专家笔谈

• 良好工程实践在狂犬病疫苗工程项目中的应用

  高恩鹏;崔行义;邱野;刘晓东;刘海洋;朱喜刚;张颖;赵博;安继新;姜崴;

  良好工程实践（Good Engineering Practice,GEP）是以保证产品质量、患者安全、药品生产质量管理规范（Good Manufacturing Practice of Medical Products,GMP）为目的，专用于制药工程项目的实践。本文基于长春生物制品研究所有限责任公司（简称长春所）现有管理体系及生物制药工程与国际工程项目管理模式，结合GEP技术特点，从用户需求（User Requirement Specification,URS）、计划、设计、变更、质量、移交等关键控制点入手，总结长春所GEP体系建设及其在狂犬病疫苗工程项目中的应用，为疫苗工程项目在风险管理、组织和控制、成本管理及创新和持续改进方面提供技术支持与理论依据。

  2024年05期 v.37 513-518+526页 [查看摘要][在线阅读][下载 898K]
  [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]

基因治疗制剂专栏

• 重组腺相关病毒9型空壳率阴离子交换高效液相色谱检测方法的建立及验证

  史新昌;王凤阳;刘亚辉;周勇;刘宾;

  目的 建立检测重组腺相关病毒9型（recombinant adeno-associated virus type 9,rAAV9）空壳率的阴离子交换高效液相色谱（anion-exchange high-performance liquid chromatography,AEX-HPLC）法，并进行验证。方法 采用基于电荷差异的AEX-HPLC法，通过对流动相洗脱梯度、流动相pH、色谱柱柱温、流速、样品浓度、进样体积和荧光检测器检测波长进行优化，建立检测rAAV9空壳与实心病毒比例的方法，并对方法的专属性、线性、检测限、定量限、精密度和准确度进行验证，确认方法可行性。结果 利用CIMac AAV full/empty-0.1 mL分析柱，以20 mmol/L 1,3-二[三（羟甲基）甲氨基]丙烷（BIS-Tris propane,BTP）为流动相A,20 mmol/L BTP+1 mol/L NaCl为流动相B进行梯度洗脱，流动相pH均为9.0，柱温20℃，流速1 mL/min，样品浓度4×10~(12)vg/mL，进样体积10μL，激发波长为280 nm，发射波长为330 nm，可实现rAAV9空壳与实心病毒的基线分离及定量检测。方法验证结果表明，制剂缓冲液无干扰，专属性较好；rAAV9在（1.6～8）×10~(12)vg/mL范围内线性关系良好，r=0.993；检测限为5×10~(10)vg/mL，定量限为1×10~(11)vg/mL；重复性和中间精密度RSD分别为2.95%和2.10%；准确率均不低于80%。结论 建立了一种高灵敏度且可快速检测rAAV9空壳与实心病毒比例的AEX-HPLC法，可用于基因治疗产品空壳率的分析及质量控制。

  2024年05期 v.37 519-526页 [查看摘要][在线阅读][下载 1072K]
  [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 重组腺相关病毒中游离与错误包装宿主细胞DNA检测的两种前处理方法的比较

  王光裕;胡倩;史新昌;闫书美;周勇;刘宾;

  目的 采用DNA酶（deoxyribonuclease,DNase）处理与填料亲和两种前处理方法检测重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus,rAAV）游离与错误包装宿主细胞DNA(host cell DNA,HCDNA)残留量，并进行比较。方法分别采用DNase处理法和填料亲和法分离游离与错误包装HCDNA，再进行核酸提取及qPCR检测。比较两种前处理方法检测HCDNA残留量的准确度和重复性。结果 采用DNase处理的方式，DNase未处理组核酸定量检测结果为HCDNA总残留量，DNase处理组为错误包装HCDNA量，二者差值为游离HCDNA残留量。DNase未处理和处理组回收率均为75%以上，重复性RSD小于30%。采用亲和提取方式，填料偶联亲和配基，结合rAAV，检测错误包装HCDNA回收率为75%以上，检测游离HCDNA回收率仅为36%。结论 DNase处理法可有效检出游离与错误包装HCDNA，可为后续研究奠定基础。

  2024年05期 v.37 527-531页 [查看摘要][在线阅读][下载 889K]
  [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ]

