利用中国流行株HIV-1 Gag重组痘苗病毒与核酸疫苗免疫的新程序

目的 将中国流行株ＨＩＶ－１　Ｇａｇ基因在痘苗病毒中表达，以重组痘苗病毒与核酸疫苗混合免疫，进 而研制艾滋病疫苗。方法 将中国流行株ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因片段插入到ｐＪ３８载体启动子下游，经同源重组和血凝素 阴性空斑筛选重组痘苗病毒，经 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ检测目的蛋白。以重组痘苗病毒与核酸疫苗进行小鼠免 疫试验，淋巴细胞转化实验，ＣＩＬ，ＣＤ＋４；ＣＤ＋８细胞计数及细胞免疫和体液免疫水平检测。结果 重组痘苗病毒ｖＪ３８ Ｇａｇ具有良好的免疫原性，与２ｒＶＶ－ＤＮＡ混合免疫效果更好。结论 重组痘苗病毒 ｖＪ３８ Ｇａｇ能够表达Ｇａｇ蛋白并诱 导机体产生细胞免疫和体液免疫。

肾综合征出血热灭活疫苗毒株L99株的全基因序列分析

目的 了解我国肾综合征出血热疫苗生产毒株Ｌ９９株的分子特征及抗原性的分子基础。方法 设计出不同的引物，用ＰＣＲ方法提取细胞总ＲＮＡ，逆转录扩增产物纯化后克隆Ｔ载体，纯化后测序，序列用ＤＮＡＳ ＴＡＲ软件拼接，并对其序列进行分析。结果Ｌ９９株全基因组由Ｌ片段６５３３个，Ｍ３６５２个，Ｓ１７６４个核苷酸组成， 分别编码２１５１、１１３３、４２９个氨基酸，Ｌ９９与同型病毒间同源率高达９５．５％－９９．４％。结论 为研究疫苗毒株的生物 学特性、致病机理等提供了分子基础。

胰高血糖素基因克隆、表达及鉴定

目的 研制基因工程胰高血糖素，用于治疗因注射胰岛素或口服抗糖尿病药物而引起的严重低血 糖反应。方法 依据人胰高血糖素氨基酸组成序列，采用大肠杆菌出现频率高的氨基酸密码子，体外合成胰高血 糖素基因序列，克隆于ｐＧＥＸ－１Ｎ质粒，转化人ＢＬ２１（ＤＥ３）菌中，对阳性克隆转化质粒进行ＤＮＡ测序。用ＩＰＴＧ诱导 转化的胰高血糖素工程菌，产生谷胱苷肽转移酶的融合蛋白，经谷胱苷肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析后，由 Ｆａｃｔｏｒ　Ｘａ酶 进行柱上切割，最后用ＲＰ－ＨＰＬＣ得到纯化产物。产品用质谱法测相对分子质量，并对Ｎ末端１５个氨基酸测序。 结果ＤＮＡ测序显示克隆基因序列正确，产品相对分子质量为３４８６Ｊ末端１５个氨基酸序列与理论值相同，产率为 １．９ｍｇ／Ｌ。结论 获得以可溶性融合蛋白方式表达的胰高血糖素基因工程菌，适于快速生产天然序列重组胰高血 糖素。

幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位基因工程菌的发酵

目的 研究幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）基因工程菌的发酵工艺。方法 通过不同培 养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位基因工程菌的菌体生长与 外源蛋白表达量的影响的比较，确定其较为合适的培养条件。结果 多批实验证明，菌体单产可达４２ｇ／Ｌ，目的蛋 白的表达率为３８．５％。结论 此发酵工艺可以提高ＨｓｐＡ基因工程菌菌体的得率和目的蛋白的表达。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的 制备安全有效的Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺（ＥＤＡＣ）将Ａ群脑膜 炎球菌多糖－ＡＨ衍生物与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合，制备Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖－蛋白结合物，具有Ａ群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ｐｓ抗体，而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ｐｓ抗体及ＴＴ抗体，并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。

α_1-抗胰蛋白酶制剂的制备及其病毒灭活

目的 从Ｃｏｈｎ　ＦⅣ中提纯α１－抗胰蛋白酶（α１－Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　α１－ＡＴ，制备较高纯度α１－ＡＴ制剂。方法 对Ｃｏｈｎ ＦⅣ抽提液经沉淀、超滤、离子交换及凝胶过滤，提纯 α１－ＡＴ用巴氏法（液态，６０℃，１０ｈ加热）作病毒灭活， 并考察其效果。用免疫单扩散、双向交叉免疫电泳、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及合成基质法检测α１－ＡＴ蛋白及生物活性。用区带 扫描法测定α１－ＡＴ制剂的纯度。结果３批试制的α１－ＡＴ制剂的纯度为９１．３±１．５２％，比活０．４９±０．０８μ／ｍｇ，比活性 比抽提液提高了２７．４倍。巴氏法处理可使ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、Ｐｏｌｉｏ　Ｉ型疫苗病毒分别降低１０．０±０．３，１０．０±０．３１及７．１１ ±０．３ｌｇＴＣＩＤ５０／ｍｌ，但仍能检出Ｐｏｌｉｏ型疫苗病毒。结论 可从 Ｃｏｈｎ ＦⅣ中制得较高纯度的 α１－ＡＴ制剂，巴氏法能对 α１－ＡＴ制剂作有效的病毒灭活处理。

