噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析

目的　从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子 ,并进行基因序列分析。方法　采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原 ,对自建的 4× 10 5Fab噬菌体抗体库进行富集筛选 ,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌 ,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后 ,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析。结果　共挑选了 6 0个单克隆菌株 ,其中噬菌体ELISA阳性有 2 7个 ,阳性率为 4 5 % ;PCR鉴定均为相应大小片段 ;限制性内切酶鉴定表明 2 7个阳性克隆菌中有 13个具有约 15 0 0bp的片段 ,其余均为约 75 0bp大小 ;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同 ;选取 5个含约 15 0 0bp片段和 2个含约75 0bp片段的克隆菌株 ,经测序均为人免疫球蛋白基因 ,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族 ,轻链分别属于L5、L6、L8和 0 12 /0 2家族。结论　从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子。表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性。

HIV-2 Gp105基因重组鸡痘病毒的构建及鉴定

目的　研制预防HIV -2的重组鸡痘病毒活载体疫苗。方法　将HIV -2Gp10 5基因插入鸡痘病毒转移载体pUTA2复合启动子的下游 ,构建鸡痘病毒转移载体pUTA2 Gp10 5。将该重组质粒与鸡痘病毒 (FPV) 2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,进行同源重组。通过 3次BrdU加压筛选 ,以PCR、RT PCR、IFA和Westernblot鉴定重组病毒。结果　从重组鸡痘病毒的基因组和总RNA中能扩增出大小为 6 5 3bp的目的基因 ;感染重组病毒的CEF细胞与特异性荧光抗体发生阳性反应 ;表达产物与人HIV- 2血清发生阳性反应 ,目的蛋白相对分子质量约为10 5 0 0 0。结论　成功获得 1株重组鸡痘病毒 ,可正确表达HIV 2Gp10 5基因。

人乳头瘤病毒16型L1 N-端主要抗原基因的原核表达

目的　获得序列正确的人乳头瘤病毒 (HPV) 16型L1N -端主要抗原基因 ,构建其原核表达载体 ,并进行诱导表达。方法　采用PCR法从宫颈癌组织中获得HPV16型L1N 端主要基因重组表达质粒 ,转化E .coliDH5α ,4 2℃诱导表达 ,Westernblot分析表达产物。结果　获得了序列正确的人乳头瘤病毒HPV16型L1N -端主要基因 ,相对分子质量约为 5 10 0 0。表达蛋白能与乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论　已成功构建HPV16型L1N -端主要基因表达载体 ,并获得有效表达。

FQ-PCR试剂质量评估方法的建立及评价

呋喃唑酮抑制Wistar大鼠精子细胞生成的研究

目的　探讨呋喃唑酮 (NFZ)对成年雄性大鼠生精细胞的抑制作用及其副作用。方法　以Wistar大鼠为模型 ,灌胃法给药 ,采用组织切片及生物化学方法进行分析。结果　一定剂量的NFZ可以特异性抑制成年大鼠的精子细胞生成 ,而对睾丸的基本结构无损害 ,对其它脏器无伤害。此种抑制生精作用为可逆性 ,停药后较短时间即可恢复正常生育 ,子代发育正常。结论　呋喃唑酮有可能作为男性避孕药。

人组织激肽释放酶成熟蛋白的纯化及活性分析

目的　制备纯化人组织激肽释放酶 ,并检测其生物活性 ,为中试放大及纯化工艺奠定基础。方法　使用麦芽糖 (MBP)融合分泌载体pMBP P ,构建并筛选出 1株工程菌株 ,在 6L培养基中经IPIG诱导表达人组织激肽释放酶融合蛋白。目的蛋白经亲和层析纯化及凝血酶切割后 ,采用电位滴度法测定其活力。结果　筛选出的工程菌株表达相对分子质量约 70 0 0 0的激肽释放酶融合蛋白 ,大小与预计大小相符。纯化后共获得 2 8mg蛋白 ,并具有水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力。结论　成功进行了人组织激肽释放酶融合成熟蛋白的小量制备 ,经纯化后的产物具有生物活性 ,为中试放大、纯化工艺研究奠定了基础。

高效价特异性HER2ME抗体的制备及鉴定

目的　制备高特异性HER2ME(Multi epitopeofhumanepidermisgrowthfactorreceptor 2 )抗体。方法将表达HER2ME基因的pcDNA3质粒与CpG混合免疫C5 7小鼠。结果　得到了HER2ME蛋白特异性抗血清。该血清与普通蛋白抗原免疫产生的血清相比 ,抗体特异性极高。未经纯化进行免疫印迹实验 ,显示出高度特异性。结论　表达质粒与CpG混合免疫可简单快速获得高特异性HER2ME抗体。

双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性

目的　研究双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性。方法　将福氏 2aO -SP- rEPA结合疫苗和宋内氏O -SP- rEPA结合疫苗混合制备成双价痢疾结合疫苗 ,对该双价结合疫苗的安全性及免疫原性与痢疾单价结合疫苗进行比较。结果　双价痢疾结合疫苗安全可靠 ,在 4℃放置 0月、6月、12月与单价结合疫苗相比 ,小鼠血清抗体应答水平差异无显著性意义。结论　混合后没有改变两个单价结合疫苗的特性 ,且稳定性良好 ,可预防福氏 2a、宋内氏痢疾菌所引起的感染。