疫苗研究

• 生物反应器微载体Vero细胞罐外消化放大培养对狂犬病病毒CTN-1Ⅴ株产毒能力的影响

  杨敏;宋远涛;王玲;徐晓;文聪;陈杰杉;王月莉;梁婧;

  目的 探讨微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器对狂犬病病毒（rabies virus,RABV）CTN-1Ⅴ株产毒能力的影响。方法 将第140代Vero细胞于37℃培养72～120 h后，按1∶4的细胞密度比传代扩增至10层细胞工厂，继续培养72～120 h；将单层致密细胞消化后接种至30 L生物反应器，微载体7～10 g/L，培养温度37℃，pH(7.0～7.4)，溶氧30%～80%，搅拌速度10～50 r/min，连续灌流培养72～120 h，共培养3批；微载体Vero细胞经罐外细胞消化后放大培养至300 L生物反应器，微载体5～8 g/L，培养温度37℃，pH(7.0～7.4)，溶氧30%～80%，搅拌速度30～80 r/min，灌流培养72～120 h；按MOI=0.05接种RABV CTN-1Ⅴ株，每24 h收获病毒液1次，检测病毒滴度和抗原含量。结果 30 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为1×10~7个/mL;300 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为7.4×10~6个/mL。病毒接种96 h达峰值，病毒平均滴度为6.8 lgLD_(50)/mL，抗原平均含量为2.58 IU/mL。结论 微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器的工艺稳定可行，对RABV CTN-1Ⅴ株的产毒能力影响较小，可为RABV灭活疫苗大规模生产提供参考资料。

  2024年05期 v.37 532-536页 [查看摘要][在线阅读][下载 998K]
  [下载次数：142 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]

基础研究

• 云南省1株柯萨奇病毒A组8型分离株全基因组分析

  郭伟;刘煜菡;张名;冯昌增;许丹菡;何秀莲;范胜涛;马绍辉;

  目的 分析柯萨奇病毒A组8型（Coxsackievirus A8,CVA8）云南分离株A8-1/YN/CHN/2019全基因组序列及其遗传特性，以期了解CVA8的流行和变异情况。方法 设计针对CVA8的引物，提取病毒RNA,RT-PCR扩增VP1序列并测序，BioEdit 7.2.3拼接得到全基因组，使用MEGA 7.0软件进行系统进化分析，应用Simplot 3.5.1及RDP4软件进行重组分析。结果 A8-1/YN/CHN/2019株长7 396 nt，编码2 188个氨基酸。其VP1与CVA8原型株AF081299/Donovan/USA/1998核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为81.04%和95.24%;A8-1/YN/CHN/2019株属于基因型E，其他中国分离株位于D和E型。重组分析发现A8-1/YN/CHN/2019株在非结构编码区的P2和P3段上发生重组。结论 A8-1/YN/CHN/2019株为E基因型，并在P2、P3段的非结构区发生了重组事件。

  2024年05期 v.37 537-543页 [查看摘要][在线阅读][下载 1420K]
  [下载次数：61 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]

• 甲基化转移酶3对食管癌细胞增殖、迁移及谷氨酰胺代谢的影响

  高川力;周锡;邹江;杨密渊;文继林;袁梓纯;王琴;徐磊;马强;钟晓武;郭晓兰;

  目的 探讨甲基化转移酶3(methyltransferase like-3,METTL3)在食管癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法 采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测食管癌组织及其癌旁组织中METTL3基因的表达；CCK8试验、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验检测METTL3抑制剂STM2457对人食管鳞状癌细胞系Eca109和KYSE150增殖及迁移的影响；流式细胞术、TUNEL染色试验检测其对细胞周期及凋亡的影响；TMT/iTRAQ定量蛋白质组法分析其对下游相关信号通路的影响；谷氨酰胺和谷氨酸检测试验及Western blot法分析其对食管癌细胞谷氨酰胺代谢的影响。结果 METTL3在食管癌组织中的表达显著上调（t=5.024,P <0.000 1）。STM2457抑制Eca109和KYSE150细胞的METTL3表达后，显著抑制了细胞的增殖及迁移能力，细胞周期在G0/G1期发生阻滞，细胞凋亡率增加，同时降低了谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量，并下调了谷氨酰胺代谢相关蛋白丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运载体2(alanine-serine-cysteine transporter 2,ASCT2)、谷氨酰胺酶（glutaminase,GLS）和谷氨酸脱氢酶1(glutamate dehydrogenase 1,GLUD1)的表达。METTL3敲低后，Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著降低（谷氨酰胺摄取量：t为24.52～41.01,P均<0.01；谷氨酸生成量：t为8.431～11.83,P均<0.01）;METTL3过表达后，Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著升高（谷氨酰胺摄取量：t分别为5.803和56.13,P均<0.01；谷氨酸生成量：t分别为11.06和4.695;P均<0.01）。METTL3敲低后，Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺代谢相关蛋白ASCT2、GLS和GLUD1表达水平显著下调，而METTL3过表达后，ASCT2、GLS和GLUD1蛋白表达水平显著上调。结论 METTL3在食管癌中高表达，并可能通过介导食管癌细胞谷氨酰胺代谢促进细胞增殖。

