- 陈娜娜;刘晨阳;邢坤鹏;高强;张朔;王颖;孙宏亮;李景良;
目的 评价0.5 mL/支的预灌封注射器森林脑炎（tick-borne encephalitis,TBE）灭活疫苗的临床前安全性和免疫原性。方法 采用兔肌内刺激性试验和豚鼠全身主动过敏反应试验评价新规格TBE灭活疫苗的安全性，并与原规格包装形式（1.0 mL/瓶，西林瓶）TBE灭活疫苗进行比对。将新规格及包材TBE灭活疫苗经腹腔免疫体质量10～12 g的昆明小鼠30只，免疫2次，间隔7 d，初次免疫后第14天攻毒（“森张”株TBEV），试验组以10~(-2)～10~(-6)稀释度病毒，对照组以10~(-6)～10~(-10)稀释度病毒经腹腔攻毒，持续观察21 d判定结果，通过Reed-Muech法计算效价来评价TBE灭活疫苗的免疫原性。结果 兔肌内刺激性试验的所有动物均未见死亡或濒死情况，各组豚鼠全身主动过敏反应试验临床观察未见异常反应。3批原规格包装形式的TBE灭活疫苗的免疫原性（免疫保护指数）分别为1.0×10~8、1.3×10~8、1.0×10~8;3批新规格包装形式的TBE灭活疫苗的免疫原性（免疫保护指数）分别为1.1×10~8、1.0×10~8、1.3×10~8，符合《中国药典》三部（2020版）大于1.0×10~5的要求，新、旧规格疫苗免疫原性差异无统计学意义（F=0.063,P>0.05）。结论 0.5 mL/支的预灌封注射器TBE灭活疫苗的临床前安全性和免疫原性良好。
2024年04期 v.37 385-390页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 郑华;白云川;杨睿;付利芝;王孝友;张素辉;沈克飞;
目的 鉴定奇异变形杆菌疫苗候选抗原，并评价其在小鼠体内的免疫保护效果。方法 采用细菌膜蛋白提取试剂盒提取奇异变形杆菌膜蛋白，进行Western blot检测及质谱分析。化学法合成外膜蛋白F(outer membrane protein F,OmpF)及丝氨酸水解酶（serine hydrolase,SH）两种膜蛋白的编码基因，克隆至载体pET-28a，于E.coli BL21(DE3)诱导表达重组蛋白，进行Western blot检测。重组蛋白通过Ni Sepharose High Performance纯化后，经腿部肌内注射15只雌性昆明小鼠，100μg/（0.2 mL·只），共免疫3次，间隔2周。末次免疫后15 d，经眶前静脉窦采血，分离血清，间接ELISA法检测特异性抗体水平；经小鼠腹腔接种致死剂量的奇异变形杆菌，接种1个月，观察小鼠存活情况，并计算抗原的免疫保护率。结果 提取的膜蛋白可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合，经质谱鉴定与奇异变形杆菌APB87305(OmpF)、WP＿004247605(SH)的同源性为100%。原核表达的重组蛋白OmpF及SH可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合，免疫小鼠后均可诱导较高水平的特异性抗体，对致死性奇异变形杆菌感染的保护率分别为100%和86.67%。结论 OmpF和SH是宿主免疫保护性抗原，有望成为制备奇异变形杆菌疫苗的新靶点。
2024年04期 v.37 391-396页 [查看摘要][在线阅读][下载 1073K] [下载次数：82 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王炜晓;赵丹莹;陈子杨;常军亮;
目的 评价重组乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）在小鼠体内的免疫原性。方法 分别用不同剂量的NLMS疫苗（含有NL、M和S蛋白的HBV VLPs疫苗，蛋白终浓度0.2、0.1、0.05、0.025、0.012 5μg/mL）及上市疫苗（蛋白终浓度4、2、1、0.5、0.25μg/mL）经腹腔免疫雌性BALB/c小鼠，0.5 mL/只，每组20只。免疫4周后，经小鼠眼内眦静脉采血，分离血清，采用HBsAb检测试剂盒检测HBsAb阳转情况，计算半数有效剂量（ED_(50)）。用NLMS疫苗（蛋白终浓度1μg/mL）及上市疫苗（蛋白终浓度20μg/mL）分别于0及2周经小鼠腹腔免疫，0.5μg/只。于初次免疫后2、3、4、5、6、7周，经小鼠内眦静脉采血，分离血清，采用相应试剂盒检测小鼠血清中S抗体水平；初次免疫后7周，相应试剂盒检测小鼠血清中preS1、preS2抗体水平及IFNγ、IL-2、IL-6含量。