人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化

目的　为了获得大量重组人血管内皮细胞生长因子（ Ｈｕｍａｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ， ｈＶＥＧＦ），以研究其在心血管和药学领域具有的潜在药用价值。方法　用ＰＣＲ方法扩增目的基因ｈＶＥＧＦ１６５，连接到 ｐＥＴ－３ａ载体上，并转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，建立可高效表达的ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ１６５重组质粒，经ＩＰＴＧ诱导表达， Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测表达产物的抗原性，通过 Ｍｏｎｏ Ｑ阴离子层析和ＦＰＬＧ　Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２分子筛柱层析，进行初步纯化，用 ＭＴＴ法检测其生物学活性。结果 　ｐＥＴ－３ａ／ｈＥＶＧＦ表达产物经纯化后，其纯度可达到９０％以上，表达的ｒｈＥＶＧＦ１６５能 呈剂量依赖性地促进人静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的增殖。结论组建了天然形式ｈＥＶＧＦ１６５的大肠杆菌菌株，并摸索 出一套纯化工艺，为大规模生产重组ｈＥＶＧＦ１６５奠定了基础。

人肝细胞生长因子杂交瘤细胞株的建立

目的　建立能分泌人肝细胞生长因子（ｈＨＧＦ）的杂交瘤细胞株。方法　从４～５月龄的人胎肝中分 离贮脂细胞，与次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＧＰＲＴ）缺陷型人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）融合成杂交瘤细胞，用 超滤膜对培养上清液初步分离，并用Ｈ３－ＴｄＲ掺入法测定各组分中ｈＨＧＦ的生物活性。结果　培养上清液中相对分 子质量 １０ ０００～ ３０ ０００的组分ｈＨＧＦ活性显著增高，对小鼠肝细胞增殖有明显的促进作用，并存在量效依赖关系，而 相对分子质量小于１０ ０００或大于 ３０ ０００的组分与对照相比 ｈＨＧＦ活性无明显改变。结论 ｈＨＧＦ杂交瘤细胞的建 立可作为获得ｈＨＧＦ的一条新途径。

人热休克蛋白73的基因重组、表达和纯化

目的　用基因重组的方法表达人热休克蛋白７３，并纯化表达产物，用于进一步分析。方法　用人 热休克类似蛋白ＨＳＰ７３基因构建原核细胞表达载体ｐＥＴＨＳＰ７３，在大肠杆菌ＢＬ２１中用半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达，用 电泳法和 ＡＴＰ亲和层析法提取 ＨＳＰ７３。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、用３ ａ３抗体 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ作 ＥＣＬ检测。结果人 ＨＳＰ７３基因 构建的载体ｐＥＴＨＳＰ７３能很好地在大肠杆菌表达出相对分子质量为７３　０００的蛋白。两种蛋白提取方法均能有效提纯表达的蛋白，该蛋白具有人ＨＳＰ７３抗原特性。所得蛋白质氨基酸测定和Ｎ端测序的结果与有关的报道一致。结 论　ＨＳＰ７３基因重组、表达和纯化方法的建立，为研究ＨＳＰ７３的结构、功能与临床应用提供了必要条件。

鸡卵黄抗体(IgY)的诱导

目的　获得鸡卵黄抗体（Ｉｇｙ），并研究该抗体在鸡的黄液中表达的进程。方法　用吗啡—牛血清蛋白 结合物为模型抗原对３０周龄产蛋鸡进行免疫诱导，用ＥＬＩＳＡ间接法测定不同时间的抗体滴度。结果全程免疫过 程中白蛋白抗体最高滴度为１：１２８００，吗啡抗体最高滴度为 １：１６００，经 ５次免疫后（４２周龄）抗体滴度不再升高。结论　为使目的抗体在鸡卵黄液中持续而高质量诱导奠定基础。

戊肝病毒(HEV)IgG抗体酶联免疫试剂盒的质量分析

缓释微球乙型肝炎疫苗的初步研究

目的　研制缓释微球乙型肝炎疫苗。方法　用聚－ＤＬ－乳酸－聚乙二醇共聚物（ＰＥＬＡ）为材料，包裹乙 型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ），制成缓释微球疫苗。微球的粒径均小于５ｕｍ，平均粒径为２．１７ｕｍ，抗原包裹量为１．２５％， 包裹率为６０－８０％。用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测抗原，以微球疫苗免疫 ＢＡＬＢ／ｃ。小鼠。结果 ＨＢｓＡｇ的结构包裹前后是一致 的，小鼠经皮下注射单剂微球疫苗后，在第 １４ｗ，小鼠血清 ＩｇＧ滴度可达到铝佐剂疫苗相当的水平，且维持较高的滴 度。结论采用生物可降解的缓释微球作为乙肝疫苗载体系统具有潜在的优势。