应用篮式生物反应器培养1A_5杂交瘤细胞及单克隆抗体分泌

目的 为了提高体外培养的杂交瘤细胞单克隆抗体的合成分泌，并为治疗型人源化单克隆抗体生 产摸索条件。方法 应用５Ｌ篮式及非篮式生物反应器培养１Ａ５杂交瘤细胞，以分泌干扰素单克隆抗体，从中对 １Ａ５细胞的接种浓度、反应动态、培养方式等进行研究。结果 细胞最适的接种浓度为２．０×１０５／ｍｌ左右；同非篮式 培养相比，在篮式培养过程中，通过葡萄糖消耗率的监测，及时地调节培养条件及换液时间，延长了培养周期，增加 了每罐收液批次，并且每次是全量换液，最高收液效价为１：４０９６。结论（１）１Ａ５ 细胞分泌干扰素单抗属于负生长 耦连型，葡萄糖消耗率与细胞的生长呈线性关系，可以利用糖消耗率的变化判断篮式生物反应器中细胞生长状况； （２）篮式生物反应器载体培养优于非篮式生物反应器悬浮培养；（３）适当地增加培养基中葡萄糖的量，可以提高干 扰素单抗的合成分泌。

百日咳疫苗血清学效力试验与小鼠保护力试验结果的相关性

目的 了解百日咳疫苗血清学效力试验（ＰＳＰＴ）与小鼠保护力试验（ＭＰＴ）结果的相关性，为该法替代ＭＰＴ积累资料。方法 用不同剂量的ＤＴＰ疫苗免疫小鼠，４ｗ后采血，用ＥＬＩＳＡ测定小鼠血清中抗百日咳菌表面 抗原的总抗体滴度。用平行线法计算疫苗的效力，与ＭＰＴ测定结果进行相关性分析。结果１５批疫苗分别用 ＰＳＰＴ和ＭＰＴ法测定的效力单位相关性显著（ｒ＝ ０．９３５８，ｐ＜０．００１），二者差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。与 ＭＰＴ法相 比，ＰＳＦＦ法有更高的重复性，而且９５％可信限较小。结论ＰＳＰＴ法有望取代ＭＰＴ。

三种方法检测静注免疫球蛋白中IgG含量的比较

目的 选定检测静注免疫球蛋白中ＩｇＧ含量的方法。方法 采用紫外分光法、火箭免疫电泳法、单 向辐射状免疫扩散法检测静注免疫球蛋白中ＩｇＧ含量。结果 火箭免疫电泳法与紫外分光法和单向辐射状免疫扩 散法之间差异有显著意义（Ｐ＜０．０１），紫外分光法与单向辐射状免疫扩散法之间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。紫外 分光法变异系数（ＣＶ％）最小。结论 为选定静注免疫球蛋白ＩｇＧ含量检测方法提供了依据。

应用24孔板培养法检测甲肝疫苗感染性滴度

目的 应用２４孔培养板检测甲肝疫苗（ＨＡＶ）感染性滴度。方法 采用２４孔培养板培养单层细 胞，接种适宜稀释度的病毒，每稀释度接种６－８孔，１００μｌ／ 孔，培养到期，用胰酶消化后收集细胞，每管沉淀细胞加 ２５０ｕｌ细胞裂解液裂解细胞，释放ＨＡＶ，然后用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＡＡｇ。结果 ＨＡＶ（Ｈ２株）在２４孔板上的增殖高峰为 ２１－２４ｄ；板间差异平均为０．１０５Ｌｏｇ；８批样品经２次重复检测，重复性较好，其差值的平均值为０．１０６Ｌｏｇ，标准差为 ０．０９９。用此方法检测１２批样品，其结果与小方瓶培养法差异无显著意义（Ｐ＞０．５）。结论 ２４孔板培养法有望用 于甲肝疫苗感染性滴度检测。

应用巢式PCR检测细胞培养物中的支原体污染

腮腺炎疫苗保护剂的改进

DNA疫苗研究的发展方向

为促进海内外学术交流，《中国生物制品学杂志》自本期起，不定用地刊出国内外专家学者就生物技术领域的热点问题撰写的述评。欢迎业内人士就已发表的述评提出不同意见，并展开讨论，共同促进生物制品事业的发展。

《中国社区医学》简介