  2024年05期 v.37 544-553+558页 [查看摘要][在线阅读][下载 1384K]
  [下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]

• 2020—2021年庄河市甲型肝炎病毒流行株基因组特征分析

  邵玉平;任丽萍;王艳;孙静;方兴;

  目的 分析2020—2021年庄河市环境污水中甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）基因组特征，比较其与病例标本HAV基因组相似性。方法 收集2021年庄河市7—12月18份污水处理厂进水口污水样本（环境污水），提取病毒RNA，逆转录后采用巢式PCR对VP1-2A区进行扩增，测序拼接获得5条HAV核苷酸序列（321 bp）。使用生物信息学软件进行系统进化分析。结果 2021年环境污水样本HAV均为ⅠA亚型，VP1-2A区核苷酸序列同源性为98.7%～100%。与2020年庄河市甲肝病例样本的核苷酸序列同源性为97.8%～100%，进化上分为2个分支。结论 ⅠA亚型为庄河市环境污水HAV的优势基因型，与病例样本的基因组存在差异，也有部分毒株的基因组完全一致。通过比较环境污水中HAV核酸与病例样本核酸的相似性，可更好地了解HAV的循环，以便对甲肝的流行病学监测作出早期预警。

  2024年05期 v.37 554-558页 [查看摘要][在线阅读][下载 969K]
  [下载次数：54 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 双瓶选择饮酒致酒精依赖小鼠海马中长链非编码RNA的表达谱分析

  薛琳媛;武南南;封芮芮;赵欣;张宇;殷丽天;

  目的 对双瓶选择饮酒致酒精依赖小鼠海马中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱进行分析。方法 通过双瓶选择饮酒法建立酒精依赖小鼠模型，同时设对照组（饮水）。选取酒精组酒精偏好率> 60%且酒精饮用量> 10 g/（kg·24 h）的雄性小鼠3只，随机抽取对照组雄性小鼠3只，分离双侧海马脑组织，液氮保存。采用Agilent084388芯片对小鼠海马脑组织RNA样本lncRNA和mRNA进行测序分析，lncRNA表达谱芯片（ncRNA microarray）检测样本中lncRNA的差异表达情况。基因功能（Gene Ontology,GO）和信号通路数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析差异表达lncRNA可能涉及的生物学过程及参与的信号通路。Pearson相关分析预测与每个差异表达lncRNA共表达的编码基因，超几何分布检验法计算每个对应转录因子条目中差异基因富集的显著性，Cytoscape软件绘制可视化网络图。结果 与对照组比较，酒精组小鼠海马组织差异表达的lncRNA共855个（FC≥2.0,P <0.05）,337个显著上调，上调幅度最大的为NONMMUT025786.2和NONMMUT072246.2;518个显著下调，下调幅度最大的为NONMMUT113098.1和NONMMUT076455.1。两组小鼠差异表达mRNA共361个（FC≥2.0,P <0.05）,271个显著上调，Upf3b和Zfp943上调幅度最大；90个显著下调，Adamts13和Ift27下调幅度最大。差异表达的lncRNA以细胞表面正向调控、GTP酶活性、细胞囊泡运输差异最明显；其主要参与的信号通路有丙酸酯代谢通路、牛磺酸代谢通路、细胞外基质受体和AMPK信号通路。最富集的转录因子为FOXL1和LHX3，分别有25和21个对应共表达基因。结论 通过高通量基因表达谱芯片分析，获得了lncRNA和mRNA可能的关键调控位点。本研究为海马脑区酒精依赖相关分子机制的研究提供了实验依据。