小鼠口腔和胃途径对精制α型人白细胞干扰素的吸收实验

目的　观察小白鼠经口腔和胃服用精制α型人白细胞干扰素的吸收情况。方法小鼠经口腔和 胃服用干扰素后，分别用微量细胞病变抑制法和ＥＬＩＳＡ检测小鼠血清中的干扰素活性。结果　含服干扰素的小鼠 血清用两种方法均可检出干扰素活性，且可被α型干扰素抗体完全中和；经胃服用干扰素的小鼠血清中未检出干 扰素。结论　含服是干扰素吸收的重要途径。

冻干重组rhGM-CSF的稳定性

目的　观察冻干重组ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的稳定性。方法采用ＸＴＴ法，ＴＦ－１细胞为依赖细胞株，对重组人 粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）进行了稳定性观察。结果重组ｒｈＧＭ－ＣＳＦ在３７℃保存３个月，２２℃５个 月，４℃４８个月生物学活性未降低。结论　重组ｒｈＧＭ－ＣＳＦ稳定性好。

rHuEPO体内生物学活性检测方法比较

目的　比较网织红细胞法与多血症小鼠法检测ｒＨｕＦＰＯ体内生物学活性。方法　对量效线性范 围、相关系数（ｒ值）、方法重复性和可信限率（ＦＬ％）进行比较。结果　网织红细胞法比多血症小鼠法操作更简便，重复性更好（ＣＶ分别为８．９０％和２３．１８％），线性范围更宽（１．８～８．ＯＩＵ），线性关系更好，可信限率更低（分别为２６．５９％和３８．５８％）。结论　网织红细胞法可以取代多血症小鼠法作为常规的ｒＨｕＥＰＯ的质控手段。

麻疹-流行性腮腺炎-风疹联合疫苗中病毒滴定方法的改进

目的　为改进ＭＭＲ（麻疹－腮腺炎－风疹）和ＭＲｕ（麻疹－风疹）联合疫苗中麻疹病毒的滴定方法。方 法　在滴定ＭＭＲ中麻疹病毒时，将中和腮腺炎、风疹病毒改为只中和腮腺炎病毒；在滴定ＭＲ中的麻疹病毒时，不 中和风疹病毒，直接滴定。结果　中和与不中和风疹病毒对滴定联合疫苗中的麻疹病毒滴度无明显影响。结论 简化了滴定方法，并解决了无合用的风疹抗体的困难。

应用层析技术提高低pH静脉注射丙种球蛋白制剂质量

目的　进一步提高低ｐＨ静脉注射两种球蛋白制剂质量。方法采用一步ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＦＦ柱 层析吸附。结果ＩｇＡ残留量由吸附前的５．６０±３．ｍｇ／ｇ蛋白下降到１．１６±０．３８ｍｇ／ｇ蛋白，清除率达（７５．３２± １９．１９）％，总蛋白回收达（８８．５５±２．７６）％，ＩｇＧ纯度进一步提高。制剂中的ＡＣＡ、ＰＫＡ、白喉抗体、单体加二聚体比例等指标均符合规程要求。结论 ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析吸附可提高ＩＶＩｇ质量。

应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量

目的　应用考马斯亮蓝法检测总蛋白含量。方法　应用考马斯亮蓝法与凯氏法和Ｌｏｗｒｙ法同时 进行不同生物制品的总蛋含量检测。结果　考马斯亮蓝法操作简便，灵敏度高，重复性好，测定蛋白的线性范围为 ５～２５ｕｇ，ｒ＝ ０．９９９５，ｎ＝５，平均回收率为１０１．３％。结论　考马斯亮蓝法是检测生物制品总蛋白含量的理想方法。

流行性感冒灭活疫苗接种人体后的反应与免疫效果

目的　观察流行性感冒灭活疫苗人体接种后的反应与免疫效果。方法　接种后进行一般反应观察，采用血球凝集抑制试验测定血清中３种抗体滴度。结果　接种后一般反应率为７．２％。Ｈ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２和Ｂ型抗体阳转率分别是８４．３６％、８７．９２％和９２．８０％。接种后的血清抗体ＧＭＴ分别增长１２．０、９．１和１０．２倍。３种抗体的保护率分别为９５．３％、９２．４％和９７．７％。结论　流行性感冒灭活疫苗是一种很安全的制品，人体接种后具有良好的耐受性和较高的免疫保护效果。

第九届世界公共卫生联盟国际大会会议通知