重组传染性法氏囊病病毒VP2/VP243基因表达及保护性和免疫原性

目的在重组鸡痘病毒中表达传染性法氏囊病毒 VP2/VP243基因,并研究表达产物的保护性和免 疫原性。方法以 FPV 282E_4株 TK基因为侧翼,分别将鸡法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV) VP2 和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质 粒,命名为pUTALacVP和pUTA LacVPO。用这2个质粒转染CEF细胞,用X-gal染色法筛选出2株重组病毒vUTA lacVP2和 vUTALacVP0。用这 2株病毒免疫 1周龄 SPF鸡,以常规疫苗为对照。结果 ELISA、SDS-PAGE和 Western blot表明表达产物可与IBDV特异性多克隆抗体反应,并诱导鸡保护性抗体。在使用vvIBDV攻击前,对照组抗体水 平显著高于实验组。但攻击5 d后,实验组抗体水平明显升高。结论vUTALacVP2和 VPO在 CEF细胞中实现了高 效表达,但重组疫苗的保护率低于常规疫苗。

人巨细胞病毒gp52蛋白基因片段的克隆及表达

目的为获得高表达人巨细胞病毒 ｇｐ５２蛋白基因的工程菌。方法通过计算机分析，筛选出巨细 胞病毒蛋白ｇｐ５２中优势抗原决定簇，用ＰＣＲ技术扩增克隆了含强抗原决定簇的基因片段。将克隆的基因片段插 入表达载体ｐＥＴ２８（ａ）内，转化大肠杆菌ＢＬ２１，经Ｓｅｐｈａｒｅｒｙ１ Ｓ－２００分子筛及Ｎｉ－ＮＴＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ螯合层析进行纯化。结 果获得的工程菌所表达的 ｇｐ５２蛋白片段相对分子质量约为 ２１ ０００，约占菌体可溶性蛋白的 ２８％。获得的表达蛋 白纯度达９５％，电泳显示单一条蛋白带，ＥＬＩＳＡ分析证实有较强的抗原性和较好的特异性。结论本研究对人巨细 胞病毒感染，尤其是对孕妇及献血员等感染的检测有重要意义。

IL-2与绿脓杆菌外毒素A嵌合蛋白的研究

目的获得ＩＬ－２绿脓杆菌外毒素Ａ嵌合蛋白，用于相关疾病的治疗。方法用ＰＣＲ方法扩增分 离ＩＬ－２和ＰＥＡ的基因，将ＩＬ－２基因的３’端与绿脓杆菌外毒素Ａ基因的５’端连接后克隆至ｐＢＶ２２０上，转化大肠杆菌 ＤＨ５ａ。挑取菌落培养，快速提取质粒进行酶切，并在温控条件下表达。结果经鉴定，获得重组质粒ｐＢＶ／ＩＬ－２／ ＰＥＡ。温控诱导表达后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，在５１ ０００处有蛋白表达带。以鼠抗人ＩＬ－２单克隆抗体经免疫印迹验 证，该表达蛋白为所设计的嵌合蛋白。结论本研究建立了一种制备ＩＬ－２／ＰＥＡ嵌合蛋白的方法，该方法也可用于 表达其他蛋白。

肾综合征出血热病毒Z10株在Vero细胞上传代适应和增殖动态

目的为了肾综合征出血热病毒滴度达到规模化生产要求。方法将肾综合征出血热病毒 Ｚ１０ 株在Ｖｅｒｏ细胞上传代适应，不同时间取样，测定病毒滴度。结果从第２代即可稳定达到高滴度。转瓶培养比静 止培养的病毒峰值出现的更早，第 ４ ｄ即可达到１０８／ｍｌ以上，且可多次收液。结论初步确立了疫苗生产中病毒制 备工艺。

肾综合征出血热灭活疫苗的纯化

目的为提高肾综合征出血热（ＨＦＰＳ）疫苗的免疫效果和减少副反应。方法用ＥＬＩＳＡ检测ＨＦＲＳ 病毒抗原的方法，比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果；比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果。结果用 孔径３０万相对分子质量滤膜浓缩时，过滤液中仍有部分病毒抗原检出，经１０万相对分子质量滤膜过滤后，过滤液 中检测不到病毒抗原；用 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ凝胶柱层析浓缩时，经波长 ２８０ ｎｍ检测到 ３个吸收峰，其中仅在第 １峰中检 测到病毒抗原，收集第１峰，几乎回收全部病毒抗原，去除杂蛋白约９０％左右。结论本纯化方法适合于ＨＦＲＳ疫 苗的规模化生产。

抗真菌蛋白质的分离纯化

目的试图从霉菌培养液中分离纯化抗真菌活性蛋白质。方法用离子交换层析法分离，用反 向高效液相色谱法进一步纯化，经Ｎ－三（羟甲基）甲基甘氨酸凝胶电泳分析确定其相对分子质量。结果从黑曲霉 菌培养上清液中分离出一种具有抗真菌活性的蛋白质（ＡＦＰ）。纯化后得到高活性的精制ＡＦＰ。相对分子质量约为 ９０００，经ＭＴＴ法检测５种真菌具有明显抗真菌活性。结论本研究为抗菌药物及防腐剂的开发提供了依据。

