人血管内皮生长因子受体FLT-1胞外区1-3环cDNA的表达、纯化及鉴定

目的　研究人血管内皮生长因子受体FLT 1胞外区 1 3环cDNA在酵母菌中的表达、纯化及生物学活性。方法　将编码 316个氨基酸残基的人FLT 1胞外区 1 3环cDNA插入到含AOX1启动子和d分泌信号肽序列的Pichiapastoris酵母载体中 ,构建了重组表达质粒pPICqk/FLT l(1～ 3) ,转化酵母宿主菌GS115 ,筛选His+ Mut表型转化子 ,经摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。结果　经SDS -PAGE显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,诱导 4天的表达量达到培养上清总蛋白的 6 0 % ,径Westernblot检测抗原性及特异性良好 ,经CM SepharoseFF阳离子交换层析和Sephacryls 10 0分子筛层析 ,纯度达 90 %以上 ;经生物活性检测具有结合hVEGF16 5的能力和hVEGF16 5促进HUVEC的增殖功能。结论　人血管内皮生长因子受体FLT 1胞外区 1～ 3环cDNA在酵母菌中表达成功。

抗人GPA~N单克隆抗体的制备及鉴定

目的　制备抗GPA单克隆抗体以建立“GPA体细胞突变分析法”。方法　用O ,N型人红细胞 ,以及纯化人GPAN 免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备 ,用细胞凝集、间接免疫荧光筛选 ,用ELISA、Westernblot、酶处理红细胞的间接免疫荧光标记鉴定。结果　获得抗GPAN 单克隆抗体 6A8杂交瘤细胞系。其单抗属lgG3亚类 ,λ型轻链 ,识别和结合GPAN 氨基端 1～ 8位决定位点 ,对糖链依赖。流式细胞分选结果显示 6A8特异结合二甲亚胺固定的人MN和N型红细胞。结论　对分析由于基因突变和糖基化变异所致N ,MN红细胞GPAN 突变有理论研究和应用价值。

精制抗江浙蝮蛇毒血清与韩国三种蝮蛇毒的交叉中和作用

目的　考察本所精制抗江浙蝮蛇毒血清能否中和三种韩国蝮蛇毒及其中和能力。方法　用免疫双扩散法鉴定抗江浙蝮蛇毒血清与三种韩国蝮蛇毒交叉反应。并根据动物实验结果计算出每毫升抗血清中和三种韩国蝮蛇毒的致死毒及出血毒的量。结果　中国精制抗江浙蝮蛇毒血清 1.0ml可分别中和韩国黑眉蝮蛇毒、短尾蛇毒和乌苏里蝮蛇毒液态原毒的致死毒 1、3.9和 2 .5mg ;同时可分别中和上述 3种蛇毒蛋白 0 .8、3.15和 2 0mg中和出血毒。结论　中国精制抗江浙蝮蛇毒血清具有中和上述三种韩国蝮科蛇毒的作用。

载脂蛋白A1和B检测试剂的研制

目的　研制载脂蛋白A1和B检测试剂。方法　采用硫酸葡聚糖沉淀、超速离心、层析等方法。结果　分离的载脂蛋白A1(ApoA1)和B (ApoB) ,经检定证实其为单一成分 ,用它们为抗原 ,免疫绵羊 ,获得ApoA1和ApoB抗血清 ,检定结果与德国Bochinger公司产品一致。用这两种抗血清配制的浊度检测试剂与德国Diasys公司的同类试剂盒进行对照 ,相关良好。结论　所研制的载脂蛋白A1和B检测试剂达到了国外同类产品的质量水平。

Lys-纤溶酶原的制备及其活力稳定性

目的　制备Lys 纤溶酶原并观察其稳定性。方法　人血浆组分Ⅲ经Lys Sepharore 4B和SephadaxG 2 0 0柱层析纯化。结果　得到分子质量为 90 0 0 0的天然纤维蛋白溶酶原 (G/u Hpg) ,经透析得到N 末端为赖氨酸的纤溶酶原 (Lys HPg) ,其活力较Glu HPg更稳定。结论　为合成酰化纤溶酶原—链激酶复合物 (APSAC)奠定基础。