结果 免疫4周后，NLMS疫苗及上市疫苗的ED_(50)分别为0.039及1.095μg/mL,95%置信区间分别为0.032～0.049和0.881～1.406μg/mL，两组疫苗ED_(50)差异有统计学意义（χ~2=34.0,P <0.05）。两剂次免疫后，两组小鼠血清抗体效价均于初次免疫后7周达最高，NLMS疫苗组S抗体效价为1∶4 096,preS1抗体效价为1∶64,preS2抗体效价为1∶128；上市疫苗组S抗体效价为1∶1 024,preS1及preS2抗体均在检测限以下。两组间3种抗体效价差异均有统计学意义（t分别为-2.025、17.433、-7.844,P均<0.05）。两种疫苗均能刺激小鼠脾淋巴细胞产生不同水平的IFNγ、IL-2和IL-6，且显著高于阴性对照组（F分别为250.1、425.6、652.8,P均<0.05）。结论 NLMS疫苗可诱导小鼠机体产生更强烈的体液免疫应答，同时产生S、preS1和preS2抗体，并可诱导相应的细胞免疫应答。
2024年04期 v.37 397-400+419页 [查看摘要][在线阅读][下载 869K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 樊江红;郭蕊;高佳;赵静;王菁;刘彩红;谢耀丽;王亚静;
目的 探讨Ca~(2+)/NLRP3/Caspase-1信号通路对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）内皮功能紊乱的调节作用。方法 将16只雄性ApoE~(-/-)小鼠随机分为普通饮食组和高脂饮食组，每周空腹测量小鼠体质量；持续喂养20周，处死小鼠，收集动脉组织；生化分析仪检测血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）水平；油红O染色评估主动脉管腔斑块及内膜厚度。将人脐静脉内皮融合细胞EA.hy926分为对照组、高糖高脂组和Ca~(2+)抑制剂组，流式细胞术检测不同时间段Ca~(2+)含量；免疫荧光法检测NLRP3表达；Western blot法检测主动脉组织和细胞中NLRP3、Caspase-1/p10/p20、VCAM-1、ICAM-1蛋白表达水平。结果 与普通饮食组相比，高脂饮食组小鼠体质量明显增高（F=3.333,P=0.026），血清TC、TG、LDL-C水平显著增高，HDL-C水平显著降低（F分别为1.852、2.410、1.920和2.917,P分别为0.000、0.004、0.002和0.003），小鼠主动脉斑块表面积/主动脉表面积显著增加（F=3.256,P=0.000），斑块横断面积/主动脉管腔面积明显增高（F=6.433,P=0.008）,NLRP3、Caspase-1/p10/p20、VCAM-1和ICAM-1蛋白表达水平明显增高（F分别为8.997、4.664、4.486和9.949,P分别为0.036、0.022、0.005和0.018）。与对照组相比，高糖高脂处理6、12、24 h的EA.hy926细胞Ca~(2+)含量均显著增高（F分别为0.310、5.649和5.580,P分别为0.006、0.009和0.004）,6 h组含量最高；高糖高脂组NLRP3表达显著增高，Caspase-1/p10/p20、VCAM-1及ICAM-1蛋白表达水平显著增高（F分别为10.476、5.310和9.306,P分别为0.029、0.030和0.018）。与高糖高脂组相比，Ca~(2+)抑制剂组EA.hy926细胞的NLRP3、Caspase-1/p10/p20蛋白表达水平显著降低（F分别为2.196、2.882和0.035,P分别<0.01、<0.05和<0.05）。结论 NLRP3炎性小体诱导血管内皮细胞功能紊乱，加重AS进展，其发生过程可能与Ca~(2+)及下游信号通路密切相关。
2024年04期 v.37 401-408页 [查看摘要][在线阅读][下载 1035K] [下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 姚慧欣;高丹;李化敏;杨冰;王悦宁;李会影;孙喆;柳菲菲;
