大肠杆菌表达的破伤风毒素C片段的免疫原性分析

目的　分析大肠杆菌表达的破伤风毒素C片段 (简称TTC)的免疫原性。方法　利用分子生物学技术在大肠杆菌中表达破伤风毒素C片段 ,用阴离子交换层析和金属离子螯合亲和层析方法进行蛋白纯化。参照2 0 0 0年版《中国生物制品规程》的方法检测表达产物的效价。用间接血凝实验检测免疫动物血清中的破伤风抗体单位。结果　重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的 15 %。纯化后蛋白纯度达到 96 5 %。免疫效价为 18 70 6IU mg ,ED50 为 2 0 μg。 1μgTTC经 4次免疫能诱导机体产生足够的抗体 ,保护动物免受破伤风毒素的攻击。 结论　重组蛋白具有良好的免疫原性 ,为开发基因工程疫苗奠定了基础

质粒介导的NDRG2 shRNA抑制其在人肿瘤细胞HHCC中的表达

目的　构建含有针对NDRG2的shRNA的质粒 ,抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达。方法　用PCR方法从人基因组DNA中扩增出 336bp的U6 启动子 ,与 2 9bp的NDRG2靶序列的反向重复序列和pSNAV质粒相连。连接后的pSNAVU6 质粒转染入HHCC细胞 ,检测它们对NDRG2表达的影响。结果　pSNAVU6 重组质粒能抑制NDRG2的表达。结论　针对NDRG2的短的发夹RNA能抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达

钩端螺旋体黄疸出血群赖株LipL41基因的克隆表达及鉴定

目的　对钩体黄疸出血群赖株LipL4 1基因进行克隆、表达及鉴定。方法　采用高保真PCR ,从我国钩体黄疸出血群赖株基因组中扩增全长LipL4 1基因片段 ,并构建原核表达系统。结果　所克隆的LipL4 1基因核苷酸和氨基酸序列与已发表LipL4 1基因序列 (GenbankL4 6 794 )同源性分别为 96 2 5 %和 98 87% ;所表达的目的蛋白经Westernblot证实为具有良好免疫反应性的广谱抗原。结论　可作为研制基因工程疫苗的候选抗原

运用SELEX技术筛选特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白RNA适配子

目的　获得特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白prepilS的RNA适配子 (aptamers) ,为开发预防、治疗伤寒杆菌肠热症的新型药物试剂奠定基础。方法　采用SELEX技术 (SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEn richment)筛选IVB型纤毛结构蛋白prepilS的特异性适配子 ,通过体外构建一个长度为 88nt含有 30个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库 ,PCR扩增为双链DNA随机文库后 ,体外转录构建RNA随机文库 ,以Sepharose 4B为筛选介质 ,筛选具有特异性高亲和力prepilS蛋白的RNA适配子。结果　经 8轮筛选获得具有特异性高亲和prepilS蛋白的RNA适配子库。结论　成功地筛选出具有特异性高亲和力的RNA适配子库 ,该RNA适配子库可显著抑制伤寒杆菌侵入THP 1细胞

问号钩体Ⅱ型分泌系统相关基因特征分析

目的　分析问号钩体Ⅱ型分泌系统相关基因特征。方法　根据问号钩体黄疸出血群赖型赖株全基因组数据库 ,应用BLAST ,Tmpred ,Pfam等软件分析问号钩体Ⅱ型分泌系统的基因组成和编码蛋白的结构特征 ,并比较问号钩体与铜绿假单胞菌和大肠埃希菌K12Ⅱ型分泌系统组成蛋白的同源性。结果　问号钩体中与Ⅱ型分泌系统相关的蛋白有 11个 ,其中 6个为一般分泌途径蛋白 ,5个为Sec分泌途径蛋白 ,问号钩体中可能存在Ⅱ型分泌系统 ,但一些辅助蛋白未发现 ,需要进一步研究。结论　初步预测了问号钩体中Ⅱ型分泌系统的作用模式 ,为深入研究问号钩体的致病机制奠定基础

治疗用鼠抗人单克隆抗体WuTac功能及药效作用

目的　研究鼠源性抗人白细胞介素 2受体单克隆抗体WuTac的功能和药效作用。方法　采用间接免疫荧光法检测WuTac对白细胞介素 2的阻断作用 ;采用同位素法检测WuTac对活化的T细胞增殖的影响 ,并且通过移植物抗宿主的反应 (GVHR)对WuTac体内的药效作用进行评价。结果　WuTac可以明显地抑制人白细胞介素 2的作用 ,并且可以明显地抑制移植物抗宿主的反应。结论　WuTac可以作为一种较为理想的免疫抑制剂 ,用于预防和治疗骨髓移植中GVHR及器官移植的急性排斥反应