重组Neurturin对大鼠面神经损伤模型中面神经元的保护作用

目的　建立大鼠面神经损伤实验动物模型 ,观察重组Neurturin对面神经元的营养与保护作用。方法　以切断面神经总干的方法 ,造成大鼠两侧面神经损伤模型 ,在右侧面神经损伤处给予重组Neurturin ,左侧作为对照侧 ,给予PBS ,分别于手术后 7、14、2 8和 4 2d ,取脑组织行双侧面神经核切片 ,甲苯胺兰染色 ,观察面神经元形态 ,分别计数两侧面神经元数量。结果　给予重组Neurturin的一侧大鼠面神经核大部分细胞仍保持正常形态 ,对照侧面神经核神经细胞多呈空泡样变性、坏死 ,部分正常形态已消失 ;手术后 7及 14d ,给药一侧存活的神经元数量明显比对照侧多 ,2 8和 4 2d差异无显著意义。结论　重组Neurturin对损伤的大鼠面神经核神经元细胞具有营养和保护作用。

应用反相HPLC法测定生物制品中苯酚含量

目的　采用反相高效液相色谱法测定 3种生物制品中苯酚含量。方法　以C18化学键合硅胶为固定相 ,以乙腈 /水 (70∶30 ,V/V)为流动相 ,UV检测波长 2 78nm进行测定。结果　平均回收率为 98. 5 % (n =6 ) ,3种生物制品 6次独立测定的相对标准偏差分别为伤寒ViRSD =0 . 77% ,PPDRSD =1 6. 1% ,气管炎疫苗RSD =1 4. 4 % ,苯酚在 0 . 0 5～ 0 . 5mg/ml范围内 ,浓度与吸收面积呈良好的线性关系。结论　本法操作简单 ,结果准确 ,重复性好 ,可用于实际检测分析。

生物制品中支原体检定方法的验证及统计学评价

目的　确定稳定、准确而可靠的支原体检测方法。方法　采用培养法与DNA荧光染色法分别检测已知阴阳性样品 ,对各组检测结果进行比较 ,验证其试验内及试验间重复性 ;检测待检样品 ,分别验证它们的可靠性。并用统计学方法评价它们的准确性及诊断价值。结果　培养法试验内、间重复性均在 95 %以上 ,可靠性Kappa值为 0 . 85 7,试验稳定性优于荧光法。而荧光法灵敏度较高。两种方法同时检测相同待检样品时 ,检测结果符合率为 93 .1% ,两种方法联合检测的试验内及试验间重复性均在 90 %以上 ,可靠性Kappa值为 0 . 88,并且其诊断指标(尤登指数、阳性似然比、验后概率及灵敏度、特异度 )均较高 ,尤其是阳性似然比为 2 93,而其验后概率为 99. 2 %。用此联合系列检测方法共检测了 6 1批次生物样品 ,有 10批次检出有支原体污染。结论　两种方法联合检测支原体重复性、可靠性及准确性指标均较高 ,是稳定、准确并可靠的检定方法。

一种神经毒素多肽的分离纯化

目的　分离纯化一种神经毒素生物大分子 ,制备单体以供研究。方法　对已经过初步提纯的神经毒素采用RP HPLC等色谱方法进一步纯化。结果　用二极管阵列检测及质谱检测表明 ,最终所得的多肽组分为单体。结论　本法对制备少量神经毒素多肽单体具有参考价值。

国产流行性感冒裂解疫苗临床反应与免疫原性观察

目的　评价国产流行性感冒裂解疫苗的临床反应和免疫原性。方法　按整群随机抽样原则 ,以进口同类疫苗作为对照开展现场临床观察 ;比较两种疫苗免疫后的反应率、抗体阳转率、保护率及几何平均滴度(GMT)。结果　试验组及对照组 1针接种后全身反应率分别为 1 .79%和 3. 32 % ,局部反应率分别为 1 .5 4 %和2 . 37% ;试验组、对照组中的婴幼儿 2针全程免疫后全身反应率分别为 5. 0 8%和 7 .6 9% ,局部反应率分别为 5 . 0 8%和 3.85 %。试验组免后H1N1、H3 N2 、B型抗体阳转率分别为 91. 36 %、86 . 36 %和 83. 18% ,对照组分别为 93 .13%、84 . 73%和 75 .5 7% ,两组比较差异无显著意义。非易感者免后H1N1、H3 N2 、B型抗体GMT与免前相比 ,试验组分别为免前的 18 2 8、9 30和 8 6 1倍 ,对照组分别为免前的 18 16、8 4 5和 5 . 77倍。试验组免后H1N1、H3 N2 、B型抗体保护率分别为 86 . 82 %、99. 0 9%和 96 . 36 % ,对照组分别为 96. 18%、96 .18%和 92 . 37%。结论　国产流感裂解疫苗具有与进口同类疫苗相似的临床反应及良好的免疫原性。

Survivin与肿瘤研究进展

Survivin是最新发现的、最强的凋亡抑制因子 ,属于IAP家族 ,但结构独特 ,组织分布具有明显的细胞选择性 肿瘤特异性。其特异性及抗凋亡作用使其在对肿瘤发生发展的研究中作用日益凸现 ,使其在探讨肿瘤诊治领域成为一个新热点。

开发用于筛检试验的体外诊断试剂应注意的问题

新春致辞