目的 分析miR-628-3p通过靶向丝氨酸/苏氨酸激酶17B(serine/threonine kinase 17B,STK17B)抑制卵巢癌（ovarian cancer,OV）增殖、迁移和侵袭的能力。方法 生物信息学分析miR-628-3p在OV组织中的表达水平及预后。分别将空载NC质粒（miR-NC）、miR-628-3p、miR-628-3p+STK17B转染至人OV细胞SKOV3和HO8910中，RT-qPCR法检测转染细胞中miR-628-3p表达水平；CCK-8法和克隆试验检测各组细胞增殖能力；划痕愈合试验检测各组细胞迁移能力；Transwell侵袭试验检测各组细胞侵袭能力。裸鼠成瘤试验检测瘤体质量及体积变化。Starbase数据库预测miR-628-3p靶基因，双荧光酶素报告试验进行验证。Western blot法测定各组细胞STK17B蛋白表达水平。结果miR-628-3p在OV组织中低表达，且患者无病生存期低。与miR-NC组相比，miR-628-3p组SKOV3和HO8910细胞中miR-628-3p表达均上调（t分别为7.789和7.862,P均<0.05），细胞活性（t分别为8.124和8.209,P均<0.05）、数量（t分别为9.012和9.110,P均<0.05）、迁移（t分别为10.002和9.983,P均<0.05）和侵袭（t分别为11.245和11.320,P均<0.05）能力均明显降低。与miR-NC组相比，miR-628-3p组移植瘤体积和质量均明显下降（t分别为8.429和10.367,P均<0.05）。数据库预测STK17B为miR-628-3p的靶基因，双荧光酶素报告试验证实，STK17B为miR-628-3p的作用靶点。miR-628-3p组STK17B mRNA和蛋白水平明显低于miR-NC组（mRNA:t分别为13.852和13.914，蛋白：t分别为11.524和11.603,P均<0.05）。GEPIA数据分析表明，STK17B在OV组织中高表达。与miR-628-3p组相比，miR-628-3p+STK17B组SKOV3和HO8910细胞的活性（t分别为8.692和8.721,P均<0.05）、数量（t分别为14.112和14.093,P均<0.05）、迁移（t分别为13.805和13.911,P均<0.05）和侵袭（t分别为14.117和14.207,P均<0.05）能力均明显上升。结论 miR-628-3p通过靶向下调STK17B表达水平，抑制OV细胞增殖、迁移和侵袭，从而抑制OV的发展进程。
2024年04期 v.37 409-419页 [查看摘要][在线阅读][下载 1370K] [下载次数：53 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 严皎;白红妹;杨旭;孙文佳;龙琼;马雁冰;
目的 建立过敏原卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）诱导的慢性哮喘小鼠模型，并对该模型免疫应答特征进行动态分析。方法 以OVA经腹腔致敏22只雌性BALB/c小鼠，并经鼻腔反复滴注刺激气道反应，于不同时间点取样进行分析。收集小鼠支气管肺泡灌洗液，进行炎性细胞计数；取灌洗液离心上清，ELISA法检测多种相关细胞因子水平。取小鼠肺组织，制备切片，苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色法检测肺组织炎性细胞浸润情况，高碘酸-希夫（periodic acid-Schiff,PAS）染色法检测气道上皮杯状细胞增生情况；马松三色（Masson′s Trichrome）及Sircol染色法检测肺组织胶原积累情况。采集小鼠静脉血，分离血清，ELISA法检测血清中OVA特异的IgE、IgG1、IgG2a水平。应用FlexiVent小动物肺功能仪的强制低频振荡模式分析小鼠气道反应性。结果 OVA的反复刺激成功诱导了小鼠气道及肺组织炎性细胞应答、炎性细胞因子积累、气道杯状细胞增生、肺组织纤维化、过敏原特异IgE抗体应答、气道高反应性等哮喘典型指标，且呈现不同应答特征。随着OVA反复刺激，炎性细胞应答、杯状细胞增生有所下降，但胶原沉积增加，而气道的高反应性在末次刺激4周后仍存在。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)伴随炎性应答的持续呈高表达，TGF-β2及白介素-33(interleukin-33,IL-33)在末次刺激4周后才呈高水平表达。结论 本研究采用OVA持续刺激诱导建立了慢性哮喘小鼠模型，并展现了该模型的免疫应答特征，为慢性哮喘机制的研究、治疗靶点及药物研发奠定了基础。
2024年04期 v.37 420-425+432页 [查看摘要][在线阅读][下载 1163K] [下载次数：261 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张瑶;周剑芳;鲁健;李希妍;曾晓旭;王大燕;