降低乙型肝炎疫苗中硫柳汞浓度的研究

目的　研究在保证产品安全性的前提下 ,降低硫柳汞浓度的可行性。方法　在含有不同浓度硫柳汞的乙肝疫苗中加入已知浓度的活微生物 ,定期取样检测活菌含量。结果　硫柳汞含量为 1 0～ 2 0 μg ml的乙肝疫苗对所测试微生物有较好的杀灭效力 ,符合美国药典和英国药典对添加防腐剂注射剂的抗微生物效力要求 ;并且经十万级和万级环境下的培养基灌封实验证明抑菌、杀菌效力能够满足要求。结论　乙肝疫苗的硫柳汞浓度由目前的 5 0 μg ml降低到 1 0～ 2 0 μg ml仍能保证产品的安全性

采用低pH法灭活人乙型肝炎免疫球蛋白中的病毒

目的　考察人乙型肝炎免疫球蛋白 (HBIG)于低pH孵放下 ,其病毒灭活情况 ,及对抗—HBs效价、IgG组份的影响。方法　将HBIG原液调pH至 4 0于 2 4℃± 1℃孵放 2 1d ,以及将成品于 2～ 8℃放置 3年比较抗—HBs、IgG各组份指标的变化。结果　HBIG原液按上述条件病毒灭活效果可达到 7 0 0logTCID50 0 1mL以上 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体 (D +M)的含量均有所下降。成品 2～ 8℃放置 3年 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体的含量较稳定。结论　人乙型肝炎免疫球蛋白经低PH灭活病毒法灭活病毒有效 ,灭活后 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体之和均有所下降 ,但其成品放于 2～ 8℃ ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体含量较稳定

不同细胞基质制备的麻疹减毒活疫苗质量比较

目的　比较人二倍体细胞 2BS株与鸡胚细胞制备的麻疹减毒活疫苗质量。方法　观察两种细胞基质制备的麻疹减毒活疫苗的病毒滴度、稳定性、抗体阳转率及GMT。结果　两种细胞基质制备的麻疹减毒活疫苗的病毒滴度分别为 4 75、4 6 4和 4 83LgCCID50 ml,热稳定性良好 ,低温保存 2 0年的滴度无明显下降 ;人体免疫接种后均未出现局部与全身反应 ,抗体阳转率均为 10 0 % ,GMT分别为 36 14、2 8 38和 78 76。结论　两种细胞基质制备的麻疹减毒活疫苗质量无明显差异

Al(OH)_3佐剂对疫苗残余牛血清检测(RPHA法)的影响

新生牛血清中微生物的电镜检测及结果分析

目的　探索利用电镜快速、有效的进行新生牛血清外源因子检测。方法　利用膜表面富积法制备新生牛血清样品 ,在电镜下观察样品 ,并与其它检测方法比较。结果　利用电镜检查 ,实验组的外源因子检测阳性率远高于对照组 ;所检市售国内外品牌新生牛血清均有不同程度的外源因子存在。结论　电镜法检测新生小牛血清是一种快速、广谱的外源因子检测方法 ,并具有检测精度高的优点 ;它为新生牛血清的质量监测提供了一种新的参比方法

人破伤风免疫球蛋白国家标准品的研制

目的　研制人破伤风免疫球蛋白国家标准品。方法　按WHO有关要求制备并检测标准品 ,以人破伤风免疫球蛋白国际标准品为标准进行协作标定。结果　冻干人破伤风免疫球蛋白国家标准品经外观、水分、无菌、分装误差、效力检测 ,均符合要求 ,在 4℃保持 6 0个月效力稳定。协作标定平均值为 10 5 5IU 支 ,CV值为4 7%。结论　该批人破伤风免疫球蛋白标准品可以作为国家标准品 ,效价定为 10IU 支 ,批号为 0 0 1

我国生物芯片产业化发展现状及存在问题

生物芯片技术的快速发展已引起国家有关部门的高度重视和大力支持。科研单位和企业已投入大量资金用于研究及开发 ,并已取得可喜成绩。随着生物芯片的发展和产业化的推进 ,在基础研究、生产技术、市场管理和知识产权等方面也出现一些问题 ,如能妥善解决这些问题 ,将有利于生物芯片产业化的发展

整联蛋白研究进展

对细胞膜信号转导过程中起重要作用的整联蛋白的结构和功能、整联蛋白与肿瘤生长和转移的关系、抗肿瘤药物的新靶点———整联蛋白的研究现状及前景予以综述