  2024年05期 v.37 559-565页 [查看摘要][在线阅读][下载 1311K]
  [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 流感病毒球状头部结构域HA1的原核表达及纯化

  曾博宇;许智强;于潼;陈璐儿;张桐;陈振海;庄忻雨;田明尧;金宁一;

  目的 原核表达流感病毒（influenza virus,IV）球状头部结构域HA1基因，优化其诱导表达条件，并进行蛋白纯化，以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法 将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F076/2018(mixed)]和Influenza A virus[A/USA/LAN＿(P5)＿HA/2018(H1N1)]进行截短，取63～286头状结构域氨基酸序列，按照大肠埃希菌常用密码子进行优化，合成基因命名为17Sa、Hebei和USA，并对基因17Sa进行点突变命名为基因17Sa变。将4个基因分别克隆至原核表达载体pET-28a（+），构建重组质粒，将重组质粒转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，优化蛋白表达条件，并利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。结果 成功插入长度为762 bp的目的基因，重组质粒经双酶切（NheⅠ/XhoⅠ）鉴定构建正确。表达的重组蛋白USA相对分子质量约为26 000,17Sa、p17Sa和Hebei相对分子质量约为28 000，均可与鼠抗His抗体特异性结合。重组蛋白均以包涵体形式表达，在诱导温度37℃，诱导8 h表达量最高。纯化的重组蛋白17Sa、17Sa变、Hebei和USA纯度分别为90%、85%、95%和80%。结论 通过原核表达系统成功表达并纯化了目的蛋白，该蛋白具有良好的反应原性，为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础。

  2024年05期 v.37 566-570+592页 [查看摘要][在线阅读][下载 907K]
  [下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

治疗制剂

• 携带白细胞介素-2/肝细胞生长因子4-kringle拮抗剂双基因的减毒沙门菌对小鼠免疫功能的影响

  杨志华;蒋如如;牛廷献;郭晓宇;宋薇;张萍;张媛媛;哈小琴;

  目的 研究携带白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)/肝细胞生长因子4-kringle拮抗剂（4-kringle antagonist of hepatocyte growth factor,NK4）双基因的减毒沙门菌（Ty21a-pIRES-IL-2-NK4，命名为TPIN）对小鼠体液及细胞免疫功能的影响。方法 将18只BALB/c小鼠（雌雄各半）随机分为对照（胃管饲服1.5 mL 10%NaHCO3）、Ty21a（胃管饲服0.1 mL Ty21a）、TPIN（胃管饲服0.1 mL TPIN）组，6只/组。初次免疫7 d后加强免疫，共2次，给药第21天，经眼球采血分离血清，ELISA法检测血清IgG抗体水平；无菌分离小鼠胸腺和脾脏，体外分别用Ty21a、TPIN刺激培养的小鼠脾细胞，72 h后，CCK-8法检测小鼠脾细胞增殖能力，ELISA法检测小鼠脾细胞细胞因子表达水平；称重小鼠脾脏和胸腺，计算脾和胸腺指数，并进行脾和胸腺组织HE染色。结果 与对照和Ty21a组相比，TPIN组小鼠血清IgG水平（F=111.74,P <0.01）以及脾细胞上清IFNγ、IL-4和IL-10含量均明显升高（F分别为38.21、11.37、26.92,P均<0.05），脾指数和胸腺指数明显升高（F分别为10.419、5.859,P均<0.05）。Ty21a、TPIN组小鼠胸腺组织皮质增宽，淋巴细胞增多，有轻度炎性反应；脾脏组织白髓增多，淋巴细胞增多伴随中性粒细胞浸润。结论 TPIN具有良好的免疫保护作用，能明显刺激机体产生体液免疫和细胞免疫，从而对肿瘤可能具有较好的治疗作用。

  2024年05期 v.37 571-576页 [查看摘要][在线阅读][下载 1120K]
  [下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 鸢尾素经PI3K/AKT/mTOR通路调节自噬对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能的影响

  李楠;刘师伟;段瑞雪;魏姣姣;王江娜;