目的 利用反向遗传学方法研究流感病毒各基因节段对其生长特性的影响。方法 挑选系间重配病毒B/福建同安/1565/2013及B/北京怀柔/11764/2013进行生长曲线测定。提取病毒核酸，扩增病毒各基因节段，并利用pHW2000载体构建重组质粒。对构建的重组质粒在两病毒间进行单一及不同组合基因节段的替换后，构建新的重配病毒，检测重配病毒的生长特性，推测基因节段的影响作用。结果 2株系间重配病毒生长特性差异显著，B/福建同安/1565/2013比B/北京怀柔/11764/2013生长曲线的峰值点高约2倍log值，但将B/北京怀柔/11764/2013单一节段分别替换至B/福建同安/1565/2013重配出的8株病毒与B/福建同安/1565/2013的生长特性差异不明显，而在同时替换HA和NA（表面蛋白）或PB2、PB1和PA（聚合酶）或PB2、PB1、PA和NP（核糖核蛋白，RNP）3种基因组合时，重配病毒的生长特性下降显著。结论 B型流感病毒生长特性受单一节段影响可能性较小，多个节段的协同作用对其影响更为显著，在监测过程中应加强对重配变异病毒的监测。
2024年04期 v.37 426-432页 [查看摘要][在线阅读][下载 1201K] [下载次数：59 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李松原;李俊达;张晰;麻天雨;刘涛;刘惠荣;
目的 对内蒙古自治区鄂尔多斯地区部分黏细菌进行分离纯化，检测其对人神经胶质瘤细胞U87的抑制作用，并鉴定其代谢产物类型。方法 采用滤纸片诱导法、大肠埃希菌划线法、兔粪诱导法，对内蒙古自治区鄂尔多斯地区采集的黏细菌土样进行分离纯化，将纯化菌株进行发酵培养，采用CCK-8法检测其发酵液对U87细胞的抑制率；采用化学显色法对菌株代谢产物进行初步定性分析。结果 分离纯化获得16株黏细菌，属于黏细菌的5个属，其发酵上清液对U87细胞均无抑制作用，大孔树脂甲醇浸提物对U87细胞均存在显著抑制效果，除E19菌株外，各菌株最高抑制率均值可达80%；不同种属菌株次级代谢产物类型差异明显，其中，珊瑚球菌属（Corallococcus）的代谢产物包含种类最多，对细胞抑制作用最强，抑制率达97.41%。结论 黏细菌的天然产物可作为抗神经胶质瘤的新型药源进行深入研究，相关工作可为抗癌新药的研发提供参考。
2024年04期 v.37 433-440页 [查看摘要][在线阅读][下载 1013K] [下载次数：71 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]
- 王岑嵘;赵慧;卢井才;袁若森;宋月爽;王亚军;王宇迪;姜春来;魏巍;吴山力;
目的 通过免疫羊驼和噬菌体建库筛选出人呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）纳米抗体（nanobodies,Nbs），并评价其结合活性和中和活性。方法 使用RSV重组F蛋白免疫2只羊驼，构建噬菌体文库，筛选得到纳米抗体的骨架区（framework region,FR）和抗原互补决定区（complementarity determining region,CDR）序列，将序列重组构建出3株RSV纳米抗体，使用Ni-NTA亲和层析纯化后，ELISA法检测纳米抗体的结合活性，RSV A2株评价纳米抗体的中和活性。结果 3株纳米抗体BF-42、BF-46、Fh-24相对分子质量约为17 000，纯化后抗体纯度约为95%;BF-42、BF-46浓度为0.16μg/mL,Fh-24浓度为32 ng/mL时仍有结合活性，三者结合能力存在剂量依赖性；3株纳米抗体浓度为450μg/mL时，均可保护50%Hep2细胞免受病毒感染，出现50%致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE），能够有效中和病毒。结论 构建的3株纳米抗体具有较高的结合活性和一定的中和能力，为RSV纳米抗体的应用奠定了基础。
2024年04期 v.37 447-452页 [查看摘要][在线阅读][下载 891K] [下载次数：203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李香;马燕春;张宇涵;花雨艳;成晓龙;
目的 分析雷公藤红素对人食管鳞癌KYSE180细胞增殖、凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 取对数生长期KYSE180细胞，分别加入0.5、1、2μmol/L的雷公藤红素，同时设空白对照组。MTT法和克隆形成试验检测细胞的增殖情况；流式细胞术检测细胞的凋亡情况；Transwell小室试验检测细胞的迁移及侵袭能力；qRT-PCR法检测细胞中P53、FAS、DR5基因mRNA的转录水平；Western blot法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、PARP蛋白的表达水平。