甲型肝炎灭活疫苗接种普通狨猴的安全性和免疫原性

目的观察本实验室研制的甲型肝炎灭活疫苗的安全性和免疫原性。方法甲型肝炎病毒吕－８ 株在人胚肺二倍体细胞（ＫＭＢ１７）中增殖，收获的病毒液用福尔马林灭活制成实验性疫苗，接种普通狨猴。结果有 特异性抗ＨＡＶ产生，无血清酶活性升高和肝组织病理学改变。接种疫苗的狨猴均能抵抗甲肝病毒强毒株的攻击， 而对照组均出现酶活性升高和肝组织病理学改变。结论该疫苗具有良好的免疫原性和可靠的安全性。

国产HIV抗体诊断试剂的质量评价

目的评价国产ＨＩＶ抗体诊断试剂的质量。方法用４４００份义务献血员的血样，评价国内９ 个厂家的 ＨＩＶ抗体诊断试剂的特异性；ＨＩＶ抗体阳性样品 ３ ３６８份，评价试剂的灵敏度；测定各试剂结果的真实性 及相关质量指标。结果国产ＨＩＶ抗体诊断试剂的特异性、阳性预示值基本在９９％以上，但灵敏度仍存在一定差 距。结论通过对国内主要生产厂家生产的试剂质量的评价，了解制品质量，有益于进一步提高国产试剂的质量。

神经节苷脂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨神经节苷脂对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ的四血管闭塞法 制作大鼠急性脑缺血／再灌注模型，利用高压液相色谱法观察脑缺血／再灌注期间谷氨酸和γ－氨基丁酸含量的变化， 通过图象分析仪测定神经元的面数密度及神经节苷脂对以上指标的影响。结果缺血后谷氨酸和γ－氨基丁酸含 量明显升高，再灌注后降低，神经节苷脂可降低谷氨酸含量，与盐水对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０１），同时增加神经 元面数密度。结论神经节苷脂通过抑制谷氨酸释放，可减轻脑缺血再灌注期间脑组织损伤。

聚乙二醇6000对Tween-80含量测定的影响

目的了解聚乙二醇６０００对测定Ｔｗｅｅｎ－８０含量的影响。方法将被检样品加９５％乙醇沉淀蛋 白后，上清加二氯甲烷，再加铵钻硫氰酸盐溶液，用紫外分光光度计测Ａ６２０吸收峰。结果 ＰＥＧ－６ ０００含量＞ ５００ｕｇ／ ｍｌ时，干扰 Ｔｗｅｅｎ－８０含量测定。结论一定浓度的 ＰＥＧ－６ ０００对测定 Ｔｗｅｅｎ－８０含量有干扰。

重组天门冬酰胺酶Ⅱ纯化过程的毛细管电泳监测法

目的建立重组天门冬酰胺酶Ⅱ纯化过程质量监控的方法。方法用高效毛细管区带电泳法监 测 Ｌ－天门冬酰胺酶的纯化过程。经优化的电泳条件为：４５ｃｍｘ５０ｕｍ ｉ．ｄ．石英毛细管（有效长度为 ３７．５ｃｍ），检测波 长 ２１４ｎｍ，分离电压 １２ｋＶ，压差迸样 １０ｓ，恒温 １３℃，分离介质为 ｐＨ７．０的 ８０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钠缓冲液。实测了 ６批样品 的纯度，用于各纯化步骤的质量监控。结果该方法简单、快速，尤其适合于重组蛋白的质量控制。结论毛细管 区带电泳法（ＣＺＥ），可以用于对Ｌ－天门冬酰胺酶的纯化过程的质量监控，还可用于半成品和成品的质量控制。

应用比色法测定静脉注射用人血球蛋白中麦芽糖含量

目的建立一种操作简便、快速的检测静脉注射用人血球蛋白中麦芽糖含量的方法。方法应用 比色法，用不同含量的麦芽糖与费林试剂混合建立标准曲线，以标准曲线计算样品中麦芽糖的含量。结果该方 法优于常规色谱法，既可省去较昂贵的设备，且提高了准确性和精密性，回收率在９９．７０％－１００．００％之间。结论 可作为血液制品的常规检测方法。

腮腺炎疫苗与白喉、破伤风类毒素同时或分别接种的免疫应答

目的了解腮腺炎疫苗与吸附精制白喉、破伤风二联类毒素（ＤＴ）能否同时接种，为制定免疫方案 提供依据。方法用冻干流行性腮腺炎减毒活疫苗和吸附精制白、破二联类毒素同时和分别接种８～１４岁的寄宿 学生，观察其免疫应答。结果两苗同时接种与分别接种临床反应及免疫应答差异均无显著意义。结论两苗是 可以同时接种的。

花生四烯酸的研究概况及应用前景