  目的 探讨鸢尾素（Irisin）是否通过磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路增强自噬，改善2型糖尿病（type 2diabetes mellitus,T2DM）大鼠胰岛β细胞功能，以期为临床治疗T2DM和代谢综合征等慢性代谢性疾病提供新的思路。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为正常组（NC）、T2DM组和Irisin干预组（T2DM+Irisin），高脂高糖饮食5周加小剂量（35 mg/kg）链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导T2DM大鼠模型。腹腔注射Irisin 8周后，检测大鼠空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、空腹胰岛素（fasting insulin,FINS）、甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C），并进行腹腔注射葡萄糖糖耐量试验（intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT）、腹腔注射胰岛素耐量试验（intraperitoneal insulin tolerance test,IPITT）及高糖钳夹试验，评估各组大鼠胰岛功能及胰岛素抵抗水平，Western blot法检测大鼠胰腺组织中PI3K/AKT/mTOR通路蛋白及自噬相关蛋白的表达水平，免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）法检测大鼠胰腺组织中胰岛素、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAP1LC3)、家蚕隔离体蛋白1(p62)、溶酶体相关膜蛋白-2(lysosomal associated membrane protein-2,LAMP-2)的表达水平。结果 大鼠FBG与干预时间存在交互作用（F=11.751,P=0.000），随着干预时间延长，T2DM+Irisin组大鼠FBG逐渐降低，从干预第4周开始，较T2DM组显著下降（F=1 008.870,P=0.000）；与NC组相比，T2DM组大鼠FINS水平显著降低（P=0.000），经Irisin干预后，较T2DM组显著升高（P=0.000）。与NC组相比，T2DM组大鼠血清中TC、TG、LDL-C浓度显著升高（P均为0.000）,HDL-C浓度显著降低（P=0.000），经Irisin干预后，上述指标均得到改善（P分别为0.010、0.000、0.000和0.000）。Western blot结果显示，与NC组相比，T2DM组p62蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值显著增加（P分别为0.008和0.048）,LAMP-2蛋白表达显著降低（P=0.000），经Irisin干预后，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值进一步增加（P=0.000），但p62蛋白表达水平显著降低（P=0.047）,LAMP-2蛋白表达显著增加（P=0.000）,IHC结果与Western blot结果一致。与NC组相比，T2DM组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT以及p-mTOR/mTOR值均显著降低（P分别为0.006、0.031和0.000），经Irisin干预后，上述指标均进一步降低（P分别为0.033、0.013和0.000）。结论 Irisin可通过PI3K/AKT/mTOR信号通路增强自噬，改善胰岛β细胞功能，为治疗T2DM提供了新的思路。

  2024年05期 v.37 577-586页 [查看摘要][在线阅读][下载 1141K]
  [下载次数：365 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

临床研究

• 脊髓灰质炎疫苗不同序贯免疫程序的安全性及基础免疫效果评价

  张瑞;邓鹏飞;杨丹丹;薛曹怡;肖绍坦;杨天;

  目的 评价口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（oral live attenuated poliomyelitis vaccine,OPV）和脊髓灰质炎灭活疫苗（inactivated poliomyelitis vaccine,IPV）不同序贯免疫程序的安全性及基础免疫效果。方法 选取上海市浦东新区居住的≥2月龄婴儿为研究对象，分别于2、3、4月龄进行OPV全程（O-O-O组）、序贯IPV和OPV(I-I-O组)及IPV全程（I-I-I组）基础免疫程序接种，免疫后由家长通过填写自我观察表进行主动监测相关不良反应。免疫前后经上臂静脉采血，分离血清，微量中和试验法检测血清中脊髓灰质炎病毒中和抗体水平，并计算抗体阳转率及几何平均滴度（GMT）。采用Logistic多因素回归法分析组别、性别、户籍、出生体质量和免疫前Ⅰ/Ⅲ型抗体是否阳性等因素对基础免疫后Ⅰ/Ⅲ型抗体阳转率的影响。结果 O-O-O组有1例嗜睡，1例哭闹；I-I-O组有1例嗜睡；I-I-I组有1例哭闹。O-O-O、I-I-O和I-I-I组免疫前Ⅰ型中和抗体GMT分别为41.39、8.21和12.56，Ⅲ型中和抗体GMT分别为7.57、4.02和8.08，组间差异均无统计学意义（F分别为2.815和0.608,P分别为0.061和0.545）。免疫前Ⅰ型抗体阳性率分别为24.04%、34.07%和41.00%，组间差异有统计学意义（χ~2=13.459,P=0.001）；Ⅲ型抗体阳性率分别为13.94%、9.89%和18.00%，差异无统计学意义（χ~2=5.188,P=0.075）。免疫后Ⅰ型中和抗体GMT分别为1 311.84、1 812.59和833.24，Ⅲ型中和抗体GMT分别为911.97、1 752.68和419.50，组间差异均有统计学意义（F分别为76.848和202.632,P均<0.001）；免疫后Ⅰ型抗体阳转率分别为98.56%、100%和100%，Ⅲ型抗体阳转率分别为99.04%、100%和99.44%，组间差异均无统计学意义（χ~2分别为2.973和1.045,P分别为0.122和0.789）。组别、性别、户籍、出生体质量和免疫前Ⅰ/Ⅲ型抗体是否阳性对基础免疫后Ⅰ/Ⅲ型抗体阳转率均无影响。结论 3种序贯免疫程序具有良好的安全性，且在基础免疫后均能获得较高的抗体阳转率。