结果 与空白对照组比较，2μmol/L雷公藤红素组细胞增殖明显受到抑制（F=10.9,P <0.05）,0.5、1μmol/L雷公藤红素组克隆数明显减少（F=457.9,P <0.05）;1、2μmol/L雷公藤红素组细胞的侵袭和迁移数量明显下降（F=751.7～1 134.0,P均<0.001）;0.5、1、2μmol/L雷公藤红素组细胞凋亡率明显升高（F=243.0～728.0,P均<0.05）;1及2μmol/L雷公藤红素组细胞中P53、FAS、DR5基因mRNA转录水平显著提高（F=71.0～539.3,P均<0.01）;1、2μmol/L雷公藤红素组Cspase-3、Caspase-9、Bax蛋白表达水平明显增加（F分别为142.1、35.3、347.6,P均<0.01）,2μmol/L雷公藤红素组PARP蛋白水平明显增加（F=877.6,P <0.01）,0.5、1、2μmol/L雷公藤红素组Bcl-2蛋白表达明显下降（F=59.2,P均<0.01）。结论 雷公藤红素可抑制KYSE180细胞的增殖、促进凋亡，可能是通过上调Caspase-3/9、Bax、PARP蛋白的表达，下调Bcl-2蛋白的表达而发挥作用。
2024年04期 v.37 453-457+465页 [查看摘要][在线阅读][下载 1099K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 殷婷婷;朱秋媚;刘冰莹;张宇;刘莹;刘景会;刘玉林;
目的 鉴定重组人白细胞介素-1受体拮抗剂（recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra）制剂和室温加速获得的制剂沉淀中相关蛋白的化学修饰类型。方法 利用反相高效液相色谱（reverse phase-high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）对rhIL-1Ra制剂和室温加速获得的制剂沉淀进行相关蛋白检测，并按面积归一化法确定相关蛋白的百分比；再用液质联用质谱法对rhIL-1Ra制剂和室温加速获得的制剂沉淀进行相关蛋白的鉴定。结果 RP-HPLC结果显示，rhIL-1Ra制剂中有6个相关蛋白色谱峰，所占百分比依次为0.414%、0.870%、0.871%、0.304%、0.104%、1.182%,rhIL-1Ra室温加速获得的沉淀中有5个相关蛋白色谱峰，所占百分比依次为0.350%、3.603%、1.118%、0.629%、0.866%。液质联用结果显示，rhIL-1Ra制剂6个相关蛋白色谱峰化学修饰类型分别为甲硫氨酸氧化、天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化、甲硫氨酸氧化、甲硫氨酸氧化、天冬氨酸脱水环化、天冬氨酸脱水环化；rhIL-1Ra室温加速获得的沉淀中5个相关蛋白色谱峰化学修饰类型分别为甲硫氨酸氧化、天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化、以甲硫氨酸氧化为主、以天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化为主、以天冬氨酸脱水环化为主。结论 rhIL-1Ra制剂和室温加速获得的制剂沉淀的相关蛋白修饰类型相同，主要存在3种：甲硫氨酸氧化修饰、天冬氨酸脱水环化、天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化，本研究为提高rhIL-1Ra制剂的质量提供了参考。
2024年04期 v.37 458-465页 [查看摘要][在线阅读][下载 935K] [下载次数：36 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ]
- 史晋朝;马娜;张倩;陈静;钟锦;周阳;李建国;
目的 建立一种改良的原代海马神经元糖氧剥夺/复氧（oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）模型。方法 从SD乳鼠脑组织中分离海马组织，制备海马神经元悬液，通过抑制胶质细胞数量，将海马神经元悬液分为无抑制、部分抑制和完全抑制组，经镜下观察细胞形态，确定原代海马神经元的最佳培养条件。在此基础上，将海马神经元进行糖氧剥夺0.5、1和1.5 h，再分别复氧0、24、36和48 h,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）含量，CCK-8法测定神经元存活率，以LDH含量较高，对神经元存活率影响较小的条件为原代海马神经元OGD/R模型的最佳建模条件。结果 部分抑制胶质细胞时，神经元纯度较高，生长状态均一良好，胶质细胞与海马神经元数量比约1∶1，可保留胶质细胞与神经元间的结构和功能联系。与OGD 1 h组比较，OGD 1 h/R 36 h时，LDH含量显著升高（t=4.31,P <0.05），神经元存活率差异无统计学意义（t=1.99,P> 0.05）。结论 获得了胶质细胞与神经元数量约为1∶1的原代海马神经元，且生长状态良好。OGD 1 h/R 36 h条件下建立的OGD/R模型，神经元树突缩短，活力受损，存活率较高。本研究为后续相关疾病的发病机制深入研究奠定了基础。