法莫替丁联合思密达治疗消化性溃疡38例

谱红细胞库的建立与应用

目的　通过对献血员和血站职工等群体普查ABO、Rh、MNSs、Duffy等 12个血型系统抗原 ,建立谱红细胞库和谱红细胞反应格局 ,用于临床鉴定特异性抗体。方法　选用盐水、菠萝酶和间接抗人球蛋白法。结果　筛出 9组O型Rh血型遣传式 (R1R1、R2 R2 、R1R2 、R1RZ、R2 RZ、R1r、R2 r、rr、rr′)和 2 9种抗原 (D、C、E、c、e、Cw、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、Fya、Fyb、K、k、KPa、Kpb、Kpc、JSa、JSb、Dia、Xga、Lua、Lub、JKa、JKb、Jra)。结论　精选出 15个O型红细胞组成谱细胞格局 ,有 2 0种抗原鉴定抗体概率符合P <0 .0 5的要求。目的　通过对献血员和血站职工等群体普查ABO、Rh、MNSs、Duffy等 12个血型系统抗原 ,建立谱红细胞库和谱红细胞反应格局 ,用于临床鉴定特异性抗体。方法　选用盐水、菠萝酶和间接抗人球蛋白法。结果　筛出 9组O型Rh血型遣传式 (R1R1、R2 R2 、R1R2 、R1RZ、R2 RZ、R1r、R2 r、rr、rr′)和 2 9种抗原 (D、C、E、c、e、Cw、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、Fya、Fyb、K、k、KPa、Kpb、Kpc、JSa、JSb、Dia、Xga、Lua、Lub、JKa、JKb、Jra)。结论　精选出 15个O型红细胞组成谱细胞格局 ,有 2 0种抗原鉴定抗体概率符合P <0 .0 5的要求。

重组链激酶(rSK)国家标准品的研制

目的　建立效价测定用重组链激酶国家标准品。方法　以NIBSC的国际标准品为标准 ,采用体外溶圈法 ,按WHO要求组织了 3家实验室 ,对该批rSK国家标准品 (批号 96 0 70 1)的效价进行协作标定。结果　经统计学分析 ,均数为 495IU/支 ,95 %可信区间为 45 7～ 5 35IU/支 ,单次测定的 95 %标准值范围为 30 1～ 70 6IU/支。该批国家标准品效价确定为 5 0 0IU/支。 4种不同温度存放 2 9个月的样品 ,效价稳定。结论　该批rSK效价稳定 ,可作为国家标准品。

小牛胸腺素的动物实验及临床应用

目的　提取胸腺素并检测药物指标 ,观察其临床应用和动物实验效果 ,探讨胸腺素对哮喘豚鼠肺组织Gα表达的影响。方法　采用酸碱沉淀加离心法制备胸腺素 ,经多肽定量、活性鉴定、细菌培养、毒性试验和热原实验 ,临床疗效观察 ,并以卵蛋白雾化吸入致敏法复制哮喘模型 ,Westernblot分析法测定哮喘豚鼠肺组织Gα水平。结果　所制胸腺素符合中国药典标准。临床疗效确切 ,经治疗后 ,哮喘豚鼠肺组织Giα、Gqα水平显著降低 (P <0 0 5 ) ,Gsα无显著变化。结论　采用酸碱沉淀加离心法可制备胸腺素 ,其治疗哮喘动物的机理可能是通过改变肺组织Gα水平来达到。

大剂量免疫球蛋白治疗再生障碍性贫血的疗效

目的　评价静脉输注大剂量免疫球蛋白 (HDIg)治疗再生障碍性贫血的疗效。方法　球蛋白治疗组为 70例 ,其中重型再障 (SAA) 30例 ,慢性再障 (CAA) 4 0例。对照组 73例 ,其中重型再障 31例 ,慢性再障 42例。应用大剂量免疫球蛋白 (HDIg) 1g/kg·次 ,每月一次 ,同时应用康力龙、左旋咪唑、再障生血片。对照组仅用后三种药物。结果　球蛋白治疗组SAA 30例 ,基本治愈 3例 ,缓解 5例 ,明显进步 6例 ,有效率 47% ,CAA 40例 :基本治愈6例 ,缓解 12例 ,明显进步 14例 ,有效率 80 %。血象上升时间 ,血小板平均 15天左右 ,白细胞及红细胞平均 5 0天左右。对照组SAA31例 ,仅 3例明显进步 ,有效率 10 % ;CAA 42例 ,基本治愈 1例 ,缓解 5例 ,明显进步 16例 ,有效率5 2 % ;血象上升时间平均 80天左右。结论　大剂量免疫球蛋白联合雄激素治疗再障疗效明显优于对照组 ;球蛋白治疗CAA组疗效优于SAA组 ,且多次应用球蛋白疗效显著提高。

生物芯片技术及其应用