  2024年05期 v.37 587-592页 [查看摘要][在线阅读][下载 904K]
  [下载次数：202 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

技术方法

• 9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物中游离多糖去除方法的筛选及优化

  陈倩;陈中伟;马浩亮;詹远枫;闫瑾;孙述学;

  目的 筛选一种有效去除9V型肺炎球菌（Pn9V）多糖蛋白结合物中游离多糖的方法，并进行工艺优化及稳定性验证，以期用于多价肺炎结合疫苗的制备。方法 制备Pn9V-CRM_(197)结合物，分别采用分子筛（Sepharose 4FF）、离子交换层析（DEAE Sepharose FF）、疏水层析（GP-Butyl）及硫酸铵（ammonium sulfate,AS）盐析法去除结合物中的游离多糖，通过比较游离多糖百分比、多糖回收率及蛋白回收率筛选最适方法，并对确定的方法进行工艺优化。连续制备3批结合物，验证工艺的稳定性。结果 疏水层析和离子交换层析均可将Pn9V-CRM197结合物的游离多糖降至5%以下，疏水层析多糖及蛋白回收率（34.7%和50.1%）高于离子交换层析（16.2%和25.7%），选择疏水层析去除结合物中的游离多糖。优化的工艺为1.1 mol/L AS上样，注射用水洗脱，层析载量为1.81 mg蛋白/mL填料。连续制备的3批结合物游离多糖去除率、多糖回收率及蛋白回收率良好，且批间一致性高；2～8℃放置6个月，结合物稳定性良好，（25±2）℃放置6个月，游离多糖百分比显著增加（F=5.83 e~(-32),P=0.003），且> 25%，不适宜高温保存。结论 建立了有效去除Pn9V蛋白结合物中游离多糖的疏水层析工艺，该工艺稳定性良好，也为其他型别肺炎球菌多糖蛋白结合物游离多糖的去除提供了参考。

  2024年05期 v.37 593-597页 [查看摘要][在线阅读][下载 889K]
  [下载次数：78 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 外泌体miRNA提取方法的建立及优化

  张益国;张美美;王丽丽;王小鑫;马磊;张婷婷;陈国柱;

  目的 建立及优化外泌体miRNA的提取方法，并与传统方法进行比较。方法 以MSC、NK、CIK细胞外泌体miRNA为研究对象，用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测gDNA去除柱对外泌体miRNA中基因组DNA的去除效果；并以浓度、纯度及基因表达水平（Ct值）为评价指标，优化提取方法中的裂解液（外泌体G2裂解液及外泌体miRNA裂解液）及聚集试剂（无水乙醇及异丙醇）。采用建立的方法、Trizol法及Trizol磁珠法提取MSC、NK、CIK细胞外泌体及健康人血清外泌体miRNA，进行实时荧光定量PCR检测。结果 gDNA去除柱可有效去除外泌体miRNA中的基因组DNA。外泌体miRNA裂解液提取MSC、NK、CIK细胞外泌体miRNA的浓度均显著高于外泌体G2裂解液（t=6.358,P=0.020）；外泌体G2裂解液提取的miRNA样品纯度均偏低，存在杂蛋白污染，而外泌体miRNA裂解液可有效去除污染；外泌体miRNA裂解液提取CIK细胞外泌体miRNA的miR-Let-7i、miR-16-1、miR-150基因Ct值明显低于外泌体G2裂解液（t=30.120,P=0.008）。异丙醇提取MSC、NK、CIK细胞外泌体miRNA的浓度明显高于无水乙醇（t=8.567,P=0.010），纯度明显高于无水乙醇（t=6.214,P=0.020）；两种聚集试剂提取CIK细胞外泌体miRNA的miR-Let-7i、miR-16-1、miR-150基因Ct值差异均无统计学意义（t=2.297,P=0.120）。与Trizol法及Trizol磁珠法比较，采用建立方法提取CIK、NK、MSC细胞及健康人血清外泌体miRNA的miR-Let-7i、miR-16-1、miR-Let-7a、miR-150基因表达量更丰富，总体Ct值较低；且熔解峰较突出、尖锐，表现为单一主峰。结论 采用建立的方法提取的外泌体miRNA具有较高的浓度及纯度，Ct值稳定，且具有较高的灵敏度及良好的特异性。本研究为外泌体miRNA的进一步研究奠定了基础。