2024年04期 v.37 471-474+480页 [查看摘要][在线阅读][下载 912K] [下载次数：81 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 缪晨阳;汪德奎;魏健;
目的 建立反相-高效液相色谱（reverse phase-high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）法检测双价人乳头状瘤病毒（human papillomavirus,HPV）疫苗中3种候选防腐剂（尼泊金甲酯、苯甲醇和间甲酚）的含量，并对方法进行验证及初步应用。方法 采用Waters Acquity Peptide BEH C18 300?（150 mm×2.1 mm,1.7μm）色谱柱；流动相A(0.1%三氟乙酸水溶液)，流动相B(0.1%三氟乙酸乙腈溶液)进行梯度洗脱；流速为0.2 mL/min；柱温为40℃，检测波长为254 nm。对建立的方法进行专属性、线性、准确性、精密性、稳定性验证，并采用该方法检测含3种防腐剂的双价HPV疫苗中各防腐剂的浓度。结果 在选定的条件下，尼泊金甲酯、苯甲醇和间甲酚有不同的出峰时间（分别为14.6、7.2和15.3 min），不受样品中其余组分和检测试剂的影响。尼泊金甲酯在0.005%～0.020%范围内线性关系良好（R~2=0.997 3），平均回收率为99.60%,RSD为2.31%(n=5)；苯甲醇在0.1%～0.5%范围内线性关系良好（R~2=0.999 9），平均回收率为100.46%,RSD为2.70%(n=5)；间甲酚在0.4%～2.0%范围内线性关系良好（R~2=0.999 4），平均回收率为100.12%,RSD为0.74%(n=5)。尼泊金甲酯和间甲酚于2～8℃放置3 d，苯甲醇放置2 d，检测结果的RSD均<5%，稳定性良好。使用建立的方法检测HPV双价疫苗样品中的3种防腐剂浓度，均满足±20%的误差范围内。结论 建立的RP-HPLC法操作简便，专属性强，准确性、精密性、稳定性良好，能有效对双价HPV疫苗中尼泊金甲酯、苯甲醇和间甲酚3种防腐剂进行检测和质控。
2024年04期 v.37 475-480页 [查看摘要][在线阅读][下载 837K] [下载次数：69 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 丁如霞;李晓玉;赵晨燕;刘强;姚佳维;黄维金;王佑春;
目的 建立一种基于稳定表达萤火虫荧光素酶（firefly luciferase,fluc）Vero细胞系的高通量检测方法，以评估样品的体外抗病毒中和活性。方法 基于成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）/Cas9靶向基因编辑技术，构建一种稳定表达fluc的Vero细胞系，在此基础上建立痘病毒和呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染细胞活性检测方法，利用该方法评估痘病毒免疫血清及RSV单抗的中和活性，并与噬斑抑制法及细胞活力检测（adenosine triphosphate,ATP）法检测结果进行比较。结果 成功构建了Vero-fluc细胞系，其细胞量与表达的fluc相关性良好（R~2=0.994 8）。利用Vero-fluc细胞作为感染细胞验证的痘病毒中和活性检测方法具有良好的稳定性、可靠性[信噪比（signal/background ratio,S/B）=25]，可满足高通量的检测需求（Z’=0.9），相比传统噬斑抑制法一致性强（R~2=0.76），免疫血清的ID_(50)值较噬斑法平均高出2倍。建立的RSV中和活性检测方法，检测的抗RSV单抗中和活性与ATP活性试剂盒检测结果一致，Vero-fluc细胞法在1∶10~3～1∶10~5的抗体滴度水平上抑制率显著高于ATP法。结论 建立的基于Vero-fluc细胞系的病毒中和活性检测方法与传统方法相比，具有良好的相关性，结果可靠，且具有更高的灵敏度及检测通量，是一种通用型体外抗病毒中和活性评价方法。
