幽门螺杆菌鞭毛蛋白B亚单位原核表达系统的构建及其产物的免疫性

目的　构建幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)鞭毛蛋白B亚单位 (flaB)原核表达系统 ,并鉴定其表达产物的免疫性。方法　采用PCR从幽门螺杆菌基因组DNA中扩增全长flaB基因 ,T A克隆后测定核苷酸序列 ,构建pET32a flaB表达载体 ,以E .coliBL2 1DE3为表达宿主菌 ,用SDS PAGE检测重组蛋白 (rFlaB)的表达水平。采用Hp全菌抗体的Westernblot和兔抗rFlaB血清的免疫扩散试验鉴定其免疫反应性和抗原性。结果　所克隆的flaB基因与文献报道的核苷酸序列同源性为 96 .31%～ 97.73% ,氨基酸序列同源性高达 99.4 1%～ 10 0 %。构建的原核表达系统pET32a flaB E .coliBL2 1DE3的rFlaB产量为细菌总蛋白的 4 0 %左右。Hp全菌抗体能识别rFlaB。rFlaB免疫家兔能获得高效价血清抗体。结论　已成功地构建了HpflaB高效原核表达系统 ,所表达的rFlaB有良好的免疫反应性和抗原性 ,可作为Hp疫苗的候选抗原

DRG2基因的克隆、表达及抑瘤活性研究

目的　克隆、表达抑癌基因NDRG2 ,纯化后考察其对肿瘤细胞的抑制作用。方法　将NDRG2基因克隆进pQE30 M15表达载体 ,经DNA测序 ,IPTG诱导表达 ,SDS PAGE测定表达量及相对分子质量 ,复性后浓缩 ,脱盐 ,亲和层析纯化 ,对纯化表达产物进行一系列检测 ,考察其抑瘤作用。结果　克隆构建的表达载体经DNA测序证明构建正确 ,表达产物相对分子质量为 39977,表达量为 4 0 0 5 % ,纯度为 94 % ,等电点为 6 3,表达蛋白N端氨基酸序列正确 ,NDRG2蛋白对肿瘤细胞有较强抑制作用。结论　构建了NDRG2的pQE30 M15表达载体并取得高表达 ,该蛋白对 790 1和HHCC肿瘤细胞均有抑制作用 ,为基因功能研究奠定了基础

纤溶酶原饼环区5蛋白重组大肠杆菌高效表达体系的建立

目的　建立纤溶酶原饼环区 5 (Humanplasminogenkringle 5 ,hPK 5 )蛋白重组大肠杆菌高效表达体系 ,为高密度发酵创造条件。方法　观察一级、二级种子的生长状态 ,比较表达hPK 5蛋白的 4种重组工程菌株在相同条件下的表达情况 ,选出首选发酵种子 ;对其培养时间、诱导时间、培养基种类、pH等条件进行优化 ;并用凝胶成像分析系统对SDS PAGE结果进行分析。结果　经过筛选 ,JM10 9 pBV2 2 0 hPK 5 (简称JP5 )是获取hPK 5蛋白的首选工程菌株 ,其最佳表达条件是LB培养基 (pH 7.4、溶解氧充足 )、30℃培养 3h、4 2℃诱导 6h。在此条件下 ,JP5表达目的蛋白占菌体总蛋白的 38%左右。结论　为高密度发酵获取hPK 5蛋白奠定了实验基础

替换稀有密码子提高HBsAg在CHO细胞中的表达量

目的　通过替换S基因稀有密码子 ,提高HBsAg在CHO细胞中的表达量。方法　利用重叠PCR技术 ,将S基因上 3个稀有密码子替换成哺乳动物细胞偏爱的密码子 ,得到Sm 基因。把S和Sm 基因分别克隆到pCI载体上 ,并转染CHO(dhfr )细胞 ,利用ELISA方法检测HBsAg的表达量。结果　获得预期的Sm 基因。在CHO细胞中 ,Sm 基因表达量明显高于S基因。结论　替换S基因稀有密码子可以提高HBsAg的表达量

抗瘤酮A_(10)、5Fu、GM-CSF和IL-2的抗癌效果

目的　比较A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2的抗癌效果。方法　选取NIH小鼠 ,分别腹腔接种肝腹水HeP A 2 2细胞、骨肉瘤S180细胞及胃癌MFC细胞 ,10d后将注射每种细胞的小鼠分为 3组 ,每组 12只 ,分别于小鼠腹腔注射A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2 ,每日 1次 ,每次 1ml 只 ,连续给药 8d后改为每 3d给药 1次 ,观察小鼠生存时间及抑瘤效果。结果　A1 0 、5Fu、GM CSF及IL 2均能延长小鼠生存时间 ,A1 0 抑制肝HeP A 2 2肿瘤效果显著。结论　A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2均有抑制癌细胞生长作用