  2024年05期 v.37 598-604页 [查看摘要][在线阅读][下载 1244K]
  [下载次数：301 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 基于自组装多肽的无血清细胞冷冻保存

  郑义哲;李东东;王蕾;张萱;李艳宏;刘坤;王博;阎少多;付秋霞;梁俊;

  目的 实现基于自组装多肽（Peptide）的无血清低DMSO的高效细胞冷冻保存。方法 使用胎牛血清（FBS）、DMSO和Peptide 3种冷冻保护剂（cryoprotectant,CPA）进行组合冷冻保存Hepa1-6细胞。采用共聚焦显微成像、流式细胞术及细胞计数等方法检测冻存后细胞的存活率、回收率及增殖能力，并通过差示扫描量热（differential scanning calorimetry,DSC）法检测CPA抑冰性能，最终确定一种用于细胞冻存的高效CPA。结果 Peptide可在DMSO溶液中形成纤维网络水凝胶封装细胞，支撑细胞呈三维（3D）立体分布。在无血清条件下，与5%DMSO及0.1wt%Peptide组相比，用0.1wt%Peptide联合5%DMSO作为新型复合CPA冻存Hepa1-6细胞，可显著提高细胞存活率及冻存后回收率，且与10%DMSO+20%FBS组相比差异无统计学意义（t分别为0.983和2.164,P均> 0.05）。此外，与10%DMSO+20%FBS组相比，0.1wt%Peptide+5%DMSO组冻融后细胞的增殖能力差异也无统计学意义（t=3.513,P> 0.05）。DSC测试显示，基于Peptide的CPA抑冰性能良好。结论 使用0.1wt%Peptide联合5%DMSO作为新型复合CPA具有良好的细胞冻存效果。

  2024年05期 v.37 605-610+616页 [查看摘要][在线阅读][下载 1146K]
  [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 昆虫融合抗冻蛋白提取方法的比较

  麻强强;谭婷婷;寇丁月;海瑜涵;邓娅娅;雷喆;吕贵珍;王岩;

  目的 对用低温乙醇法、硫酸铵盐析法及等电点法提取的昆虫融合抗冻蛋白EGFP-OcAFP4浓度和蛋白相对得率进行比较。方法 选取不同终浓度的乙醇（5%～65%）、硫酸铵（0.2～3.0 mol/L）及pH(5.6、5.4、5.2、5.0、4.8、4.7、4.6、4.5、4.4)提取重组质粒pET28a-EGFP-OcAFP4诱导表达液破菌上清中的EGFP-OcAFP4，并检测其纯度及蛋白相对得率。结果 乙醇终浓度为30%时提取EGFP-OcAFP4的纯度最高，达86.21%，蛋白相对得率为6.89%；硫酸铵终浓度为2.0 mol/L时提取EGFP-OcAFP4的纯度最高，达42.33%，蛋白相对得率为30.83%;pH为5.0时提取EGFP-OcAFP4的纯度最高，达15.46%，蛋白相对得率为11.97%。结论 低温乙醇法、硫酸铵盐析法和等电点法均可用于EGFP-OcAFP4的提取，但低温乙醇法和硫酸铵盐析法提取蛋白的纯度及相对蛋白得率更高，更适用于EGFPOcAFP4的提取。

  2024年05期 v.37 611-616页 [查看摘要][在线阅读][下载 1025K]
  [下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]

综述

• 吸入性疫苗递送研究进展

  王颖;邹全明;顾江;

