淋巴细胞转化率差异均有显著意义。与铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗相比,白介素-2佐剂疫苗诱导产生中和抗体的时间早,抗体滴度高。结论白介素-2佐剂狂犬病疫苗具有良好的免疫学效果。
2007年10期 741-743页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K] [下载次数：259 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 全文琦;宋霞;陈巍;熊秋霞;段维国;崔萍芳;李文忠;谢忠平;
目的评价口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃保存的稳定性。方法将-20℃保存1～7年的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型单价疫苗半成品各随机抽取5～11个批次,采用微量细胞病变滴定法进行病毒滴度测定,分析样品的病毒滴度变化。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价疫苗半成品保存5年,滴度仍达到《中国药典》三部(2005版)的要求;保存6和7年,Ⅰ型半成品滴度仍符合上述要求,Ⅱ型半成品滴度合格率均为80%,Ⅲ型半成品合格率分别为60%和20%。结论口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃下保存具有良好的稳定性,与Ⅰ型、Ⅱ型相比,Ⅲ型稳定性相对较差。
2007年10期 744-745页 [查看摘要][在线阅读][下载 103K] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 夏天瑶;程晓耕;白春杰;崔岩;丰沧玉;杨琳;
目的制备缓释胸腺肽口服片剂,并探讨其生物学活性及对小鼠免疫功能的影响。方法采用常规方法制备缓释胸腺肽片剂。以E-玫瑰花环试验及淋巴细胞转化试验,评价其生物学活性;免疫小鼠,以乳酸脱氢酶释放法检测小鼠NK细胞活性;巨噬细胞吞噬功能试验检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率;流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果所制备的缓释胸腺肽口服片剂,各项质量检测指标均达到《中国药典》三部(2005版)要求,其释药过程无突释和释药峰。缓释片剂组的E-玫瑰花结形成率及淋巴细胞转化率明显高于空白基质片组,且差异有显著意义;NK细胞活性、巨噬细胞吞噬率及CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+比值与空白基质片组相比,差异均有显著意义。结论缓释胸腺肽口服片剂具有良好的生物学活性,并对小鼠免疫调节功能有明显的增强作用。
2007年10期 746-749页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K] [下载次数：190 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 孙可芳;肖建;闭兰;端义坤;赵亚杰;张涛;张爱华;
目的对荧光素标记的CD3、CD4和CD8单克隆抗体进行质量控制。方法采用多参数的流式细胞分析技术,对单色、多色荧光标记抗体的偶联率及偶联效果进行分析与评价,并进行稳定性试验。结果荧光标记的单克隆抗体特异性保持完好;单色标记的抗体荧光强度均比进口对照低一个数量级;FITC-CD3/PE-CD4平均荧光强度与进口对照相差较大,FITC-CD3/PE-CD8和FITC-CD4/PE-CD8平均荧光强度与进口对照相差较小;FITC标记产物的F/P值控制在1～2之间;标记抗体于2～8℃放置18个月,稳定性良好。结论应用FITC、PE标记的CD3、CD4和CD8单克隆抗体可以采用流式细胞仪进行检测。
2007年10期 750-753+763页 [查看摘要][在线阅读][下载 453K] [下载次数：472 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 邵华;陈子杨;张勇;王振远;黄伟嵩;贾媛;郭立君;郭凤云;
目的探讨口服福氏志贺菌IgY在动物体内的抑菌作用。方法以福氏志贺菌制备免疫原,免疫母鸡,收集鸡蛋,提取IgY。以不同剂量的IgY口服免疫6日龄乳鼠,并分别以不同剂量的福氏志贺菌于不同时间攻击,观察体内抑菌作用。结果攻菌前口服特异性IgY的乳鼠,其直肠内分离菌的百分率明显低于攻击后口服IgY的乳鼠。抑菌作用随着口服IgY剂量的减少和攻菌量的增加而降低。口服大于3mg/只的特异性IgY,可使肠内特异菌减少50%以上。口服4mg/只可抵御10亿菌的攻击。结论福氏志贺菌特异性IgY可有效抑制该菌在乳鼠肠内的繁殖。