双价肾综合征出血热纯化疫苗的研究

目的　研制包含Ⅰ型和Ⅱ型病毒抗原的肾综合征出血热纯化疫苗 ,以提高疫苗质量及临床应用效果。方法　用金黄地鼠肾细胞培养的PS 6株 (Ⅰ型 )病毒和L99株 (Ⅱ型 )病毒以体积比 1∶1的比例配制成双价疫苗 ,经醋酸锌沉淀、超滤浓缩、Sepharose 4FF柱层析制备成双价纯化疫苗。结果　双价纯化疫苗经中国药品生物制品检定所检测 ,各项指标全部合格。疫苗于 37℃放置 2周和 4℃放置 3年 ,效力试验均合格。临床观察血清中和抗体阳转率大于 85 % ,仅出现 0 .5 %的轻反应。结论　研制的出血热双价纯化疫苗 ,各项质量指标均符合《双价肾综合征出血热纯化疫苗试行规程》的要求 ,临床应用效果良好

在搅拌培养和静态培养中造血细胞亚群组成的分析

目的　分析转瓶和方瓶培养过程中造血细胞亚群组成的变化。方法　观察培养过程中脐血单个核细胞总细胞扩增倍数 ,CD34+ 细胞、CD33+ 细胞、CFU GM、CD4 1+ 细胞、CFU Mk和BFU E占总细胞的比例及其随培养时间的变化。结果　 14d的培养中 ,无论是用转瓶和方瓶 ,总细胞不断扩增 ,CD34+ 细胞含量在第 7天、CFU GM含量在第 10天、BFU E含量在第 5天达到最高 ,而后出现分化 ,转瓶和方瓶培养的CD34+ 细胞和CFU GM和BFU E含量差异无显著意义 ;CFU Mk则不同 ,其含量在转瓶培养第 7天时达到最高 ,而在方瓶第 10天达到最高 ,在转瓶中CFU Mk的含量一直低于方瓶培养 ;两种培养过程中CD33+ 细胞比例均在 5 0 %～ 70 %之间 ,而且差异无显著意义。转瓶培养中CD4 1+ 细胞含量到后期出现下降 ,而方瓶中则一直增加。结论　与静态培养环境相比 ,搅拌环境对干 祖细胞分化速度、粒 巨噬系祖细胞和红系祖细胞的分化没有明显影响 ,但不利于巨核系祖细胞的扩增 ,促进了其分化

应用ELISA法检测静脉注射用人血免疫球蛋白抗补体活性

目的　建立检测静脉注射人血免疫球蛋白的抗补体活性的ELISA方法及其相应的标准品。方法用C1q包被酶标板 ,以辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA HRP)作为酶标记物 ,邻苯二胺为底物。结果　应用ELISA法检测静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性具有准确性高 (97 2 % ) ,精确性好 (试验内精密度为6 7% ,试验间精密度为 9 1% ) ,特异性强 ,灵敏性高 (测定限度为 0 2ACA单位 ,测量限度为 0 3ACA单位 )等特点。结论　ELISA法检测抗补体活性简便、快捷、准确

两种方法制备甲乙肝联合疫苗的效果比较

目的　观察两种不同方法制备甲乙肝联合疫苗的效果。方法　将甲肝抗原和乙肝抗原分别加Al(OH) 3吸附后混合 ,制备甲乙肝联合疫苗 (方法 1)或将甲肝抗原与乙肝抗原等量混合后 ,加Al(OH) 3吸附 ,制备甲乙肝联合疫苗 (方法 2 ) ,并进行吸附效果、理化性质及效力检测。结果　两种方法制备的联合疫苗理化性质稳定 ,免疫效果良好 ;方法 2制备的联合疫苗其小鼠效力优于方法 1(方法 1甲肝ED50 为 4 2 .0 9EU ml,方法 2为 8.2 0EU ml,P =0 .0 10 )。结论　两种方法制备的联合疫苗均达到了单价疫苗的免疫效果 ,方法 2优于方法 1

粉尘螨滴剂中硫柳汞限度的比色检查

HIV疫苗的研究进展