  呼吸道是病原体感染最常见部位，也是诱导机体保护性免疫应答的重要场所。吸入性疫苗不仅能诱导黏膜局部产生抗原特异性免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)，而且能激发全身性IgG抗体和局部呼吸道的细胞免疫应答。但由于缺乏有效的递送系统，使吸入性疫苗的研发进展缓慢。近年来，基于微粒的递送系统为吸入性疫苗的设计提供了新的思路，经合理设计后获得最佳理化特性的微粒疫苗不仅能防止抗原被酶降解，而且能靶向抗原递呈细胞，从而产生长期、有效的保护性免疫应答。目前吸入性流感疫苗Flumist已在国内外获批上市，2022年，我国批准全球首款吸入式新冠疫苗紧急使用，此外，还有大量吸入性疫苗已开始临床试验。本文就近年来吸入性疫苗递送的研究进展作一简要综述。

  2024年05期 v.37 617-620+626页 [查看摘要][在线阅读][下载 848K]
  [下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 小脑蛋白家族在寨卡病毒生物安全事件中的潜在作用

  杜金凤;杨建;杨杰;赵攀峰;

  寨卡病毒可跨越生物屏障感染神经系统，导致严重的公共卫生问题。小脑蛋白（cerebellin,Cbln）家族作为神经系统发育中关键的调控因子，与寨卡病毒之间可能存在干扰和调节的相互关系。介于寨卡病毒的病源特征、Cbln家族的功能特点及其在神经系统中的作用，Cbln家族有望成为寨卡病毒感染后重要的分子标志物和治疗靶点。本文就寨卡病毒与Cbln家族之间潜在的病原学和免疫学关系作一综述，探讨Cbln在维护神经系统功能和保障生物安全方面的重要作用。

  2024年05期 v.37 621-626页 [查看摘要][在线阅读][下载 1028K]
  [下载次数：41 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

• 基于国际物品编码组织标准的出口疫苗追溯标识系统的应用进展

  刘睿智;刘一漩;林强;李志敏;

  COVID-19是由SARS-CoV-2感染引起的一种呼吸道疾病，具有较强的传染力，严重威胁人类健康，接种疫苗是预防SARS-CoV-2感染最有效的手段。世界卫生组织（World Health Organization,WHO）要求使用国际物品编码组织（Global Standard 1,GS1）标准实现对新型冠状病毒疫苗（简称新冠疫苗）和治疗制剂的跟踪与追溯。追溯标识系统是追溯系统的基础和核心，是实施追溯的前提，贯穿于整个产品追溯过程中。通过对出口疫苗产品各级包装及物流单元进行全球唯一性编码、建立疫苗追溯码和物流单元追溯码标识，帮助出口疫苗生产企业建立追溯制度，实现产品生产、流通、使用等环节信息的追溯，可强化出口疫苗产品质量安全监管、风险监测预警和有效处置、问题产品召回及原因分析，增强国际市场对中国疫苗安全的信任与认可。本文对出口疫苗产品建立追溯制度的重要性、GS1系统在国内外医疗领域的应用、出口疫苗产品追溯标识编码、条码表示及质量要求作一综述，以期为我国出口疫苗产品建立追溯标识制度，满足国际标准法规要求提供参考。

  2024年05期 v.37 627-633页 [查看摘要][在线阅读][下载 904K]
  [下载次数：57 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]

专题报道

• 我国双特异性抗体药物注册申报现状及药学审评思考

  阚红金;韦薇;程速远;

  近年来，国内外双特异性抗体发展迅速，截至2023年12月，全球已有近200个双特异抗体正在进行临床研究，10余个双特异性抗体药物获批上市。本文分析了国内外双特异性抗体注册申报现状，并结合药学审评经验及相关文献，对此类产品药学开发中的常见技术问题进行探讨，以期为双特异性抗体药物的药学开发及评价提供参考。

  2024年05期 v.37 634-639页 [查看摘要][在线阅读][下载 867K]
  [下载次数：408 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ]

• 《中国生物制品学杂志》稿约

  <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊，主要报道我国生物制品科技成果及相关行业国内外研究现状和发展动态。本刊为月刊，由国家卫生健康委员会主管，中华预防医学会和长春生物制品研究所主办。1刊载内容和设置栏目主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域，如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用及质控类学术文章，并兼顾重大学术交流活动的报道。在选择来稿时注重学术性、前沿性和实用性。

  2024年05期 v.37 640页 [查看摘要][在线阅读][下载 583K]
  [下载次数：6 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]
下载本期数据