2007年10期 754-756页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K] [下载次数：58 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 傅颖;梅松;来伟旗;王茵;
目的制备新生牛肝活性肽并评价其安全性。方法采用膜法分离制备新生牛肝活性肽。将3批制品于37～40℃,75%相对湿度条件下存放3个月,以多肽含量为指标观察其稳定性,并进行急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、Ames试验、小鼠精子畸形试验和大鼠喂养试验。结果制备的3批新生牛肝活性肽存放3个月后,多肽含量无明显下降,质量稳定。小鼠和大鼠经口灌人大于20.0g/kg体重的新生牛肝活性肽,均无急性毒性。3种致突变试验均未显示出致突变性,大鼠喂养试验各项指标均未见明显毒性。结论新生牛肝活性肽未表现出明显毒性。
2007年10期 757-759页 [查看摘要][在线阅读][下载 176K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ]
- 张波;李方和;龚劲松;田拥军;张春燕;李时君;陈妍;黄永国;杨东亮;
目的建立重组乙型肝炎病毒G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法。方法用抗-HBs单克隆抗体(D12- McAb)制备亲和层析胶,对2A8细胞(分泌G145R变异HBsAg)培养上清盐析物进行亲和纯化。采用SDS-PAGE、Western blot及ELISA,对纯化产物的纯度、特异性、含量和回收率进行鉴定,并与同法纯化的HBsAg阳性血清及r-wHBsAg提取物进行比较。结果D12-McAb对重组真核表达G145R变异HBsAg、HBsAg阳性血清及r-wHBsAS三者具有相似的亲和性,产物纯度分别为90.3%、95.2%和93.1%,回收率分别为43.3%、72.0%和66.4%。结论已成功地建立了重组G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法,为G145R变异以及其他HBV免疫逃逸变异感染的深入研究奠定了重要的技术基础。
2007年10期 767-770页 [查看摘要][在线阅读][下载 314K] [下载次数：70 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 梅建军;王兴龙;万忠海;李晓燕;马云志;张辉;崔丽瑾;
目的研制羊布鲁菌O链M纯化抗原及其单克隆抗体。方法采用冷酚法提纯羊布鲁菌16M的O链抗原,并经琼脂糖凝胶免疫扩散和SDS-PAGE鉴定,用灭活的该抗原免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并进行鉴定。结果建立3株分泌单克隆抗体的细胞株2D10、3C6和1E10,ELISA效价分别为1.380、1.109和1.048,与大肠杆菌0:157、小肠结肠炎耶尔森菌0:9、鼠伤寒沙门菌和猪胸膜肺炎放线杆菌均无交叉反应。3C6和1E10与牛布鲁菌544A发生交叉反应,2D10的亲和常数达5.30×10~7M~(-1)。结论已制备出纯化的羊布鲁菌O链M抗原及其单抗。
2007年10期 771-774页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K] [下载次数：99 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 常景玲;邓小莉;贺杰;李兰;李俊梅;
目的优化新城疫病毒Lasota系疫苗生产中鸡胚孵化条件。方法利用正交实验,对影响疫苗效价的鸡胚孵化温度、孵化湿度、照蛋时间间隔等3个因素进行优化。结果鸡胚最佳孵化条件为孵化温度36℃,孵化湿度55%,照蛋时间间隔2h。孵化湿度对疫苗效价有极显著影响,孵化温度和照蛋时间间隔有显著影响。应用优化的条件生产的疫苗,效价为10~(9.5)EID_(50)/0.1ml,明显高于原条件生产疫苗的平均效价10~(8.5)EID_(50)/0.1ml。结论采用优化的生产条件,可明显提高疫苗的效价。
2007年10期 775-777页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]