2024年04期 v.37 481-486+492页 [查看摘要][在线阅读][下载 969K] [下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王文辉;李伟;王凯文;郭靖;孟胜利;宫立孟;王泽鋆;郭江红;申硕;张承志;
目的 建立SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）体外相对效力的双抗体夹心ELISA检测方法，并进行验证。方法采用细胞融合技术制备SARS-CoV-2单克隆抗体，以其作为包被抗体，SARS-CoV-2多克隆抗体作为检测抗体建立用于检测SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）体外相对效力的双抗体夹心ELISA法，并验证方法的线性范围、专属性、精密性、耐用性。采用建立的方法检测20批SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）的体外相对效力，并与相应体内效力结果进行相关性分析。结果 筛选出单克隆抗体20D8用于方法的建立，纯化后效价可达10~5，蛋白浓度为2.69 mg/mL。SARS-CoV-2灭活疫苗参考品浓度在3.2～200 WU/mL范围内，与A_(450/630)呈良好的线性关系，线性方程为：y=0.846 8 x-1.483,R~2为0.991 9；建立的方法可特异性检测SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞），与其他疫苗均无交叉反应；重复性验证CV为9.91%，中间精密性验证CV为11.03%;SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）供试品于37℃解吸附22、24、26 h的体外相对效力CV为8.59%,36、37、38℃解吸附24 h的体外相对效力CV为6.62%。20批SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）体外相对效力与体内效力检测结果呈正相关性（r=0.7,P <0.05）。结论 建立的双抗体夹心ELISA检测方法法具有良好的专属性、精密性及耐受性，且操作方便，可用于SARS-CoV-2灭活疫苗（Vero细胞）体外相对效力的检测和质量控制。
2024年04期 v.37 487-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 908K] [下载次数：164 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 高睿;王福鑫;黄海;
目的 建立注射用聚乙二醇化重组假丝酵母尿酸氧化酶SSS111中异丙醇（isopropanol,IPA）、二氯甲烷（dichloromethane,DCM）和甲苯（toluene,TOL）残留量的顶空气相色谱检测方法，并进行验证。方法 采用DB-1301毛细管柱（30 m×0.53 mm,1.0μm）。检测温度：250℃，进样温度：200℃，载气：氮气，分流比：3，柱流速：3.0 mL/min，氢气流速：60 mL/min，空气流速：400 mL/min。柱温采用程序升温，初始柱温：50℃，维持12 min，以40℃/min的速度升温至200℃，维持5 min。顶空瓶的平衡温度：120℃，平衡时间：20 min。验证方法的线性范围、精密性、准确性，确定检测限和定量限。采用建立的方法检测3批SSS111供试品中IPA、DCM和TOL的残留量。结果 IPA、DCM、TOL分别为0.001 982～7.928、0.002 118～8.472和0.041 960～8.392μg/mL时，与峰面积呈良好的线性关系，r均> 0.99；重复6次检测对照品溶液中IPA、DCM、TOL残留量的RSD均<5%;SSS111供试品中添加对照品溶液后检测IPA、DCM、TOL回收率均在80%～120%范围内；IPA、DCM、TOL的检测限分别为1.982、2.118、41.96 ng/mL，定量限分别为6.941、6.236、126.92 ng/mL。3批供试品溶液中的IPA残留量均低于检测限，DCM残留量约为1 ppm,TOL均<1 ppm。结论 建立的顶空气相色谱检测法具有良好的精密性、准确性，且操作简便，灵敏度较高，可用于SSS111中有机溶剂残留量的检测。
2024年04期 v.37 493-496+504页 [查看摘要][在线阅读][下载 861K] [下载次数：97 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]